hK6单克隆抗体制备及在胃和乳房肿瘤组织中的初步应用

目的:原核表达人组织激肽释放酶6(human kallikrein 6,hK6),采用杂交瘤技术制备其单克隆抗体,建立免疫组织化学方法,检测hK6在胃癌、乳腺癌组织中的表达情况.方法:通过原核表达hK6融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备特异性单克隆抗体,并用间接ELISA、SDS-PAGE及Western-blot鉴定抗体,protein A agarose亲和层析柱纯化抗体,并以此抗体建立免疫组织化学方法检测人胃癌、乳腺癌组织中hK6表达情况.结果:成功筛选出4株高分泌型特异性杂交瘤细胞株,其制备抗体可与hK6融合蛋白发生特异性结合;免疫组织学显示,hK6主要分布在胃癌细胞胞浆中,成阳性表达,而在癌旁胃黏膜中成阴性表达;在乳腺癌组织中定位于胞浆,成弱阳性表达,癌旁组织成阴性表达.结论:成功制备了高纯度、特异性的抗hK6单克隆抗体;该抗体为深入研究hK6功能和建立高特异性、高敏感性检测组织和体液中hK6的方法奠定基础.     

抗人CA19-9单克隆抗体的制备和鉴定及化学发光检测体系的建立

目的制备抗人糖抗原19-9(CA19-9)单克隆抗体(mAb),建立双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。方法 CA19-9免疫小鼠后,通过细胞融合技术,获得抗CA19-9的mAb。鉴定其抗体的纯度、效价、特异性和配对,建立双抗体夹心化学发光体系。在包被缓冲液、包被浓度及加样模式上优化化学发光体系,对该体系进行准确度、最低检测限、线性、重复性评估以及血清样本的检测。结果获得4株名称为#1-1、#2-1、#3-1和#4-1的mAb。抗体效价均大于10-8,与CA125、CA15-3、CA72-4均无交叉反应。其中#3-1 mAb与#2-1-HRP建立的双抗体夹心体系经优化后,其检测范围为0~1 000 U/mL;最低检测限为2.0 U/mL;线性相关系数为0.9999。与罗氏试剂检测结果对比,Kappa系数大于0.75;相关系数大于0.9。结论成功制备了抗人CA19-9 mAb,建立了双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。     

Mta-1与VEGF在子宫内膜癌组织中的表达及其相关性

目的:探讨子宫内膜癌组织中肿瘤转移相关蛋白1(Mta-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达及其与子宫内膜癌生物学行为之间的关系.方法:采用免疫组化SP法检测62例宫内膜癌和30例正常宫内膜组织中Mta-1和VEGF的表达水平,并分析两者与子宫内膜癌临床病理特征的关系以及两者表达之间的相关性.结果:子宫内膜癌组织中Mta-1、VEGF阳性表达均显著高于正常子宫内膜组织(P<0.01);子宫内膜癌中Mta-1、VEGF表达均与组织学分级、临床分期、有无淋巴结转移及肌层浸润深度有关(P<0.05或P<0.01),而与患者年龄无关.Mta-1与VEGF在子宫内膜癌组织中的表达呈正相关(r=0.582,P<0.05).结论:Mta-1和VEGF表达与子官内膜癌的发生、发展及生物行为密切相关,且两者表达存在相关性.     

血管内皮生长因子C在维吾尔族妇女宫颈病变组织及血清中表达的临床研究

目的 检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)在新疆维吾尔族妇女宫颈病变中组织表达及血清含量,评价组织及血清中VEGF-C的相关性及临床意义.方法 ①应用免疫组织化学方法检测22例慢性宫颈炎、24例宫颈上皮内瘤变( CIN)及43例宫颈鳞癌组织中VEGF-C的表达.②用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测15例慢性宫颈炎、23例CIN及40例宫颈鳞癌患者血清中VEGF-C的含量.结果 ①慢性宫颈炎、CIN及宫颈癌组织中VEGF-C阳性表达率分别为9.10％、87.50％、100％,差异有统计学意义(P＜0.05).②慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌患者血清中VEGF -C含量呈逐渐增高趋势,差异有统计学意义(P＜0.05).③慢性宫颈炎、CIN和宫颈鳞癌患者组织及血清中VEGF-C的表达及含量,两者之间有相关性,差异有统计学意义(r=0.27,F=5.327,P＜0.05),组织表达越强,血清含量越高.结论 VEGF-C在新疆维吾尔族妇女CIN及宫颈鳞癌的转变过程中起一定的作用.     

