心肌显像联合冠状动脉造影及组织学检查在评价Ad-HGF治疗猪心肌梗死疗效中的价值

目的探讨心肌静息显像联合冠状动脉造影及组织学检查在评价重组腺病毒-肝细胞生长因子（Ad—HGF）治疗猪实验性心肌梗死中的价值。方法低、中、高剂量Ad—HGF治疗组[Ad-HGF剂量依次为10^8，4×10^8，5×10^9空斑形成单位（PFU）／点；均分10点注射]，生理盐水对照组及空白对照组小型猪各5头，分别于治疗前后行静息心肌显像及冠状动脉造影，并于治疗后行组织学检查。结果空白对照组及生理盐水对照组治疗前后心肌灌注及Rentrop评分无明显变化。各Ad-HGF治疗组治疗后心肌灌注及Rentrop评分较治疗前改善，低、中、高剂量组治疗前后冠状动脉左回旋支（LCX）供血节段得分分别为7．8±1．3和16．4±1．1（低），8．2±1．6和17．6±0．9（中），8．4±1．5和19．0±0．7（高）；各组治疗前后LCX供血区域Rentrop评分分别为0．80±0．16和1．66±0．15（低），0．94±0．11和2．16±0．11]（中），0．90±0．22和2．22±0．19（高）。3组治疗前后数据比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。各Ad-HGF治疗组及空白对照组治疗后血管数量明显多于生理盐水对照组。结论用心肌静息显像联合冠状动脉造影及组织学检查评价Ad-HGF治疗猪心肌梗死的疗效有价值。     

肝细胞生长因子基因转染大鼠急性脑卒中模型的生物效应

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）基因转染大鼠急性脑卒中模型后的表达情况及其生物学效应。方法39只实验用大鼠，线栓法制备成可控性急性大鼠脑卒中模型。利用基因重组技术将HGF基因与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因标记的真核表达载体PIRES2-EGFP进行融合，构建真核细胞表达质粒。通过脂质体介导法，立体定向下多点注射到大鼠急性脑卒中模型的缺血半暗带区域行基因转染，转染7d后断头取大鼠脑组织，切片观察HGF基因在大鼠脑内的表达情况；并采用兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体对大鼠脑组织进行免疫组化染色，显微镜下随机检测5个高倍视野下缺血半暗带区血管数量；同时在基因转染前及转染后7d，应用CT灌注扫描对实验鼠脑血流量进行监测，观察基因转染对脑血流量的影响。将大鼠脑卒中模型随机分成3组（每组13只）：（1）注射脂质体／pIRES2-EGFP-HGF质粒的实验组；（2）注射脂质体/PIRES2-EGFP空载质粒的空载体对照组；（3）空白对照组（未进行注射）。结果酶切鉴定及基因测序证实，HGF基因片段已克隆到PIRES2-EGFP的BamH Ⅰ和SalⅠ位点之间。HGF基因转染大鼠缺血半暗带区7d后，利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达，用免疫组化方法进一步证实了HGF的表达。实验组大鼠转染局部血管数量（46．71±7．11）条／5个高倍视野，明显多于对照组的（20．43±3．21）条／5个高倍视野和空白对照组的（18．00±3．27）条／5个高倍视野（F=74．447；P＜0．01）；CT灌注显示其梗死侧大脑半球的脑血流量（63．82±6．08）％也高于对照组（53．58±4．19）％和空白对照组（52．46±4．93）％（F=10．445；P＜0．01）。结论脂质体转染HGF基因能够在缺血半暗带区表达，表达产物能够发挥生物学效应，促进局部血管侧支循环形成。     

BTEB2反义基因转染对血管平滑肌细胞迁移的影响

目的：研究BTEB2反义基因转染对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法：将BTEB2 cDNA反向克隆至腺病毒载体,构建携带反义BTEB2基因的重组腺病毒Ad-ASBTEB2;用Ad-ASBTEB2转染VSMC,经免疫印迹法检测BTEB2蛋白质表达;通过改良Boyden趋化小室检测VSMC迁移数;用免疫细胞化学技术检测促VSMC迁移血小板源性生长因子B链（PDGF）的表达。结果：（1）Ad-ASBTEB2转染明显抑制VSMC的BTEB2蛋白表达;（2）Ad-ASBTEB2组VSMC迁移数较未转染组（P〈0．01）和Ad．LacZ组（P〈0．01）显著减少;（3）Ad-ASBTEB2组PDGF-BB表达较Ad．LacZ组和未转染组显著降低。结论：BTEB2反义基因转染显著抑制AngⅡ诱导的VSMC的迁移,这种抑制作用可能是通过减少促迁移因子的表达而实现的。     

