无锡市冷却塔水军团菌污染状况及菌型分析

目的了解无锡市不同场所冷却塔水中军团菌污染状况和血清型别。方法按照无锡市地理分布抽取32家公共场所和8家工厂作为监测点,共抽取冷却塔水529份,按照卫生部《集中空调通风系统卫生规范》附录A＂空调系统军团菌的检验分析方法＂进行检测。结果 529份冷却塔水军团菌的检出率达14.18%（75/529）,阳性率以商场和医院为高,分别为27.45%（14/51）和24.00%（18/75）。公共场所以7、8月份的阳性率为高,分别为18.75%（9/48）和25.25%（25/99）;工厂工艺性冷却塔水军团菌在全年各月份均有检出。军团菌血清型以LP1为主,占78.67%（59/75）。结论无锡市不同场所冷却塔水中存在军团菌污染,对人群健康构成潜在威胁,需引起重视。     

深圳市中央空调冷却塔军团菌核糖体基因型研究

军团病(Legionnaires' disease)是由军团菌感染引起的以肺炎为主要症状的急性呼吸道传染病,嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,Lp)是引起军团病的主要菌群。目前研究发现军团菌广泛存在于自然界的土壤和各种水环境中,中央空调冷却塔是军团菌主要的传染源,近30年来军团病大的暴发多与中央空调冷却塔被军团菌污染有关。     

上海市集中式中央空调冷却塔水嗜肺军团菌污染状况分析

目的了解上海市宾馆、大型商场、超市及写字楼中央空调系统嗜肺军团菌的污染状况。方法采集上海市100家公共场所集中式中央空调冷却塔水100份,经酸处理,以GVPC、BCYE、血平板进行菌落筛选,并应用生化反应鉴定,最后进行血清学分型。结果100份冷却塔水检出嗜肺军团菌的样本数为75份,检出率达75％（75／100）,其中宾馆、大型商场、超市、写字楼阳性率分别为80．6％、72．7％、72．7％、70％。75份检出水样中分离到76株军团菌,血清型别呈多样化,但以LPl为主,同一份水样同时检出2个型别的占总检出水样的1．3％（1／75）。结论上海市公共场所中央空调冷却水中嗜肺军团菌污染严重,血清型别呈多样化,对人群健康构成潜在威胁,需要引起重视,以防军团菌病的暴发流行。     

南京地区肺科患者军团菌感染状况调查

了解南京市不同人群军团菌感染情况.选择南京市健康从业人员和肺科住院患者共计912份血清标本,采用微量凝集试验检测军团菌抗体效价,并对受检者进行流行病学调查.结果显示,南京市肺科患者军团菌抗体阳性率(46.3%,265/572)显著高于健康从业人员阳性率(39.4%,134/340)(P＜0.05).女性阳性率(45%)比男性阳性率(42.9%)稍高,但无显著性差异(P＞0.05).肺科患者中Lp 1型阳性率最高(14.2% ),其次为Lp 6型(8.9% ),Lp 10型最低(0.17%).健康从业人员中Lp 1型阳性率最高(12.4%),其次为Lp 3型(7.1%),Lp 6型(6.2%)和Lm型(5.0%)较低,Lp9未检出.结果提示,军团菌感染已经成为南京市肺科疾病重要的因素之一,并已对健康从业人员构成潜在危险.     

广州市亚运接待宾馆酒店淋浴热水军团菌污染状况分析

目的对广州市亚运接待宾馆酒店淋浴热水的军团菌污染状况进行调查分析,提出相应的对策。方法采集广州市48间亚运接待宾馆酒店淋浴热水108份,按照卫生部《公共场所集中空调通风系统卫生规范》2006年附录A进行军团菌的检测。结果 108份淋浴热水中,10份淋浴热水共检出11株嗜肺军团菌,阳性率为9.3%;其中LP1、LP3、LP6血清型分别占45.5%、18.2%、36.4%;三星级、四星级和五星级宾馆酒店淋浴热水军团菌的阳性率分别为15.2%、11.1%和2.6%。结论广州市亚运接待宾馆酒店的淋浴热水存在嗜肺军团菌的污染,建议定期清洗消毒淋浴设施,并加强对淋浴热水中军团菌的监测,以防范军团菌病的发生。     

