荧光定量PCR诊断肺结核的临床应用研究——附179例检测分析

目的：探讨荧光定量PCR（fluorescent quantitative PCR,FQ—PCR）诊断肺结核病的临床价值。方法：179例临床确诊的结核病患者（结核病组）和41例非结核呼吸系统疾病患者（对照组）的痰标本,分别应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法检测。对3种方法的阳性检出率进行统计学比较分析。结果：VQ-PCR法检测结核病组痰标本的阳性检出率为64．3％（115／179）,明显高于痰涂片抗酸染色法的20．7％（37／179）及结核杆菌培养法的41．3％（74／179）。3种方法检测对照组41例的结果均为阴性,特异度为100％（41／41）。结论：FQ-PCR荧光定量法的敏感度和特异度明显高于痰涂片抗酸染色法和结核杆菌培兼法．用干诊断结核痛具有良好的临康应用前景。     

结核抗体，痰涂片及PPD试验对肺结核诊断价值的比较研究

【目的】比较结核抗体,痰涂片及PPD试验对肺结核临床诊断的应用价值。【方法】分3次收集清晨深咳痰,直接涂厚片抗酸染色,PPD试验采用5IU前臂屈侧皮内注射,72h观察反应,结核抗体采用结核分枝杆菌多种抗原IgG抗体蛋白芯片检测。【结果】痰涂片,结核抗体及结核菌素试验（PPD）的敏感性分别为26．07％,74．64％,76．43％。特异性分别为100％,84．77％,42．97％。【结论】痰涂片检查仍是特异性较强的肺结核诊断方法之一,但其低检出率使得漏诊人数大大增加。结核抗体检测比痰涂片有着更高的检出率,比PPD有着更高的特异性。在临床上可以替代PPD。     

结核感染T细胞试验在儿童结核病临床诊断中的应用研究

目的对比研究结核感染T细胞试验（T-SPOT.TB）在儿童结核病临床诊断中的应用价值。方法选取2012年3月-12月汕头市结核病防治所门诊和汕头大学医学院第二附属医院儿科就诊的结核病患儿112例、非结核病（有其他肺部疾病）患儿58例、结核病易罹患高危者60例、健康儿童60例,分别进行T-SPOT.TB、结核菌素纯蛋白衍生物皮肤试验（PPD皮试）、结核抗体检测（TB-DOT）、痰涂片抗酸染色、痰结核分枝杆菌培养,比较其灵敏度和特异度。同时对儿童结核病组按痰菌结果、病变部位、免疫状态不同进行分组比较。结果在儿童结核病组,T-SPOT.TB的阳性率为92.9%,高于其他方法,差异有统计学意义（χ^2=9.33,P〈0.01;χ^2=81.71,P〈0.01;χ^2=142.00,P〈0.01;χ^2=101.71,P〈0.01）;在非结核病组,T-SPOT.TB的假阳性率为3.4%,较痰涂片、痰培养稍高,与TB-DOT对比无异,但明显低于PPD的27.6%（χ^2=12.89,P〈0.01）;在结核病易罹患高危组,T-SPOT.TB的检出率为25.0%,高于TB-DOT、痰涂片及痰培养（P〈0.05）;在健康对照组,T-SPOT.TB的特异度为95.0%,高于PPD皮试的71.7%（χ^2=11.76,P〈0.01）。T-SPOT.TB在菌阴和菌阳、肺内和肺外结核、正常免疫和免疫缺陷组均具有良好的灵敏度（P〉0.05）。T-SPOT.TB与PPD皮试结果总符合率为78.6%。结论 T-SPOT.TB在儿童结核病的诊断中具有较高的灵敏度和特异度,且受其他因素影响较小,其结果客观、准确,对儿童结核病的诊断具有较高的临床应用价值。     

3种检测方法诊断结核病结果分析

目的比较和评价操作简便、成本低廉、高发现结核患者的不同诊断方法。方法对180例结核门诊就诊患者采用痰涂片、痰培养、血清结核抗体（TB-Ab）3种方法进行检测，并与正常体查人群对照。结果180例结核门诊就诊患者痰涂片阳性率为38．34％（69/180），痰培养阳性率为40．00％（72/180），血清结核抗体阳性率为42．23％（76/180）。对照组50例痰涂片、痰培养均阴性，血清结核抗体阳性率为4．00％（2/50）。结论3种检测方法差异不大（P〉0．05），为提高结核患者确诊率，建议对可疑肺结核患者采用3种方法联合检测。     

