大鼠卵巢发育过程中Smad4的表达

目的 了解转化生长因子-β超家族(TGF-βs)在调节卵泡发育过程中的信号转导模式,以探讨在不同发育阶段大鼠卵巢中Smad4蛋白及mRNA的表达。方法 选择不同发育时期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测卵巢中Smad4蛋白表达,并进行图像分析;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Smad4mRNA在卵巢中的表达,以GAPDH作为内对照与特异性Smad4同时进行扩增,并计算Smad4和GAPDH的RT-PCR产物积分吸光度比值来表示Smad4mRNA的含量。结果 Smad4广泛表达于卵巢组织,但主要表达在卵泡中,其表达部位和强度随卵巢的成熟度不同而变化;在卵巢发育早期,Smad4主要在原始卵泡和窦前卵泡中表达,而在间质中的表达较弱;随着卵巢的发育成熟,Smad4在间质中的表达逐渐增强,性成熟后,在窦状及成熟卵泡颗粒细胞和卵泡膜的表达与间质细胞比较无显著差异(P>0.05)。Smad4在卵泡中的表达强度也发生了变化,即随着卵泡的发育,Smad4在窦状及成熟卵泡卵母细胞的表达明显减弱,与窦前卵泡卵母细胞比较有显著差异(P<0.05,P<0.01);与窦前卵泡比较,Smad4在卵泡膜细胞的表达逐渐增强(P<0.01),而在各级卵泡颗粒细胞中的表达无显著差异(P>0.05)。RT-PCR结果显示各阶段卵巢均有mRNA的表达,从第3周起Smad4mRNA的表达明显增强,Smad4和GAPDH积分吸光度比值与出生后1 d的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 卵巢内存在Smad4,提示TGF-β家族对卵泡发育的调节是通过Smad信号转导模式实现的。     

Localization of cystathionine β synthase in mice ovaries and its expression profile during follicular development

Background In vitro fertilization (IVF) researches have suggested that cystathionine β synthase (CBS) is involved in oocyte development. However, little is known about the regional and cellular expression patterns of CBS in the ovary. The purpose of this study was to analyze the localization of CBS in mice ovaries and to investigate the expression profile during follicular development. Methods We used in situ hybridization and immunohistochemical analysis to determine CBS expression in the ovaries of female Balb/c mice. Then the follicles were collected from F1 (C57BL×Balb/c) mice and cultured in vitro. With the method of semi-quantitative RT-PCR, we also investigated the expression profile of CBS during follicular development. Results CBS was absent in the oocytes, although it was ubiquitously expressed in the ovary with the strongest expression in follicular cells at all stages. In late antral follicles, CBS expression was markedly higher in granulosa cells located close to the antrum and in cumulus cells around the oocyte. The semi-quantitative RT-PCR showed that CBS mRNA was detected in follicles at all stages in vitro. In cumulus-oocyte complexes superovulated, CBS expression also increased rapidly. Conclusions CBS was located mainly in the follicular cells in the ovaries. The level of CBS expression is high in follicles during folliculogenesis in mice. Differences in the CBS expression profile between oocyte and follicular cells suggest a role for CBS as a mediator in interactions between oocyte and granulosa cells.     

大鼠卵泡发育过程中基质金属蛋白酶-2，-9的作用

目的：探讨基质金属蛋白酶-2,-9（MMP-2,-9）在大鼠卵泡发育的组织重建中的作用。方法：采用原位杂方法检测动情周期大鼠卵泡中MMP-2,-9mRNAs的基因表达变化,并通过密度扫描方法对原位杂交结果进行半定量分析。结果：在动情周期中,各情期卵巢中卵泡的颗粒细胞和发育良好的卵泡的膜细胞中均可检测到MMP-2m-RNA的杂交信号;MMP-9mRNA的表达始于已发育良好的窦前卵泡的膜细胞,此后在小窦状卵泡、窦状卵泡及排卵前卵泡的膜细胞中均检测到MMP-9mRNA的杂交信号。结论：MMP-2,-9可能通过其基因的表达变化参与卵泡的发育过程。     

环磷酰胺作用下成年大鼠卵巢干细胞因子和mRNA的表达

目的 探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制.方法 将成年SD大鼠分为两组:生理盐水组和环磷酰胺组.大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后处死,固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目.免疫组化方法检测干细胞因子(SCF)蛋白在卵巢的表达,RT-PCR半定量法检测对侧卵巢SCFmRNA的表达.结果 环磷酰胺可引起卵巢间质的严重损害和局部纤维化的发生.SCF可表达于大鼠卵巢原始卵泡和初级卵泡的卵母细胞,次级卵泡和早期窦卵泡的颗粒细胞也可见SCF的表达.环磷酰胺组注射后8周卵泡颗粒细胞SCF蛋白显著升高,卵母细胞SCF蛋白显著减少(P＜0.05);卵巢SCF mRNA显著升高(P＜0.05).结论 SCF在化疗卵巢表达的变化有助于进一步阐释化疗药物损伤卵巢的机制.     

