AFP血清浓度及肝癌组织中Cx43的表达与肝癌根治切除后早期复发和预后的关系

目的 研究Cx43、CD105、VEGF在不同血清AFP(α-fetoprotein)浓度的乙型肝炎病毒性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达的关系以及Cx43的表达和RO切除术后复发和预后的关系.方法 应用组织芯片技术和免疫组织化学PV-6000两步法检测234例HBV相关HCC组织标本Cx43和CD105、VEGF的表达,应用RT-PCR检测20例HBV相关HCC标本Cx43mRNA的表达,并分析在不同血清AFP浓度下与Cx43的表达与CD105、VEGF的表达的关联以及与HCC患者根治切除术后的复发和预后的关系. 结果 免疫组织化学法和RT-PCR均检测到Cx43在HCC组织中表达,AFP＜ 400 μg/L的HBV相关HCC组织中Kaplan-Meier分析显示Cx43阳性表达者其1年复发、无瘤生存和总体生存均显著低于阴性表达组(Log Rank P =0.001,0.026,0.000),Cox回归分析表明Cx43阳性表达是HCC早期复发和预后(Log Rank P=0.049、0.035)的独立影响因子,Cx43阳性表达者CD105、VEGF低表达(P=0.018、0.023),并与组织分化程度(P =0.002),病灶数(P =0.033)血管癌栓(P =0.029)有关.结论 Cx43的表达与CD105、VEGF的表达相关,在AFP＜400 μg/L的HBV相关HCC的患者中Cx43阴性表达预示早期复发和不良预后.     

α-平滑肌肌动蛋白在肝癌组织中的表达及其与肝癌侵袭转移的关系

目的 探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肝癌中的表达及与肝癌侵袭转移的关系.方法 收集非肝癌的肝脏组织15例,肝癌并伴门静脉转移的癌组织30例,按病理分化程度分为3组:低分化组、中分化组和高分化组.采取逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝癌组织中α-SMAmRNA的表达和免疫组织化学的方法检测α-SMA在癌组织及门静脉癌栓组织的表达.结果 RT-PCR结果显示α-SMA在所有肝癌组织中均呈阳性表达;免疫组织化学显示α-SMA在对照肝脏、肝癌组织和门脉癌栓组织的表达值分别为125.69±29.17、187.43±17.66、218.70±13.52,方差分析显示α-SMA表达差异有统计学意义(P＜0.01),门脉癌栓组表达最高;按照肝脏病理分为3组:低分化组、中分化组和高分化组,表达值分别为237.14±25.83、190.57±19.90、165.67±22.64,方差分析显示α-SMA表达差异有统计学意义(P＜0.01),在低分化组表达最高.结论 α-SMA在肝癌中表达明显增加,特别是门静脉癌栓组及低分化组,与肝癌的侵袭、转移有关.     

miR-21在肝癌中的表达及其与PTEN的关系

目的:探讨miR-21在肝癌中的表达及其与PTEN的关系。方法:用RT-PCR检测119例肝癌组织与癌旁组织中miR-21与PTEN的表达情况;双报告基因实验检测肝癌细胞中miR-21对PTEN转录水平的影响;分析miR-21表达与肝癌患者临床病理因素的关系;在肝癌细胞中分别过表达及抑制miR-21的表达之后,检测细胞增殖与PTEN及其下游通路蛋白的表达。结果:肝癌组织中miR-21表达明显高于癌旁组织,而PTEN则相反(均P0.05);miR-21与PTEN的表达具有一定相关性(r2=0.6767,P0.05);miR-21可并抑制PTEN转录活性;miR-21的表达与肝癌患者AFP水平及TNM分期有关(均P0.05);肝癌细胞过表达miR-21后,肝癌细胞增殖明显增强,PTEN表达明显调,并影响其下游蛋白的表达,而抑制miR-21则相反(均P0.05)。结论:miR-21在肝癌中表达升高,且miR-21可以通过下调PTEN表达进一步促进肝癌细胞的增殖。     

mTOR基因在人肝癌组织中的表达

目的 观察人肝癌组织哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的表达.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测10例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中mTORmRNA的相对表达量,并采用Western blot检测上述组织中mTOR蛋白产物表达.结果 90%(9/10)的肝癌组织中mTOR mRNA和蛋白表达增强,而癌旁组织中80%(8/10)该基因表达缺失和蛋白表达减少,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 中晚期肝癌中mTOR表达处于活化状态,可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用.     

