锰对神经元细胞内SNARE复合物蛋白及突触囊泡的影响

目的研究锰干扰神经递质释放的分子机制,重点观察锰对神经元细胞内SNARE复合物蛋白及突触囊泡的影响。方法利用体外培养的神经元,用0~400μmol/L锰处理24 h后,观察细胞活力及培养液中LDH的释放量。根据结果挑选剂量为0、12.5、50、200μmol/L的氯化锰处理神经元24 h,测定SNARE复合物相关蛋白的基因及蛋白表达,以及活动性突触囊泡的数量。结果随着锰处理浓度的增加,神经元损伤逐渐加重;与对照组比较,Syntaxin1A的基因及蛋白表达均未见明显改变,SNAP 25的基因和蛋白表达均逐渐下降,VAMP 2的基因和蛋白表达均逐渐升高,进而导致SNARE复合物蛋白形成下降,同时活动性突触囊泡的数量明显减少。结论锰通过干扰SNARE复合物相关蛋白的表达,减少了神经元细胞内SNARE复合物蛋白的形成,进而导致活动性突触囊泡减少,造成神经递质释放紊乱。     

锰对大鼠脑片的损伤及对细胞α-突触核蛋白表达的影响

目的研究锰对脑多巴胺神经细胞的毒性作用,重点观察α-突触核蛋白与细胞凋亡的改变。方法利用体外脑片培养模型,用不同浓度氯化锰(0,25,100,400μmol/L)处理脑片24 h后,观察脑片中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞改变,培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的释放量,细胞凋亡率以及α-突触核蛋白的表达。结果随着Mn处理浓度的增加,脑片神经细胞损伤逐渐加重。与对照组比较,锰处理脑片导致TH阳性细胞数明显减少,LDH释放量、细胞凋亡率以及α-突触核蛋白的表达均明显增加。结论锰对多巴胺神经细胞有毒性作用,并且锰可以通过诱导α-突触核蛋白过表达而造成神经细胞损伤。 更多还原     

锰致神经细胞损伤中诱导型一氧化氮合酶及其基因的变化

[目的]观察不同浓度锰对大鼠脑片神经细胞的损伤情况,探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在锰诱导神经细胞损伤中的变化. [方法]培养出生后4～7 d大鼠脑片,培养液为50％高糖杜尔伯科改良伊格尔培养基,25％Hank平衡盐溶液,24％热灭活马血清,1％青霉素和链霉素.待第15天脑片神经细胞生长状态最佳时加入0、25、100、400 μmol/L MnC12.培养24h后,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,脑片细胞悬液中细胞凋亡率、一氧化氮生成量和iNOS活性,mRNA和蛋白表达水平. [结果]不同浓度锰处理脑片24h后,脑组织切片神经细胞发生明显损伤.随着锰处理浓度升高,LDH活性升高,100和400 μmol/L锰处理组是对照组的1.71、2.76倍.细胞凋亡率和一氧化氮生成量升高增加,25、100和400 μmol/L锰处理组分别是对照组的3.31、4.50和6.97倍和1.98、2.79和4.02倍.iNOS活性增强,100和400 μmol/L锰处理组分别是对照组的2.12和2.64倍.iNOS mRNA和蛋白表达水平明显升高,25、100和400 μmol/L锰处理组iNOS mRNA表达水平是对照组的1.27、1.43和1.86倍.100和400 μmol/L锰处理组iNOS蛋白表达水平分别是对照组的4.17和5.50倍. [结论]锰可致大鼠脑片神经细胞一氧化氮生成量和iNOS表达升高,进一步导致细胞凋亡率增加.     

