API0134对LDL诱导单核细胞表达PDGF—B,bFGF及平滑肌细胞增？…

目的和方法：应用免疫细胞化学方法，观察穿心莲成分ＡＰＩ０１３４对轻度氧化低密度脂蛋白诱导人血单核细胞表达血小板源生长因子Ｂ链蛋白和碱性成纤维细胞生长因子的影响，并进行平滑肌细胞有丝分裂试验，观察ＡＰＩ０１３４作用后的单核细胞条件培养基（ＣＭ）对＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入ＳＭＣ ＤＮＡ的影响。结果：ｍｍＬＤＬ可显著促进单核细胞表达ＰＤＧＦ－Ｂ和ｂＦＧＦ，ｍｍＬＤＬ作用后的ＣＭ亦可显著增加＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量     

氧化修饰的低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白对单核细胞MCP-1表达的影响

为了研究氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ┐ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ┐ＶＬＤＬ）对单核细胞的单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ┐１）ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。在单核细胞的培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的ＬＤＬ、ＯＸ┐ＬＤＬ、ＶＬＤＬ和ＯＸ┐ＶＬＤＬ，培养２４小时后分别收集单核细胞及其条件培养基。参照异硫氰酸胍法提取单核细胞总ＲＮＡ，并用γ３２Ｐ末端标记ＭＣＰ┐１寡核苷酸探针，进行ｓｌｏｔｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析。同时用夹心ＥＬＩＳＡ检测其条件培养基中ＭＣＰ┐１蛋白含量。结果显示单核细胞能表达ＭＣＰ┐１，ＯＸ┐ＬＤＬ和ＯＸ┐ＶＬＤＬ能明显增强单核细胞表达ＭＣＰ┐１。而ＬＤＬ和ＶＬＤＬ的作用却很轻微。说明单核细胞能通过表达ＭＣＰ┐１，从而进一步招引其它的单核细胞迁入内皮下间隙，而ＯＸ┐ＬＤＬ和ＯＸ┐ＶＬＤＬ能加强这种作用。     

丹参素对氧化低密度脂蛋白致血管平滑肌细胞增殖的影响和机制

目的： 探讨丹参素(DSS)对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响和机制。方法： 采用反复贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养成功后,采用第3-10代细胞应用于实验。分4组：对照组,ox-LDL(50 mg/L)组,ox-LDL(50 mg/L)+DSS（50 mg/L）组,ox-LDL(50 mg/L)+DSS（100 mg/L）组;用单个核细胞直接细胞毒性测定(MTT)法检测吸光度(A值),观察DSS对ox-LDL致VSMCs增殖的影响;RT-PCR法观察丹参素对血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）表达的影响。结果：丹参素可明显降低ox-LDL 引起的A值升高,丹参素可降低ox-LDL引起的PDGF-BB表达水平的升高。结论：丹参素可对抗ox-LDL致血管平滑肌细胞的增殖,其可能通过降低ox-LDL引起的PDGF-BB表达水平升高而发挥作用。     

IFN—γ抑制血管成形术后兔血管平滑肌细胞增殖和PDGF—A的表达

目的和方法：采用体外细胞培养，进行氚标胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入和原位杂交。结果：发现γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）能抑制体外培养新西兰兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的ＤＮＡ合成和血小板衍化生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）的基因表达；整体实验中，用４ＦＦｏｇａｒｔｙ导管气囊拉伤新西兰兔的腹主动脉内皮后，随即连续肌注ＩＦＮ－γ（１６５万Ｕ·ｋｇ１·ｄ１）３天，结果发现肌注ＩＦＮ－γ能明显抑制受损部位ＶＳＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ的标记率及ＰＤＧＦ－Ａ的表达。结论：ＩＦＮ－γ对血管成形术引起的血管挛缩有一定的舒张作用。     

血小板源生长因子对冠脉再狭窄中平滑肌细胞的作用

冠状动脉再狭窄是影响冠脉成形术远期疗效的重要问题。在其形成过程中，诸多生长因子参与作用。血小板源生长因子具有促进血管平滑肌细胞增殖和迁移作用，从而导致再狭窄的发生     