骨桥蛋白在肝细胞癌中的表达与临床病理特征的关系

目的 研究骨桥蛋白在HCC中的表达与临床病理特征的关系.方法 选取48例HCC手术切除的新鲜肝癌和癌旁组织标本和10例正常肝组织,以10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,每一个标本行连续切片,厚4 μm.应用SABC免疫组化法,以骨桥蛋白单克隆抗体对HCC组织切片进行染色.对骨桥蛋白在HCC中的表达及其临床病理特征的关系进行分析.结果 OPN在HCC组织中的阳性率为50.00%,明显高于癌旁及正常肝组织(P＜0.01).骨桥蛋白在高、中、低HCC中评分依次为0.67±1.63,2.14±1.81和2.20±1.74,低分化明显高于高分化(P＜0.05).骨桥蛋白在有转移与无转移HCC中的评分是2.64±1.84和1.25±1.74,有转移者明显高于无转移者(P＜0.01).骨桥蛋白与其他病理特征无明显关系.结论 骨桥蛋白在HCC癌组织中的表达明显升高,低中分化者和伴有转移者高于分化高和不伴转移者.提示骨桥蛋白可能促进了HCC的发展和转移.     

干细胞表面标志物CD90及端粒酶逆转录酶在原发性肝癌中的表达及临床意义

目的 检测CD90及端粒酶逆转录酶(hTERT)在原发性肝癌中的表达,研究其蛋白产物在原发性肝癌发生、发展过程中的表达特点及相互关系.方法 应用免疫组化S-P法检测36例原发性肝癌中CD90、hTERT的表达,并以同期20例正常肝组织作对照.结果 肝癌组织中CD90、hTERT基因蛋白产物阳性表达率(分别为63.9％和47.2％)显著高于良性对照组(CD90、hTERT均阴性);CD90、hTERT蛋白在UICC临床分期Ⅲ～Ⅳ期肝癌患者(分别为79.1％和62.5％)明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者(分别为33.3％和16.6％);CD90、hTERT两者呈正相关;CD90、hTERT阳性患者生存率(术后中位生存时间分别为85 d和76 d)明显低于CD90、hTERT阴性患者(术后中位生存时间分别为505 d和463 d),log秩检验显示生存率差异均有统计学意义.结论 CD90可能与肝癌的发生、发展相关,有望成为判断患者预后的指标之一.     

KLF8在不同肝癌细胞株及肝癌组织中的表达及其意义

目的 观察不同肝癌细胞株及肝癌组织中Krappel样因子8(KLF8)的表达,并探讨其意义.方法 用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、免疫化学方法分别检测不同肝癌细胞株及肝(癌)组织中KLF8的mRNA和蛋白质水平.结果 KLF8的mRNA及蛋白质水平随肝癌细胞株侵袭转移潜能的增强而明显升高(P<0.05);正常肝组织(6例)、无转移肝癌组织(17例)、有转移肝癌组织(6例)中KLF8 mRNA的相对表达量分别为0.2377±0.0658、0.4683±0.2073、0.6669±0.0239(P<0.05);在正常肝组织和肝硬化组织中KLF8蛋白表达的阳性率分别为16.7%(1/6)和33.3%(2/6),均为弱阳性,在肝癌组织中强阳性率为81.8%(27/33),肝癌转移灶中强阳性率为83.3%(5/6)(P<0.01).结论 KLF8可能参与肝癌的发生和侵袭转移.     