应用单一和双重荧光定量PCR法快速检测军团菌

目的 建立单一和双重荧光定量PCR方法分别和同时进行军团菌属及嗜肺军团菌的检测.方法 利用军团菌属16 S rRNA基因和嗜肺军团菌mip基因设计引物和探针,两条基因探针分别标记FAM和HEX,并将相关反应体系和条件进行优化.分别应用单一基因探针(单一荧光定量PCR)和双重基因探针(双重荧光定量PCR)对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及非军团菌进行检测,并验证两种方法的特异度、敏感度.应用双重荧光定量PCR检测空调水样滤膜样品和DNA提取样品,比较两者结果的一致性.结果 针对军团菌属及嗜肺军团菌,应用荧光定量PCR,16 S rRNA基因和mip基因均能较好的检出,16S rRNA和mip的最低检出限分别为8和10个拷贝.经优化得到了最佳反应体系.单一荧光定量PCR方法所检的8株嗜肺军用菌及4株非嗜肺军团菌16 S rRNA基因均为阳性,嗜肺军团菌mip基因阳性,非嗜肺军团菌mip基因阴性.双重荧光定量PCR方法所检的23株嗜肺军团菌中有2株为假阴性,9株非嗜肺军团菌和非军团菌属中有1株为假阳性.49份空调水样滤膜直接检测和提取DNA后检测的结果一致,其中26份水样军团菌阳性,20份为嗜肺军团菌,6份为非嗜肺军团菌;1份弗朗西斯菌检测HEX阳性(假阳性),占实际培养分离的1/26.结论 单一及双重荧光定量PCR法特异、快速、敏感,一次同时检测嗜肺与非嗜肺军团菌,满足对空调和环境水样军团菌监测的要求.     

应用单一和双重荧光定量PCR法快速检测军团菌

目的 建立单一和双重荧光定量PCR方法分别和同时进行军团菌属及嗜肺军团菌的检测.方法 利用军团菌属16 S rRNA基因和嗜肺军团菌mip基因设计引物和探针,两条基因探针分别标记FAM和HEX,并将相关反应体系和条件进行优化.分别应用单一基因探针(单一荧光定量PCR)和双重基因探针(双重荧光定量PCR)对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及非军团菌进行检测,并验证两种方法的特异度、敏感度.应用双重荧光定量PCR检测空调水样滤膜样品和DNA提取样品,比较两者结果的一致性.结果 针对军团菌属及嗜肺军团菌,应用荧光定量PCR,16 S rRNA基因和mip基因均能较好的检出,16S rRNA和mip的最低检出限分别为8和10个拷贝.经优化得到了最佳反应体系.单一荧光定量PCR方法所检的8株嗜肺军用菌及4株非嗜肺军团菌16 S rRNA基因均为阳性,嗜肺军团菌mip基因阳性,非嗜肺军团菌mip基因阴性.双重荧光定量PCR方法所检的23株嗜肺军团菌中有2株为假阴性,9株非嗜肺军团菌和非军团菌属中有1株为假阳性.49份空调水样滤膜直接检测和提取DNA后检测的结果一致,其中26份水样军团菌阳性,20份为嗜肺军团菌,6份为非嗜肺军团菌;1份弗朗西斯菌检测HEX阳性(假阳性),占实际培养分离的1/26.结论 单一及双重荧光定量PCR法特异、快速、敏感,一次同时检测嗜肺与非嗜肺军团菌,满足对空调和环境水样军团菌监测的要求.     

延安市286例呼吸科患者血清嗜肺军团菌抗体的检测

目的了解延安市嗜肺军团菌的感染情况。方法采用微量凝集法对286份呼吸科住院患者血清标本进行嗜肺军团菌Lp1型军团菌抗体测定。结果抗体阳性率为17．13％,其中男为18．56％,女为15．13％;在各年龄组均有嗜肺军团菌Lp1型抗体阳性者,其中40岁年龄组的感染率（26．09％）最高;呼吸科疾病中肺结核患者合并嗜肺军团菌Lp1感染率较高,为26．56％,各疾病类型之间感染率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论延安市存在一定的嗜肺军团菌感染,需加强对军团病血清学的监测工作。     

