抗人原发性肝细胞肝癌相关抗原P60单克隆抗体的产生及体内定位研究

本文用临床肝癌手术标本,制成细胞悬液,三次免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用A、B、C染色法筛选单克隆抗体。抗原片为低温石腊切片,获得一株特异性好的杂交瘤一H_(H10)。抗体亚类为小鼠IgG_1。 一、免疫组化染色 肝癌阳性例数37/50;正常肝0/30;肝硬化0/30;肝炎3/50;肝细胞瘤0/2;胃癌0/5;结肠癌1/5;正常成人组织复合片0/3;正常胎儿复合片1/5(心肌~+)。     

高迁移率族蛋白1促进原发性肝癌细胞增殖

目的探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)及晚期糖基化终产物受体(RAGE)在原发性肝癌中的表达,研究HMGB1促进肝癌细胞增殖的作用以及相关的分子机制。方法取肝癌组织及癌旁组织各25例,免疫组化法观察组织样本中HMGB1及RAGE的表达;体外培养肝癌细胞系HepG2和正常肝细胞系L02,用Western blot检测细胞系中HMGB1及RAGE的表达。向HepG2肝癌细胞系中加入外源性重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1),用MTT法检测处于不同浓度rhHMGB1(0、10、50和100μg/L)以及不同处理时间(0、12、24和36 h)作用下HepG2细胞的增殖率;用Western blot检测细胞中RAGE和NF-κB的表达。结果 HMGB1和RAGE蛋白在肝癌组织的阳性表达率为64%和72%,分别高于癌旁组织的20%和28%(P0.05)。随着细胞培养时间的延长,HMGB1及RAGE的表达呈上升趋势;随着rhHMGB1浓度的升高或处理时间的延长,HepG2细胞的增殖率显著提高(P0.05),细胞中RAGE和NF-κB的表达显著上调(P0.05)。结论 HMGB1和RAGE蛋白在肝癌组织及肝癌细胞中高表达。HMGB1可能通过与其受体RAGE结合,进一步激活NF-κB信号通路,从而促进肝癌细胞增殖。     

华蟾素对肝癌Bel-7402细胞放疗敏感性的影响及其作用机制的研究

目的 探讨华蟾素对肝癌Bel-7402细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法 分别使用浓度为0.125、 0.250、 0.500、1.000 μg/mL华蟾素处理肝癌Bel-7402细胞24 h、48 h、72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的影响,根据半数抑制浓度(IC₅₀)选择华蟾素浓度及作用时间。用0 μg/mL(对照组)和0.4 μg/mL华蟾素处理肝癌Bel-7402细胞,同时用剂量为0、2、4、6、8 Gy的6 MV X线进行照射,克隆形成实验检测细胞放疗敏感性。用IC₅₀为0.4 μg/mL华蟾素、6 Gy的X线分别单独或联合处理肝癌Bel-7402细胞,48 h后流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot检测细胞中p50、p65、Bcl-2、cyclin D1蛋白表达情况。结果 华蟾素能够显著抑制肝癌Bel-7402细胞增殖,随着作用浓度的增加及作用时间的延长,细胞抑制率逐渐升高。华蟾素能够抑制经照射后的肝癌Bel-7402细胞克隆形成能力,细胞存活率显著低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,华蟾素组、放疗组及联合组肝癌Bel-7402细胞G0/G1期细胞比例增多,S期细胞减少,细胞凋亡率升高,p50、p65、Bcl-2和cyclin D1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);联合组与华蟾素组和放疗组相比,细胞周期、细胞凋亡率及蛋白表达差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论 华蟾素能够增强肝癌Bel-7402细胞的放疗敏感性;其作用机制可能与华蟾素能够通过抑制核因子-κB信号通路及下调Bcl-2和cyclin D1蛋白表达,进而抑制细胞增殖、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡相关。     

