呼吸道合胞病毒单克隆抗体用于纸上桥联酶标诊断的初步探讨

为了呼吸道合胞病毒(RSV)能够在基层及时诊治和控制其流行,作者旨在更加简化RSV的快速诊断,将RSV-McAb移在微孔滤膜上,以搭桥法和RSV抗原结合,由碱性磷酸酶催化底物,在膜上显色。将RSV-McAb用于RSV培养物检测,并作了     

呼吸道合胞病毒抗原酶联免疫吸附测定检测方法的建立及应用

目的建它呼吸道合胞病毒抗原酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法,应用其对来源于本院的临床样本进行检测.方法建立ELISA方法,检测标本中的呼吸道合胞病毒,与呼吸道合胞病毒细胞培养检测方法进行对照,并利用该方法进行该病毒2007年在广州市的流行性分析.结果本方法的灵敏度略高于呼吸道合胞病毒的细胞培养检测方法,对甲型流感病毒(H3N2亚型、H1N1亚型)、乙型流感病毒、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)无特异性反应.结论本呼吸道合胞病毒抗原ELISA检测方法可用于呼吸道合胞病毒感染的临床诊断和鉴别诊断.     

北京甲3流感流行中合并其它呼吸道病毒感染的调查

为获得北京甲３流感暴发中其它主要呼吸道病毒介入和血清学依据。方法应用系列呼吸道病毒桥联酶标试剂盒对２０４例患者分泌物进行多病毒抗原检测;应用间接免疫荧光法对流行前人群５０例和流行后患者恢复期血清４１例,分别作呼吸道合胞病毒;副流感病毒３型以及腺病毒７型的血清学检测。     

呼吸道合胞病毒单克隆抗体用于纸上桥联酶标诊断的初步探讨

为了呼吸道合胞病毒(RSV)能够在基层及时帮助诊断和控制其流行,作者旨在更加简化RSV的快速诊断,将RSV-McAb移在微孔滤膜上以搭桥法和RSV抗原结合,由碱性磷酸酶催化底物,在膜上显色。作者将RSV-McAb用于RSV培养物的检测,并作了异种动物血清封闭试验以及vero细胞等阴性对照,证实RSV-Mc-Ab用于纸上桥联是特异性显色,对23例患儿鼻咽部脱落细胞同时作纸上桥联,免疫荧光及APAAP 3种RSV的快速诊断的比较,获得初步满意结果。     

儿童社区获得性肺炎血清免疫学病毒特异性抗体检测与呼吸道病毒核酸检测结果一致性分析

目的:探讨儿童社区获得性肺炎的病毒血清特异性抗体检测与呼吸道病毒核酸检测结果的一致性,以指导其临床应用。方法:109例经鼻咽拭子标本实时荧光定量PCR检测诊断为病毒感染的社区获得性肺炎患儿,采集其急性期和恢复期血清标本,采用间接免疫荧光法检测呼吸道常见病毒(呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒...     

呼吸道合胞病毒F蛋白基因片段真核细胞表达纯化及其ELISA建立的研究

目的表达纯化人呼吸道合胞病毒(HRSV)F蛋白基因片段,建立间接夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA),为进一步大量表达F基因、构建基因工程疫苗和快速临床检测奠定基础。方法逆转录并扩增F基因中的F1片段,连接到载体中,转染真核细胞,诱导并纯化重组F蛋白。将纯化重组F蛋白免疫小鼠制备抗体血清,并建立间接夹心ELISA。通过100份标本应用"金标法"对所建立的方法进行验证。结果成功获得F基因中F1片段的扩增产物,筛选阳性克隆,得到相对分子质量为45000的大量表达蛋白。确定了间接夹心ELISA的最佳反应条件和工作浓度;鼠抗F1IgG最佳质量浓度为3.2μg/mL,样品最佳反应时间为37℃70 min,酶标兔抗鼠IgG最佳工作浓度为1∶6 000。与"金标法"对比,阳性样品的变异系数为3.2%～8.6%,阴性样品的变异系数为5.1%～8.3%,均小于10.0%,表明该方法有良好的重复性。结论构建的重组真核细胞能够大量表达F蛋白,纯化的F蛋白具有很好的免疫原性,制备的抗体血清用于ELISA能够得到准确的检测结果。     

APAAP桥联酶标McAb用于RSV Hep-2细胞培养基质片产生假阳性反应的实验

呼吸道融合病毒(RSV)-McAb用于患者鼻咽部脱落细胞APAAP桥联酶标快速诊断,经300例临床对照应用,证实其特异性与敏感性均优良,且不需要昂贵的荧光显微镜等设备。但是,作者在作RSV基质片阳性对照时,出现只加二抗或者三抗也可产生阳性的非特异反应,为慎重起见我们作了系列实验,证实APAAP假阳性只产生在RSV的Hep-2病毒培养细胞内,此反应不发生在患者鼻咽部脱落细胞内的RSV-Ag中,兹将实验方法报告如下。 1.3张RSV基质片:A片按APAAP全过程操作。B片:不滴加一抗(即RSV-McAb),其它同APAAP法。C片:不滴加一抗及二抗(即兔抗鼠IgG)直接在基质片上加三抗后,即加底物显色。     

抗合胞病毒单克隆抗体用于(IFA)临床快速诊断的研究

本文以8株合胞病毒单克隆抗体(以下简写RSV-McAb)和北京地区近三年RSV地方株结合,选其中7株敏感性、特异性高的McAb进行混合,以RSV多价动物血清(以下简写RSV-Poly Ab)和双份血清学作对照,用免疫间接萤光法(IFA)检测100例患儿鼻咽部脱落细胞内的RSV-Ag。证实了McAb对RSV快速诊断敏感性高,特异性强,具有极大实际应用价值。它可以完全作为一种RSV快速诊断新试剂来代替Poly Ab。     

呼吸道合胞病毒感染患儿可溶性白细胞介素2的检测及其临床意义

呼吸道合胞病毒感染患儿可溶性白细胞介素２的检测及其临床意义李世光，赵习芳，岳月娥，赵俊萍，张泮生应用间接免疫荧光法对急性下呼吸道感染（ＡＬＲＴＩ）患儿１０８份鼻咽分泌物（ＮＰＳ）脱落细胞中呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）抗原和１１２份双份血清标本进行了研究，...     

检测循环免疫复合物的快速ELISA捕捉法

以兔抗日本脑炎病毒(JEV) IgG与JEV形成的免疫复合物(IC)为模型,羊抗兔IgG为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的JEV种特异性单抗为结合物,通过选择适宜的试验条件,建立了检测IC的快速ELISA捕捉法(RICC-ELISA);并初步用于检测感染JEV的恒河猴多次注射单抗后,猴抗鼠IgG及IgM与单抗形成的IC的动态变化.应用该法,在60分钟内就可得出结果,具有快速、简便、特异、敏感等特点,并可推广应用,检测其它类型的IC.     

抗8种主要呼吸道病毒单抗杂交瘤细胞库的建立和临床应用

目的：为了对流感病毒甲型和乙型、副流感病毒１、２和３型、呼吸道合胞病毒及腺病毒３、７型主要呼吸道病毒进行快诊。方法：从１９８６至１９９７年应用杂交瘤单抗技术,制备出上４类８种抗病毒单抗细胞库,连同用于连接物的抗碱性磷酸酶单抗细胞株,共有１１７株单抗细胞株。将以上４类８种病毒单抗连接抗碱性磷酸酶单抗复合物,以兔抗鼠搭桥进行ＡＰＡＡＰ桥联快速诊断。结果：获得满意结果,此技术结果清晰,无内源性酶干扰,只     

九项呼吸道联检试剂对多种呼吸道感染病原体检测的临床意义

目的 为临床提供一种快速诊断呼吸道感染病原体的方法.方法 对1318例呼吸道感染患者的血清标本应用九项呼吸道联检试剂(间接免疫荧光法)同时检测九项主要病原体的IgM抗体,包括嗜肺军团菌(LP)、肺炎支原体(MP)、Q热立克次体(COX)、肺炎衣原体(CP)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(IFA)、乙型流感病毒(IFB)和副流感病毒1、2和3型(PIVS).结果 非典型病原体感染率为33.3％(439/1318),其中以肺炎支原体最为多见,其次为呼吸道合胞病毒,流感病毒B、A次之;混合感染率达15.7％(207/1318);感染人群以儿童多见.结论 九项呼吸道联检试剂(间接免疫荧光法)检测快速、操作简便、准确性高,检测范围广、利于早期发现,费用不高,适合各大医院推广应用.     

抗合胞病毒单克隆抗体用于IFAT供临床快速诊断的研究

本文以8株合胞病毒单克隆抗体(RSV-McAb)和北京地区近三年RSV地方株结合,选其中7株敏感性、特异性高的McAb进行混合,以RSV多价动物抗血清以下简写RSV-PolyAb)和双份血清学作为对照,用免疫间接萤光染色法(IFAT)检测69例患儿鼻咽部脱落细胞内的RSV-Ag。证实了McAb对RSV快速诊断敏感性高,特异性强,具有极大实际应用价值。它可以完全作为一种RSV快速诊断的新试剂来代替PolyAb。     

RSV感染和诊断的研究发展

呼吸道合胞病毒 (respiratory syncytialvirus,RSV)是副粘病毒科 ,肺炎病毒属的负链RNA病毒。其感染遍及全世界 ,是婴幼儿病毒性肺炎和毛细支气管炎的主要病原体之一 ,严重威胁婴幼儿健康。尽管 RSV疫苗的研制已有2 0多年 ,但至今未获成功。因此 RSV感染的诊断和治疗非常重要。目前常用的诊断方法有 :免疫荧光法、酶免疫法、核酸杂交和逆转录聚合酶链反应等。本文现就 RSV的感染和实验室诊断研究的进展综述如下。1　呼吸道合胞病毒感染1 .1　呼吸道合胞病毒。RSV是 1 95 6年首先从上呼吸道感染的猩猩体内分离得到的 ,当时命名为“猩…     

儿童呼吸道感染临床病毒学研究

目的了解广州地区呼吸道病毒感染情况.方法采用咽拭子和部分血清进行病毒分离、红细胞凝集试验、红细胞凝集抑制试验和免疫酶标固相吸附试验进行研究.结果 4298例咽拭子中分出流感病毒200例,其中上呼吸道流感病毒172例阳性,占流感病毒阳性率的86.0%;分出呼吸道合胞病毒150例,下呼吸道合胞病毒139阳性,占呼吸道合胞病毒阳性率92.7%;及分出单疱病毒20例;单疱病毒阳性率0.5%.460例肺炎和支炎血清检测巨细胞病毒IgM 82例阳性,CMV-IgM阳性率17.7%.结论流感病毒为上呼吸道感染的主要病原,呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒是下呼吸道感染的主要病原.流感病毒流行有2个高峰(每年3～4月及7～8月份).单疱病毒在上下呼吸道感染中为散发病例.     

多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术检测呼吸道病原体

目的 建立一种呼吸道病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测方法.方法 针对几种重要的呼吸道病原体(甲型流感病毒、乙型流感病毒、SARS冠状病毒、嗜肺军团菌、脑膜炎奈瑟菌以及腺病毒)保守区基因设计引物,进行多重PCR反应、核酸侵入反应及纳米金显色反应,对多种呼吸道病原体同时进行检测,以人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒、人鼻病毒、肺炎链球菌4种呼吸道病原核酸评价其检测特异性,以体外转录的病毒RNA或扩增的PCR片段评价其检测敏感性.结果 成功建立了一种呼吸道病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测技术.建立的检测方法可特异的检测目的病原体,且与人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒、人鼻病毒、肺炎链球菌无交叉反应.该方法对不同靶标的检测灵敏度介0.5 ～50拷贝/μL.结论 建立的呼吸道病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术的检测方法,具有较高的检测特异性及灵敏度,检测通量高,肉眼即可观察结果,在传染病病原体检测方面具有广阔的应用前景.     

