大枣中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞电位的影响

目的：探讨大枣中性多糖（JDP－N）体外对小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）膜电位的影响。方法：采用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）测定小鼠腹腔巨噬细胞内膜电位。结果：大枣中性多糖作用后巨噬细胞内DiBAC4(3)荧光强度明显增强。结论：大枣中性多糖能引起小鼠腹腔巨噬细胞膜去极化。     

大枣中性多糖的抗小鼠腹腔巨噬细胞内活性氧作用

目的：探讨大枣中性多糖（JDP－N）体外对小鼠腹腔巨噬细胞内活性氧（ROS）的影响。方法：采用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）测定活性氧。结果：大枣中性多糖作用后巨噬细胞内DCFH－DA荧光强度明显降低。结论：大枣中性多糖具有抗小鼠腹腔巨噬细胞内活性氧作用。     

大枣中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞内pH值的影响

目的：探讨大枣中性多糖（JDP－N）体外对小鼠腹腔巨噬细胞（MΦ）内pH值的影响。方法。采用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）测定小鼠腹腔巨噬细胞内pH值。结果：大枣中性多糖作用后巨噬细胞内SNARF－1荧光强度明显增强。结论：大枣 中性多糖能引起小鼠腹腔巨噬细胞内pH值升高。     

大枣中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞胞浆游离Ca^2＋浓度的影响

目的：探讨大枣中性多糖（JDP－N）对小鼠腹腔巨噬细胞（MΦ）胞浆游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i)的影响。方法：采用激光扫描共聚焦显微镜技术（LSCM）测定[Ca^2 ]i。结果：JDP－N能引起MΦ内Ca^2 浓度[Ca^2 ]i明显升高,[Ca^2 ]i的升高是由胞外Ca^2 内流和通过IICP（IP3-induced calcium release)和CICR（calcium-induced calcium release)机制释放细胞内贮存Ca^2 引起。结论：[Ca^2 ]i升高是JDP－N活化MΦ的重要信号转导通路。     

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞蛋白激酶A活性的影响

为观察灵芝多糖（ＧＬＢ７）体外对小鼠腹腔巨噬细胞（ＭΦ）蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）活性的影响,采用反相离子对高效液相色谱法测定ＭΦ中ＲＫＡ活力。结果表明ＧＬＢ７（４０ｍｇ／Ｌ）能引起小鼠腹腔ＭΦ中ＰＫＡ活性明显升高,１０ｍｉｎ达峰值,３０ｍｉｎ恢复到基础水平。提示灵芝多糖的免疫增强作用与其增强ＭΦ中ＰＫＡ活性有关。     

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞胞浆游离Ca2+浓度的影响

 目的:探讨灵芝多糖(GLP)对免疫细胞信号转导过程的影响?方法:采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术,动态监测GLP均一体组分GLB₇对小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)胞浆游离Ca²⁺浓度([Ca²⁺]i)的影响?结果:GLB₇(20μg·ml^-1)引起小鼠腹腔MΦ中[Ca²⁺]i明显升高,升高值为(248±18)%(n=6);GLB₇引起小鼠腹腔MΦ外钙内流及MΦ内IP₃敏感和IP₃非敏感钙池释放Ca²⁺,[Ca²⁺]i升高值分别为(76±10)%,(58±10)%,(41±8)%(n=6);GLB₇对MΦ[Ca²⁺]i的影响与K⁺通道及其引起的膜电位变化无关?结论:MΦ是灵芝多糖作用的靶细胞;GLB₇引起MΦ中[Ca²⁺]i快速升高,可能是灵芝多糖产生作用的重要途径?     

灵芝多糖对小鼠巨噬细胞cAMP含量的影响

目的：研究灵芝多糖（ＧＬＢ_７） 对小鼠巨噬细胞（ＭФ） 内ｃＡＭＰ含量的影响,为其免疫增强作用机制提供依据。方法：采用细胞培养和竞争性蛋白结合分析法测定小鼠腹腔ＭФ中ｃＡＭＰ含量。结果：ＧＬＢ_７ 能剂量依赖性引起小鼠腹腔ＭФ中ｃＡＭＰ浓度快速升高,５ ｍｉｎ 达峰值,之后缓慢下降,至３０ ｍｉｎ 时基本恢复原来水平。结论：ＧＬＢ_７ 引起小鼠ＭФｃＡＭＰ浓度快速升高,可能与其增强小鼠免疫功能有关。     

灵芝多糖对小鼠M1巨噬细胞活性的研究

目的研究灵芝多糖对小鼠M1巨噬细胞活化及对T细胞增殖的影响。方法吉姆沙染色巨噬细胞后,显微镜观察巨噬细胞吞噬现象;ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-10、IL-12和TNF的水平;MTT法检测M1巨噬细胞诱导T细胞的增殖作用。结果灵芝多糖能促进小鼠M1巨噬细胞对金色葡萄球菌的吞噬作用;体外实验显示,100μg/ml灵芝多糖可以诱导小鼠巨噬细胞分泌IL-10和TNF-α;灵芝多糖介导的巨噬细胞和T细胞的联合培养与脾脏细胞混合培养有显著性差别。结论灵芝多糖能诱导小鼠巨噬细胞活化,产生M1型细胞因子,介导T细胞活化增殖。     