芒柄花黄素对小鼠H22肝癌移植瘤的抗肿瘤作用

目的 揭示芒柄花黄素对H22肝癌移植瘤小鼠免疫的影响。方法 雄性C57BL/6小鼠皮下接种H22细胞(4×10⁵个)建立荷瘤小鼠模型,用[10 mg/(kg·d)]或[50 mg/(kg·d)]的芒柄花黄素治疗小鼠28 d,然后计算抑瘤率。卡瑞利珠单抗作为阳性对照药物。免疫组织化学染色分析肝癌组织中CD8、颗粒酶B(granzyme B)和叉头盒P3(FOXP3)的表达,实时定量PCR或Western blot法检测肝癌组织中的程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)及其配体1(PD-L1)的mRNA和蛋白表达,ELISA检测血清中白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)的水平。结果 芒柄花黄素提高荷瘤小鼠的抑瘤率,增加肝癌组织中CD8和granzyme B染色阳性率。各组小鼠肿瘤组织中的FOXP3染色阳性率均无显著差异。芒柄花黄素降低的荷瘤小鼠血清中IL-10和TGF-β的水平,降低荷瘤小鼠肿瘤组织中PD-1和PD-L1的mRNA和蛋白相对表达量。结论 芒柄花黄素通过阻断PD-1/PD-L1通路激活CD8⁺ T细胞数量并减弱调节性...     

芒柄花黄素通过TLR4/NF-κB通路抑制肝癌荷瘤小鼠肿瘤免疫逃逸北大核心CSCD

目的:揭示芒柄花黄素对肝癌免疫逃逸的作用机制。方法:采用不同浓度(50、100、200μg/ml)芒柄花黄素处理人肝癌细胞系HepG2 24 h,CCK-8检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡。雄性C57BL/6小鼠皮下接种HepG2细胞(4×105个)建立荷瘤小鼠模型,10/50 mg(/kg·d)芒柄花黄素治疗28 d,计算抑瘤率。qRT-PCR、Western blot检测小鼠肝癌组织和HepG2细胞TLR4和NF-κB p65表达,ELISA检测小鼠血清和HepG2细胞TNF-α、IL-1β和IL-10水平。结果:芒柄花黄素可提高HepG2细胞增殖抑制率和凋亡率(P<0.05),降低荷瘤小鼠血清和HepG2细胞TNF-α、IL-1β和IL-10水平(P<0.05),提高荷瘤小鼠抑瘤率(P<0.05),降低荷瘤小鼠肿瘤组织和HepG2细胞TLR4和细胞核NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:芒柄花黄素通过抑制TLR4/NF-κB通路介导的肿瘤免疫逃逸抑制肝癌发生发展。     

Sestrin 2(SESN2)通过激活蛋白激酶B促进肝癌细胞索拉非尼原发性抵抗

目的探讨sestrin 2(SESN2)在肝癌细胞索拉非尼原发性抵抗中的作用和机制。方法实时定量PCR和Western blot法检测Bel-7404、SNU-398、HLE、HLF、Hep3B肝癌细胞系中SESN2 mRNA和蛋白水平,免疫组织化学染色检测肝癌组织中SESN2的表达。分别用(0、2、5、10、15、20、25)μmol/L索拉非尼处理上述肝癌细胞24 h,采用CCK-8法检测肝癌细胞增殖活性并计算索拉非尼半数抑制浓度(IC50),(0、2、4、6、8)μmol/L索拉非尼刺激Bel-7404、SNU-398肝癌细胞24 h,检测癌细胞SESN2 mRNA和蛋白水平;采用SESN2的特异性小干涉RNA(si SESN2)敲低Bel-7404、SNU-398肝癌细胞的SESN2水平,再分别用(0、8)μmol/L索拉非尼刺激24 h,CCK-8法检测细胞增殖活性、流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)水平。结果与正常肝细胞和癌旁肝组织相比,肝癌细胞系和肝癌组织中SESN2水平升高,且癌细胞中SESN2水平与索拉非尼IC50呈正相关;索拉非尼刺激Bel-7404、SNU-398肝癌细胞后,癌细胞SESN2水平升高,AKT信号活化;敲低Bel-7404、SNU-398肝癌细胞的SESN2水平,可进一步抑制细胞增殖活性、促进细胞凋亡、抑制AKT磷酸化。结论 SESN2可通过激活AKT信号促进肝癌细胞索拉非尼原发性抵抗。     