肺腺癌中PDGF-B、PDGFR-α的表达及意义

目的　探讨血小板衍生生长因子(PDGF)及其受体(PDGFR)与肺腺癌发生、发展的关系。方法　采用免疫组化 LSAB法检测PDGF B、PDGFR α在30例肺腺癌原发灶和12例正常支气管黏膜中的表达。结果　PDGF- B主要在肺腺癌细胞 质和(或)细胞核表达,PDGFR -α主要在肺腺癌细胞质表达,少数在细胞核表达;二者均在肺腺癌细胞过度表达(P<0.05),偶 见间质巨噬细胞淡染;PDGFR- α阳性表达率在肺腺癌高分化组明显高于低分化组(P<0.05)。结论　PDGF B/PDGFR- α自 分泌刺激环在肺腺癌的发生、发展中可能起重要作用,PDGFR- α阳性表达与肺腺癌分化程度呈正相关。     

高胆固醇血症大鼠LDL受体与apoA－1mRNA的水平变化及苯甲酸雌二醇对其影响

本文研究了实验性高胆固醇血症大鼠肝及小肠中低密度脂蛋白（ＬＤＬ）受体ｍＲＮＡ和载脂蛋白（ａｐｏ）Ａ－１ｍＲＮＡ的水平变化以及苯甲酸雌二醇（ＥＢ）对二者的影响。发现高脂（ＨＣ）组肝及小肠ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ水平分别低于正常组５０％和６０％（Ｐ＜０．０５），小肠ａｐｏＡ－１ｍＲＮＡ水平低于正常组５８％（Ｐ＜０．０５），此时血清总胆固醇（ＴＣ）及ＬＤＬ胆固醇（ＬＤＬ－ｃ）均明显高于正常组（Ｐ＜０．０１），血清ａｐｏＡ－１低于正常组（Ｐ＜０．０５）。ＨＣ＋ＥＢ组血清ＴＣ及ＬＤＬ－ｃ明显低于ＨＣ组，而肝ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ水平则显著高于ＨＣ组，为ＨＣ组的３．５倍（Ｐ＜０．００２）。结果提示：（１）高胆固醇负荷时细胞可通过转录水平下行调节ＬＤＬ受体；（２）小肠可能在ａｐｏＡ－１的代谢中起重要作用；（３）ＥＢ可能通过诱导肝ＬＤＬ受体基因表达而降血脂。     

前列腺素E2对LDL氧化修饰和巨噬细胞清道夫受体活性的影响

应用ＢＡ－ＥＬＩＳＡ酶联免疫技术、免疫组化和油红Ｏ组织化学等方法观察了氧化ＬＤＬ对巨噬细胞清道夫受体活性的影响和前列腺素Ｅ＿２（ＰＧＥ＿２）等的保护作用。结果显示，氧化ＬＤＬ组的巨噬细胞含脂量、清道夫受体活性及免疫组化阳性颗粒三项指标均明显高于ＰＧＥ＿２和亚硒酸钠两用药组。表明ＰＧＥ＿２和亚硒酸钠均有明显抗氧化作用，而ＰＧＥ＿２作用还略优于抗氧化剂亚硒酸钠。     

PDGF-B反义寡脱氧核苷酸对大鼠肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的：探讨PDGF-B反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对大鼠肝星状细胞（HSCs）增殖及Ⅰ型胶原合成的影响。方法：合成了特异性的PDGF-B硫代磷酸ASODN及其对照错义寡脱氧核苷酸(MSODN)，并将其加入至培养的HSCs。采用MTT法检测PDGF-B ASODN对HSCs的增殖抑制作用，RT-PCR检测PDGF-B和collagen-Ⅰ mRNA的表达，流式细胞仪与ELISA法分别检测PDGF-B的表达和Ⅰ型胶原的合成。 结果：PDGF-B ASODN在终浓度为10 μmol/L，作用HSCs-T6细胞48 h时，能明显地抑制其增殖，降低PDGF-B和collagen-ⅠmRNA的表达；FCM与ELISA分析表明，HSCs表达PDGF-B和合成Ⅰ型胶原都明显低于对照组，而对照组寡脱氧核苷酸在相同浓度下未见抑制效应。结论：PDGF-B ASODN可以抑制HSCs的增殖、Ⅰ型胶原的合成、内源性PDGF-B的表达，可能成为一种有用的抗肝纤维化基因治疗的药物。     