灵芝多糖对小鼠巨噬细胞内三磷酸肌醇和二酰基甘油的作用研究

为研究灵芝多糖（ＧＬＢ７） 对小鼠腹腔巨噬细胞（ ＭΦ） 三磷酸肌醇（ＩＰ３） 和二酰基甘油（ＤＡＧ） 的作用,确定其对ＭΦ信号转导途径,采用细胞培养、放射免疫分析及离子交换层析和薄层层析法测定了小鼠腹腔ＭΦ中ＩＰ３ 和ＤＡＧ 的变化。结果显示ＧＬＢ７ 能引起小鼠ＭΦ中ＩＰ３ 和ＤＡＧ 浓度升高。ＩＰ３ 的达峰时间为３０ｓ,百日咳毒素（ＰＴＸ） 对此现象有抑制作用;ＤＡＧ 的合成出现两个峰,第一个峰迅速短暂,峰值位于３０ｓ,第二个峰是持续近２ｍｉｎ 的迟发峰。表明ＩＰ３／Ｃａ２ ＋ 和ＤＡＧ／ＰＫＣ 两条信息途径均参与了灵芝多糖对ＭΦ的免疫调节     

灵芝中灵芝多糖的含量测定研究

灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss·ex Fr·)Karst·或紫芝Ganoderma sinenseZhao·Xu et Zhang的干燥子实体。其化学成分复杂,目前已知主要含有多糖(肽)类、三萜类、核苷类等[1]。灵芝多糖类具有抗肿瘤作用、免疫调节作用、降血糖、降血脂、抗氧化和抗衰老等作用,被认为是灵芝扶正固本的重要有效成分[2]。本研究建立了灵芝多糖的含量测定方法。本实验采用分光光度法,以葡萄糖为对照品,经硫酸蒽酮显色后测定其吸     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞[Ca2+]i和细胞膜电位的影响

目的研究甜菜碱对肝癌HepG2细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)和细胞膜电位的影响。方法Fluo-3/AM标记,激光扫描共聚焦显微镜观察HepG2细胞[Ca2 ]i,TMRE标记,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞膜电位的影响。结果甜菜碱能够升高HepG2细胞[Ca2 ]i,降低细胞膜电位。升高[Ca2 ]i的强度具一定的剂量依赖性,随甜菜碱剂量的增大而升高。甜菜碱50、25mg/mL组与对照组比较差异非常显著(P<0.01),甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较差异显著(P<0.05)。给药48h时间段内细胞内的[Ca2 ]i升高的幅度较大,72h升高幅度相对较小。而降低膜电位上,在48h时间段内,甜菜碱50、25、12.5mg/mL各组膜电位均显著高于对照组(P<0.05),但在72h时间段内甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论甜菜碱通过开放细胞膜上的通透性转换孔道(MPTP),从而升高HepG2细胞[Ca2 ]i,启动细胞凋亡机制,诱导HepG2细胞凋亡。     

肥大细胞类过敏反应脱颗粒的实时动态检测方法

目的 建立实时、动态、直接的肥大细胞脱颗粒光学成像检测方法.方法 将囊泡表面特异性分子CD63与绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的基因融合后,通过质粒转染入细胞中,建立稳定表达CD63-GFP蛋白的鼠肥大细胞株(RBL-2H3细胞).之后利用激光扫描共聚焦显微镜及全内反射显微镜分别观察细胞内囊泡在过敏原刺激下脱颗粒时的运动状况.结果 成功建立稳定表达CID63-GFP的RBL-2H3细胞株;在类过敏原的刺激下,用激光扫描共聚焦显微镜观察到了细胞脱颗粒过程中,细胞内囊泡向细胞外脱出的过程,同时,用全内反射显微镜观察到了细胞内囊泡与细胞膜融合的过程.结论 本研究在活细胞状态下,实时、直观、灵敏、快速地观察到肥大细胞脱颗粒的过程,直接评估过敏原刺激肥大细胞脱颗粒的特性,为类过敏反应的检测提供了新的检测手段.     

灵芝多糖联合低剂量顺铂抑瘤作用及对荷瘤鼠免疫功能的影响

目的 研究灵芝多糖与顺铂联合用药对荷瘤小鼠的肿瘤生长情况及其免疫功能的影响.方法 Balb/c小鼠腋下接种小鼠肺癌细胞株Lewis 5×106个细胞,待肿瘤至100 mm3分组给药.分为对照组、灵芝多糖组(1次/2 d,40 mg/kg,灌胃)、顺铂组(1次/2 d,2 mg/kg,腹腔注射)和联合用药组(等剂量的顺铂和灵芝多糖).每3天测量一次肿瘤的体积,30d后解剖,检测荷瘤小鼠的肿瘤大小、脾脏的变化,脾脏和外周血中免疫细胞的变化以及相关免疫细胞的功能.结果 灵芝多糖可有效增加小剂量顺铂的抗肿瘤效果,提高荷瘤小鼠的存活率,使小鼠外周血中Th细胞向Th1转化,增加细胞免疫功能,并增加骨髓来源DC细胞表面CD11c分子的表达(与对照组比较灵芝多糖组从1.06％升至4.59％,与顺铂比较,联合用药组从2.8％升至7.21％),提高抗原提呈能力.结论 灵芝多糖可以提高荷瘤小鼠的免疫功能,与小剂量顺铂联合用药后,具有协同抗肿瘤生长作用,且可提高小鼠存活率.     

库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的体外激活作用

 目的　研究库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用。方法　用25,50,100,200,400μg·mL^-1的库拉索芦荟多糖体外诱导小鼠腹腔巨噬细胞48h ,测定细胞内乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶、精氨酸酶活性及释放的TNF-α和IL-1含量。结果　库拉索芦荟多糖能上调腹腔巨噬细胞内乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和精氨酸酶活性,并能显著诱导腹腔巨噬细胞表达TNF-α和IL-1,增强吞噬中性红能力。结论　库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞具有激活作用。