磷酸化雌激素受体alpha在肝癌组织中的表达

目的：研究磷酸化雌激素受体α（p-ERα）在肝癌组织中的表达,探讨其与肝癌生物学特征及患者预后的关系。方法：采用免疫组织化学法检测77例肝癌组织中p-ERα中的表达,采用Westernblot和RT-PCR检测肝癌组织、癌旁组织以及正常肝组织中p-ERα的蛋白表达及ERαmRNA表达情况。结果：肝癌组织中p-ERα的表达阳性率为48%（37/77）。p-ERα在肝癌组织中的表达低于癌旁组织及正常肝组织。p-ERα的表达与肝癌包膜（χ2=13.487,P〈0.01）、镜下癌栓（χ2=5.751,P〈0.05）有关。Kaplan-Meier生存分析显示,p-ERα阳性与p-ERα阴性患者的总体生存率（51.4%vs 37.5%,χ2=1.491,P=0.22）与无瘤生存率（56.8%vs 60%,χ2=0.300,P=0.58）差异无统计学意义。结论：p-ERα对肝癌的预后可能没有影响,但对肝癌患者的生物学特性有一定的影响。     

酪氨酸激酶Syk在肝癌中的表达及与血管生成的关系

目的探讨酪氨酸激酶Syk在肝细胞性肝癌中的表达及对肿瘤微血管生成的影响。方法采用RT-PCR检测Syk mRNA在肝细胞性肝癌及癌旁正常组织中的表达,免疫组化SABC法检测标本中CD34的表达反映肿瘤的微血管密度（MVD）。结果24例癌旁正常组织中Syk mRNA均表达阳性,32例肝细胞性肝癌中Syk mRNA表达率为46.9％（15／32）,其中低分化组阳性表达率23．1％（3／13）,明显低于高分化组阳性表达率63．2％（12／19）（P〈0．05）。肿瘤微血管密度（MVD）检测：低分化组（Ⅲ级Ⅳ级为49．2±3.6,54±4.3）,明显高于高分化组（Ⅰ级Ⅱ级为13．6±4．5,32.3±3．2）与正常组织（5．9±1．7）,有显著统计学意义（P〈0．05）。Syk mRNA的表达与CD34的表达明显负相关（r=-0.97）。结论肝细胞性肝癌中Syk基因的缺失对癌组织血管的生成起重要的作用。     

肝癌细胞血行播散对术后复发及远处转移的影响

目的 对照研究周围静脉血液中甲胎蛋白(AFP)mRNA阳性及阴性肝癌患者术后肿瘤复发和远处转移情况.方法 应用巢式RT-PCR检测术后24、48 h及1周、4周肝癌患者周围静脉血液中AFP mRNA水平,并术后随访1、2、3年.结果 12例术前及术后1周内血液AFP mRNA持续(+)的肝癌患者中,有7例在术后1年内产生了复发或转移性病灶(7/12,58.3%);所有患者在术后2年内均发生了肝癌复发和远处转移(12/12,2年复发率为100%).而在随访的19例血液AFPmRNA(-)肝癌患者中,有5例(5/19,26.3%)在术后1年内复发,4例在术后第2年复发(9/19,2年复发率为47.3%),1例术后第3年复发(10/19,3年复发率为52.6%),未出现肝外远处器官转移.术后1、2,3年复发率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 术后血液AFP mRNA持续(+)的肝癌患者较AFP mRNA阴性肝癌患者更容易产生复发或转移.     

