pEGFP—VEGF165重组质粒的构建及在血管内皮细胞中的表达

采用PCR技术,从原核表达质粒PUC19-VEGF165中获得上下游含有HindⅢ和BamH I酶切位点的目的基因VEGF165,与真核载体pEGFP-C1构建重组质粒pEGFP-VEGF165,观察其在内皮细胞中的表达。结果表明,带有绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-VEGF165构建成功,并在PEI的介导下成功转染脐静脉内皮细胞（HUVEC）,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,ELISA检测证明VEGF在细胞上清中有效表达,RT—PCR证明了VEGF165mRNA水平上的有效表达。此研究结果将为再狭窄的基因治疗提供实验基础。     

血管内皮生长因子165真核基因转染载体转染的骨骼肌细胞

背景：血管内皮生长因子基因转染治疗组织损伤的研究倍受关注,构建稳定可靠的人血管内皮生长因子真核表达载体有重要意义。 目的：克隆人血管内皮生长因子基因血管内皮生长因子165片段,构建pcDNA4-HisMax-C/VEGF165真核表达质粒,并验证其转染大鼠骨骼肌细胞的可靠性。 方法：采用反转录-聚合酶链反应技术,从人卵巢癌患者外周血中提取并扩增出血管内皮生长因子165基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA4-HisMax-C真核表达载体上,构建成pcDNA4-HisMax-C/VEGF165重组质粒,聚合酶链反应扩增,分别用酶切电泳分析和DNA测序的方法对提取和重组DNA 进行鉴定。pcDNA4-HisMax-C/VEGF165重组质粒转染骨骼肌细胞1周后反转录-聚合酶链反应提取血管内皮生长因子基因并酶切电泳鉴定。 结果与结论：构建的重组质粒目的基因片段为人血管内皮生长因子165 cDNA,对大鼠骨骼肌细胞转染后检测到血管内皮生长因子165基因片段。提示成功地克隆了血管内皮生长因子165基因并构建了其真核表达质粒,能以此为载体转染至骨骼肌细胞,并已整合到骨骼肌的基因组参与转录,证明了其转染的有效性。     

血管内皮细胞黏附分子胞外区基因真核表达载体构建及表达

目的构建并表达血管内皮细胞黏附分子(VCAM-1)胞外区基因真核表达载体。方法从小鼠NIH/3T3细胞提取总RNA,以其为模板通过RT-PCR扩增VCAM-1胞外区(D1-D4结构域)cDNA。利用PCR获得VCAM-1胞外区基因,连接pMD19-T载体,进行基因序列测序。将VCAM-1 D1-D4目的片段插入到真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc中,构建重组真核表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1。经双酶切鉴定VCAM-1胞外区基因真核表达载体构建的成功与否。利用脂质体把pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1导入至人B淋巴性白血病细胞株(Raji)内。结果基因测序结果表明成功扩增出VCAM-1胞外区基因,双酶切鉴定表明重组的真核表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1构建成功。Western blot结果显示导入pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1质粒的Raji细胞中VCAM-1高表达。细胞结合实验表明,表达的VCAM-1与前B细胞(70Z/3)表面的VLA-4特异性结合。结论 VCAM-1真核表达载体构建及表达成功,为前B细胞克隆形成机理以及为B细胞分化发育研究提供实验依据。     

人血管内皮生长因子165基因真核表达载体的构建及表达

目的：构建人血管内皮生长因子165（hVEGF165)的真核表达载体，并在大鼠骨髓基质细胞中进行表达。方法：利用基因克隆技术，将原核克隆载体pSP73中的目的基因VEGF165用BamHI和XhoI双酶切后，再克隆到真核表达载体pcDNA3.1中，构建重组质粒pcDNA3.1-VEGF165。对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定。通过脂质体介导，用重组质粒转染SD大鼠骨髓基质细胞，然后以G418筛选阳性克隆。用免疫细胞化学鉴定。结果：经酶切鉴定及基因测序证实，重组体中已插入目的基因片段VEGF165，免疫细胞化学证实，重组质粒转染的骨髓基质细胞中有VEGF165基因的表达。结论：成功地构建真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165。并在骨髓基质细胞中得到表达，为将表达VEGF基因的骨髓基质细胞作为骨组织工程的种子细胞的可能性提供了实验依据。     

可溶性血管内皮生长因子受体1真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

本研究旨在构建可溶性血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)受体1(soluble fmslike tyosine kinase-1,sFlt-1)的真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,并观察sFlt-1对血管内皮细胞增殖的影响。提取人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)总RNA,扩增Flt-1基因胞外1-3结构域,构建真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,测序鉴定基因序列。将重组质粒转染Lewis肺癌细胞,采用RT-PCR和SDS-PAGE检测sFlt-1在基因及蛋白水平的表达情况。MTT法检测sFlt-1对VEGF诱导的HUVECs生长的影响。结果显示:①插入片段序列正确;②sFlt-1在基因水平成功表达且转染后的Lewis肺癌细胞能分泌表达sFlt-1;③含sFlt-1的细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖。本研究成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,sFlt-1,在基因和蛋白水平均获得有效表达,且表达的蛋白可明显抑制由VEGF诱导...     