MK-801对锰中毒大鼠脑纹状体NMDA受体亚单位表达的影响

目的 研究MK-801对锰中毒大鼠脑纹状体NMDA受体亚单位mRNA和蛋白表达的影响.方法 Wistar大鼠40只,按体重随机分成5组,每组8只.第1组为对照组,皮下注射0.9%氯化钠;第2～4组为锰染毒组,分别皮下注射8、40、200 μmol/kg的氯化锰溶液;第5组为MK-801预处理组,隔日腹腔注射0.3 μmol/kg MK-801,2 h后皮下注射200μmol/kg的氯化锰溶液;注射容量均为5 ml/kg,染锰4周,每周5次.通过电镜观察神经细胞损伤情况,同时测定脑纹状体锰和谷氨酸(Glu)含量,NR1、NR2A、NR2B mRNA和蛋白表达.结果 染锰4周后,随着染锰剂量的增加,纹状体Mn和Glu含量均逐渐升高;NR1、NR2A、NR2B的mRNA和蛋白表达均有不同程度的下降,其中NR2A灰度值下降最明显.电镜观察发现染锰后神经细胞出现不同程度的空泡变性和染色质边集.MK-801预处理组与高剂量染锰组比较,NR2A的mRNA和蛋白表达均有所增加(P<0.05).结论 锰能够破坏纹状体Glu平衡,并且抑制NMDA受体亚单位的表达产生神经毒性,促使细胞凋亡.MK-801可以影响NR2A的mRNA和蛋白表达.     

锰对神经细胞内质网应激信号分子的影响

目的 观察锰对大鼠脑片神经细胞内质网应激信号分子的影响及其与细胞凋亡的关系. 方法 以胎大鼠脑片为模型,用400μmo/L锰分别处理脑片612、18、24 h后,检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的释放量,神经细胞凋亡率以及脑片中GRP78、CHOP及caspase 12的表达. 结果 随着锰处理时间的增加,脑片细胞损伤明显,LDH释放量,细胞凋亡率和GRP78、CHOP及caspase 12的表达均逐渐上升. 结论 锰可以时间依赖性地活化内质网应激信号分子,促使细胞凋亡.     

锰对新生大鼠神经细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响

目的 研究不同浓度锰对大鼠神经细胞凋亡及内质网应激信号分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)mRNA与蛋白以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)蛋白表达的影响.方法 以出生4～7 d的SPF级Wistar大鼠脑片为模型,分别用0(对照)、25、100、400 μmol/L锰暴露24h.检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,神经细胞凋亡率以及神经细胞内GRP78、CHOP mRNA和蛋白及caspase-12蛋白的表达.结果 与对照组比较,100和400 μ,mol/L锰暴露组培养液中LDH的释放量均较高,而各浓度锰暴露组大鼠神经细胞凋亡率均较高,差异有统计学意义(P＜O.01);且随着锰暴露浓度的升高,培养液中LDH的释放量和大鼠神经细胞凋亡率均呈逐渐升高的趋势.与对照组比较,100和400 μmol/L锰暴露组神经细胞内GRP78mRNA及各浓度锰暴露组大鼠神经细胞内CHOP mRNA的表达均较高,而100、400 μmol/L锰暴露组神经细胞内GRP78和CHOP蛋白及各浓度锰暴露组大鼠神经细胞内caspase-12蛋白的表达也均较高,差异有统计学意义(P＜0.01);且随着锰暴露浓度的升高,大鼠神经细胞内GRP78、CHOP mRNA和蛋白及caspase-12蛋白的表达均呈逐渐升高的趋势.结论 锰可促使大鼠神经细胞凋亡及GRP78和CHOP表达升高.     