原发性肝癌血源性微转移检测及临床意义的研究

目的通过联合检测外周血端粒酶亚单位hTERT mRNA，AFP mRNA及TPS（组织多肽特异性抗原）表达水平，来提高肝癌血源性微转移早期检测的敏感性和特异性。尤其对肝移植术后进行早期预测微转移，以指导综合治疗，改善预后。方法选取肝癌肝移植病人20例，肝癌伴肝外转移10例作为实验组，胆石症病人10例、乙型肝硬化病人10例作为对照组。外周抗凝血进行低温离心取有核细胞成分进行RT-PCR mRNA检测；非抗凝血离心留取血清进行TPS ELISA检测。结果外周血AFP mRNA在肝癌中表达率为75％，端粒酶为90％，伴肝外转移者均为100％。TPS表达水平在116-4600U／L之间，中位值为1600U／L，伴肝外转移者多〉1600U／L。AFP或端粒酶任意一项表达阳性肝癌为100％。对照组中胆结石病人AFP、端粒酶及TPS均阴性。肝硬化病人AFP表达率10％，端粒酶10％，TPS值〈1600U／L，实验组与对照组间三者表达有显著差异。术后AFP持续阳性、术前TPS〉1600U／L的2例病人于术后2个月左右发生肝肺转移死亡。另外2例术后AFP、端粒酶由阴性转阳性且TPS升高到500U／L左右，分别于术后6、8个月出现转移，带瘤存活。结论联合检测AFP mRNA，hTERT mRNA及TPS使检测微转移敏感性达100％，使AFP阴性肝癌亦得到诊断。术后AFP、端粒酶持续阳性且TPS水平高者易于发生转移且转移出现时间早。动态监测AFP、端粒酶由阴转阳、TPS逐渐增高是转移复发的征兆。该研究为评估预后及预警术后转移复发提供了很好的方法。     

原发性肝癌组织中胸苷磷酸化酶的表达及其临床意义

目的 探讨胸苷磷酸化酶(TP)与原发性肝癌(HCC)术后预后的关系.方法 收集65例HCC病人围手术期一般临床资料和病理学资料,并进行随访.分析TP的免疫组织化学表达与微血管密度(MVD)计数的关系;对随访的54例病人作生存分析.结果 (1)肝癌组织TP阳性表达率明显高于正常肝组织(P<0.05).(2)肝癌组织TP阳性表达组、阴性表达组MVD计数分别为16.14±5.11、10.11±4.55,两者差异具有统计学意义(P<0.01).(3)TP的表达与肝癌大小、Edmondson分级、包膜是否完整、有无门静脉癌栓明显相关.(4)TP表达阳性HCC组1、2、3年复发率分别为40%、66.7%、79.2%;TP表达阴性HCC组则分别为27.4%、31.3%、45.7%.TP阳性HCC组2、3年复发率明显高于TP阴性组(P<0.01).(5)54例随访病人,TP阳性组总体生存率明显低于阴性组(P<0.01).结论 TP是HCC术后一个新的评估预后的指标.     

EphA2在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

目的检测原发性肝细胞癌中EphA2的mRNA和蛋白的表达及临床意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术及免疫组织化学方法检测EphA2的mRNA及蛋白在40 例肝癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝脏组织中的表达,并分析其与临床病理特点之间的关系。结果半定量分析显示EphA2 mRNA的表达在肝癌组织(0．836 8±0．205 7)、癌旁肝组织 (0．768 9±0．118 0)和正常肝组织(0．720 8±0．091 0)中的表达差异无统计学意义(P>0．05);从正常组织、癌旁肝组织到肝癌组织,EphA2蛋白的阳性表达率分别为50．0％、57．5％和87．5％。呈递增趋势(X~2=20．21,P<0．01);EphA2蛋白的过表达与肝癌患者的门脉癌栓、卫星灶及淋巴结转移等临床病理因素有关(P<0．05)。结论EphA2蛋白的过表达与肝癌的淋巴结转移、卫星灶的形成和门脉癌栓有密切的联系,提示其在肝癌的侵袭和转移中发挥重要的作用。     

