烧伤后小鼠海马糖皮质激素受体的变化

目的：观察严重烧伤应激后糖皮质激素受体(GR)的变化特点以及兴奋性氨基酸谷氨酸的3类受体(代谢型受体、离子型NMDA受体、离子型非NMDA受体)对其表达的调节，以期寻找创伤后GR的可靠调节手段。方法：以小鼠背部造成30％总体表面积Ⅲ度烧伤，利用RT-PCR技术。检测烧伤后小鼠海马GR转录水平的变化特点；通过Western-b10t方法检测GR蛋白水平的变化特点；选取烧伤后GR表达最明显的时相点。分别检测烧伤前腹腔注射谷氨酸的3种受体拮抗剂[NMDA受体拮抗剂(MK-801)、非NMDA受体拮抗剂(CNQX)、代谢型受体拮抗剂(MCPG)]对伤后GR mRNA水平的影响。结果：烧伤各组海马GR mRNA水平明显降低；各组海马GR蛋白水平的表达亦明显降低；烧伤前30min腹腔注射MK-801可显著抑制伤后(2h)GR mRNA水平的下降，而腹腔注射CNQX，MCPG却无此作用。结论：严重烧伤可导致海马GR减少，谷氨酸的离子型受体NMDA受体参与了这种变化，提示调控NMDA受体活性可调节创伤后GR的改变。     

糖皮质激素、糖皮质激素受体和热休克蛋白对大鼠严重创伤后早期肝损伤的作用机制

目的 探讨严重创伤后糖皮质激素(GC)、糖皮质激素受体(GR)、热休克蛋白(HSP70)在肝脏继发性损伤中的作用机制。方法 成年雄性Wistar大鼠88只，随机分成正常对照组、严重创伤组、阻断50％GR伴严重创伤组。采用严重胸部撞击伤伴单侧股骨骨折模型、动态观察创伤后大鼠血清皮质醇浓度、肝组织GR及HSP70、肝脏病理、血清肝功能生化指标等变化。结果 创伤后血浆皮质醇浓度迅速增加，伤后4h达到峰值，24h仍维持在高水平；肝组织GR的结合容量伤后即开始下降，12h降至最低，24h有所回升，HSP70在伤后增加，8h达到高峰，24h仍持续在较高水平；但肝脏病理、血清ALT、TB的改变差异无显著性。使用GR阻断剂后，血浆皮质醇浓度较严重刨伤组明显增加，肝淤血明显，肝窦内有较多炎性细胞浸润；血清ALT、TB在伤后早期即有明显升高；肝组织HSP70较单纯创伤组明显增多。结论 GR不足可导致创伤后继发性肝功能不全的发生；HSP70参与了肝组织细胞抗损伤机制的启动；GC、GR及HSP70在严重创伤后肝组织细胞的损伤与抗损伤机制方面起着重要作用。     

小鼠烧伤早期肝组织AP-1 DNA结合活性的变化

目的：观察烧伤小鼠早期肝组织AP－1DNA结合活性的时相变化特点，初步探讨烧伤早期应激和炎症反应的分子机制。方法：将36只BALB／C小鼠随机分为正常对照组和实验组，实验组给予背部Ⅲ度15％－20％烧伤，分别于伤后2、4、6、12、24h用EMSAs测定肝组织AP－1的DNA结合活性。结果：烧伤后2hAP-1的DNA结合活性与正常对照组相比无显著差别，4h后AP－1的DNA结合能力逐渐升高，12h达到最大值，以后渐恢复，至24h仍显著高于正常对照组。结论：烧伤早期引起小鼠肝组织AP－1的DNA结合活性显著增强。     