肝癌及肝硬化组织中ICAM-1和ToPoⅡ的表达

目的　探讨细胞间黏附分子 1(ICAM 1)和拓扑异构酶Ⅱ (TopoⅡ )作为判断肝硬化及肝癌发展程度及预后指标的可能性。方法　应用免疫组化S P法对 32例肝细胞癌和癌旁组织、2 6例肝硬化和 10例正常肝组织标本进行ICAM 1和TopoⅡ标记。结果　ICAM 1和TopoⅡ表达率分别为肝癌 84 3%、6 2 5 % (2 7/32 ,2 0 /32 ) ;癌旁组织为 6 8 7%、4 6 8% (2 2 /32 ,15 /32 ) ;肝硬化为 6 5 3% ,38 4 % (17/2 6 ,10 /2 6 )。 10例正常肝组织无表达及弱表达 ,阳性率与组织学分类相关 ,肝癌组织中I CAM 1和TopoⅡ含量明显高于癌旁及肝硬化组织 (P <0 0 1) ,而癌旁及肝硬化组织中表达差异无显著性 (P >0 0 5 )。 结论肝组织中ICAM 1和TopoⅡ的过度表达在一定程度上可以反应肝癌、肝硬化发展及细胞增殖活性 ,有可能作为判断预后的指标之一。     

抗AFP抗体—蓖麻毒素A链偶联物对靶细胞AH66的体外杀伤效应

本文应用流式细胞仪(FACStar~(PIns))的荧光分析技术,去检测与比较羊抗大鼠甲胎蛋白抗体(αAFP)与蓖麻毒蛋白A链(RTA)偶联物(αAFP-RTA)、RTA及αAFP和BTA的混和物(αAFP+RTA)对大鼠腹水型肝癌细胞AH66的体外杀伤作用。其αAFP-RTA、RTA和αAFP+RTA的剂量均以RTA的克分子浓度计算,致死50％靶细胞的浓度(IC_(50))分别为6×10~(-9.6)mol/L、6×10~(-8.4)mol/L、6×10~(-8.2)mol/L。αAFP-RTA与RTA的IC_(50)之比为1:12,αAFP-RTA与αAFP+RTA的IC_(50)之比为1∶14。相当于αAFP-RTA中抗体量的αAFP对AH66细胞不显示杀伤作用。实验证明,αAFP-RTA有明显的导向杀伤靶细胞的效应。上述实验结果与以台盼蓝除外试验所获得的结果基本一致。     

EGF对人肝癌细胞CK19表达及增殖能力的影响

目的 观察表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对人肝癌细胞株PLC-5和HepG2中CK19表达及增殖浸润能力的影响.方法 通过体外培养人肝癌PLC-5和HepG2细胞,分别连续采用EGF(30 ng/ml)、TGF-β1(10 ng/ml)、HGF(50 ng/ml)及FGF-b(50 ng/ml)刺激5天后,采用RT-PCR技术检测CK19 mRNA的表达,采用MTT法检测EGF对人肝癌细胞PLC-5和HepG2增殖能力的影响,划痕实验检测EGF对人肝癌细胞PLC-5和HepG2侵袭转移的影响.结果 (1)EGF可促进肝癌细胞PLC-5和HepG2中CK19 mRNA的表达、降低其AFP mRNA的表达.HGF和FGF-b对CK19及AFP mRNA表达影响较小;(2)PLC-5和HepG2的mRNA和蛋白水平均有EGFR的表达,EGF可明显上调PLC-5和HepG2中CK19 mRNA的表达,并可诱导CK19蛋白表达;(3)PLC-5和HepG2的EGF处理组的细胞增殖能力和浸润特性均明显高于无血清空白对照组.结论 EGF可促进CK19的表达并提高肝癌细胞株的浸润能力,抑制EGF与EGF受体的结合可能会改善CK19阳性肝癌患者的预后.     

利用普通冰箱冻存肿瘤细胞的技术研究

<正> 利用普通冰箱-18℃冷冻保存组织、细胞,迄今少见报道.本实验以人肝癌细胞株Bel_(7402)为对象,探讨-18℃冷冻保存方法.1材料与方法1.1 细胞来源及培养方法人肝癌细胞株Bel_(7402)引自中山医科大学实验动物中心,置于含100mL/L新生牛血清的RPMI1640培养液中,在37℃,50mL/LCO_2,饱湿条件下传代培养,细胞贴壁生长.1.2 试剂DMSO(AR)由北京化工厂生产;新生牛血清由杭州四季青生物工程材料研究所生产;RPMI 1640由Life Technologies Ins生产;胰蛋白酶(AR)由新疆化学研究所生产.1.3 冻存方法处于对数生长期的细胞经D-Hank’s液洗2次,后用0.25%胰蛋白酶消化,再用含100mL/L新生牛血清的1640液洗涤1次.后分别用含5%、10%、15%、20%DMSO的完全培养基(含100mL/L新生牛血清1640)重新制成细胞悬液.细胞浓度保持在1×10~6/mL左右.将细胞悬液置于2mL的硬塑料冻存管中,加盖密封,做好标记.直接迅速地放入-18℃冰箱中冻存.每份样品分装4支冻存管,每管装1mL悬液.于1周,1个月,2个月,3个月后分别进行融冻.     

