一种制备兔抗人IgG抗体的简易方法

目前,制备兔抗人ＩｇＧ的方法很多,但没有一个统一的具体方案,难以制备出理想的高效价抗体。我们根据抗体产生的基本原理,参照有关文献,探索出一种能得到高效价抗体的简易的方法,介绍如下：材料和方法１抗原制备参照文献［１、２］进行。选取多份健康人混合血清,新...     

血栓患者抗心磷脂抗体与纤维蛋白原关系

目的 :观察血栓患者抗心磷脂抗体 (ACA)与纤维蛋白原 (Fg)之间的关系。方法 :应用间接ELISA法检测 10 2例血栓患者和 6 0例正常人血清中的ACA水平 ,并同时在生化分析仪上测定Fg含量。结果 :急性心肌梗死、脑梗死、肾病综合征ACA阳性率分别为 38.2 %、33.3%、31.3% ,6 0份正常人血清全呈阴性 (Fg<4 .0g/L)。 35例ACA阳性患者中Fg同时升高的有 12例。结论 :3组血栓患者ACA阳性率均高于正常对照组 ,各种血栓患者 3种Ig类别ACA阳性检出率无显著差异 ,实验组存在一定程度的Fg含量的升高 ,其中尤以ACA阳性者为甚 (P <0 .0 1)。ACA与Fg含量的升高都会加重或加快微血管血栓的形成。     

血清抗心磷脂抗体、纤维蛋白原与急性脑梗死的关系

目的 探讨抗心磷脂抗体(ACA)翻:维蛋白原(Fg)与急性脑梗死(ACI)的关系,为临床诊断和预防脑梗死提供依据.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定80例ACI患者清晨空腹血清中ACA、Fg的含量进行检测,并与正常组40例健康体检者进行对照.结果 ACI组的ACA阳性率远较正常对照组高(P<0.01).ACA阳性组Fg含量显著高于ACA阴性组;脑梗死患者病情越重,Fg含量越高,血清IgG-ACA阳性率也越高.ACI组患者神经系统功能缺损程度评分与血清抗心磷脂抗体水平呈正相关.随时间变化,ACA阳性率逐渐减少,第1周与第2,3,4周ACA相比较,差异显著(P<0.01).ACA阳性与≤50岁脑梗死患者关系密切.ACA的存在与Fg含量升高显著相关(r=0.714,P<0.01)结论血清中ACA、Fg动态变化对急性脑梗死的诊断、预后有一定的帮助,ACA可能参与了年龄较轻脑梗死患者的发病过程;ACA、Fg含量的升高都会加重或加快微血管血栓的形成.     

细胞融合法制备抗人CD3—抗人IgMμ链双特异性抗体

目的 制备抗入CD3－抗人IgMμ链双特异性抗体（Bispecific antibody,BsAb)的细胞株,并对建株的杂交－杂交瘤的稳定性及活性进行鉴定。方法 将抗入CD3单克隆抗体细胞株采用8－AG诱变成HAT敏感杂交瘤细胞株,再通过FuGENE^TM6转染含neo基因质粒pCDaA3,制备成具有双标记杂交瘤αCD3 HAT^S G418^R亚系,与抗人IgMμ链单克隆抗体细胞株融合,通过ELISA法及流式细胞仪筛选,制备分泌BsAb的细胞株。结果 融合6次,共接种1080孔,共得5株抗CD3－抗IgM杂交－杂交瘤。经亚克隆后,其中2株体外连续传代培养2月仍保持良好的分泌BsAb功能。结论 采取细胞融合法可成功制备分泌BsAb的杂交－杂交瘤,其稳定性及效价与亲本杂交瘤相似。     

细胞融合法制备抗人CD3-抗人IgM μ链双特异性抗体

目的制备抗人CD3-抗人IgMμ链双特异性抗体(Bispecific antibody,BsAb)的细胞株,并对建株的杂交-杂交瘤的稳定性及活性进行鉴定.方法将抗人CD3单克隆抗体细胞株采用8-AG诱变成HAT敏感杂交瘤细胞株.再通过FuGENETM6转染含neo基因质粒pCDaA3,制备成具有双标记杂交瘤αCD3 HATsG418R亚系,与抗人IgMμ链单克隆抗体细胞株融合.通过ELISA法及流式细胞仪筛选,制备分泌BsAb的细胞株.结果融合6次,共接种1 080孔,共得5株抗CD3-抗IgM杂交-杂交瘤.经亚克隆后,其中2株体外连续传代培养2月仍保持良好的分泌BsAb功能.结论采取细胞融合法可成功制备分泌BsAb的杂交-杂交瘤,其稳定性及效价与亲本杂交瘤相似.     