茂名市公共场所中央空调冷却水中军团菌污染状况调查

目的调查茂名市公共场所大型中央空调冷却水中军团菌的污染状况及主要血清型。方法于2006年8月至2007年7月．共采集茂名市区部分商场、酒店等中央空调冷却水24份，应用GVPC、BCYE、BCY培养基进行军团分离培养、生化鉴定及血清分型。结果冷却塔冷却水中军团菌的污染率达37．5％（9／24），血清型有LP1、U两种，以LJ（6／9）为主。结论茂名市公共场所大型中央空调冷却水中军团菌检出率较高，对市民健康构成了威胁。     

嗜肺军团菌在武钢青山地区的发现及其检测和防治对策

军团病是因1976年在美国费城退伍军人年会中首次发现急性发热性肺部疾患而被命名的。患者以呼吸道感染为主，死亡率较高。嗜肺军团菌（Legionella pneumophila，Lp）是军团菌属的代表种，是近20年来新发现的传染病之一。我们对武钢青山地区10家单位使用1个月后中央空调系统冷却塔水中的嗜肺军团菌进行检测调查，首次发现嗜肺军团菌的存在，并了解其分布特征和菌型特征，制定出相应的防治策略。     

嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

目的扩增编码Ⅳ型菌毛蛋白的嗜肺军团菌pilE基因,构建重组质粒pET32a（＋）-pilE并在原核系统中表达．纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE．为进一步探讨Ⅳ型菌毛蛋白的作用及其作为军团病的诊断抗原提供实验基础。方法采用聚合酶链式反应（PCR）从嗜肺军团菌扩增得到pilE基因,构建重组质粒pET32a（＋）-pilE,转化大肠杆菌BL21（DE3）并用聚合酶链式反应、限制性酶切分析、序列分析鉴定后,IPTG诱导表达PIIJE蛋白,用硫酸十二烷酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、Western印迹鉴定。使用HisTrap^TM HP亲和层析柱纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。结果扩增出430bp的pilE基因;构建了重组质粒pET32a（＋）-pilE;表达并纯化出35700Mr的目标蛋白。结论成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的原核重组质粒,并在原核系统中得到了高效表达。成功纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。     

162例婴幼儿非典型性肺炎患者抗MP、CP和LP抗体检测的临床意义

非典型肺炎(atyccal pneumonia,AP)是社区获得性肺炎(CAP)中的一种,引起AP病原体主要包括肺炎支原体、肺炎衣原体和嗜肺军团菌等.本研究应用间接免疫荧光法(IIF)对162例婴幼AP患者血清进行抗肺炎支原体(mycoplasma pnemnoniae,MP)抗体、抗肺炎衣原体(chlamydiapneumoniae,CP)抗体和抗嗜肺军团菌(Legionella pneumophile,Lp)抗体联合检测,现报道如下.     

广州市部分公共场所集中空调通风系统卫生现况调查

目的了解广州市部分公共场所集中空调通风系统的卫生现况，为规范公共场所集中空调通风系统的卫生管理提供依据。方法随机抽取广州市部分大型公共场所的集中空调通风系统，对新风量进行检测；对送风中可吸入颗粒物（PM10）、细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌进行检测并对总挥发性有机化合物（TVOC）、军团菌进行检测。结果部分公共场所集中空调通风系统新风量合格率为99．01％，送风中PM10合格率为95．53％．细菌总数合格率为92．64％，真菌总数合格率为90．70％，β-溶血性链球菌合格率为100％；空气净化消毒装置的TVOC合格率为81．05％；冷却水冷凝水中军团菌合格率为89．58％。结论公共场所集中空调通风系统应加强卫生管理。     

嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用

目的 表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(MIP)蛋白,研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值.方法 将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coli BL21感受态细胞,诱导MIP蛋白表达,运用SDS-PAGE分析和亲和层析法纯化.用DRG军团菌IgG/IgM/IgA的ELISA检测试剂盒筛出40份阳性血清和30份阴性血清,用纯化的MIP蛋白建立间接ELISA,同时与R＆D的ELISA IgG、IgM、IgA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后对这两种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及不同检测结果的一致性,来评价该方法的应用价值.结果 诱导相对分子质量(Mr)大约40 000的MIP融合蛋白在E.coli BL21中表达并纯化.纯化蛋白建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与国外ELISA试剂盒(R＆D)进行比较,IgG抗体的灵敏度88.5％,特异度95.5％,一致性Kappa值0.846(P ＜0.05),ROC曲线下面积0.927.IgM抗体的灵敏度89.3％,特异度97.6％,一致性Kappa值0.88(P ＜0.05),ROC曲线下面积0.947.IgA抗体的灵敏度90％,特异度95.2％,一致性Kappa值0.856(P＜0.05),ROC曲线下面积0.931.结论 成功诱导了嗜肺军团菌MIP蛋白稳定表达并纯化,运用MIP作为包被抗原的军团菌肺炎的血清学诊断方法具有较高的诊断价值.     