血清结核抗体及PPD试验联合检测在结核病诊断中的应用

目的 探讨血清结核抗体检测联合PPD试验对结核病的诊断价值.方法 采用胶体金法对500例结核病患者和100例健康者进行血清结核抗体检测,同时进行PPD试验.结果 血清结核抗体检测诊断结核病的灵敏度、特异度分别为87%和93%,PPD试验的灵敏度和特异度分别为83%和67%,二者灵敏度比较差异无统计学意义(P>0.05),但血清结核抗体检测的特异度高于PPD试验(P<0.05);二者联合检测的灵敏度97%,高于各自单独检测的灵敏度(P<0.05).结论 PPD试验与血清结核抗体检测可互相补充,二者联合应用对结核病的诊断和鉴别诊断具有重要的参考价值,也有助于痰涂片检测阴性结核病的诊断.     

噬菌体生物扩增法检测不同标本对结核病临床诊断的意义

目的探讨噬菌体生物扩增法技术检测不同标本对结核病临床诊断的应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法技术对86例活动性肺结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液、7例结核性脑膜炎患者脑脊液,共计196例结核标本进行检测;对非结核病患者痰标本10例、胸水5例、灌洗液5例,共计20例标本进行检测。每例标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果86例痰标本、73例胸水、30例肺泡灌洗液、7例脑脊液噬菌体生物扩增法检测阳性率分别为53．49％（46／86）、49．32％（36／73）、60．00％（18／30）、0（0／7）,涂片抗酸染色阳性率分别为24．42％（21／86）、2．74％（2／73）、20．00％（6／30）、0（0／7）,罗氏培养分别为44．19％（38／86）、4．11％（3／73）、36．67％（11／30）、0（0／7）。20例非结核患者标本,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论噬菌体生物扩增法检测结核病标本的阳性率高于涂片和罗氏培养,该方法敏感性高、特异性强、操作简便,对结核病临床诊断有较高的应用价值。     

噬菌体生物扩增法对结核病临床诊断的意义

目的探讨噬菌体生物扩增法技术检测临床标本对结核病临床诊断的应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法技术对86例活动性肺结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液,共计189份临床标本进行检测;对非结核病患者痰标本10例、胸水5例、灌洗液5例共计20份标本进行检测。同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果86例活动性结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液噬菌体生物扩增法检测阳性率分别为53．49％（46／86）、49．32％（36／73）、60．00％（18／30）;涂片抗酸染色阳性率分别为24．42％（21／86）、2．74％（2／73）、20．00％（6／30）;罗氏培养阳性率分别为44．19％（38／861、4．11％（3／73）、36．67％（11／30）。20份非结核患者标本,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论噬菌体生物扩增法检测结核病标本的阳性率高于涂片法和罗氏培养,该方法敏感性高、特异性强、操作简便。对结核病临床诊断有较高的应用价值。     

联合检测胸水中TB-Ab和TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的应用价值

目的 评价检测胸水中结核抗体（TB-Ab）和TB-DNA对诊断结核性胸膜炎的应用价值。方法 以胸水为标本，用斑点免疫金渗试验检测结核抗体，用荧光探针PCR（TaqManPCR）技术检测TB-DNA，同时对胸水进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果 179例结核性胸膜炎胸水．结核抗体阳性率为60．89％（109／179）、TB-DNA阳性率为63．13%（113／179），TB-Ab阳性及，或TB-DNA阳性共135例（75．4％）．涂片抗酸染色阳性率为1．1%（2／179）、罗氏培养阳性率为1．68％（3／179）。30例非结核性胸膜炎胸水，结核抗体阳性率为6．67％（2／30），TaqManPCR、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论 结核抗体和TB-DNA均是诊断结核性胸膜炎的较好指标．两者联检可进一步提高检测敏感性。     