制备羊抗兔 IgG 抗体的1种简单方法

制备羊抗兔ＩｇＧ抗体的１种简单方法首都医科大学微生物学免疫学教研室柯岩制备高效价和高特异性的免疫血清有助于临床疾病的诊断和治疗，有助于抗原的分析和病原的鉴定，同时，也是免疫学实验室和临床检验室必不可缺少的生物制剂。其中羊抗兔ＩｇＧ抗体的用途极为广泛，...     

教学用高效价兔抗人免疫血清的制备

目的:制备教学用高效价兔抗人免疫血清.方法:采集健康人混合血清,用混合免疫法免疫健康家兔,一个月后产生高效价免疫血清,并用双向琼脂免疫扩散法测定其效价.结果:制备出效价高于1∶16的兔抗人免疫血清.结论:采用混合免疫法可在较短期内制备出高效价兔抗人免疫血清.     

纤维蛋白及其抗体的研究进展

纤维蛋白及其抗体的研究进展首都医科大学病理解剖学教研室李良血液凝固是由一系列酶所催化的复杂的化学链锁反应过程，最终结果是将溶胶状态的纤维蛋白原转变为凝胶状态的纤维蛋白。因此，在研究血栓性疾病的工作中，研究纤维蛋白的形成及其溶解是很重要的一部分。近年来...     

抗rhANG多克隆抗体的制备及初步应用

目的 制备抗重组人血管生长素(recombinant human angiogenin，rhANG)多克隆抗体，并初步应用于消化道肿瘤实验研究。方法 用重组基因工程菌表达，SDS法纯化的rhANG蛋白免疫新西兰兔，制备并纯化多克隆抗体，并用免疫组织化学和ELISA等方法对多克隆抗体进行测定。结果 此次获得的抗血清ELISA方法效价达1：12800，检测ANG灵敏度最低为8～16μg／L，不与其他细胞因子和血清反应。该抗体与20％～30％消化道恶性肿瘤呈阳性反应。结论 ANG多克隆抗体对表达ANG的肿瘤组织反应特异性强，ELISA方法检测灵敏度高，该抗体可用于ANG的检测。     

兔抗人RBBP10多克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备兔抗人RBBP10多克隆抗体并进行鉴定.方法 用人工合成的RBBP10蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot方法检测制备的抗血清效价和特异性.结果此次获得的抗血清ELISA方法检测抗体效价达到1:16000,检测RBBP10的灵敏度最低为10μg/μ1.Western blot检测表明抗体效价高,特异性强.结论 应用该方法成功制备了人RBBP10多克隆抗体,此抗体可通过免疫组化方法检测RBBP10蛋白在各种肿瘤中的表达,具有一定的应用价值.     

兔抗人TGF-β_1多克隆抗体的制备

目的以人重组TGF-β1蛋白作为抗原,制备兔抗人TGF-β1多克隆抗体。方法重组蛋白与弗氏佐剂等体积混匀,免疫新西兰白兔,获得兔抗人TGF-β1多克隆抗血清。饱和硫酸铵盐析法纯化多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验检测多克隆抗体效价,Western-blot技术进行抗体特异性检测。结果成功获得兔抗人TGF-β1多克隆抗体,纯化后抗体效价达1∶110 000。结论获得的兔抗人TGF-β1多克隆抗体具有良好的特异性,能满足进一步实验的需要。     

抗人卵细胞膜抗体的制备及其免疫避孕的可能性

目的：探讨利用人卵细胞膜抗原制备抗受精抗体的可能性。方法：半纯化人卵细胞膜，利用生物素标记监测纯化技术，经小鼠足部皮下注射免疫获得免疫血清后，采用间接免疫荧光标记及共聚焦显微镜检测其特异性，体外受精抑制试验观察其受精抑制能力。结果：获得的免疫血清对人卵细胞具有特异识别能力，其受精抑制作用与浓度呈正相关，结论：利用人卵细胞膜可获得特异的抗受精抗体。     