糖皮质激素受体和热休克蛋白70在大鼠创伤失血性休克肝组织中的变化及其意义

目的从组织细胞受体水平探讨糖皮质激素受体（GR）和热休克蛋白70（HSP70）在创伤失血性休克后肝脏中的变化及其作用。方法采用双侧股骨骨折伴失血性休克致严重创伤模型，动态观察伤后8h大鼠肝组织GR、HSP70、血清肝功能生化指标、肝脏病理等变化。采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）测定肝组织GR、HSP70含量，并进行计算机图像分析。结果单纯股骨骨折伤后，肝组织GR含量于伤后1h即开始下降，6h降至最低，8h仍显著低于正常对照组；创伤合并休克后，GR下降更加明显。HSP70在单纯股骨骨折伤后迅速增加，6h达到峰值，8h仍持续在较高水平；创伤合并休克后，HSP70升高更加显著。单纯股骨骨折伤后，血清丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TB）和白蛋白与正常对照组比较，差异均无显著性。但创伤合并休克后4h和2h血清ALT和TB分别开始明显增高（P均d〈0．01），白蛋白则均下降（P均〈0．01）。创伤合并休克后6h肝脏镜下肝窦内即出现较多炎性细胞浸润。结论GR不足在严重创伤失血性休克后肝脏继发性损害过程中起重要作用，HSP70可能参与了肝组织细胞抗损伤机制的启动。     

糖皮质激素干预对血管瘤患儿血清和瘤组织中GRα、GRβ蛋白及mRNA水平的影响

目的探讨糖皮质激素治疗对血管瘤患儿血清和瘤组织中糖皮质激素受体α(GRα)、糖皮质激素受体β(GRβ)蛋白及mRNA水平的影响。方法选取2012年2月至2014年1月来我院就诊,并同意接受糖皮质激素治疗的血管瘤患儿30例作为实验组,治疗前、后均空腹采静脉血并细针穿刺取血管瘤组织;同期入院接受手术的非血管瘤患儿20例作为对照组,术前空腹采静脉血、术后取小块正常皮肤组织。采用酶联免疫法和实时荧光定量法检测两组血清和组织中GRα、GRβ蛋白及mRNA水平。结果治疗前实验组患儿血清和组织中GRα蛋白及mRNA水平均显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01),GRβ蛋白及mRNA水平略升高差异无统计学意义(P0.05);治疗后实验组患儿血清和组织中GRα蛋白及mRNA水平明显降低,与对照组比较差异无统计学意义(P0.05),GRβ蛋白及mRNA水平略升高差异无统计学意义(P0.05)。结论糖皮质激素能通过结合GRα,下调GRα的蛋白及mRNA水平,抑制血管瘤的增殖,从而促进血管瘤的消退,对GRβ蛋白及mRNA水平无调控作用。     

烧伤早期肝组织JNK1及其磷酸化的变化

目的:观察烧伤小鼠早期肝组织JNK1及其磷酸化的时相变化特点,初步探讨烧伤后应激的分子机制。方法:将36只BALB/C小鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组给予背部Ⅲ°15％-20％烧伤。分别于伤后2h、4h、6h、12h、24h用western blot测定肝组织JNK1的蛋白表达及其磷酸化水平。结果:烧伤后各时相点肝组织JNK1在蛋白水平与正常对照相比没有统计学意义的变化;而烧伤后早期(2h)JNK1磷酸化程度显著增加,4h达到高峰,6h时仍显著高于正常对照组水平(P<0.01),以后逐渐恢复至正常。结论:烧伤早期引起小鼠肝组织JNK1的磷酸化程度显著增强,而蛋白表达无明显变化。     

7周递增运动负荷训练过程中糖皮质激素受体的变化

目的：为探讨不同运动负荷量作用后的机体靶细胞糖皮质激素受体（GR）变化特征。方法：复制相应的动物运动模型，观察7周递增运动负荷训练过程中不同运动负荷量作用后大于肝胞液GR结合量的变化。采用竞争性蛋白结合分析法检测血浆皮质酮浓度；放射配体结合分析法测定靶细胞胞液糖皮质激素受体结合量。结果：运动后GR减少呈运动负荷量依赖性。结论：7周递增负荷运动过程中，GR呈渐进性减少，在运动至第7周时达最低点。     