RLF mRNA在不同阶段大鼠卵巢中的表达

目的 探讨松弛素样因子(RLF)在啮齿类动物的正常卵巢中有无表达以及与卵巢功能的关系，对RLF在大鼠卵巢动情周期、假孕模型中的表达进行研究。方法 采用RT-PCR方法。结果 在成年大鼠整个动情周期中都有RLF的表达，RLF的表达强度在动情前期、动情期卵巢较强，动情间期和动情后期卵巢较弱；未成年大鼠，激素处理使卵泡发育至窦前期、排卵前期时，RLF呈现持续的强表达，在黄体早期RLF的表达明显升高，而黄体中期、黄体晚期中RLF表达下降。结论 RLF与卵泡发育、排卵、黄体形成和退化密切相关。     

大鼠卵巢颗粒细胞IGF-Ⅰ、TGFβ、Fas-L表达与卵泡闭锁发生的研究

为研究ＩＧＦ－Ⅰ,ＴＧＦβ和Ｆａｓ－Ｌ在维持卵泡颗粒细胞存活和介导颗粒细胞凋亡中的作用,探讨卵泡闭锁的局部分子机理,将ＳＤ大鼠卵巢石蜡切片,用ＴＵＮＥＬ法和ＰＣＮＡ免疫组化法区别闭锁和生长卵泡,用免疫组化法标记这三种因子以及它们的膜受体在卵泡内的表达。结果显示：无腔和有腔生长卵泡内大多数颗粒细胞为ＰＣＮＡ阳性;早期有腔闭锁卵泡有５个以上颗粒细胞被ＴＵＮＥＬ法标记,部分颗粒细胞为ＰＣＮＡ阳性;晚期有腔闭锁卵泡剩余颗粒细胞多数被ＴＵＮＥＬ法所标记,但为ＰＣＮＡ阴性。有腔生长卵泡颗粒细胞ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－ＩＲ、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲ、Ｆａｓ、Ｆａｓ－Ｌ均为阳性。早晚期有腔闭锁卵泡的颗粒细胞为Ｆａｓ、ＴＧＦβ和ＴＧＦβＲ阳性。结果提示：ＴＵＮＥＬ法和ＰＣＮＡ免疫组化联合运用有利于区分闭锁卵泡和生长卵泡。ＩＧＦ－Ⅰ仅对有腔生长卵泡颗粒细胞有促进增殖和维持存活的作用,其表达的下降和消失为有腔卵泡闭锁的重要诱因。ＴＧＦβ、Ｆａｓ－Ｌ和Ｆａｓ可能介导有腔卵泡颗粒细胞的凋亡,参与闭锁过程,但在有ＩＧＦ－Ⅰ存在的条件下,其介导作用可能受到抑制     

大鼠卵巢颗粒细胞IGF—I,TGFβ,Fas—L表达与卵泡闭锁发生？…

为研究ＩＧＦ－Ｉ,ＴＧＦβ和Ｆａｓ－Ｌ在维持卵泡颗粒细胞存活和介导颗粒细胞凋亡中的作用。探讨卵泡闭锁的局部分子机理,将ＳＤ大鼠卵巢石蜡切片,用ＴＵＮＥＬ法和ＰＣＮ免疫组地区别闭锁和生长卵泡,用免疫组分法标记言之有理三种因子以及它们的膜受体在卵泡内的表达,结果显示,无腔和有腔生长卵泡内大多数颗国ＰＣＮＡ阳性,早期有腔闭锁卵泡有５个以上颗粒细胞被衍标记,部分颗粒细胞为ＰＣＮＡ阳性;晚期有腔闭锁卵泡剩余     

PACAP mRNA在大鼠排卵过程中的表达与调节

目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽（pituitary adenylate cyclase—activating polypeptide，PACAP）mRNA在排卵过程中的表达情况与调节其表达的因素。方法采用RT-PCR对PACAP mRNA在使用外源性激素诱导的大鼠排卵过程中的表达变化进行研究，并在体外培养的排卵前卵泡颗粒细胞中分析了不同处理因素对其表达的影响。结果对预先用孕马血清（PMSG）处理的未成年大鼠给予hCG发现，给予hCG4～12h期间，PACAP转录水平持续升高，其表达水平在给予hCG4h后达高峰。对体外培养的排卵前卵泡颗粒细胞的研究结果分析显示，与对照组相比hCG和hCG＋PAF能提高颗粒细胞PACAP mRNA水平。结论PACAP mRNA在排卵前卵泡呈瞬时性高表达，提示了PACAP可能在排卵过程中发挥重要作用。hCG能促进PACAP的转录，并且PAF可加强这种促进作用。     

多囊卵巢综合征患者颗粒细胞AQP9的表达

目的:研究多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)卵巢组织中窦状卵泡和在超促排卵(COH)周期黄素化颗粒细胞AQP9的表达,探讨颗粒细胞AQP9表达水平与COH周期卵泡液中甾体激素水平的关系。方法:行体外受精-胚胎移植的PCOS患者18例,对照组18例。收集卵泡(直径≥1.8 cm)液,测定甾体激素E2、P和T水平;取卵时分别收集大卵泡(直径>1.6 cm)和小卵泡(直径<1.4 cm)的黄素化颗粒细胞。用RT-PCR检测COH周期黄素化颗粒细胞AQP9mRNA的表达,免疫组化定位AQP9在PCOS卵巢内窦状卵泡和COH周期的黄素化颗粒细胞的表达。结果:RT-PCR检测证实黄素化颗粒细胞有AQP9 mRNA表达,PCOS组AQP9 mRNA表达水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05),PCOS组大卵泡的颗粒细胞AQP9表达高于小卵泡,但无统计学差异。免疫组化显示PCOS患者卵巢的窦状卵泡内颗粒细胞和COH周期的黄素化颗粒细胞均有AQP9的表达,染色定位于胞浆和胞膜。在COH周期,颗粒细胞AQP9 mRNA表达水平与卵泡液中E2、P和T均无显著性相关。结论:PCOS患者卵巢组织中窦状卵泡的颗粒细胞及在COH周期黄素化颗粒细胞均有AQP9表达,推测AQP9可能通过水转运介导卵泡发育和窦卵泡形成。在COH周期,PCOS的大卵泡AQP9的表达有高于小卵泡的趋势,可能与卵泡发育有关。在COH周期,颗粒细胞AQP9 mRNA表达水平与甾体激素的分泌无相关性。