血管内皮生长因子C在维吾尔族妇女宫颈病变组织及血清中表达的临床研究

目的检测血管内皮生长因子C（VEGF．C）在新疆维吾尔族妇女宫颈病变中组织表达及血清含量,评价组织及血清中VEGF—C的相关性及临床意义。方法①应用免疫组织化学方法检测22例慢性宫颈炎、24例宫颈上皮内瘤变（CIN）及43例宫颈鳞癌组织中VEGF—C的表达。②用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法检测15例慢性宫颈炎、23例CIN及40例宫颈鳞癌患者血清中VEGF—C的含量。结果①慢性宫颈炎、CIN及宫颈癌组织中VEGF—C阳性表达率分别为9．10％、87．50％、100％,差异有统计学意义（P〈0．05）。②慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌患者血清中VEGF—C含量呈逐渐增高趋势,差异有统计学意义（P〈0．05）。③慢性宫颈炎、CIN和宫颈鳞癌患者组织及血清中VEGF—C的表达及含量,两者之间有相关性,差异有统计学意义（r=0．27,F=5．327,P〈0．05）,组织表达越强,血清含量越高。结论VEGF．C在新疆维吾尔族妇女CIN及宫颈鳞癌的转变过程中起一定的作用。     

神经细胞黏附分子在老年乳腺癌中表达的研究

目的:研究神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecules,NCAM)在乳腺肿瘤中的表达并讨论其临床意义。方法:选择老年(60~72岁)乳腺癌组织25例(神经侵袭的8例,无神经侵袭的17例)、癌旁组织25例,乳腺良性病变26例(乳腺纤维腺瘤16例,乳腺腺病4例,囊性乳腺病6例),用免疫组织化学方法检测NCAM在这些组织中的表达。用酶联免疫吸附法(ELISA)测定NCAM在乳腺癌、乳腺良性病病和正常对照(n=30,61~68岁)血清中含量。结果经统计学处理。结果:NCAM在部分乳腺癌细胞质和细胞膜呈宗黄色阳性表达,癌旁组织和良性病变表达很少。乳腺癌组、癌旁组及乳腺良性病变NCAM阳性率分别为28.0%(7/25),4.0%(1/25)和3.8%(1/26),腺癌组织明显高于癌旁组和乳腺良性病变(P0.05)。NCAM阳性表达在乳腺癌有神经侵袭病例阳性率50.0%(4/8)明显高于无神经侵袭病例23.5%(4/17,P0.05)。血清NCAM浓度(pg/ml)结果,乳腺癌(69.8±29.4)显著高于乳腺良性病变(16.7±6.3)和正常对照(14.9±3.1),具有明显统计学差异(P0.05)。结论:NCAM在老年乳腺癌有明显表达,且伴发神经侵袭和转移时表达更为明显,表明NCAM表达影响乳腺癌发生发展,这为临床防治老年乳腺癌提供重要的参考依据。     

小鼠抗人肿瘤抑制素2(ST2)单克隆抗体的制备及应用

目的 制备针对人肿瘤抑制素2(ST2)的小鼠源性单克隆抗体,并进行功能和应用的初步鉴定.方法 用真核表达的重组人ST2分子免疫BALB/c小鼠,利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗ST2单克隆抗体,并鉴定其在Western blot法、免疫组织化学染色和流式细胞术中的应用价值;建立检测可溶性ST2的夹心ELISA,检测热射病...     

肺癌患者血清血管内皮生长因子、内皮抑素的表达研究

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、内皮抑素(En-dostatin)在肺癌患者血清中的表达以及与肺癌临床病理生理特征的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测初诊肺癌患者47例及18例肺良性病变患者血清中VEGF、Endostatin的表达水平。结果肺癌患者血清中VEGF(60.93±38.23)pg/ml、Endostatin(131.71±50.32)ng/ml水平显著高于肺良性病变者(33.28±26.49)pg/ml,(85.86±36.86)ng/ml(均P(0.01);肺癌晚期、有淋巴结及远处转移及肺腺癌患者血清VEGF、Endostatin高表达。结论检测血清中VEGF及Endostatin均有助于肺癌的诊断及生物学行为的评估。     