实时荧光PCR快速检测嗜肺军团菌的研究

目的 建立TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测嗜肺军团菌技术,为临床和环境样品检测嗜肺军团菌提供可实用工具.方法 在对嗜肺军团菌mip序列进行分析、比较基础上,设计一对特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过实时荧光PCR反应条件和反应体系的优化,实现对嗜肺军团菌的快速检测;用克隆到pMD-19T载体上的嗜肺军团菌mip基因阳参片段和不同菌株验证方法的敏感性和特异性.结果 当用热裂解法提取DNA,25μl的反应体系中包括上、下游引物(20μmol/L)各0.6μl,探针(20μmol/L)0.4μl,模板DNA 6.0μl,反应条件为预变95℃20 S,变性95℃10 s,退火50℃ 40 s,40个循环时,TaqMan-MGB探针实时荧光PCR技术对嗜肺军团菌mip基因阳参片段最低检测浓度为0.71拷贝/μl,其循环阈值(Ct值)与模板浓度具有极好的对应关系(r=0.999);1株嗜肺军团菌标准株、12株嗜肺军团菌分离株的Ct值在13.23～16.04之间,而包括金黄葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、痢疾志贺菌共计76株其他菌PCR Ct值均大于30;整个检测过程仅需1.5 h.结论 TaqMan-MGB探针的嗜肺军团菌实时荧光PCR检测方法具有特异性和敏感性、易操作、结果准确可靠等优点,可用于嗜肺军团菌检测.     

双重PCR检测气道肺泡灌洗液在军团菌肺炎早期诊断中的意义

为探讨采用双重PCR方法 (DPCR)检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)标本中军团菌DNA在早期诊断军团菌肺炎方面的意义 ,采用DPCR方法对军团菌肺炎组 (8例 )、临床表现类似军团菌肺炎组 (15例 )、普通肺炎组 (16例 )、肺结核组 (10例 )和肺癌组 (15例 )五组患者留取的BALF标本进行检测。军团菌肺炎组的DPCR阳性检出率为 10 0 % ,明显高于其它四组 (分别为 13 33% ,0 % ,0 % ,0 % ) ,(均P <0 0 1)。模拟BALF标本DPCR的最低检出限为 1× 10 3cfu mL。采用DPCR方法检测BALF标本中的军团菌DNA具有较好的敏感性和特异性 ,此法在临床早期诊断军团菌肺炎方面具有一定的价值     

社区获得性军团菌肺炎39例临床分析

目的 了解社区获得性军团菌肺炎(LP)的临床特征,提高对本病认识.方法 收集确诊社区获得性LP的住院患者39例,对其临床资料进行回顾性总结分析.比较单纯军团菌感染组及合并其他病原菌感染组临床表现、实验室检查、胸部CT及治疗预后等方面的差异结果39例患者,共有34例(87.2％)合并基础疾病,主要为高血压(38.5％)、冠心病(33.3％)、2型糖尿病(25.6％)、恶性肿瘤(23.1％)、肾功能不全(35.9％)、脑血管病(20.5％)等.单纯军团菌感染18例(46.2％),合并其他细菌或真菌感染21例(53.8％).合并感染组的年龄及基础疾病(恶性肿瘤、冠心病、高血压、脑血管病)情况显著高于单纯感染组,差异有统计学意义(P<0.05).临床表现主要为发热(94.9％)、咳嗽(92.3％)、呼吸困难(20.5％)、肌肉酸痛(20.5％),两组间差异无统计学意义.39例患者中,肝功能异常占30.8％、低蛋白血症占76.9％、白细胞升高占43.6％、中性粒细胞百分比升高占79.5％、CRP升高占92.3％、PCT升高占71.8％.合并感染组中,低蛋白血症、白细胞及PCT升高所占比例显著增高,两组差异有统计学意义.39例患者均表现为斑片影,其中多发斑片影33例(84.6％),单发斑片影6例(15.4％),合并胸腔积液10例(25.6％),两组间差异无统计学意义.18例单纯军团菌肺炎患者均给予喹诺酮类抗菌素治疗2周并痊愈.21例合并感染组患者,给予喹诺酮类联合β内酰胺类药物,有4例(19.0％)死亡,17例(81.0％)痊愈.结论 社区获得性军团菌肺炎临床及影像学表现不典型,对于高龄合并基础疾病的老年人,需要警惕军团菌肺炎合并其他细菌及真菌感染的可能,早期诊断并尽早应用喹诺酮类联合β内酰胺类药物,对改善预后至关重要.     