利用报告基因rNIS监测大鼠骨髓间充质干细胞移植大鼠心肌的可行性研究

目的 研究大鼠钠碘转运体（rNIS）作为报告基因监测大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSC）移植至大鼠心肌的可行性.方法 构建含rNIS/增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的重组腺病毒载体（Ad/rNIS/EGFP）,转染rBMSC后应用荧光显微镜观察细胞表达EGFP情况.按随机数字表法将健康大鼠分为3组,rNIS组大鼠心肌内移植转染rNIS的rBMSC 抑制组大鼠心肌内移植转染rNIS的rBMSC,γ显像前口服高氯酸纳 对照组大鼠心肌内移植未转染病毒的rBMSC.细胞移植到大鼠心肌后,以99TcmO4-作为报告探针对大鼠进行γ显像,随后进行生物学分布实验,用实时聚合酶链反应（PCR）和Western blot分别检测心肌组织中rNIS基因和蛋白表达水平,免疫组织化学检测心肌组织中CD11b、CD29、CD34、CD44、CD45和CD90表达情况.组间计量资料的差异用t检验分析.结果 重组腺病毒转染后,荧光显微镜下可见到高表达EGFP的rBMSC.rNIS转染的rBMSC移植到大鼠心肌后,γ显像能清晰显示移植部位的心肌,心肌/右前肢放射性比值（RUR）为6.7±0.4,对照组RUR为3.0±0.2,二者之间比较差异有统计学意义,t=2.78,P=0.03.生物学分布实验中,对照组心肌组织的每克组织百分注射剂量率（%ID/g）为2.5±0.4,明显低于rNIS组的60.2±20.8,差异有统计学意义,t=7.13,P＜0.001.移植心肌组织中rNIS的基因和蛋白都高表达,而对照组心肌组织rNIS表达较低.移植转染细胞的心肌组织中,CD29、CD44、CD90表达阳性,CD11b表达弱阳性,CD34、CD45表达阴性.结论 rNIS可作为报告基因有效监测rBMSC移植大鼠心肌.     

异舒吉^99Tc—MIBI心肌断层显像评价直接PTCA术与溶栓治疗心肌梗死的效果

目的：异舒吉^99mTc－MIBI心肌断层比较直接经皮冠状动脉内成形术（PTCA）与溶栓治疗急性心肌梗死的效果。材料与方法：对47例经直接PTCA治疗（A组）、溶栓再灌注成功（B组）和失败（C组）的急性心肌梗死患者异舒吉和静态^9mmTc－MIBI心肌显像。20例经介入性治疗患者,术后3个月复查静态心肌显像。结果：不论是静态,还是异舒吉^99mTc-MIBI心肌显像,A组心肌缺损面积小于B组,B组小于C组,三组之间差异有显著性。与静态心肌显像比较,A组和B组异舒吉心肌显像提示心肌灌注明显改善,在C组改善不明显,其中A组异舒吉心肌显像灌注改善大于B组＋C组。15例介入治疗异舒吉显像有心肌存活者,术后心肌缺损面积缩小,由术前36．3％±22．6％降至22．0％±19．3％。5例无心肌存活者,术后心肌缺损面积与术前比较无差异。结论：异舒吉^99mmTc－MIBI心肌断层显像定量分析显示直接PTCA术可减少心肌缺损面积,挽救更多的濒死心肌,同时可准确识别心肌梗死后存活心肌。     

注射速率对孤立性肺结节64层螺旋CT灌注成像影响的初步研究

目的：利用64层螺旋CT探讨孤立性肺结节CT灌注成像技术中对比剂注射速率对结果的影响。方法：对50例孤立性肺结节患者进行前瞻性研究。随机将患者分为两组，注射速率分别为3ml／s（组1）及5ml／s（组2）；男性34例，女性16例。年龄范围28～73岁，平均年龄56．02±9．11岁。其中，43例通过手术证实；2例通过CT引导经皮肺穿刺活检证实；1例通过纤支镜活检证实；4例同时发现全身多处转移性肿瘤。结果：组1中，血流量值：49．006±42．429ml·100g^-1·min^-1、血容量：3．358±4．608ml／100g，平均通过时间：6．307±3．772s，表面渗透性：9．378±9．040ml·100g^-1·min^-1。组2：血流量：52．917±61．206ml·100g^-1·min^-1，血容量：3．045±4．671ml／100g，平均通过时间：6．079±3．831s，表面渗透性：8．142±7．082ml·100g^-1·min^-1。组1与组2结节血流量（P=0．249〉0．05）；血容量（P=0．737〉0．05）；平均通过时间（P=0．776〉0．05）；表面渗透性（P=0．454〉0．05）。不同注射速率的两组孤立性肺结节灌注值统计学差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：不同的对比剂注射速率（3ml／s和5ml／s）对64层螺旋CT孤立性肺结节灌注成像无明显影响。     