IL-12通过AKT/mTOR/STAT3信号通路诱导肝癌细胞自噬

目的探讨白细胞介素12(IL-12)对Hep G2和SMMC-7721肝癌细胞自噬的影响及其可能的作用机制。方法 10 ng/m L的IL-12处理肝癌细胞6 h,通过Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3)和Beclin 1以及相关信号通路蛋白:蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)磷酸化水平的变化,免疫荧光技术及透射电镜观察细胞自噬的发生情况;使用STATTIC或si STAT3抑制STAT3的活性以及胰岛素样生长因子1(IGF-1)活化AKT之后,再次观察IL-12诱导细胞自噬的变化情况。10 ng/m L的IL-12处理肝癌细胞1、2、3、4、5 d,CCK-8法检测细胞的增殖;10 ng/m L的IL-12处理肝癌细胞48 h,台盼蓝染色检测细胞死亡率;利用小干扰RNA(siRNA)沉默Beclin 1基因抑制自噬后,再次用CCK-8法和台盼蓝染色法检测IL-12对肝癌细胞增殖和死亡的影响。结果 IL-12能够诱导肝癌细胞发生自噬,抑制其增殖,降低其存活率;siRNA沉默Beclin 1基因后,细胞存活率降低;IL-12处理后p-AKT、p-m TOR、p-STAT3水平都显著降低;STATTIC预处理可增强IL-12诱导的细胞自噬,而IGF-1预处理后,IL-12诱导的细胞自噬减弱。结论 IL-12通过抑制AKT/m TOR/STAT3信号通路来诱导Hep G2和SMMC-7721肝癌细胞发生自噬,该自噬可减弱IL-12抑制肝癌增殖的能力。     

NY-ESO-1和LAGE-1癌症-睾丸抗原在肝细胞癌的表达

目的　检测NY- ESO -1和LAGE- 1癌症睾丸抗原在肝细胞癌中的表达,探讨其作为肝细胞癌免疫治疗靶标的可行性及其与肝癌生物学行为的关系。方法　逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)和免疫组织化学EnVision二步法检测30例肝细胞癌新鲜标本NY ESO -1和LAGE -1的表达;另将191例肝癌石蜡组织制成芯片观察NY- ESO- 1蛋白在肝癌中的分布和表达。结果NY- ESO -1和LAGE -1基因mRNA在肝癌中的阳性表达率分别是33. 3% (10 /30)和16. 7% (5 /30),至少表达1种基因mRNA者为36 7% (11 /30);NY- ESO -1蛋白主要分布在肝癌细胞胞质,有效标本中NY ESO 1表达13 8% (24 /174),小肝癌、中晚期肝癌、发生转移肝癌中的阳性表达率逐渐升高,分别为6 8% (3 /44)、16 2% (21 /130)、23 1% (12 /52),不发生转移的肝癌仅为9 8% ( 12 /122 ),其中转移组与无转移组之间比较差异有统计学意义(P<0 .05),全部病例癌组织与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0 .01)。NY- ESO-1蛋白的阳性表达与肿瘤大小无关,所有癌旁肝组织均未见NY -ESO -1和LAGE -1的mRNA和蛋白的表达。结论　NY -ESO- 1 /LAGE- 1在肝细胞癌组织中的特异性表达提示其可作为肝细胞癌特异性免疫治疗潜在的靶标;NY -ESO -1在肝癌早期出现,随病情进展表达率逐步增高,转移患者最高,提示N     

微粒体谷胱甘肽S转移酶1过度表达促进肝癌发生发展

目的探讨微粒体谷胱甘肽S转移酶1(MGST1)在肝癌中的表达及其在肝癌细胞增殖、迁移和裸鼠成瘤中的作用。方法 Western blot检测人肝癌样品及肝癌细胞系中MGST1的表达;用慢病毒PLL3.7载体系统构建敲低MGST1的MHCC97H和HCCLM3细胞株及慢病毒p CDH载体系统构建过表达MGST1的SK-Hep-1细胞株后,用克隆形成实验检测细胞增殖能力;用Transwell实验检测细胞迁移能力;用皮下移植瘤实验检测MHCC97H细胞裸鼠成瘤能力。结果 71%(17/24)的肝癌组织中MGST1蛋白表达上调。敲低MGST1抑制MHCC97H和HCCLM3细胞的增殖、迁移能力(P0.05);过表达MGST1促进SK-Hep-1细胞增殖、迁移(P0.05);敲低MGST1的MHCC97H细胞裸鼠成瘤时间滞后(P0.01),肿瘤体积减小(P0.001),裸鼠生存期延长(P0.001)。结论 MGST1过度表达促进肝癌发生发展,是治疗肝癌的一个新靶点。     