嗜肺军团菌生物膜的形成与毒力基因表达量分析

目的 初步探讨生物膜相关军团菌独特的毒力基因表达特征.方法 在富营养条件下建立静止状态的单细胞嗜肺军团菌生物膜模型.运用反转录real-time PCR技术,比较和分析浮游和生物膜状态下嗜肺军团菌部分毒力基因的表达,毒力基因包括mip、flaA和fliA基因.结果 对数生长后期与对数生长期浮游菌的mip、flaA和fliA基因表达量比值分别为0.53、4.45、3.67,对数生长期浮游菌显示复制态军团菌的毒力基凶表达特征,对数生长后期表达转移态军团菌特点.生物膜相关军团菌与对数生长期浮游菌的mip、flaA和fliA基因表达量比值为4.42、5.24、16.21;与对数生长后期浮游菌的比值为8.39、1.18、4.43,生物膜相关军团菌同时表达复制态和转移态军团菌毒力基因特征.结论 生物膜相关军团菌毒力基因的表达具有其特殊性,有待进一步研究.

Abstract：

Objective To investigate the physiological state of L. pneumophila in biofilm. Methods Genes previously identified as good markers for the transmissive and replicative phases of the L. pneumophila life cycle during growth in Acanthamoeba castellanii were examined for their expression fold change in the sessile cells as compared to planktonic cells using real-time RT PCR. Results Mature L. pneumophila biofilms were formed at 37t in 75 cm2 cell culture treated flasks for 18 days. The ratio of gene (mip, flaA and fliA) expression in post-exponential cells compared to exponential cells is 0. 53, 4. 45 and 3. 67. The exponential phase cultures display replicative traits and post-exponential bacteria express transmissive factors. The ratio of gene (mip, flaA and fliA) expression in sessile cells compared to exponential cells is 4.42, 5.24 and 16.21, while the sessile cells compared to exponential cells is 8.39, 1. 18 and 4. 43, respectively. Conclusion The violence gene expression of L pneumophila in biofilm is unique.     

沉默HDAC6对嗜肺军团菌干扰RAW264.7自噬作用的影响

目的 以嗜肺军团菌感染HDAC6基因沉默的RAW264.7细胞为研究对象,检测自噬流及自噬相关因子表达水平的变化,探究HDAC6在嗜肺军团菌干扰巨噬细胞自噬中的作用机制。方法 利用RNAi技术介导基因沉默,构建shRNAHDAC6细胞,Western blot验证沉默效果。用嗜肺军团菌活菌和灭活菌[感染复数(MOI)=50]分别感染RAW264.7、sh-NC、shRNA-HDAC6细胞6、12、24 h。应用自噬双标质粒pmCherry-C1-EGFP-LC3B检测巨噬细胞自噬流的变化;透射电镜观察嗜肺军团菌感染24 h后各组细胞内的自噬小体和自噬溶酶体;实时荧光定量PCR及Western blot法检测AMBRA1、ATG9B、P62、Beclin1、α-tubulin、LC3B的表达水平。结果 与RAW264.7对照组相比,shRNA-HDAC6细胞的HDAC6蛋白表达水平显著降低(P<0.05);自噬双标质粒检测自噬流结果显示,嗜肺军团菌活菌及灭活菌感染RAW264.7细胞,自噬流均减弱,沉默HDAC6后嗜肺军团菌感染巨噬细胞自噬流增加。透射电镜可观察到嗜肺军团菌感染巨噬...     

招远市口腔诊所污染状况调查

为了解我市口腔诊所消毒工作现状,规范口腔诊所消毒技术规范,预防医源性感染的发生,我们于2006年4月-5月对辖区内的32个口腔诊所进行了细菌污染状况的调查.现将结果报告如下: