生存素反义寡核苷酸在恶性肿瘤治疗中的研究进展

生存素(survivin,SVV)是目前恶性肿瘤基因治疗研究中的新靶点.应用反义寡核苷酸技术(ASODN)等治疗方法可以抑制SVV的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.近年应用SVV-ASODN对恶性肿瘤的研究已成为肿瘤治疗领域的研究热点,这将为恶性肿瘤的治疗提供新的理论基础.     

生存素反义寡核苷酸对人恶性黑素瘤A375细胞生物学行为的影响

目的研究生存素反义寡核苷酸(AS-ODN)经脂质体介导转染对A375细胞增殖、凋亡的影响。方法合成生存素硫代反义寡核苷酸(AS-ODN),脂质体携带转染人恶性黑素瘤A375细胞。采用台盼蓝计数、软琼脂克隆形成试验、电镜、流式细胞仪检测AS-ODN对A375细胞增殖及凋亡的影响。通过裸鼠致瘤实验观察AS-ODN对A375细胞动物体内增殖的抑制作用。结果生存素反义寡核苷酸能降低G2/M期细胞百分比,诱导细胞凋亡发生,明显抑制A375细胞的生长和克隆形成,裸鼠体内A375细胞恶性增殖潜力下降。结论脂质体介导生存素AS-ODN能有效抑制A375细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡。     

存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖和凋亡的影响。方法以脂质体介导存活素反义寡核苷酸转染体外培养的角质形成细胞。采用MTT方法观察存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞生长曲线的影响;采用RT-PCR方法观察存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞存活素表达水平的影响;采用流式细胞仪检测存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞细胞周期和凋亡的影响。结果存活素反义寡核苷酸作用于角质形成细胞后,细胞增殖受到明显抑制,存活素mRNA表达水平明显下降,细胞出现明显的凋亡现象。结论存活素反义寡核苷核酸能够抑制角质形成细胞增殖,促进角质形成细胞凋亡。提示存活素可能会成为一个新的治疗银屑病的靶分子。     

COX-2反义寡核苷酸对Colo-16细胞生长及c-myc基因表达的影响

目的探讨脂质体介导环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AsODN)对皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞生长及对c-myc表达的影响。方法将COX-2无义(Nonsense oligodeoxynucleotide,NsODN)、反义寡核苷酸用脂质体分别导入Colo-16细胞中。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察COX-2反义寡核苷酸对Colo-16细胞体生长曲线的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测c-myc蛋白表达的变化。结果COX-2反义寡核苷酸作用于Colo-16细胞后,细胞增殖能力受到抑制,荧光染色可见细胞核染色质边集、固缩、核碎裂的凋亡形态学改变;c-myc表达明显下调。结论COX-2反义寡核苷核酸能够抑制Colo-16细胞体外增殖,诱导Colo-16细胞凋亡,并能显著下调c-myc表达。     

皮肤科学基础

20 0 4 196 7　反义寡核苷酸阻遏角蛋白 14的表达 /陈玉欣 (四军大西京医院皮肤科 )… / /中华皮肤科学杂志 .-2 0 0 4 ,37( 4) .- 2 2 4～ 2 2 6人表皮角质形成细胞原代培养 ,利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配 K14寡核苷酸基因片段导入角质形成细胞 ,应用流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)和免疫组化 ( SABC)法检测反义寡核苷酸对角质形成细胞的细胞周期、K14基因和蛋白表达的影响。结果显示 ,应用反义技术封闭K14基因 ,可以阻遏角蛋白K14基因和蛋白的表达 ,并可以抑制体外培养的角质形成细胞的增殖。提示以 K14为靶…     

环氧合酶-2反义寡核苷酸对鳞状细胞癌Colo-16细胞基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的:研究环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AsODN)对人皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。方法:免疫细胞化学法检测Colo-16细胞中COX-2蛋白表达;免疫荧光显微镜观察转染情况;蛋白免疫印迹(Western blot)及半定量反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测Colo-16细胞MMP-2蛋白和MMP-2mRNA表达水平。结果:Colo-16细胞中COX-2蛋白阳性表达,并分布在胞质、胞核;Colo-16细胞胞质和胞核可见荧光标记的COX-2无义寡核苷酸、反义寡核苷酸;Western blot及RT-PCR检测结果显不COX-2反义寡核苷酸作用Colo-16细胞48 h后,MMP-2表达显著下调(P0.05)。结论:COX-2反义寡核苷酸能有效下调Colo-16细胞MMP-2表达,提示COX-2反义寡核苷酸可能通过抑制MMP-2表达来阻断皮肤鳞状细胞癌的浸润、转移。     

反义核酸技术及其在皮肤科的应用

针对各种癌基因、功能蛋白、生长因子及其受体设计的反义寡核苷酸已有效用于调控致病或异常基因表达 ,成为治疗各种疾病包括各种皮肤病的有效手段。综述了近年来反义核酸技术在皮肤病基础研究和临床研究的新进展 ,特别是反义寡核苷酸体内外的稳定性、细胞通透性、透皮性、临床应用方面的最新研究结果。并对这一领域存在的问题进行了总结 ,展望了这一技术的应用前景。     

角蛋白K14反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖的影响

目的：研究角蛋白K14反义寡核苷酸(ASODN)对人角质形成细胞(KC)体外增殖活性的影响。方法：利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配K14寡核苷酸基因片段导人体外培养的角质形成细胞，应用细胞生长抑制实验、透射电镜(TEM)和流式细胞仪(FCM)检测ASODN对角质形成细胞的增生、超微结构改变和细胞增殖周期的影响。结果：脂质体介导的K14反义寡核苷酸组KC增殖活性受到明显抑制；电镜下可见KC增殖活性受到抑制的改变，角蛋白合成明显减少；流式细胞仪检测见细胞周期发生明显改变，G1期细胞百分率上升，S期细胞百分率下降。而正义寡核苷酸组、错义寡核苷酸组及空白对照组均无此改变。结论：K14反义寡核苷酸可抑制KC体外增殖活性，应用反义寡核苷酸技术封闭K14基因，有望为银屑病的基因治疗提供新的思路。     

hTERT反义寡核苷酸抑制Hut78细胞端粒酶活性及诱导细胞凋亡的研究

目的 探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸对皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞株端粒酶活性及细胞生长的影响,为CTCL基因治疗提供新的基因靶点。方法 采用脂质体介导的基因转染方法,将不同浓度(10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L)的寡核苷酸分别导入CTCL细胞株Hut78中;分别于不同的时间,应用端粒酶重复序列扩增及酶联免疫吸附方法(PCR-ELISA)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪技术等动态观察转染细胞中端粒酶活性、hTERT mRNA表达以及细胞凋亡的变化。结果 经hTERT反义寡核苷酸(AODN)作用72h后,细胞端粒酶的活性明显下降,hTERT mRNA的表达减弱,并可观察到细胞凋亡,凋亡细胞发生率为13.05%。细胞生长抑制作用有明显的时效性,以30μmol/L、72h时下降最明显。而有义寡核苷酸(SODN)组和对照组以上指标均无明显变化(P>0.05)。结论 hTERT反义寡核苷酸可显著抑制CTCL细胞的端粒酶活性,抑制细胞生长增殖,诱导细胞凋亡。     

皮肤科学基础

20042639　角蛋白K14反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖的影响/陈玉欣(四军大西京医院全军皮肤性病中心)…//临床皮肤科杂志.-2004,33(5).-263～265采用脂质体将人工合成的正义、反义及错配寡核苷酸基因片段导入体外培养的角质形成细胞,应用细胞生长抑制实验、透射电镜和流式细胞仪分别检测反义寡核苷酸对角质形成细胞的增殖、超微结构和细胞增殖周期的影响。结果显示,脂质体介导的K14反义寡核苷酸对角质形成细胞的增殖活性有明显抑制作用;电镜下见角质形成细胞中角蛋白合成明显减少;流式细胞仪检测见细胞周期发生明显改变,G1期细胞百分率上…     

反义寡核苷酸阻遏角蛋白14的表达

目的 研究脂质体介导角蛋白K14反义寡核苷酸(ASODN)阻遏人角质形成细胞K14基因和蛋白的表达及抑制体外增殖活性的效果.方法 人表皮角质形成细胞原代培养,3~10代用于实验,利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配K14寡核苷酸基因片段导入角质形成细胞,应用流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化(SABC)方法检测反义寡核苷酸对角质形成细胞的细胞周期、K14基因和蛋白表达的影响.结果 脂质体介导的K14反义寡核苷酸转染角质形成细胞后,能有效地抑制角质形成细胞中K14基因的表达;48h后可阻遏K14蛋白表达;流式细胞仪检测见反义寡核苷酸处理组细胞周期发生明显改变,G₁期细胞百分率上升,S期细胞百分率下降.而正义寡核苷酸1组、错义寡核苷酸组及空白对照组均无此变化.结论 应用反义技术封闭K14基因,可以阻遏角蛋白K14基因和蛋白的表达,并可以抑制体外培养的角质形成细胞的增殖.     

Stat 3与相关皮肤病

Stat3是一种重要的核转录因子,参与细胞增殖、存活、转化、迁移等过程。Stat3在以表皮过度增殖和/或异常分化为特征的皮肤病,如银屑病、皮肤恶性肿瘤的发病中起重要作用。通过向目的细胞内引入Stat3反义寡核苷酸、诱饵寡核苷酸或显性负相蛋白等阻断Stat3的功能,能抑制目的细胞的增殖,促进细胞调亡。     

K17反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖和K17表达的影响

目的研究脂质体介导角蛋白17(K17)反义寡核苷酸对培养人角质形成细胞增殖和K17表达的影响。方法利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配K17寡核苷酸基因片段导入体外培养的人角质形成细胞系HaCaT,应用MTT法检测其对HaCaT细胞增殖的影响,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测K17mRNA水平的变化,并以蛋白质印迹法、免疫荧光细胞化学结合激光扫描共聚焦显微镜检测K17蛋白水平的改变。结果脂质体介导的K17反义寡核苷酸转染HaCaT细胞后,细胞增殖受到明显抑制,同时细胞中K17mRNA和蛋白的表达明显下降,而正义寡核苷酸组、错义寡核苷酸组及空白对照组均无明显变化。结论应用反义技术封闭K17基因,可以阻遏角蛋白K17基因和蛋白的表达,抑制角质形成细胞的体外生长和增殖能力。     

核因子-κB反义寡核苷酸抑制紫外线诱导的HaCaT细胞反义分泌白介素6

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)反义寡核苷酸转染体外培养的HaCaT细胞反义株HaCaT后,对紫外线(UV)诱导的HaCaT细胞反义分泌炎症因子白介素6(IL-6)的抑制作用。方法 蛋白质印迹方法测定不同剂量中波紫外线(UVB)辐射HaCaT细胞反义后NF-κBp65的变化;逆转录-聚合酶链反应测定NF-κBp65反义寡核苷酸转染后p65m RNA表达的变化;酶联免疫吸附测定法测定NF-κBp65反义寡核苷酸转染后紫外线辐射的HaCaT细胞反义分泌IL-6水平。结果 10、20、30mJ/cm² UVB辐照HaCaT细胞反义后均可显著促进NF-κBp65表达(P<0.05),不同浓度的NF-κBp65反义寡核苷酸转染后对30mJ/cm² UVB诱导的p65mRNA表达和IL-6分泌均有显著抑制作用(P<0.05)。结论 脂质体介导的NF-κBp65反义寡核苷酸转染HaCaT细胞反义,可以抑制UV辐射诱导的HaCaT细胞反义产生IL-6,表明UV诱导HaCaT细胞反义产生IL-6可能是通过UV激活NF-κBp65的表达产生的。     