IRF1对M1巨噬细胞极化及其抗肿瘤效应的影响

目的研究IRF1对M1巨噬细胞极化及M1介导的抗肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建单核细胞U937来源M1巨噬细胞模型(U937-M1),将细胞分为4组:用PMA诱导的未活化巨噬细胞组(M0),用PMA,IFN-γ和LPS处理的M1型巨噬细胞组(M1),用siRNA干扰IRF1的M1型巨噬细胞组(si IRF1)以及阴性干扰的M1型巨噬细胞组(si C)。用流式细胞术检测M1/M2特异表面标志物CD86/CD206的表达;q PCR检测M1/M2相关基因(IL-12p35,IL-12p40,IL-23p19,IL-6,TNF-α/IL-10)及IFNB1的表达;ELISA检测IL-12p70,IL-10及IFN-β的表达;Western blot检测IRF1及IRF5的表达;CCK8和流式细胞术分别检测Hep G2及SMMC-7721增殖和凋亡。结果与U937-M1组相比,干扰IRF的M1组CD86表达降低,但CD206升高(P0.05);mRNA水平上,IL-12p35,IL-12p40,IL-23p19,IL-6,TNF-α以及IFNB1表达降低,但IL-10表达增高(P0.01);蛋白水平上,IL-12p70,IFN-β及IRF5表达降低,但IL-10表达增高(P0.05)。IRF1干扰后,M1巨噬细胞促进肝癌细胞增殖、抑制其凋亡(P0.05)。结论干扰IRF1后,M1巨噬细胞极化状态受损,甚至部分向M2型转变;其抗肿瘤效应转变为促肿瘤效应;且IRF1可能参与调节IFN-β与IRF5的表达。     

牛磺酸联合SN50协同抑制人肝癌细胞系HepG2的增殖

目的探讨牛磺酸联合NF-κB信号通路抑制剂SN50对肝癌细胞系HepG2增殖的影响及其机制。方法将HepG2细胞分为对照组、牛磺酸组(给予150 mmol/L牛磺酸处理24 h)、抑制剂组(给予36μmol/L SN50处理24 h)和牛磺酸+抑制剂组;用MTT法、克隆形成实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡;Western blot和RT-qPCR检测细胞中cyclin D1、Bcl-2蛋白和mRNA的表达情况。结果与对照组相比,经150 mmol/L牛磺酸或36μmol/L SN50处理24 h后,HepG2细胞的生存率和集落形成率均明显降低,凋亡率明显升高,细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白和mRNA表达均明显受到抑制(P<0. 05)。同时,SN50增强了牛磺酸对HepG2细胞的增殖和cyclin D1、Bcl-2表达的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用。结论牛磺酸联合NF-κB信号通路抑制剂协同抑制肝癌细胞系HepG2的增殖。     

病毒感染的成纤维细胞对粒细胞产生的趋化活性等同于单核细胞衍生的IL-8

本文作者用100u/ml IL-1β、100ug/ml Poly(rI).Poly(rC)或10~(4·6)TCID50/ml 麻疹病毒诱导人E_1SM 二倍体成纤维细胞株和骨肉瘤MG-63细胞系,发现他们能     

PAR-2激动剂对肝癌细胞增殖及Ca2+水平的影响

目的： 研究PAR-2激动剂对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞内Ca2+浓度（［Ca2+］c）的影响。方法: 培养人肝癌细胞HepG2, 分别利用PAR-2激动剂SLIGKV-NH2及反PAR-2激动肽VKGILS-NH2干预肝癌细胞生长,用Fura-2荧光法测定肝癌细胞内［Ca2+］c,用MTT法检测对肝癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞周期改变情况,RT-PCR法检测cyclinD1 mRNA表达变化。结果: 50 μmol/L SLIGKV-NH2刺激HepG2细胞后,［Ca2+］c迅速短暂升高（P<0.01）;G0/G1期比例明显降低,S期和G2/M期细胞比例和细胞增殖指数(PI)明显提高（P<0.01）;cyclinD1 mRNA的表达显著增加（P<0.01）。SLIGKV-NH2在1-50 μmol/L时可以促进HepG2细胞增殖,呈剂量依赖性（P<0.01或P<0.05）。而VKGILS-NH2组与对照组相比差异无显著（P>0.05）。结论: PAR-2激动剂在体外能通过激活PAR-2,诱导HepG2细胞内［Ca2+］c升高,上调cyclinD1 mRNA的表达,加速HepG2细胞周期进程,促进DNA合成,促进肝癌细胞增殖。     