联用两种结核抗体检测方法对肺结核的诊断价值

目的：观察联用两种结核抗体检测方法对肺结核病人的诊断价值。方法：对176例活动性肺结核病人（实验组）和49例非结核患者（对照组），采用两种结核（tubercle bacillus,TB)抗体检测方法TB－DOT结核抗体检测和“TB－CHECK－1”层析法结核抗体检测，结合结核菌素纯蛋白衍生物（purified protei derivative,PPD)试验，对其检出率及结核抗体的诊断价值进行了对照观察。结果：实验组TB－DOT法特异性、敏感性和真实性分别为89．8％、74．3％、77．8％；TB－CHECK－1法特异性、敏感性和真实性分别为81．6％、71．3％、73．6％，均高于PPD试验（55．1％、67．7％、64．8％）。两种抗体检测方法联用检出率为82．4％，高于单独应用任一方法（分别为P＜0．05、P＜0．01）。结论：结核抗体检测对活动性肺结核病人具有较好的诊断价值。两种检测方法联用可提高活动性肺结核病人检出率，并对痰涂片阴性的活动性肺结核患者有较好的诊断与鉴别诊断价值。     

聚合酶链反应检测结核杆菌的临床应用价值

５８例结核病患者与２８例非结核病呼吸系统疾病患者的痰中胸水标本，分别进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测结核杆菌及直接涂片找抗酸杆菌，同时用酶联法（ＥＬＩＳＡ）查血清结核抗体。对照研究表达ＰＣＲ检测结核杆菌特异性好，敏感性强，临床应用前景好。     

结核分枝杆菌检测方法临床应用的对比研究

目的用涂片、聚合酶链反应(PCR)法检测结核分枝杆菌,探讨其临床应用价值。方法对169例临床确诊的肺结核患者、可疑肺结核患者和非结核患者痰标本用涂片、PCR两种方法进行检测,对结果进行对比分析。结果 169例痰标本中,痰涂片检查阳性率为7.1%(12/169),PCR检测阳性率为32.54%(55/169);痰涂片、PCR法检测42例临床确诊的肺结核患者痰标本阳性率分别为11.9%(5/42)、57.1%(24/42);检测82例临床可疑肺结核患者痰标本阳性率分别为8.54%(7/82)、37.8%(31/82)。比较两种方法的阳性检测率,差异有统计学意义(χ2=19.729,P<0.01),检测45例非结核患者痰标本,涂片及PCR检测均为阴性。结论 PCR法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核病检测诊断的有效方法之一。     

2008-2013年浙江省诸暨市涂阳肺结核学生患者的密切接触者结核感染情况调查

目的调查分析涂阳肺结核学生患者的密切接触者感染情况及影响因素,为进一步防止结核病在学生中的扩散和蔓延提供依据。方法通过在诸暨市2008-2013年发生的涂阳肺结核学生患者的密切接触者的结核菌纯蛋白衍生物(purified protein derivative of tuberculin,PPD)筛查,以非密切接触者为感染情况作为本底对照;分层分析密切接触者感染情况的影响因素。结果调查28例涂阳肺结核学生患者密切接触者共1721人,强阳性400人,强阳性率为23.24%。同时调查非密切接触者1409人,强阳性39人,强阳性率为2.77%,密切接触者的强阳性率远高于非密切接触者(χ2=269.33,P=0.000)。影响密切接触者PPD试验结果的因素有发病季节、痰菌含量及就诊延误,通过分层分析,冬春季发病患者的密切接触者阳性率较高,特别是患者痰菌含量较高时(χ2=10.12,P=0.00;χ2=5.35,P=0.02);痰菌含量高的患者其密切接触者阳性率高,在春季发病患者的密切接触者中尤其明显(χ2=14.42,P=0.00;χ2=11.25,P=0.00);传染源诊断延误时间对密切接触者强阳性率的影响表现为患者痰菌含量较低时,冬春季发病患者的不同诊断延误患者的密切接触者强阳性率不同(χ2=4.60,P=0.03);而患者痰菌含量较高时,不同季节发病患者的密切接触者强阳性率差异无统计学意义。结论在影响涂阳肺结核学生患者PPD试验强阳性率的主要因素中,传染源的发病季节、痰菌含量和诊断延误各自起着一定的作用,其中以发病季节和痰菌含量的作用更为显著。     