头部X线照射后大鼠血清中糖皮质激素含量及脾细胞中糖皮质激素受体变化机制的研究

观察头部Ｘ线照射后血清皮质酮含量和脾细胞中糖皮质激素受体的变化及其机制。给Ｗｉｓ－ｔａｒ大鼠以１０ＧｙＸ线头部照射后不同时间测定其血清皮质酮含量和脾细胞中糖皮质激素受体。结果表明：头部Ｘ线照射后皮质酮含量的变化呈双峰曲线，第１天即显著增高，至第９天仍显著增高；头部Ｘ线照射后２４小时受体数已显著降低，至第９天恢复近正常，受体和皮质酮含量的变化规律无相关性；体外实验也证实内源性糖皮质激素含量的增高不是引起受体变化的主要原因；头部Ｘ线照射后脾脏中Ｂ淋巴细胞数的减少与糖皮质激素受体的变化规律相同，而Ｔ淋巴细胞增多，说明脾细胞中糖皮质激素受体的变化可能和Ｔ、Ｂ淋巴细胞比例的变化有关；头部Ｘ线照射后受体的最大结合容量有降低趋势，但差异不显著，而平衡解离常数（Ｋｄ）值显著增大，亲和力降低，说明受体数的减少是亲和力降低的结果。作者提出，在应激反应中存在复杂的神经内分泌免疫调节系统，只有综合考虑激素和受体等多方面的改变，才能对应激反应作出正确的分析。     

清醒小鼠严重颅脑闭合性撞击伤后外周血TNF-α IL-1β皮质醇和肝脏GR蛋白表达的变化

目的 研究小鼠严重闭合性脑创伤后外周血中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TMF-α)的变化与肝脏肝皮质激素受体(GR)变化的关系。方法 利用BIM-Ⅲ型小型多功能动物撞击机对小鼠清醒致伤，于致伤后30min、2h、8h、24h、48h、72h采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组外周血清中细胞因子的含量，放免法检测皮质醇含量，Western Blot免疫印迹法检测肝脏GR的蛋白水平的变化。结果 致伤后外周血中TNF-a、IL-18、皮质醇较对照组有明显升高，均具有两个峰值特征；GR在致伤2h后开始出现蛋白水平表达降低，72h仍未完全恢复正常。结论 严重颅脑外伤后外周组织存在糖皮质激素抵抗，与TNF-α、IL-1β关系密切。     

烧伤后小鼠海马糖皮质激素受体的变化

目的观察严重烧伤应激后糖皮质激素受体(GR)的变化特点以及兴奋性氨基酸谷氨酸的3类受体(代谢型受体、离子型NMDA受体、离子型非NMDA受体)对其表达的调节,以期寻找创伤后GR的可靠调节手段。方法以小鼠背部造成30%总体表面积Ⅲ度烧伤,利用RT-PCR技术,检测烧伤后小鼠海马GR转录水平的变化特点;通过Western-blot方法检测GR蛋白水平的变化特点;选取烧伤后GR表达最明显的时相点,分别检测烧伤前腹腔注射谷氨酸的3种受体拮抗剂[NMDA受体拮抗剂(MK-801)、非NMDA受体拮抗剂(CNQX)、代谢型受体拮抗剂(MCPG)]对伤后GRmRNA水平的影响。结果烧伤各组海马GRmRNA水平明显降低;各组海马GR蛋白水平的表达亦明显降低;烧伤前30min腹腔注射MK-801可显著抑制伤后(2h)GRmRNA水平的下降,而腹腔注射CNQX,MCPG却无此作用。结论严重烧伤可导致海马GR减少,谷氨酸的离子型受体NMDA受体参与了这种变化,提示调控NMDA受体活性可调节创伤后GR的改变。     

