流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群的探讨

目的 :探讨样本放置时间、抗体标记孵育条件及本实验室配制的红细胞裂解液对T淋巴细胞亚群结果的影响。方法 :全血单个核细胞用荧光标记单抗标记后作多参数流式细胞仪分析。结果与结论 :样本采集后分别在1h和 6h测定抗原CD4 5 ,三种白细胞表达的平均荧光强度有显著性差异 (P <0 .0 1) ;样本分别在室温 (2 0℃～ 2 5℃ )和 4℃条件下孵育 ,比较检测结果无差异 (P >0 .0 5 ) ;采用本实验室配制的裂解液与商品化裂解液进行裂解比较 ,检测结果无差异 (P >0 .0 5 )。     

流式细胞仪检测急性脊髓损伤患者外周血T淋巴细胞亚群

应用免疫荧光标记流式细胞仪检测 15例急性 SCI患者外周血淋巴细胞 CD3、CD4、CD8表达的变化 ,与正常人群进行比较。结果发现急性 SCI患者 T细胞 CD3、CD4和 CD4 / CD8比值显著低于正常组 (P<0 .0 1)。这表明急性脊髓损伤后机体T细胞免疫功能受到严重损伤 ,可能与脊髓损伤后机体易受感染状态有一定联系。     

流式细胞仪对烧伤患者外周血淋巴细胞亚群的检测

烧伤患者由于细胞免疫功能紊乱，易感染和引起脓毒血症。为探讨烧伤患者免疫功能的变化，我们采用流式细胞仪对烧饬患者外周血T细胞亚群进行了检测，报道如下。1对象和方法1．1研究对家烧伤病人23例，男性，年龄20至30岁，按烧伤面积不同将病人分三级。Ⅰ组，8例，烧伤面积为80％～90％；Ⅱ组：8例，烧饬西积为60％～70％；Ⅲ组，7例，烧伤面积为50％以下。正常对照组20例。1．2方法分别在两个试管中加入EDTA抗凝的外周静脉血100μl，一管加入CD3单克隆抗体20“另一管加入CD4／CD8双标单克隆抗体20μl（抗体购自法国国际免疫公司），充…     

肾移植患者淋巴细胞亚群及外周血单个核细胞凋亡动态检测

目的检测肾移植患者外周血淋巴细胞亚群、单个核细胞凋亡情况，结合临床诊断及临床表现，探讨肾移植患者手术前后淋巴细胞亚群、外周血单个核细胞凋亡及免疫抑制治疗的关系。方法收集2例移植患者术前2天，术后2天，8天，16天外周血，利用流式细胞仪进行淋巴亚群及PBMC凋亡检测。结果与正常参考值相比．两例肾移植患者CD3 细胞百分率(61．54～73．14)％在正常范围，CD6^-CDl9^ 细胞百分率较高(11．14～29．06)％，CD3^-CDl6 56^ 细胞百分率(3．54～25．50)％较低；CD4^ 细胞百分率逐渐增加(30．48～41．06)％；CD8^ 细胞百分率(26．55～34．08)％则逐渐降低(31．74～27．02)％；CD4／CD8比值(0．96～1．52)逐渐升高；PBMC凋亡率术前2天分别为10．26％、8．28％，术后2天分别为14．32％、11．75％、术后8天分别为12．93％、8．42％，术后16天分别为9．13％、5．76％。结论：在免疫抑制剂与患者免疫系统的综合作用下，肾移植患者术后2天和术后8天PB-MC细胞凋亡率较高；CD4／CD8比率控制在正常范围内。     

流式细胞仪检测尖锐湿疣患者的T细胞亚群及NK细胞

目的 研究尖锐湿疣患者的细胞免疫功能。方法 用流式细胞仪检测了３０例尖锐湿疣患者外周血Ｔ细胞亚群及ＮＫ细胞百分率。结果 尖锐湿疣患者ＣＤ４细胞百分率下降,ＣＤ８细胞百分率增高,ＮＫ细胞数降低,与对照组相比差异均有显著性。结论 尖锐湿疣患者存在细胞免疫功能缺陷。     

流式细胞仪对系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞亚群及NK细胞的检测

目的 研究系统性红斑狼疮（SLE）患者的细胞免疫功能。方法 用流式细胞仪检测了30例SLE患者外周血T细胞亚群及NK细胞百分数。结果 SLE活动组病人,CD4+细胞百分率显著降低（P<0.01）,CD8+细胞百分率增高（P<0.01）,NK细胞数降低,与对照组相比具有非常显著差异（P<0.01）。稳定期病人CD4+细胞百分率正常,CD8+细胞百分率稍高于对照组 (P>0.05),NK细胞百分率高于活动组病人组仍低于正常对照组。结论 SLE病人细胞免疫功能是异常的,T细胞亚群和NK细胞的测定可作为诊断活动期与非活动期SLE病人的一项有价值的参考指标。     