靶向survivin shRNA在肿瘤治疗中的研究进展

生存素在细胞凋亡抑制中起重要作用,越来越多的研究者将其作为肿瘤基因治疗的理想靶点。应用RNA干扰技术靶向抑制生存素的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成、增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性。     

RNA干扰与皮肤恶性肿瘤的治疗

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是在转录水平上的基因阻断技术,可以抑制靶基因表达或使基因沉默。促成针对性的RNAi发生,达到在不同环节上调节恶性肿瘤发生、发展,影响基因的表达,是RNAi参与皮肤恶性肿瘤治疗的重要思路。使用RNAi技术参与肿瘤的治疗具有针对性强、效率高、作用可以持久的优势,可能特异性、长期及完全抑制目的基因表达、逆转肿瘤细胞恶性表型、诱导肿瘤细胞发生调亡和降低肿瘤耐药性,从而实现抑制肿瘤发生、抑制肿瘤生长、抑制肿瘤侵袭性、逆转肿瘤耐药性,达到治疗肿瘤的目的。     

Survivin与皮肤恶性肿瘤

生存素（survivin）是凋亡抑制蛋白（IAP）基因家族新成员。具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂及参与肿瘤血管形成等多重功能，于多种肿瘤组织中高表达而在正常成人组织中一般不表达。Survivin在皮肤恶性肿瘤中高表达，与皮肤恶性肿瘤的演主莹、复发、预后、耐药及病人生存率等有关，可作为皮肤恶性肿瘤诊断及治疗新的切入点，     

生存素与皮肤肿瘤相关性的研究进展

生存素基因是凋亡抑制蛋白家族新成员,因其结构较为独特,且能选择性地在肿瘤中表达,正常终末分化组织中不表达,是皮肤鳞癌、恶性黑素瘤的预后指标;抑制其表达能显著促进常见皮肤恶性肿瘤细胞发生凋亡,对正常组织无明显影响,有望成为肿瘤标记物和肿瘤治疗的新靶点。     

整合素表达对硬皮病成纤维细胞合成原胶原的影响

目的　研究硬皮病成纤维细胞整合素表达对成纤维细胞合成原胶原的影响。方法　运用硫代修饰的整合素反义寡核苷酸阻断硬皮病成纤维细胞表面相应整合素亚基的表达 ,RT PCR检测整合素表达抑制后硬皮病成纤维细胞原胶原mRNA量的变化。结果　反义寡核苷酸能特异抑制硬皮病成纤维细胞相应整合素亚基的表达 ;整合素α5或 β1 亚基表达减少的成纤维细胞 ,原胶原proα1(Ⅰ )、proα1(Ⅲ )mRNA均显著降低。结论　降低硬皮病成纤维细胞整合素的表达 ,可从转录水平抑制成纤维细胞合成原胶原     

COX-2反义寡核苷酸对Colo-16细胞生长能力及VEGF表达的影响

目的:评估脂质体介导环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸(AsODN)对皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:将COX-2无义寡核苷酸(NsODN)和AsODN用脂质体分别导入Colo-16细胞中,克隆并观察COX-2 AsODN对细胞的生长抑制作用.Hoechst33258荧光染色法和流式细胞仪观察Colo-16细胞凋亡形态学变化及凋亡率.Western blot检测VEGF表达水平.结果:COX-2 AsODN作用于Colo-16细胞后,增殖能力受到抑制,克隆形成率下降(P<0.05),细胞出现明显凋亡,COX-2 AsODN组细胞早期凋亡率显著高于对照组(P<0.05);VEGF表达明显下调.结论:COX-2AsODN能够抑制Colo-16细胞体外生长,诱导其凋亡,并能显著下调VEGF表达.