地塞米松对人单核细胞糖皮质激素受体蛋白表达的影响

目的研究不同浓度的地塞米松,在不同的刺激时间下对人单核细胞糖皮质激素受体蛋白(GRα,GRβ)表达的影响。方法对培养的人单核细胞株THP1给予不同浓度的地塞米松,在不同的刺激时间下,采用Westernblotting检测细胞中GRα、CRβ蛋白表达。结果人的单核细胞中存在GRQ、GRB受体。GRQ表达量在相同浓度地塞米松刺激下,随刺激时间的延长表现出下调;GRB表达量随地塞米松刺激浓度的增加以及刺激时间的延长而上调。结论GRα表达量随地塞米松刺激时间的延长表现出下调。GRβ表达量随地塞米松浓度的增加、刺激时间的延长而上调,具有一定的剂量和时间依赖性。GRα、GRβ的表达受糖皮质激素的调节。     

Effects of glucocorticoids on leukocytes: Genomic and non-genomic mechanisms

Glucocorticoids (GCs) have been widely used as immunosuppressants and anti-inflammatory agents to treat a variety of autoimmune and inflammatory diseases, and they fully exert their anti-inflammatory and immune-regulating effects in the body. The effect of GCs on white blood cells is an important part of their action. GCs can cause changes in peripheral blood white blood cell counts by regulating the proliferation, differentiation, and apoptosis of white blood cells. Although the total number of white blood cells, neutrophil counts, lymphocytes, and eosinophils increases, the counts of basic granulocytes and macrophages decreases. In addition, GCs can regulate the activation and secretion of white blood cells, inhibit the secretion of a variety of pro-inflammatory cytokines, the expression of chemokines, and promote the production of anti-inflammatory cytokines. For patients on GC therapy, the effects of GCs on leukocytes were similar to the changes in peripheral blood caused by bacterial infections. Thus, we suggest that clinicians should be more cautious in assessing the presence of infection in children with long-term use of GCs and avoid overuse of antibiotics in the presence of elevated leukocytes. GCs work through genomic and non-genomic mechanisms in the human body, which are mediated by GC receptors. In recent years, studies have not fully clarified the mechanism of GCs, and further research on these mechanisms will help to develop new therapeutic strategies.     

糖皮质激素治疗IgA肾病79例临床分析

目的　探讨糖皮质激素在IgA肾病治疗中的价值,为其临床干预治疗提供依据。方法　对应用糖皮质激素治疗的79例IgA肾病患者的临床资料进行回顾性分析。结果　79例IgA肾病患者肾组织活检后平均随访( 39. 6 ±42. 2 )个月;治疗前尿蛋白量为( 1. 57 ±2. 40 )g/24 h, 治疗后则降到(0. 43±1. 07)g/24h(P=0. 000 );治疗前平均内生肌酐清除率为( 86. 64±29. 99 )ml/min,治疗后为(92. 06±35. 90)ml/min(P>0. 05)。同时不同蛋白尿程度、有无高血压、治疗前有无肾功能受损及不同的肾脏病理表现的患者激素治疗后尿蛋白水平均显著降低。结论　应用糖皮质激素治疗IgA肾病能显著降低其患者的蛋白尿,保护肾功能。     

环孢素联合糖皮质激素治疗IgA肾病的研究

目的观察环孢素联合糖皮质激素治疗以大量蛋白尿（蛋白尿≥3.5g/d）为主要表现的IgA肾病的临床效果。方法34例符合条件的IgA肾病患者随机入组环孢素联合激素治疗组（观察组,18例）和糖皮质激素治疗组（对照组,16例）,记录并比较两组患者治疗6个月时的24h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐及肾小球滤过率等指标,并观察两组患者的不良反应。结果两组患者治疗6个月时的24h尿蛋白定量较治疗前显著下降（P均〈0.05）,血清白蛋白水平较治疗前显著升高（P均〈0.05）,治疗前后血清肌酐水平及eGFR水平差异均无统计学意义,且两组间总有效率的差异无统计学意义（P=0.311）。两组均无因发生不良反应而退出研究者。结论环孢素联合糖皮质激素治疗以大量蛋白尿为主要表现的IgA肾病较单纯激素治疗起效快、疗效好,且不良反应少。     