^13N—NH3 PET及冠状动脉造影评价CD151基因转染对小型猪心肌梗死后血流灌注的影响

目的用^13N—NH,PET及冠状动脉造影共同评价CD151基因转染促小型猪心肌梗死后血运重建。方法结扎20头小型猪冠状动脉左前降支（LAD）,建立心肌梗死模型。对梗死区及梗死周围心肌直接注射CD151及绿色荧光蛋白（GFP）重组腺相关病毒（rAAV）进行基因转染。8周后用免疫组织化学方法分析心肌组织CD151蛋白的表达和心肌组织微血管密度,用^13N—NH,PET显像评价心肌血流灌注,用LAD造影评价侧枝循环的建立。采用SPSS11．0软件行配对t检验或方差分析（ANOVA）。结果CD151基因转染促进局部心肌组织CD151高表达并增加缺血区心肌组织微血管密度。rAAV—CD151组心肌血流灌注明显增加,心肌缺血总分值为10．82±2．36,明显小于rAAV—GFP组（19．33±1．67,t=5．86,P=0．002）。冠状动脉造影显示rAAV—CD151组缺血心肌的侧枝循环建立明显较rAAV—GFP组增加。结论CD151基因转染可以明显促进心肌梗死后血运重建、增加血流灌注。^13N—NH,PET及冠状动脉造影能直观地评价心肌血运重建。     

白介素-1β预处理对心肌细胞粘附分子表达的影响

为观察IL－1β预处理后心肌细胞粘着分子（CAMs)表达的变化及其与延迟保护（DP）作用的关系，在大鼠心肌缺血再灌注（I／R）模型上设假手术对照组（C组）、生理盐水组（NS组）和IL－1β预处理组（ILPC组），采用原位杂交、免疫组化及酶法检测低剂量IL－1β注入大鼠后即刻、12h和24h心肌细胞间粘附分子－1（ICAM-1)mRNA及其蛋白质表达和白细胞功能相关抗原－1（CD11a)蛋白质表达的变化，以及中性粒细胞（PMNs)的浸润数，并测定心肌梗死面积。结果发现，与C组比较，NS组和ILPC组各时相点ICAM－1 mRNA及其蛋白质表达和CD11a蛋白质表达以及PMNs浸润数均显著增加（P＜0．05或0．01），但ILPC组后24h I/R末，上述指标的增幅明显减少（P＜0．05），且心肌梗死面积显著下降（P＜0．05）。即刻和12h,ILPC组与NS组比较差异无显著性意义（P＞0．05）。提示，低剂量IL－1β预处理可使心肌延迟期CAMs表达减少而产生延迟保护作用。     

血红素氧合酶-1对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用研究

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的效果及作用机制。方法采用HO-1的诱导剂钴原卟啉(CoPP)和抑制剂锌原卟啉(ZnPP)分别进行干预处理后,建立大鼠的心肌缺血-再灌注损伤模型,观察大鼠再灌注后心肌形态变化;检测血红素氧合酶-1基因在大鼠心肌的表达情况;测定大鼠左心室心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果再灌注前使用CoPP进行预处理,可以诱导HO-1蛋白的表达上调。HO-1蛋白表达上调可以减少缺血-再灌注后的心肌细胞坏死,提高心肌组织中SOD含量并降低MDA的含量。结论CoPP诱导的HO-1过表达可以抑制心肌缺血-再灌注损伤后的细胞坏死,从而减轻心肌的再灌注损伤,其主要机制与抗氧自由基有关。     

血管紧张素Ⅱ2型受体重组腺病毒的扩增及其在INS－1细胞中的转染

目的：利用人胚肾（HEK）293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）基因的重组腺病毒,并在大鼠胰岛素瘤细胞INS－1细胞株中进行转染,构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和对照病毒Ad－CMV－EGFP,并测定病毒滴度。在INS－1细胞中瞬时转染后利用实时PCR、Western 印迹以及免疫荧光和激光共聚焦技术检测细胞中AT2R与AT1R的表达。结果扩增后得到重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和Ad－CMV－EGFP的滴度分别为9×109和8×109 pfu／ml。在INS－1细胞中转染Ad－G－AT2R－EGFP后,AT2R mRNA的表达随病毒感染复数（multiplicity of infection,MOI）值的增加呈剂量依赖性增加。当MOI值为10时,AT2R mRNA的表达达到峰值（P＜0．05）,同时AT2R蛋白的表达明显高于转染了Ad－CMV－EG－FP的细胞和未转染细胞,但AT1R的表达无显著变化。结论成功扩增并得到高滴度且携带有AT2R基因的重组腺病毒载体,并将其转染入INS－1细胞中构建出AT2R高表达的胰岛β细胞模型,为下一步探讨AT2R在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。