7种实验方法诊断结核病的临床应用价值

目的评估直接涂片法、浓集涂片法、结核分枝杆菌罗氏培养法、BACTEC MGIT960系统培养结核分枝杆菌法、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)扩增法、结核分枝杆菌IgG抗体检测等7种方法对临床结核诊断的应用价值。方法对临床确诊的672例肺结核患者和62例健康体检者的痰标本用7种结核菌检测方法进行检测。结果 672例患者中检测阳性率分别为直接涂片法17.0%(115/676)、浓集涂片法25.6%(173/676)、改良罗氏培养法32.2%(218/676)、BACTEC MGIT960系统培养结核分枝杆菌法45.7%(309/676)、实时荧光定量PCR 90.1%(609/676)、SAT扩增法96.4%(652/676)、结核分枝杆菌IgG抗体检测法65.4%(442/676)。对照组只有荧光PCR法和结核抗体法检出阳性,阳性率分别为8.1%、12.9%。涂阴标本经罗氏培养法+结核抗体法+SAT法联合检出阳性率高于单一检测方法。结论涂片法操作简便、快速和价格便宜,但阳性率低,在长时期内其依然是基层医院诊断结核病的主要检测手段;结核分支杆菌培养能进行菌种鉴定和药物敏感试验仍是不可缺少的方法,但周期长;结核抗体法方便,简单,仍是结核实验室诊断的重要手段,但不能区分感染与发病;荧光PCR扩增法快速,灵敏,有较好诊断价值,但设备昂贵,技术要求高,易污染;SAT法快速,灵敏,要求较荧光PCR扩增法低,可以辅助诊断结核病。同时联合检测提高诊断率,并满足不同临床需要。     

应用痰模型涂片法检测抗酸杆菌结果分析

目的评价痰模型涂片法检测抗酸杆菌的应用价值。方法应用组、研究组分别收集初诊活动性肺结核患者的痰标本780例、1 089例,应用模型涂片法检测抗酸杆菌,两组检测结果采用χ2检验进行比较。结果应用组与研究组应用痰模型涂片法检测抗酸杆菌的阳性检出率分别为29.74%(232/780)、31.68%(345/1 089)(χ2=0.799;P>0.05),差异无统计学意义,5项质量指标合格率均较高,分别为痰细胞(94.10%～94.21%)、痰膜大小(98.72%～98.99%)、厚薄(95.64%～96.14%)、染色(93.72%～94.49%)、痰膜脱落(97.18%～97.43%),两组痰涂片5项质量指标差异均无统计学意义(P值均大于0.05),说明应用组与研究组检测结果差异无统计学意义。结论痰模型涂片法检测抗酸杆菌,实现了涂片标准化,提高了制片质量和阳性检出率,灵敏度高,重复性好,实用性强,简单易行,特别适合于基层实验室应用。     

通过增加痰液量和超声裂菌提高结核分枝杆菌荧光定量PCR检出率

目的通过增加痰液量和超声破碎法提取痰液中的结核菌DNA,提高结核分枝杆菌实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的检出率。方法选择206例肺结核患者,以103例非结核患者作为对照组;肺结核患者同时进行结核菌涂片,并在美国BD公司的MAGIT960仪器上进行液体快速培养结核菌。另收集至少5 mL的痰液,加入2~3倍体积的4%氢氧化钠液化后,取1 mL按照采用常规方法抽提痰液中的结核菌DNA,剩余部分采用改进的超声破碎法提取结核菌DNA;两者同时进行实时荧光定量PCR检测。结果采用增量超声法,对于涂片阳性、培养阳性的结核患者,阳性检出率由87.5%(可信区间为81.4%~93.6%)提升至95.5%(可信区间为91.7%~99.4%)(P0.05)。对于涂片阴性、培养阳性的患者,阳性检出率由57.4%(可信区间为47.5%~67.4%)提高至83%(可信区间为75.4%~90.6%)(P0.01)。增量超声法比常规方法,定量值平均提高14倍以上。结论通过增加痰液量和超声破碎法提取痰液中的结核菌DNA,可提高实时荧光定量PCR结核分枝杆菌的检出率,值得进一步推广应用。     

结核感染T细胞斑点试验诊断肺结核临床价值探讨

目的对比结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、皮肤结核菌素试验、结核抗体和痰液或肺泡灌洗液涂片4种方法诊断肺结核的结果,选择临床最有价值的诊断方法。方法选择湖北省襄阳市中医院2010年12月至2012年12月非结核呼吸系统疾病患者48例和同期明确诊断为结核的患者42例为研究对象。对所有患者进行T-SPOT.TB、皮肤结核菌素试验、结核抗体和痰液或肺泡灌洗液涂片,计算并比较各种检查阳性率、敏感度和特异性。结果 T-SPOT.TB的结核抗体敏感性和特异性均高于皮肤结核菌素和痰液及肺泡灌洗液涂片,且具体数值相同;通过两两比较发现,T-SPOT.TB的阳性率均明显高于其他3种试验方法(P<0.05)。结论 T-SPOT.TB诊断结核具有很好的稳定性,值得临床推广使用。     