激素对肺损伤大鼠肺内水通道蛋白-1及钠钾-ATP酶的影响

目的 观察不同剂量氢化可的松（hydrocortisone,HC）对急性肺损伤（ALI）大鼠肺内水通道蛋白-1（AQP-1）和钠钾-ATP酶的影响及机制.方法 间隔5 h分2次注射灭活大肠杆菌建立早期休克Wistar大鼠ALI模型.40只鼠随机分为5组：正常对照组、肺损伤组、大剂量HC组（150 mg/kg）、中剂量HC组（20 mg/kg）、小剂量HC组（6 mg/kg）.给药2 h后收集肺组织标本,观察肺组织病理形态和计算肺损伤病理评分,并采用免疫组化法观察肺内水通道蛋白-1、钠钾-ATP酶、糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）的表达.结果 肺损伤组肺损伤病理评分显著高于正常对照组（P＜0.05）.使用HC干预后,各剂量组较肺损伤组明显降低（P＜0.05）,以小剂量组下降最明显（P＜0.05）.中剂量组肺损伤病理评分虽较大剂量组降低,但两组间差异无显著性;肺内AQP-1和钠钾-ATP酶表达,肺损伤组显著低于正常对照组（P＜0.05）,使用HC干预后,各剂量组肺内AQP-1和钠钾-ATP酶表达均较肺损伤组升高,以小剂量组最明显（P＜0.05）,中剂量组较大剂量组表达增强,但差异无显著性;肺内GR表达,肺损伤组显著低于正常对照组（P＜0.05）,使用HC干预后,各剂量组肺内GR表达均较肺损伤组升高,但仅小剂量组差异达显著性（P＜0.05）.大、中剂量组间差异无显著性.指标间相关性分析提示,GR与AQP-1和钠钾-ATP酶表达均存在明显直线正相关关系（r=0.43,P=0.007;r=0.31,P=0.015）.结论 不同剂量HC干预早期休克大鼠ALI显示,在改善肺泡液体转运、肺组织病理改变等方面,均以小剂量HC最佳,未发现剂量依赖效应.不同剂量HC干预效果差异的原因可能与GR表达水平有关.     

大剂量糖皮质激素对百草枯中毒患者血中细胞外基质成分的影响及意义

目的观察糖皮质激素对百草枯中毒患者血中细胞外基质成分的影响及其意义。方法采用病例对照研究方法,将36例患者随机分为试验组（采用大剂量甲基强地松龙冲击和长疗程）20例和对照组（常规剂量组）16例。在患者入院第1、3、10天分别采静脉血,用放射免疫法测定细胞外基质成分：层黏蛋白（LN）、透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（CIV）含量。结果用药后第1天两组血中细胞外基质成分含量差异无统计学意义（P〉0．05）,第3和第10天静脉血中HA、PCⅢ和CIV含量试验组明显低于与对照组（P〈0．05）,而LN两组间差异仍无统计学意义;死亡率试验组明显低于对照组（P〈0．05）。结论大剂量激素可能通过减少HA、PCm和CIV等细胞外基质成分的含量,抑制百草枯致肺纤维化作用,降低其死亡率。     

糖皮质激素对于活化RBL-2H3表达IL-5的影响

目的:探讨糖皮质激素对于活化RBL-2H3(简称RBL)表达白细胞介素5(IL-5)的影响。方法:利用抗原和钙离子载体A23187分别激活RBL表达IL-5,通过总RNA提取、逆转录和半定量PCR研究加入糖皮质激素后对于RBL活化表达IL-5的影响。结果:经A23187活化的RBL,加入10-7mol/L地塞米松后,其IL-5表达量降低到对照的9%,加入10-6mol/L氢化可的松后,其IL-5表达量降低到对照的8.5%。经抗原活化的RBL,加入10-6mol/L地塞米松后,其IL-5表达量降低到对照的12%,加入10-6mol/L氢化可的松后,其IL-5表达量降低到对照的9%。结论:糖皮质激素对于活化RBL表达IL-5具有极大的抑制作用,提示糖皮质激素在临床上治疗哮喘的作用与其抑制肥大细胞表达IL-5存在一定关系。     