早期细胞凋亡的流式细胞术分析

目的：探讨多参数流式细胞术分析肿瘤细胞早期凋亡的方法。方法：采用Annexin V FITC／PI双染法及JC-1染色法标记食管癌EC6细胞，通过多参数流式细胞术分析X射线、顺铂诱导产生的细胞凋亡情况及线粒体膜电位的变化。结果：随着剂量的增加，凋亡细胞的百分率逐渐增加，线粒体膜电位下降，去极化细胞增多，并且有明显的剂量依赖性。结论：多参数流式细胞术具有广阔的应用前景，短时间内能够获得大量统计学意义上可靠的数据，为探讨细胞凋亡机制、寻找治疗靶点提供了有益线索。     

PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡的影响因素

目的 利用PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡时影响亚二倍体峰位置的因素。方法 用地塞米松诱导SD大鼠胸腺淋巴细胞凋亡,采用不同的固定剂、固定温度和时间,在悬浮缓冲液洗涤细胞时悬浮不同的时间,然后进行PI染色流式细胞仪分析。结果 4种不同的固定剂中,只有70％乙醇固定的胸腺淋巴细胞出现亚二倍体峰,而其它3种固定方法无亚二倍体峰出现;乙醇固定的温度以及细胞在悬浮缓冲液悬浮的时间对亚二倍体峰的位置有明显的影响,而固定时间的长短对其影响较小。结论 不同的固定剂、固定温度和时间以及细胞在悬浮缓冲液悬浮的时间对PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡的结果均有影响,但如条件掌握得当,PI染色是一种检测细胞凋亡的较好方法,具有简单、直观和可以定量的特点。     

hGM-CSF基因活体电转染小鼠中子辐射损伤后细胞凋亡流式分析

目的研究hGM-CSF基因活体电转染对中子辐射损伤的救治作用。方法用流式细胞分析hGM．CSF基因活体电转染小鼠和单纯中子照射小鼠细胞凋亡的变化。结果在小鼠骨髓、脾脏与胸腺的分析中。hGM-CSF基因活体电转染纽小鼠细胞凋亡率始终明显低于单纯照射组小鼠细胞凋亡率（P〈O．05）。结论hGM．CSF基因活体电转染可显著减低中子辐射所致小鼠骨髓细胞、脾脏与胸腺淋巴细胞的凋亡率,并使凋亡程度减弱,凋亡持续时间缩短。提示hGM．CSF基因活体电转染对中子辐射损伤的救治作用。     

流式细胞检测技术在不孕症中的应用

目的 探讨流式细胞检测技术在不孕症中的应用价值。方法采用流式细胞检测技术,对不孕症患者外周血T淋巴细胞,B淋巴细胞,NK细胞及其亚群进行检测并分析。结果共检测分析外周血T淋巴细胞及其亚群1 959例,其中CD3+T细胞正常例数为70.44%（1 380/1 959）,异常29.56%（579/1 959）;检测分析B淋巴细胞及其亚群3 118例,其中CD19+ B细胞正常例数为81.53%（2 542/3 118）,异常18.47%（576/3 118）;检测分析NK细胞及其亚群2 260例,其中CD3-CD56+NK细胞正常例数为51.02% (1 153/2 260),异常48.98%（1 107/2 260）;异常病例组进一步区分为异常增高和降低两种;3种细胞都可以分化为不同的细胞亚群。结论不孕症患者存在不同程度的淋巴细胞比例异常,流式细胞检测技术对评估不孕症患者免疫功能异常具有重要的价值。     

流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜患者血小板相关免疫球蛋白及T淋巴细胞亚群

目的：应用流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血中的血小板相关免疫球蛋白（PAIg）水平和T淋巴细胞亚群分布情况。方法：应用三色免疫荧光多参数流式细胞术检测ITP患者（n=30）和对照者（n=30）外周血PAIg水平和T淋巴细胞免疫表型（CD3^＋、CD3^＋CD4^＋及CD3^＋CD8^＋）。结果：ITP患者外周血PAIgG、PAIgM及PAIgA的平均荧光强度均显著高于正常对照组（P〈0．01）；与对照组比较，ITP患者外周血CI）3^＋、CD3^＋CD4^＋亚群明显减低（P〈0．05），CD3^CD8^＋亚群明显升高（P〈0．05），而CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋比值显著减低（P〈0．01）。结论：ITP患者PAIg水平显著增高，且存在T淋巴细胞亚群分布漂移。此方法简便易行，有助于ITP的诊断．     