45例原发性肝细胞肝癌患者血清AFP,SF,RIA的结果观察

我们对45例原发性肝细胞肝癌患者血清进行了AFP、SF的联合测定,并将结果进行分析,现报告如下。 对象和方法 一、对象: (一)正常对照组:系本院血库献血员及本院托儿所工作的健康人员50例。 (二)肝癌组:系本院门诊和住院患者45例,均为放射性核素扫描以及彩超证实肝内占位性病变,临床确诊的肝癌患者。 二、方法: (一)SF(双抗)试剂盒:由上海生物制品研究所供应。 (二)AFP(双抗)试剂盒:巾上海生物制品研究所供应。 (三)仪器:使用上海原子核研究所日环仪器厂生产的SN—682型放射免疫γ计数器。 结果 一、正常组:50例SF测定值为24～162ng/ml,均值为49.64±24.53ng/ml。 二、肝癌组:45例血清标本同时进行SF和AFP测定,其结果分别为200～500↑ng/ml,均值为438.40±80.26ng/ml与42～400↑ng/ml,均值为345.53±115.318ng/ml(表1)。 45例原发性肝细胞肝癌患者血清标本中测定结果,SF含量高于500ng/ml有20例(44.44％)(20/45),300～500ng/ml有21例(46.66％)(21/45),200～250ng/ml有4例(8.88％)(4/5)。且这45例肝癌血清标本同时进行AFP测定,>400ng/ml有34例(75.55％)(31/45),100～400ng/ml有7例(15.55     

枸橼酸芬太尼对人肝癌HepG2 细胞生物学性状的影响

目的:研究枸橼酸芬太尼(FC)对人肝癌Hep G2细胞增殖及运动能力的影响。方法:使用不同剂量枸橼酸芬太尼处理正常肝细胞LO2 24 h,CCK8检测细胞存活率;选择低中高剂量(10、20、50 nmol/L)枸橼酸芬太尼处理人肝癌Hep G2细胞进行后续实验,通过Brd U-ELISA法检测0、1、2、3、4 d细胞增殖倍数;流式细胞术检测细胞凋亡情况; Western blot检测Ki67、Caspase-3、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况; Transwell和划痕实验检测细胞运动能力。结果:计算出药物对正常细胞的IC10=59 nmol/L。用不同浓度药物处理的Hep G2细胞与对照组相比较,细胞活力显著降低,同时Ki67的表达显著下调;凋亡细胞数目明显增加,裂解型Caspase-3的水平显著上调(P0. 01); VEGF的表达显著下调(P0. 01);细胞侵袭能力显著下降,迁移显著降低(P0. 01);且上述作用均具有枸橼酸芬太尼剂量依赖效应。结论:枸橼酸芬太尼抑制人肝癌Hep G2细胞生长、迁移和侵袭能力。     

肝靶向米托蒽醌聚乳酸毫微粒冻干针剂抗肝癌活性及毒性研究

目的 :观察对米托蒽醌聚乳酸毫微粒肝靶向制剂 (DHAQ PLA NP)的抗肝癌活性及毒理。方法 :采用常位移植鼠肝癌瘤株的小鼠肝癌模型 ,(DHAQ PLA NP)的抗肝癌活性进行了研究。结果 :显示DHAQ PLA NP对H2 2 实体型肝癌的抑瘤率高于DHAQ水针剂。用免疫组化 (HIC)SP法染色显示肿瘤增殖细胞 ,计算阳性百分率 ,DHAQ PLA NP组增殖细胞阳性率低于DHAQ水针剂组 ,说明靶向制剂具有良好的抗增殖细胞活性。测定靶向制剂的LD50 为 1 5 7mg·kg 1,与水针剂LD50 文献值 1 3 6mg·kg 1比较[1] ,表明靶向制剂毒性与水针剂接近。结论 :DHAQ PLA NP有良好的肝靶向性 ,其毒性和水针剂接近