切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞PDGF-B mRNA表达的影响

目的：探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞（VSMCs）对内皮细胞（ECs)PDGF-BmRNA表达的影响，为预防血管移植物发生再狭窄提供实验资料。方法：用原位杂交和图像分析等技术，以静态条件下单独培养的ECs和联合培养的ECs为两对照组，观察切应力作用下单独培养的ECs和与VSMCs联合培养ECs的PDGF－BmRNA表达变化。结果：静态条件下联合培养ECs和PDGF－BmRNA表达水平比单独培养的ECs下降；切应力作用下，联合培养ECs的PDGF－BmRNA的表达在切应力作用1h左右有瞬时上升，6h后 下降至低于联合培养条件下的静态水平，且瞬时上升的时间点比单独培养的ECs提前。结论：切应力作用下，与VSMCs联合培养ECs的PDGF－BmRNA表达水平下降，这可能有利于抑制VSMCs的增生。     

核因子-κB活化参与Ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(英文)

目的：研究核因子-κB(NF-κB)在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的体外培养的人肾小球系膜细胞表达单核/巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)中的作用。方法： 采用凝胶迁移率变动分析检测NF-κB的DNA结合活性变化，以免疫组化观测细胞内REL P65的核转位，用细胞ELISA法检测细胞内MCP-1及IκBα蛋白含量变化。结果： 不同浓度(10、25、50、100 mg/L)Ox-LDL刺激肾小球系膜细胞均可引起细胞NF-κB的DNA结合活性增强，50 mg/L Ox-LDL活化MCs效果最明显(8.50±1.14，P＜0.01 vs control； P＜0.05 vs 10, 25和100 mg/L Ox-LDL)。Ox-LDL刺激MCs 30-240 min均可以活化NF-κB，60 min时相点活性最强(11.0±2.11，P＜0.01 vs control； P＜0.05 vs 30 min or 240 min)。以50 mg/L Ox-LDL刺激MCs 1 h后，细胞内IκBα蛋白水平最低(0.050±0.006，n=5,P＜0.01 vs control)，作用24 h MCP-1表达水平最高(0.331±0.016， n=5,P＜0.01 vs control)。NF-κB活化的同时伴有REL P65核转位。上述效应可被NF-κB特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)所抑制。结论： Ox-LDL刺激人肾小球系膜细胞产生MCP-1是由NF-κB调控，NF-κB参与了脂质肾损害的发病过程。     

大槐合剂对实验性高胆固醇血症大鼠LDL清除途径的影响

本文应用同位素双标记示踪方法、巨噬细胞功能测定和斑点杂交力法,观察了大槐合剂对实验性高胆固醇血症大鼠LDL清除的受体途径和非受体途径(单核巨噬细胞系统)的影响。与造型组比较,大槐合剂组LDL经受体途径和非受体途径的部分清除率(FCR)均显著增加(P<0.01,P<0.05),非受体途径的第二指数曲线半衰期(t1/2)明显缩短(P<0.05)。单核巨噬细胞系统吞噬功能显著增强,吞噬指数(K,K’)和校正吞噬指数(α)显著增加(P<0.001,P<0.001,P<0.05),半量清除时间(t1/2)显著缩短(P<0.001)。肝胞液LDL受体mRNA表达的相对水平显著增加(P<0.05)。结果提示:大槐合剂可同时促进受体和非受体途径清除LDL的作用。为通过刺激单核巨噬细胞系统功能以治疗纯合子家族性高胆固醇血症(FH)的可能性提供依据。     