细胞流式术检测同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的 应用流式细胞术检测同型半胱氨酸(Hcy)诱导的血管平滑肌细胞凋亡,进一步探索同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制.方法 采用组织贴块法培养人血管平滑肌细胞,FITC荧光标记PI/Annexin V染色后,流式细胞术检测Hcy诱导的平滑肌细胞凋亡率.结果 在Hcy不同浓度下(100、200、500、1 000 μmol/L)培养24 h后平滑肌细胞的凋亡率分别是2.64%±0.14%、8.36%±2.47%、12.97%±4.86%、24.15%±5.46%,对照组在0 μmol/L的Hcy培养液中细胞的凋亡率为2.58%±0.32%;用终浓度(1 000 μmol/L)的Hcy培养液分别培养0、6、12、24、48 h后平滑肌细胞的凋亡率分别是2.29%±0.52%、8.45%±2.42%、13.45%±4.42%、24.15%±5.46%、32.75%±4.72%.Hcy诱导人血管平滑肌细胞凋亡成时间及浓度依赖性增加.结论 同型半胱氨酸可诱导平滑肌细胞过度凋亡,促进平滑肌细胞过度凋亡可能是Hcy致动脉粥样硬化及斑块不稳定性的机制之一.     

利用流式细胞术研究榄香烯对肝癌腹水瘤细胞系Hca—F25／CL—1 …

采用小鼠肝癌腹水瘤细胞系Ｈｃａ－Ｆ２５／ＣＬ－１６Ａ３,利用流式细胞术研究了榄香烯对肿瘤细胞的作用,对Ｈｃａ－Ｆ２５／Ｃｌ－１６Ａ３细胞周期的影响、ＤＮＡ含量的分析以诱导细胞凋亡。结果表明：榄香烯可以明显抑制Ｈｃａ－Ｆ２５／ＣＬ－１６Ａ３细胞的增殖,有效地杀伤肿瘤细胞;榄香烯对ＣＯ／ＧＩ期细胞无明显作用,主要作用于Ｓ期,阻止由Ｓ期进入Ｇ２／Ｍ期,从而抑制肿瘤生长;可以ＧＯ／ＧＩ期前出现一个凋亡特异     

香烟烟雾提取物诱导A-549肺上皮细胞凋亡

目的：探讨香烟烟雾提取物诱导A-549肺上皮细胞凋亡的机制。方法：以不同浓度香烟烟雾提取物作用于A-549肺上皮细胞，用碘化丙啶（PI）及Annexin V-FITC/PI双标记法检测凋亡细胞及坏死细胞。结果：50％、30％、20％、10％及5％浓度的香烟烟雾提取物处理细胞24h后，经细胞早期凋亡检测，细胞凋亡率分别达到0、31．7％、11．9％、1．6％、0．3％，细胞坏死率分别为100％、34．2％、6．2％、1．1％、0．8％。结论：一定浓度香烟烟雾提取物可诱导A-549肺上皮细胞凋亡，凋亡与坏死相伴存在，并呈剂量依赖性。     

流式细胞术淋巴细胞亚群检测在糖尿病免疫功能紊乱监测中的应用

目的 探测糖尿病(DM)患者外周血淋巴细胞亚群分布情况,了解糖尿病患者细胞免疫功能改变.方法 以流式细胞术三色荧光标记的单克隆抗体检测459例健康体检者和100例DM患者体内T细胞(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+)、B细胞(CD3+CD19+)、NK细胞(CD3-CD16-56+)、活化T细胞(CD3+HLA-DR+、CD3+CD25+)分布水平.细胞百分率取98%可信区间,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 DM患者组CD3+、CD3+CD8+细胞百分率低于对照组(P＜0.01).DM患者组CD3+CD19+、CD3+HLA-DR+、CD3+CD25+细胞百分率高于对照组(P＜0.01).DM患者组T4/T8比值、NK细胞百分率与对照组差异无统计学意义.结论 DM患者体内存在细胞免疫功能紊乱,淋巴细胞亚群检测可作为临床DM诊断指标.     

双标记流式细胞术定量分析5-FU诱导胃癌细胞早期凋亡

目的 以Annexin V-FTTC/PI双标记流式细胞术检测5－FU诱导胃癌细胞株SCG7901早期凋亡。方法 250、125、50以及25mg/L不同浓度5－FU处理SCG7901胃癌细胞0、6、12、18、24、30h,Annexin V-FTTC/PI双标记流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡。结果 早期（0－24h)瘤细胞凋亡比例随5－FU作用剂量增加和时间延长而显著提高（P＜0.01)；后期（24-30h)瘤细胞以坏死增加为主（P＜0.01)而凋亡比例反而降低。结论 5－FU诱导细胞凋亡呈时间以及剂量依赖关系。Annexin V/PI双标记法可以清楚区分正常、坏死、机械损伤以及凋亡细胞群落，是定量分析早期细胞凋亡的准确方法。