1262例拟似肺结核初发患者的痰液性状、排菌量的分析

[目的]探讨拟似肺结核初次发病（初发）和初发肺结核病人,不同性质的痰标本的结核分枝杆菌涂片阳性分布（涂阳）对结果的影响。提高诊断的准确性。[方法]1262例拟似肺结核初发患者,其中927例最终排除了肺结核,335例确诊为初发肺结核的患者。对痰液标本3751份,性状,结核分枝杆菌的数量分级的比较。确诊患者的涂片和培养阳性率的比较。[结果]初发结核病人中,涂片阳性占75．2％,培养阳性占83．9％。分别为涂片培养双阳性60．30％,单涂片阳性15．52％,单培养阳性24．18％。培养的阳性率明显高于涂片（P〈0．05）。不同痰标本的涂片阳性率分别是：血样痰42．7％、1二乳样痰40．10％较黏液痰32．60％、气管镜27．50％、水样痰17．40％差异非常显著（P〈0．01）。结核分枝杆菌阳性数量分级分布为：干乳样痰、血样菌痰、黏液样痰4级多见;水样痰、气管镜1级多见。[结论]初发病人痰培养与痰涂片二者都应重视,呵增加涂片次数。不同性状的痰分级可以观察到排菌量的不同,重视干乳样、黏液样痰检查,水样痰检查不能忽视,不能过分依赖皿样痰作诊断。     

浙江省湖州市流动人口结核病防治效果分析

目的分析浙江省湖州市全球基金结核病流动人口项目实施前后流动人口结核病防治效果,为进一步加强流动人口结核病防治工作提供依据。方法收集湖州市2005年1月至2012年6月登记的流动人口结核病患者资料,以全球基金项目实施后(2008年10月到2012年6月)登记的流动人口结核病患者为研究组,以项目实施前(2005年1月至2008年9月)登记的流动人口结核病患者为对照组,对比分析项目实施前与实施后的患者治疗转归情况。结果研究组共登记流动人口结核病患者1596例;对照组共登记流动人口结核病患者1084例。新涂阳肺结核患者治愈率由项目前的81.0%上升到89.2%(χ2=13.17,P0.01);复治涂阳患者治愈率虽然由65.9%上升为76.4%(χ2=1.28,P=0.26),但差异无统计学意义;涂阴患者完成疗程率由73.7%上升为90.0%(χ2=37.88,P0.01)。年龄组中,44岁以下新涂阳患者的研究组及对照组治愈率差异有统计学意义(χ2=13.34,P0.01);涂阴患者在不同年龄组的研究组及对照组治疗完成率差异均有统计学意义。不同职业分类,新涂阳肺结核患者中,民工的研究组与对照组治愈率差异有统计学意义(χ2=13.64,P0.01);涂阴患者,除服务业,其他职业研究组与对照组治愈率差异均有统计学意义。结论通过项目实施,流动人口的结核病患者治疗转归情况具有很大改善,有针对性地进行干预,可有效提高结核病控制效果。     

结核分泌蛋白MPT64用于101例结核病快速诊断的研究

目的：比较痰菌检查、结明试验、PPD实验和MPT64蛋白抗体检测，评价MPT64蛋白在结核病血清学诊断中的价值。方法：对101例结核病患者进行分析，同时进行痰菌检查、结明试验、PPD实验和MPT64蛋白抗体检测，对结果进行比较对照分析。结果：痰检阳性率20．8％0，结明试验45．5%，PPD试验77．2％，PPD抗体79．2%，MPT64抗体74．2％；在肺结核患者，MPT64抗体与PPD试验一致率为75．6％；在胸膜炎患者，MPT抗体检测特异性高达86．7％。结论：PPD试验仍是目前结核病早期诊断与鉴别诊断的重要方法，分泌蛋白MPT64可作为新型结核病快速诊断试剂的组分。