P27在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的　探讨P2 7的表达与肝细胞癌 (HCC)的发生、进展、转移和术后复发的关系及其临床意义。方法　用免疫组化S P法检测 10例正常肝组织和 86例肝细胞癌及其癌旁肝组织中P2 7蛋白的表达情况 ,用TUNEL法检测 86例肝细胞癌组织标本的细胞调亡水平。并结合各临床因素和随访资料进行分析。结果　 (1)肝细胞癌标本中P2 7蛋白阳性率为 37 2 % (32 / 86 ) ,明显低于正常肝组织 (80 % ,8/ 10 )和癌旁肝组织 (80 2 % ,6 9/ 86 )。 (2 )在肿瘤直径≤ 5cm、高分化和无门静脉侵犯或转移组的肝细胞癌中P2 7蛋白的阳性率明显高于肿瘤直径 >5cm、低分化和有门静脉侵犯或转移组。(3)P2 7蛋白阳性组的肝细胞癌组织中的凋亡指数 (AI)较高 ,而阴性组者较低 ,两者呈显著正相关。(4)Cox比例风险模型多因素分析发现P2 7蛋白是一种保护因素 ,可减低肝癌术后复发的危险度。(5 )Kaplan Meier生存分析发现 ,P2 7蛋白阴性组肝癌术后无复发生存时间明显短于P2 7蛋白阳性组。结论　P2 7蛋白能诱导肝癌细胞的凋亡 ;它的的减低与肝癌的发生、进展、转移和术后复发有密切关系。P2 7蛋白的表达水平可望成为一个预测原发性肝癌术后复发的指标。     

CT9和CT10基因在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的检测肿瘤睾丸抗原CT9和CT10基因mRNA在肝细胞癌（HCC）中的表达情况。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法对HCC病人的癌组织和相应癌旁组织及对照（肝硬化和正常肝组织）中CT9和CT10mRNA的表达进行了检测,随机选取每一种抗原RT-PCR呈阳性的产物4例进行DNA序列测定,结合AFP、抗HCV、HgsAg、肿瘤直径、分化程度等临床指标进行分析。结果56例HCC病人中,CY9、CT10基因mRNA阳性率分别是51．8％（29／56）和44．6％（25／56）,至少表达一种CTA者达66．1％（37／56）,表达两种者为30．4％（17／56）;电泳显示PCR产物与阳性对照大小一致;而癌旁组织中仅有CT9基因nRNA表达为阳性,阳性率为7．1％（4／56）,但表达强度明显弱于在癌组织中的表达,进一步的病理检查未发现CY9表达呈阳性的癌旁组织中有癌细胞。所测10例肝硬化和10例正常肝组织均未检测到CT9和CT10的表达。DNA测序结果表明RT-PCR产物确为CT9和CT10cDNA。CT9和CT10的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性（P〉O．05）。而在部分AFP正常（〈25ng／L）HCC病人中存在CT9和CT10基因的表达。结论CT9和CT10基因在HCC中呈高比例、高特异表达,为HCC免疫治疗提供了新的理想靶位;CT9和CT10同时在HCC中表达,为应用以这些肿瘤抗原为基础的多价瘤苗治疗HCC提供了实验依据。     

凋亡及血管生成因子在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的 研究部分凋亡及血管生成因子在肝细胞肝癌（肝癌）中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化方法检测90例肝癌标本中p53、Survivin、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况,并分析其与肝癌术后复发的关系。结果 p53、Survivin、MMP-2、MMP-9及VEGF的阳性率分别为33．3％、51．1％、60．0％、37．8％及76．7％。经相关性分析,VEGF与MMP-2、VEGF与MMP-9的表达呈正相关;MMP-2、MMP-9及VEGF与术后复发呈正相关（P〈0．05）。MMP-2阴性组的1、2、3年无瘤生存率分别显著高于MMP-2阳性组中的相应指标（P〈0．05）,MMP-9和VEGF中亦发现类似结果。多因素分析发现术前播散结节、镜下微转移灶、血清甲胎蛋白水平以及VEGF和MMP-9的表达水平是肝癌术后复发的独立危险因素。结论 p53和Survivin与肝癌术后复发无关;MMPs和VEGF与肝癌术后复发相关,可用于评价术后复发风险。     