氧化高密度脂蛋白对单核细胞膜脂流动性及淋巴细胞功能相关抗原-1表达的影响

目的:研究氧化高密度脂蛋白(oxHDL)对单核细胞膜脂流动性及淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)表达的影响。方法:采用荧光探针DPH检测膜脂流动性,用流式细胞术间接免疫荧光法检测人单核细胞株THP-1细胞表面LFA-1的表达水平。结果:100 μg protein/mL的oxHDL和oxLDL(氧化低密度脂蛋白)作用20 h后可显著降低THP-1细胞膜脂流动性(LFU),分别较对照组低45%和52%(P＜0.01);oxHDL作用24 h可明显促进LFA-1的表达,阳性细胞率和平均荧光强度分别较对照组高39%和45%(P＜0.01)。结论:oxHDL可能通过促进单核细胞表达LFA-1而使更多的单核细胞粘附于内皮,它还可降低单核细胞膜脂流动性,这将使单核细胞在进入内皮下层后难于重新返回循环血中,从而促进动脉粥样硬化的发生。     

血小板衍化生长因子BB对体外培养肌腱细胞增殖的影响

背景：细胞增殖和组织修复是一个复杂的过程,这期间有大量生长因子参与,并且这些因子在发挥本身功效时,还相互影响和制约,从而更好的促进细胞增殖和组织修复。 目的：了解不同质量浓度的血小板衍化生长因子BB对体外培养肌腱细胞增殖的影响。 方法：体外培养并鉴定大鼠肌腱细胞,根据培养液中血小板衍化生长因子BB质量浓度的不同分为对照组(0 μg/L)和实验组(1,5,10,20,50,100,150,200,250 μg/L),以MTT法检测细胞增殖能力。 另外检测对照组与20 μg/L血小板衍化生长因子BB组培养12-72 h时肌腱细胞的吸光度值,以观察其增殖量效与时间的关系。 结果与结论：分离培养的细胞Ⅰ型胶原染色呈阳性, Ⅲ型胶原染色呈阴性,证明为大鼠肌腱细胞。与对照组相比,除 250 μg/L 血小板衍化生长因子BB组外,其他各实验组细胞的吸光度值均升高(P < 0.05或P < 0.01);并且随血小板衍化生长因子BB质量浓度的增加,其吸光度值先逐渐增大,达一定浓度(20 μg/L)后,又逐渐减小。在20 μg/L血小板衍化生长因子BB组,肌腱细胞数量从培养12 h开始增加,至48 h达高峰,在培养24-72 h的吸光度值均显著高于对照组(P < 0.01)。结果可见血小板衍化生长因子BB在一定质量浓度和时间范围内具有促进肌腱细胞增殖的作用。     

维生素E对氧化低密度脂蛋白诱导的单核细胞/内皮细胞粘附的干预作用

目的:观察ox-LDL在体外对兔单核细胞与血管内皮细胞粘附的影响及维生素E的干预作用,初步探讨其机制。方法:培养兔主动脉内皮细胞。密度梯度离心法分离健康兔单核细胞。沉淀法制备人LDL,硫酸铜氧化制备ox-LDL。用Kim等^[1]方法并略加改良观察ox-LDL对内皮细胞/单核细胞粘附的影响及维生素E的干预。Northernblot检测内皮细胞VCAM-1mRNA的表达。结果:ox-LDL浓度为2.5mg/L、5mg/L、10mg/L时,每个视野粘附的单核细胞数分别为132.8±20.2、350.0±37.2、502.6±78.8,而正常对照组为51.2±7.7,相差非常显著(P＜0.01)。在加ox-LDL(10mg/L)前加维生素E干预,当维生素E浓度为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L时,粘附单核细胞数分别为422.3±32.2、298.0±21.7、205.2±36.6,均低于ox-LDL对照组的502.6±78.8,维生素E浓度为10μmol/L组与对照组相差不显著(P＞0.05),其余两组与ox-LDL对照组相差非常显著(P＜0.01)。ox-LDL对照组内皮细胞VCAM-1mRNA表达高于维生素E(40μmol/L)干预组(0.49±0.09vs0.33±0.10,P＜0.05)。结论:ox-LDL促进兔主动脉内皮细胞与单核细胞的粘附,其机制与其促进内皮细胞表达VCAM-1有关。维生素E能抑制ox-LDL的上述作用。     

辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞增殖及bFGF与ERK1/2表达的干预作用

目的:观察辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达的影响.方法:体外培养大鼠胸主动脉VSMC,MTT法测定细胞增殖活力;Western blot法检测bFGF与ERK1/2蛋白的表达.结果:与对照组比较,辛伐他汀各浓度组细胞增殖活力均显著降低(P＜0.05).与对照组比较,低、中剂量组bFGF、ERK1/2蛋白表达均显著降低(P＜0.05),高剂量组bFGF、ERK1/2蛋白表达进一步降低(P＜0.01);与低剂量组比较,中剂量组bFGF、ERK1/2蛋白的表达均无统计学意义(P＞0.05),高剂量组则显著降低(P＜0.05);高剂量组bFGF、ERK1/2蛋白的表达又较中剂量组显著降低(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论:辛伐他汀能抑制平滑肌细胞增殖,该作用是通过抑制bFGF及其相应信号通路ERK1/2蛋白的表达来实现的,这可能是辛伐他汀治疗动脉粥样硬化、再狭窄及高血压等心血管疾病的重要机制之一.     

云芝多糖B抑制ox-LDL诱导巨噬细胞株单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达的调控机制

目的：探讨云芝多糖（CVPS）-CVPS-B对氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的巨噬细胞(RAW264.7)单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA表达的影响，及对核因子-κB（NF-κB）和细胞内谷胱甘肽（GSH）的调控作用。方法:应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定RAW264.7细胞MCP-1 mRNA的表达；凝胶滞留法（EMSA）测定NF-κB的结合活性；荧光分光光度法测定细胞内GSH的活性。结果:CVPS-B呈剂量依赖性抑制ox-LDL诱导的RAW264.7细胞MCP-1 mRNA的表达。应用GSH 特异性消耗剂buthionine-［S，R］-sulfoximine （BSO），ox-LDL不能诱导RAW264.7细胞MCP-1 mRNA的表达。CVPS-B抑制ox-LDL诱导RAW264.7细胞内GSH活性下降。CVPS-B呈剂量依赖性抑制 ox-LDL诱导的RAW264.7细胞NF-κB活性；在完全消耗GSH的RAW264.7细胞，ox-LDL不能诱导NF-κB的活性。结论:CVPS-B可抑制ox-LDL诱导RAW264.7细胞MCP-1 mRNA的表达；其抑制作用可能通过GSH/NF-κB的调控。     

载脂蛋白(a)多态表型与低密度脂蛋白受体基因表达水平的相关性研究

选择载脂蛋白（ａ）的高和低分子量表型各１０例（均为男性，年龄２４～２５岁），应用ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测外周血单个核细胞低密度脂蛋白受体基因表达水平，发现低分子量表型者的脂蛋白（ａ）水平与低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ水平呈明显负相关（ｒ＝－０．７８，Ｐ＜０．０１）；高分子量表型者则无此相关性。而高和低分子量表型的低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ与低密度脂蛋白胆固醇水平均呈负相关（ｒ＝－０．８１和－０．７２，Ｐ均＜０．０１），提示低密度脂蛋白受体可能是低分子量表型脂蛋白（ａ）的一个重要代谢途径。     

PDGF-AA对血管平滑肌细胞c-myc、c-myb mRNA及PCNA表达的影响

目的明确血小板源生长因子-AA(PDGF-AA)与自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR-VSMC)增殖的关系.方法采用Western blot、RT-PCR等方法,观察在SHR和Wistar大鼠VSMC中,PDGF-AA对SHR/Wistar-VSMC增殖细胞核抗原(PCNA)、c-myc、c-myb mRNA表达影响的差异性.结果在不同浓度PDGF-AA刺激下,SHR-VSMC中PCNA、c-myc、c-myb mRNA表达明显高于Wistar-VSMC(P＜0.01),且呈明显的剂量依赖性关系(P＜0.01).结论PDGF-AA特异性的刺激SHR-VSMC异常增殖,可能是导致高血压血管重构的重要原因之一.