茶多酚对甲基汞致大鼠大脑皮质神经元氧化损伤的防护作用

目的探讨茶多酚(tea polypheonols,TP)对甲基汞(methylmercury,MeHg)所致大鼠大脑皮质神经元氧化损伤的防护作用及机制。方法进行大鼠大脑皮质神经元原代培养,细胞成熟后给予0.01、0.1、1、2μmol/L MeHg分别处理0.5、1、3、6、12 h,通过测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力来进行MeHg细胞毒性分析;根据测定结果选择最具代表性的1μmol/L MeHg暴露6 h作为MeHg染毒组。应用同样方法进行TP预处理组选定,向培养液中分别加入终浓度为5、10、20及40μmol/L TP,分别预处理0.5、1、3及6 h后,再加入终浓度为1μmol/L MeHg,继续培养6 h后测定培养液LDH漏出,根据实验结果选定5、10、20μmol/L预处理3 h作为TP预处理剂量及时间;细胞经各剂量TP预处理后,再暴露于1μmol/L MeHg 6 h,测定神经元细胞凋亡率、非蛋白巯基(non-protein sulfhydryl,NPSH)含量、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平及Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活力。结果与对照组比较,随着染MeHg剂量的升高,培养液中LDH活力逐渐升高,呈现剂量和时间依赖性的效应关系。TP预处理后,LDH活力逐渐降低,在10、20μmol/L TP预处理组显著降低(P0.05或P0.01);1μmol/L MeHg导致神经元凋亡率显著升高,NPSH含量显著降低,ROS水平显著升高,Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活力显著降低,差异均有统计学意义(P0.01),TP预处理对上述指标的拮抗作用呈现剂量-效应关系,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 TP对MeHg所致大鼠大脑皮质神经元氧化损伤具有一定的防护作用。     

双酚A对人胚肝细胞凋亡的影响

[目的]研究双酚A(BPA)对人胚肝L-02细胞的凋亡的影响。[方法]以MTT来分析不同浓度BPA对人胚肝L-02细胞的细胞存活率的影响;用流式细胞术分析不同浓度BPA对细胞凋亡的影响;通过RT-PCR分析BPA引起的生长抑制、DNA损伤基因GADD45、GADD153、GADD34表达水平的变化。[结果]BPA处理后,L-02细胞的生存率随着BPA浓度的增加而下降,在≥50μmol/L,细胞的存活率显著降低(P<0.01)。随着BPA浓度升高,细胞凋亡率增加,≥50μmol/L可显著升高L-02细胞的凋亡率(P<0.01)。生长抑制DNA损伤基因GADD45、GADD153.GADD34表达水平随着BPA浓度增加表达量也增加,100μmol/LBPA组显著高于正常对照组,但在100μmol/L,BPA+VitC组三种GADD基因表达量均稍降低。[结论]BPA对L-02细胞具有细胞毒性作用,可导致细胞凋亡率升高,与细胞生长调控和DNA损伤相关的GADD45、GADD153、GADD34基因表达升高,VitC可减缓BPA对DNA的损伤作用。     

锰对神经元细胞内钙稳态影响的研究

目的研究锰对神经细胞内钙稳态的影响,重点观察神经元细胞钙离子浓度、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性的改变。方法选用原代培养神经元为模型,待细胞生长至最佳状态时,予以分组处理:锰处理组为含不同浓度氯化锰(0,25,100,400μmol/L)的培养液,培养神经细胞12h后,通过倒置相差显微镜观察细胞形态的改变,并检测神经元细胞内钙离子浓度、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性的变化。结果随着染Mn剂量的加大,神经元形态出现异常,细胞内钙离子浓度逐渐升高;细胞Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性也逐渐下降。结论锰通过影响与维持钙稳态相关的酶(Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase)活性,干扰神经元细胞内钙稳态,进而造成神经元细胞损伤。     

灵芝孢子提取物对Lactacystin致PC12细胞损伤的保护作用

[目的]探讨灵芝孢子提取物对Lactacystin诱导PC12细胞损伤的保护作用。[方法]体外培养PC12细胞,建立Lactacystin诱导PC12细胞损伤的模型,观察细胞形态,用CCK-8法检测细胞活力,annexin V-FITC/PI流式细胞法检测细胞调亡。[结果]用不同浓度的灵芝孢子提取物处理PC12细胞时,细胞存活率与对照几乎一致,并未表现出细胞毒性。经20μmol/L的Lactacystin处理24 h后,PC12细胞活力比对照组降低,仅为对照组的63.2%。模型组经不同浓度的灵芝孢子提取物预处理后,细胞活力明显提高,其保护作用随浓度升高而升高。Lactacystin诱导PC12细胞凋亡,处理24 h后细胞凋亡率为48.86%,经灵芝孢子提取物处理后,细胞凋亡率明显降低。[结论Lactacystin能诱PC12细胞凋亡,灵芝孢子提取物能对Lactacystin致PC12细胞损伤有一定的保护作用。