microRNA-616在肝癌中的表达及临床意义

目的:探讨micro RNA-616(mi R-616)在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法:应用实时定量PCR检测80例HCC患者的肿瘤组织与癌旁组织标本,以及正常肝细胞与不同分化程度的HCC细胞mi R-616表达;分析mi R-616表达与HCC患者临床病理因素及预后的关系;观察HCC细胞过表达或抑制mi R-616表达后侵袭及转移能力的变化。结果:与癌旁组织比较,HCC组织中mi R-616的表达明显升高,且复发患者明显高于非复发患者,有转移患者明显高于无转移患者(均P0.05);所有HCC细胞株的mi R-616表达均明显高于正常肝细胞,且在高侵袭性HCC细胞株中的表达明显高于低侵袭性HCC细胞株(均P0.05);mi R-616表达与HCC患者是否存在门静脉癌栓、Edmondson-Steiner分级、TNM分期有关(均P0.05);mi R-616表达是影响HCC患者生存的独立危险因素(P0.05),mi R-616高表达患者的总生存率和无病生存率均明显低于mi R-616低表达患者(均P0.05)。HCC细胞过表达mi R-616后侵袭迁移能力明显增强,mi R-616表达抑制后侵袭迁移能力明显减弱(均P0.05)。结论:mi R-616在HCC中表达升高,且mi R-616高表达与HCC不良预后密切相关。     

RASSF1A基因在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的观察人肝癌组织RASSF1A的表达情况。方法应用半定量反转录聚合酶联反应技术检测62例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中RASSF1A的表达情况。结果69．4％（43/62）的肝癌组织中RASSF1A表达缺失，而癌旁组织中仅30．6％（19／62）该基因表达缺失，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论中晚期肝癌中RASSF1A表达处于失活状态，其可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现、早期诊断以及预后的判断。     

肝癌基质型血管生成拟态的表达及预后意义

目的 研究基质型血管生成拟态( vasculogenic mimicry,VM)在肝细胞癌中表达及其预后意义.方法 收集安徽省立医院2003年1月至2008年12月临床病理资料完整的151例肝细胞癌组织标本,采用层粘连蛋白、CD34和肝细胞免疫组织化学染色以及透射电镜检测肝细胞癌组织中基质型VM表达,分析基因表达与肝细胞癌临床病理指标及生存预后的关系.结果 151例肝细胞癌组织中基质型VM阳性31例(20.5％).组织中基质型VM阳性肝细胞癌患者与阴性患者相比,肿瘤较大(x2=4.132,P=0.042),血管侵犯率高(x2=5.825,P=0.016),Edmondson分级高(x2=5.256,P=0.022),pTNM分期晚(x2 =6.218,P=1.013).基质型VM阳性患者和基质型VM阴性患者1、3、5年总生存率分别为67.7％、34.6％、11.5％和86.7％、64.7％、40.3％(x2=14.852,P＜0.001);1、3、5年无瘤生存率分别为41.9％、19.4％、6.5％和63.3％、40.6％、19.6％(x2=10.065,P =0.002).对总生存率和无瘤生存率的单、多因素分析显示,多发肿瘤、血管侵犯和基质型VM表达是影响总生存率的独立危险因素;而血管侵犯和基质型VM表达是影响无瘤生存率的独立危险因素.结论 肝细胞癌中存在基质型VM,其表达与肿瘤大小、分级、分期、血管侵犯有关,是肝癌患者预后不良的独立危险因素.     

p73蛋白在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的　探讨p73蛋白在肝细胞性肝癌中的表达及其临床病理意义。方法　采用免疫组 织化学SABC法检测p73蛋白在肝癌和癌旁组织中的表达水平,并分析其与肝癌临床病理特征的关 系。结果　38例肝癌组织中有22例p73蛋白呈阳性表达,阳性表达率为57.9%,而癌旁组织无1例 呈阳性表达,低分化、有转移的肝癌组织中p73蛋白水平明显高于高分化、无转移的肝癌组织。结论 p73蛋白在肝癌组织中表达上调,可能在肝癌的发生、发展过程中起着重要的作用。