抗人纤维蛋白(原)及降解产物单克隆抗体制备及特性的探讨

本文报告了抗人纤维蛋白(原)及降解产物单克隆抗体的研制,并对其特异性、结合力、滴度等特性进行了探讨,为研究纤维蛋白(原)及降解产物提供了多样化、专一性的抗体,也为临床许多与其有关疾病的特异性诊断治疗提供了先进手段。     

抗人端粒重复序列结合因子多克隆抗体制备及纯化

目的 制备并纯化抗人端粒重复序列结合因子片段（TRF1^33-277)的多克隆抗体。方法 运用基因工程的方法表达人工TRF1^33-277，将表达蛋白经亲和层析大量纯化后免疫白哆，制备血清过柱纯化，将TRF1^33-277和GST交连于CNBr-活化的Sephrose4B柱，血清过GST柱以去除抗GST抗体，然后经GST-TRF1柱吸收抗TRF1抗体，获得兔抗人TRF1多克隆抗体。结果 用此抗体作为一抗。在人膀胱癌细胞总蛋白中检到68KD的特异条带，与阳对照基本一致。结论 兔抗人TRF1多克隆抗体制备方法有效。所获抗TRF1^33-277多克隆抗体为国内首次报道。     

兔抗VIP抗体制备及特性研究

用碳二亚胺制备血管活性肠肽(VIP)一牛血清白蛋白连接物免疫新西兰白兔,获得优质抗体R3-6,最终滴度为1:450,000,亲和常数为5.05 x 10~10M-1,结合位点数为88.07pM.该抗体与促胰液素、胰高糖素等7种胃肠激素在浓度为10~-8M时无明显交叉反应,与VIP10～28的反应表明本抗体为抗整个VIP分子的抗体。应用该抗体进行人血浆VIP的放射免疫分析,其灵敏度、精确度及回收率均较满意。     

人源抗Trop-2抗体Fab的制备及条件优化

目的:探讨人源抗Trop-2抗体片段Fab在大肠杆菌中的诱导表达,优化蛋白表达及纯化的条件?方法:将含有抗Trop-2 Fab 抗体基因的质粒转化宿主菌E.coli TOP10F ′大肠杆菌,比较诱导前培养液更换对抗Trop-2 Fab片段表达量的影响;比较不同诱导温度?诱导时间及诱导前加入葡萄糖对蛋白表达的影响;大量表达的抗Trop-2 Fab经亲和层析纯化后,用免疫荧光和流式细胞术检测其免疫学特性?结果:在培养液中加入5 g/L的葡萄糖,人源抗Trop-2抗体Fab片段的表达产量明显增加;16℃的诱导温度比其它温度能表达更多的Fab分子;加诱导剂12 h,目的蛋白的表达量至峰值?结论:本实验结果为在原核系统中大量制备抗Trop-2抗体片段及后续的肿瘤靶向治疗提供了基础?     

人Lrp蛋白多克隆抗体的制备

目的:制备人Lrp蛋白多克隆抗体. 方法:克隆全长lrp-cDNA编码序列并进行原核表达与鉴定. 用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化原核表达的全长Lrp蛋白,获得纯度较高的目的蛋白. 用纯化后蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并吸附去除非特异性反应成分. 结果:Western印迹结果表明,纯化前后的抗血清在69 ku处均检测到目的蛋白条带,说明吸附纯化后的抗体可以与Lrp蛋白特异结合. 而纯化后抗体Western印迹结果目的条带只有一条,说明吸附纯化后得到高特异性抗血清,其免疫印迹的效价在10-6以上,有较高免疫印迹滴度. 结论:成功制备了高效价高特异性的兔抗人Lrp蛋白的多克隆抗体,为Lrp功能的进一步研究提供了重要的实验工具.     

互补式亲和层析纯化制备兔源性抗人精子多克隆抗体标准品

目的:纯化制备兔源性抗人精子多克隆抗体标准品.方法:利用人精子抗原及其他组织蛋白等分别制备亲和层析柱,经正反相互补式亲和层析从兔抗血清中纯化IgG和IgA型抗人精子多克隆抗体,用SDS-PAGE、Western blot和ELISA等法检测其纯度、特异性和与精子抗原的线性反应.结果:所得抗体与牛血清白蛋白、正常人全血清、正常人组织细胞裂解液等在诊断试剂中常有的物质无可见交叉反应,在7.8120～0.488 2ng·ml-1或31.250～1.953ng·ml-1浓度范围内与精子抗原的酶联吸附试验呈直线反应.结论:该纯化方案可用于抗精子抗体定量检测中抗体标准品的制备.