单克隆抗体MG7在胃癌癌前病变组织中的免疫组织化学研究

作者应用胃癌单克隆抗体MG7对289例胃粘膜活检标本进行PAP免疫组织化学观察,发现伴有肠化生的萎缩性胃炎组(20.0％)与伴有肠化生的癌旁粘膜组(62.1％)间、弥漫型胃癌癌旁粘膜肠化生组(41.7％)与肠型胃癌癌旁粘膜肠化生组(76.5％)间、轻型不典型增生组(23.9％)与中重度不典型增生组(54.0％)间,MG7-Ag表达阳性率均有显著性差异(均为P<0.01)。在胃癌组织中MG7-Ag表达阳性率为87.8％,而8例正常胃粘膜均阴性。结果表明,胃癌单克隆抗体MG7对胃癌的诊断具有较高的特异性;肠化生与胃癌(尤其是肠型胃癌)的发生有密切关系;对MG7-Ag表达阳性的肠化生和异型增生患者加强随访,将有利于胃癌的早期发现。     

抗人结肠癌相关抗原单克隆抗体的制备及初步研究

目的：制备抗人结肠癌相关抗原的单克隆抗体4D10，运用组织芯片技术研究其与人结肠癌组织反应的情况。方汪：用人结肠癌细胞株LOVO免疫小鼠，用间接细胞ELISA和免疫组化的方法筛选抗结肠癌相关抗原的单抗。结果：获得一株能够稳定分泌抗人结肠癌相关抗原的杂交瘤细胞株。4D10能够与不同分期的结肠癌组织切片反应，且与正常组织和其他癌组织几乎不反应。结论：4D10对结肠癌的病理分期及预后结果都具有一定的临床参考价值。     

鼠抗人B7-1分子功能性单克隆抗体的制备及生物学特性

目的：制备鼠抗人Ｂ７－１分子的功能性单克隆抗体,研究其对高表达相应配基分子细胞的生物学效应。方法：用两株转入Ｂ７－１基因细胞株ＸＧ７－Ｂ７和Ｌ－Ｂ７分别作为免疫原及检测细胞株,利用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。以快速定性试纸分析法鉴定单抗所属的小鼠ＩｇＧ亚类,采用竞争抑制及间接免疫荧光法分析单抗的特异性和亲和力。以高表达Ｂ７－１分子的恶性淋巴瘤细胞Ｒａｊｉ和Ｄａｕｄｉ为靶细胞,分析单抗对其生     

Preparation of a monoclonal antibody against testosterone and its use in development of an immunochromatographic assay

A monoclonal antibody against testosterone was produced and used to construct an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunochromatographic assay. As testosterone could not be linked to the protein directly, testosterone and methyltestosterone were first derived by using carboxymethoxylamine hemihydrochloride (CMO) to introduce a carboxyl group at the carbonyl group position. Then the resulting testosterone-3-CMO was coupled to the carrier protein to form the immunogen, using the 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC)/N-Hydroxysuccinimide (NHS) method. A cell line obtained by cell fusion secreted an antibody which showed high affinity with testosterone. Based on methyltestosterone-3-CMO-ovalbumin (OVA) as the competitive antigen, the ELISA we developed showed high sensitivity to testosterone, with IC₅₀ of 0.11?ng/mL. The results of cross-reactivity testing showed that the antibody was specific to testosterone. Based on this antibody, an immunochromatographic assay was developed and used to detect testosterone in milk samples. This method could be used as a fast and cost-effective alternative tool for screening for endocrine-disrupting compounds.     

抗人VEGF单抗的研制及对肿瘤生长及转移的抑制作用

为了确定人血管内皮细胞生长因子在肿瘤生长及转移中的作用。方法：利用ＤＮＡ重组技术表达人ＶＥＧＦ,以其为抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,应用杂交瘤技术获得１４株稳定分泌抗ＶＥＧＦ单抗的杂交瘤细胞株。结果ＥＬＩＳＡ测定所分泌的单抗只与ＶＥＧＦ特异结合,与ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦα及ＴＮＦ等均无交叉反应。     

人肺癌相关单克隆抗体的制备及其抗原的纯化

目的：研制抗人肺癌细胞（A549）单克隆抗体，并对其所识别的抗原进行免疫亲和层析纯化。方法：以人肺癌细胞系A549免疫BALB／c小鼠，常规融合，以间接ELISA筛选，免疫组化研究单克隆抗体的特性，通过免疫亲和层析纯化所识别相关的抗原。结果：成功获得了一株能够稳定分泌抗人肺癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株289，并提取了其识别的相关抗原。结论：2139单克隆抗体及其所识别抗原有可能进一步用于肺癌的实验室诊断。     

抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。     

重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)单克隆抗体,为rLZ-8的药效学及药代动力学研究奠定基础.方法:以纯度99%的rLZ-8免疫BALB/c小鼠;应用常规的细胞融合技术建立一种能够稳定分泌抗rLZ-8单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用小鼠腹腔接种法制备腹水;Protein A Sepharose 亲和层析柱在AKTA纯化仪上对抗体进行纯化;间接ELISA方法测定单克隆抗体的效价;Western blot胶片曝光方法对rLZ-8单克隆抗体特异性进行分析.结果:筛选出2株可特异性分泌抗rLZ-8单克隆抗体的杂交瘤细胞株.分别命名为clone13-2-3和clone11-4-4.其抗体亚型分别为IgG1亚型和IgG2a亚型.腹水抗体效价分别为1:12 000和1:7 500,细胞培养上清效价分别为1:3 000和1:2 800.Western blot检测证明这两株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均具有良好的特异性.结论:成功制备出较高效价和较高特异性的鼠抗rLZ-8的单克隆抗体.     

鼠抗人B7-2单克隆抗体的研制及生物学特性研究

以天然高表达膜型B7-2分子的人恶性B淋巴瘤经胞株Daudi和B7-2基因转染细胞株L929-B7-2为免疫原及检测细胞株,采用B细胞杂交瘤技术建立了1株稳定分泌抗人B7-2单抗的杂交瘤,命名为6A5。快速定性试纸法鉴定6A5属小鼠IgG1亚类。经体内诱生腹水法制备单抗,小鼠腹水形成的阳性率为80%,腹水的收获量平均为5.9 ml/只小鼠。经免疫亲和层析法纯化,腹水中抗体蛋白的得率为1.1 mg/ml。采用间接免疫荧光法及流式细胞仪分析,单抗6A5与L929-B7-2、PBTC、Raji和Daudi的阳性结合率分别为99.9%、4.6%、90.6%和99.1%。将6A5(终浓度为5μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,6A5对Daudi细胞的生长在24 h内具有抑制作用(P<0.05)。以丝裂霉素处理的L929-B7-2为刺激细胞,PBTC为反应细胞,加入6A5共同培养。经MTT法分析,6A5能阻断B7-2介导的协同刺激信号,抑制PBTC增殖(P<0.05)。提示6A5是一株功能性抗体,在B7-2分子相关的基础和应用研究中具有重要的价值。     

人粘蛋白糖链单抗的制备及在胃化生粘膜和胃肿瘤中的应用

制备抗胃肠道粘蛋白糖链单抗,并研究其抗原在小胃粘膜、化生粘膜及肿瘤中的表达,方法：将肠道粘膜冻干粉碎,ＣｓＣｌ平均密度离心法提取人胃肠粘蛋白,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４鼠的骨髓瘤细胞融合成杂交瘤,克隆制备单克隆抗体,并应用ＬＳＡＢ法检测其抗原在胃粘膜,化生取粘膜和肿瘤中的表达。结果制备抗人胃粘蛋白单抗（ＨＧＭ７２,７５）和抗人肠粘蛋白单抗（ＨＣＭ１４,２１）均为抗粘蛋白     

Comparative study of monoclonal antibody B72.3 and gross cystic disease fluid protein-15 as markers of apocrine carcinoma of the breast

Gross cystic disease fluid protein-15 (GCDFP-15) is a commonly used apocrine marker; however, its expression was recently found to decrease in infiltrating, larger, or metastasizing apocrine carcinomas of the breast. In the breast, monoclonal antibody (MAb) B72.3 has been reported to be useful as an apocrine marker although it is used for that purpose much less frequently than GCDFP-15. In the search for a more consistent apocrine marker, immunoreactivity for MAb B72.3 was examined in apocrine carcinomas at different stages and compared with GCDFP-15. 47 of 51 apocrine carcinomas (92%) and 9 of 62 ordinary carcinomas (15%) were MAb B72.3 positive, while 39 of 51 apocrine carcinomas (76%) and 13 of 62 ordinary carcinomas (21%) were GCDFP-15 positive. Thus, both sensitivity and specificity were higher for MAb B72.3. Furthermore, unlike GCDFP-15, MAb B72.3 exhibited positivity irrespective of infiltrating status, tumor size, or metastatic status. There was no correlation between MAb B72.3-immunoreactivity and GCDFP-15-expression. The combined usage of MAb B72.3 with GCDFP-15 was useful to confirm the diagnosis of apocrine carcinoma, especially for advanced tumors, with only two cases being negative for both MAb B72.3 and GCDFP-15. Whether these two cases should be differentiated from ordinary apocrine carcinomas remains to be investigated.