人血管内皮生长因子165基因转染兔骨髓间充质干细胞的蛋白表达

背景：骨髓间充质干细胞是最好的组织工程种子细胞来源,含有血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)不仅对血管再生和启动成骨修复有重要意义,其持续稳定的释放还能够提高新生骨的矿化程度,增强修复组织的力学性能。 目的：观察hVEGF165基因转染的兔骨髓间充质干细胞分泌血管内皮生长因子的蛋白功能。 方法：体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞,纯化并鉴定兔骨髓间充质干细胞;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后的骨髓间充质干细胞以pcDNA3.1-VEGF165质粒和脂质体1∶3比例的混合液转染,并分为3组：转染组应用pcDNA3.1-VEGF165转染细胞,空载体转染组应用pcDNA3.1-空载体转染,未转染组不处理。通过ELISA和Western-blot检测转染后细胞中外源性血管内皮生长因子的表达。 结果与结论：转染组与其他两组比较,VEGF165蛋白含量显著增高,差异有显著性意义(P < 0.05),但空载体转染组与未转染组之间差异无显著性意义(P > 0.05),转染组不同时间点之间VEGF165蛋白含量差异均有显著性意义(P< 0.05),hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞能成功分泌VEGF165蛋白。提示采用基因转染技术可将hVEGF165基因转染到骨髓间充质干细胞中并可有效表达具有生物活性的VEGF165。     

人Gax基因真核表达载体的构建及在血管平滑肌细胞中的表达

目的:构建人Gax基因真核表达载体,并观察在兔血管平滑肌细胞中的表达。方法:通过PCR从pCMV-SPORT6-Gax质粒中扩增出人Gax cDNA片段,经双酶切后装入到有绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,经限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定后通过梭华-Sofast转染试剂介导重组质粒转染至兔血管平滑肌细胞中进行表达,通过荧光显微镜观察转染细胞的绿色荧光蛋白表达和RT-PCR扩增转染细胞的cDNA来鉴定Gax在兔血管平滑肌细胞中的表达。结果:琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物人Gax基因片段约915bp,与预期分子量相符;酶切分析和测序鉴定证明人Gax真核表达载体pEGFP-N1-Gax连接正确;荧光显微镜观察到重组质粒转染细胞中有绿色荧光蛋白表达,及RT-PCR证明转染细胞有人GaxmRNA表达。结论:成功构建人Gax基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-Gax,并证实在兔血管平滑肌细胞中表达,为进一步研究Gax基因在心血管病中的作用提供了实验基础。     

人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体的构建与鉴定

背景：人白血病抑制因子(LIF)和血管内皮生长因子165(VEGF165)对脊髓损伤后神经元存活有重要作用。病毒载体临床应用存在安全隐患,利用真核表达载体表达蛋白为解决安全性问题提供了一种方法。 目标：构建双基因共表达载体pIRES2-LIF-VEGF165并对其进行鉴定。 方法：是采用直接PCR的方法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取人白血病抑制因子基因,然后将人白血病抑制因子的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建成为pIRES2-LIF-EGFP。人血管内皮生长因子165 cDNA片段是通过双PCR的方法从pIRES2-VEGF165-EGFP质粒中获取,接着将血管内皮生长因子165 cDNA片段以替换EGFP的方式插入pIRES2-LIF-EGFP中,最后构建成为含有IRES(即内部核糖体进入位点)的pIRES2-LIF-VEGF165双基因共表达载体。通过双酶切和DNA测序方法对其鉴定,将重组的双基因共表达载体感染HEK293细胞,利用RT-PCR与Western-blot方法检测双基因的表达。 结果与结论：DNA测序显示,提取的人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165均与基因库报道序列一致,片段大小分别为609 bp和576 bp。构建的pIRES2-LIF-VEGF165双基因共表达载体经EcoRI/BamHI切出LIF条带,经BamHI/NotI双酶切后切出IRES-VEGF165片段,经EcoRI/NotI双酶切后切出LIF-IRES-VEGF165片段。RT-PCR 与Western-blot方法检测显示,此载体转染后,HEK293细胞均能表达人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白。结果证实,实验成功构建了人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

胰岛-脑1基因真核表达质粒的构建及鉴定

目的 构建并鉴定表达胰岛-脑1(Islet-Brain 1,IB1)基因的真核细胞表达质粒.方法 从人胰岛细胞瘤提取总RNA,根据IB1 cDNA文库的序列利用RT-PCR扩增IB1基因.将此基因插人带有绿荧光的真核表达载体pEGFP-N1的EcoR1/KpnI酶切位点区域,携带IB1基因的真核表达质粒转染到胰岛细胞系(RINm5F),最后通过G418筛选获得稳定的携带IB1基因的胰岛细胞系.利用倒置相差荧光显微镜、流式细胞仪、Western blot鉴定的质粒及转染的细胞系.结果 RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析为840 bp的分子(IB1 AA1-280),测序分析证明与Genbank IB1 cDNA具有相同的序列.用EcoR I和Kpn I消化可见两条条带,Western blot分析证明IB1基因在RINm5F细胞表达.结论 成功构建了pEGFP-N1-IB1真核表达载体,转染到胰岛细胞系并稳定表达.     