儿童呼吸道感染临床病毒学研究

目的 了解广州地区呼吸道病毒感染情况。方法 采用咽拭子和部分血清进行病毒分离、红细胞凝集试验、红细胞凝集抑制试验和免疫酶村固相吸附试验进行研究。结果 4298例咽拭子中分出流感病毒200例,其中上呼吸道流感病毒172例阳性,占流感病毒阳性率的86．0％;分出呼吸道合胞病毒150例,下呼吸道合胞病毒139阳性,占呼吸道合胞病毒阳性率92．7％;及分出单疱病毒20例;单疱病毒阳性率0．5％。460例肺炎和支炎血清检测巨细胞病毒IgM82例阳性,CMV－IgM阳性率17．7％。结论 流感病毒为上呼吸道感染的主要病原,呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒是下呼吸道感染的主要病原。流感病毒流行有2个高峰（每年3－4月及7－8月份）。单疱病毒在上下呼吸道感染中为散发病例。     

抗MHCⅡ类抗原单克隆抗体人血清蛋白氨甲喋呤结合物的制备及活性研究

作者采用间接偶联法,以人血清白蛋白作为中间载体制成氨甲噪吟-人血清白蛋白-鼠抗人MHCⅡ类抗原单克隆抗体结合物。经体外活性检测,证实该结合物对靶细胞Raii的IC50为0.6μg/ml,对非靶细胞Molt 4的IC50为10μg/ml,游离McAb HI43能竞争抑制这种作用。而相同浓度的结合物对造血干细胞克隆无抑制效应。     

呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及鉴定

目的：建立能稳定分泌抗呼吸道合胞病毒（RSV-long株,国际标准株）单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法：杂交瘤技术制备单抗,鉴定各项特性。结果：培育出稳定分泌抗RSV蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞5株。杂交瘤细胞株染色体数目在89～104条之间,其分泌的抗体分别属于鼠IgG1、IgG2a、IgG2b亚类,各种腹水单抗的荧光效价在1∶4000～1∶16000之间。一种单抗识别RSV基质蛋白（M）,两种单抗识别RSV融合蛋白（F）,另两种单抗识别RSV核衣壳蛋白（N）。单抗中和效价最高达1∶64。相加指数证实5种单抗识别不相关的抗原表位。用硫氰酸铵洗脱法比较了五种单抗相对亲和力的大小,依次为：1#〉2#〉4#〉3#〉5#。所有杂交瘤细胞株,经连续3个月培养及冻存半年后复苏,细胞生长良好,检测上清,其分泌抗体效价稳定。结论：已获得抗呼吸道合胞病毒的单克隆抗体,为RSV感染的早期诊断及进一步研究奠定了基础。     

金银花体外抗呼吸道合胞病毒的作用研究

目的了解金银花体外抑制呼吸道合胞病毒的效果和强度。方法采用细胞病变抑制实验．噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,观察金银花在人宫颈癌传代细胞（Hela）中对人呼吸道合胞病毒3型的抑制作用,以治疗指数（TT）为评价指标。结果金银花对Hela细胞半数中毒浓度（TC50）为5mg／ml,最大无毒浓度（TC50）为3．6mg／ml;对呼吸道合胞病毒有直接灭活作用,其半数抑制率（IC50）为0．16mg／ml,TI为31．2;在吸附阶段也有作用,其IC50为0．48mg／ml,TI为10．5;同时金银花有抑制呼吸道合胞病毒生物合成作用,其IC50为1．0mg／ml,TI为5;金银花不能阻止呼吸道合胞病毒侵入细胞。结论金银花在体外主要通过直接灭活、阻止病毒吸附和抑制生物合成3种方式发挥抗呼吸道合胞病毒作用。