血浆VIP含量与缓解期慢性阻塞性肺病患者吸入糖皮质激素疗效的关系

目的 :探讨血浆中血管活性肠肽 (vasoactiveintestinalpeptide ,VIP)含量与非哮喘性缓解期慢性阻塞性肺病 (COPD)患者吸入糖皮质激素疗效的关系。方法 :采用放免法 (RIA)测定非哮喘性COPD及健康正常人 (HS)血浆VIP含量。选择 74例非哮喘性COPD患者 ,以健康正常人血浆VIP含量 x - 2S为标准 ,分为两组 :血浆VIP含量低于 x - 2S为VIPL组 (38例 ) ,血浆VIP含量高于 x - 2S为VIPH组 (36例 )。 74例均予布地奈德 80 0 μg·d-1吸入治疗 ,共 6周。治疗前、后检测常规肺功能、血浆VIP含量并进行比较。结果 :VIPL组 ,吸入糖皮质激素治疗后FEV1.0显著提高 (治疗前 1.4 9± 0 .2 6L ,治疗后 1.75± 0 .5 2L ,P <0 .0 5 ) ,有效率为 92 .1% (35 / 38) ;血浆VIP含量亦有不同程度升高 (治疗前 9.74± 4 .4 7,治疗后 15 .0 2± 7.12 )两者具有相关性 (r =0 .6 2 ,P <0 .0 1)。VIPH组治疗前、后各项指标无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,有效率为 2 .8% (1/ 36 )。两组比较 ,有显著差异 (P <0 .0 1)。结论 :血浆VIP含量较低的缓解期COPD患者吸入糖皮质激素治疗可能有效。提示我们可以根据缓解期COPD患者血浆VIP含量来判断该患者是否需要使用糖皮质激素治疗     

Application of denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) to screen for mutations of the human glucocorticoid receptor alpha gene (hGRalpha)

OBJECTIVES: In a previous publication, we had presented a sensitive method to detect mutations of the segment of the human glucocorticoid receptor alpha (hGRalpha) gene encoding the ligand binding domain (LBD) and part of the DNA binding domain (DBD) of hGRalpha, as several types of glucocorticoid resistance syndromes have been correlated with mutations in the respective nucleotide sequences. However, mutations affecting various regions covering the whole length of hGRalpha are increasingly reported in a variety of disease states. We now present an expanded screening methodology to detect mutations covering the whole length of hGRalpha. DESIGN AND METHODS: We developed a sensitive, simple screening PCR-DGGE method to detect mutations in the aminoterminal domain and DNA-binding domain of the hGRalpha. Wild type hGRalpha cDNA and mutant samples were included in the analysis to ensure the accuracy and sensitivity of the method. RESULTS: The PCR-DGGE method identified the mutant samples and discriminated them from wild type hGRalpha. CONCLUSIONS: The method described is accurate, sensitive, simple, cheap and fulfills the critera for a screening method which will be useful in delineating possible involvement of hGRalpha mutations in the aetiopathology of diseases correlated to derangements of glucocorticoid action.     

大剂量地塞米松冲击疗法对胰岛β-细胞功能的影响

目的通过短期应用糖皮质激素来研究血糖、血清胰岛素（Insulin）、瘦素（Leptin）的水平变化与关系。方法采用酶联免疫法分析对43例有应用地塞米松的患者进行血糖、血清瘦素、胰岛素含量测定,比较其血糖、胰岛素、瘦素含量的水平变化。结果与未治疗前相比,接受地塞米松治疗的43例患者,第1、3、7天治疗后血糖、瘦素、胰岛素明显升高,但是,未达到糖尿病的诊断标准,且1周后均回到基线水平。结论糖耐量正常者短期应用地塞米松仍会导致胰岛素抵抗,停药后可以恢复。