体外构建内皮抑素基因真核表达载体抑制血管生成

背景：胶质瘤的根除治疗至今仍是一大难题,抗血管生成治疗胶质瘤有望成为新的有效途径。目的：证实内皮抑素在体外对血管生长的抑制作用,为今后利用其抑制肿瘤生长奠定实验室基础。方法：取Wistar大鼠肝脏,提取mRNA后利用RT-PCR获取内皮抑素cDNA片段。碱裂解法小量提取质粒pcDNA3。重组质粒pcDNA3-Endo的构建。重组pcDNA3-Endo真核表达载体转染骨髓间充质干细胞。RT-PCR及Western Blot检测内皮抑素基因的表达。MTT法检测ECV-304细胞增殖抑制实验。体外实验共分成4个组：重组质粒组、空载质粒组、脂质体对照组及空白对照组。结果与结论：成功构建pcDNA3-Endo重组真核表达质粒,pcDNA3-Endo质粒能在体外有效转录并分泌内皮抑素基因,转染了外源pcDNA3-Endo质粒的ECV-304细胞增殖明显受到抑制。结果提示内皮抑素基因能在体外有效抑制血管内皮细胞的增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

VEGF165反义RNA对人食管鳞癌细胞影响的实验研究

目的 :观察血管内皮生长因子16 5 (VEGF16 5 )反义RNA对人食管鳞癌细胞EC10 9的影响 ,探讨其治疗食管癌的可行性。方法 :采用亚克隆技术 ,构建并鉴定VEGF16 5 反义RNA的真核表达载体。以重组质粒转染人食管鳞癌细胞EC10 9后 ,将其接种于裸鼠皮下 ,分别利用原位杂交、激光共聚焦、图象分析及微血管计数等方法 ,观察转染前后EC10 9细胞的生物学性状和致瘤性。结果 :成功地构建了VEGF16 5 反义RNA的真核表达载体 ,并在EC10 9细胞中获得表达。转染细胞中VEGF16 5 的表达下降 75% ,其生物学性状不受外源基因表达的影响 ,但其在裸鼠皮下的致瘤性和和瘤组织中血管的生成明显下降。VEGF16 5 反义RNA转染组、空载体转染组和对照组中肿瘤的体积 ,分别为 (82 0± 112 .5)mm3 、(793 0± 10 3 5)mm3 和 (7850± 950 )mm3(P <0 .0 1) ;微血管的密度分别为 (8.5± 1.2 ) /mm2 、(44.3± 9.4) /mm2 和 (46.4± 12 .6) /mm2 (P <0 .0 1)。结论 :VEGF16 5反义RNA能够明显减少食管鳞癌细胞内VEGF16 5 的表达 ,具有抑制肿瘤生长和血管生成的作用 ,可望用于实体肿瘤的辅助治疗。     

The World Health Organization reference reagent for vascular endothelial growth factor,VEGF165

Preparations of human sequence recombinant vascular endothelial growth factor-165 (VEGF₁₆₅) synthesized in Escherichia coli were formulated and lyophilized at NIBSC. Following evaluation at NIBSC, the first preparation, 01/424, has been distributed since 2002 as a NIBSC research reagent, but shows variation between ampoules in the volume and crystalline appearance of the lyophilized plug. A second preparation, 02/286, was subsequently lyophilized in a different formulation. Preparation 02/286 has now been evaluated in a collaborative study for its suitability to serve as a reference standard, and compared with preparation 01/424, by five laboratories using in vitro bioassays or immunoassays. On the basis of the results reported here, the World Health Organization (WHO) established the preparation coded 02/286 as the WHO reference reagent (RR) for human VEGF₁₆₅, with an assigned unitage of 13,000 units per ampoule. Details on ordering the WHO RR can be found at www.nibsc.ac.uk.     

甲状腺癌组织中VEGF和VEGF-C的表达及意义

目的　探讨血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF- C在甲状腺癌中的表达及其意义。方法　应用免疫组化S P法检测44例甲状腺癌中VEGF、VEGF C的表达情况,并以17例癌旁正常甲状腺组织作对照。结果　VEGF、VEGF- C在甲状腺癌中呈高水平表达(88. 6%、81. 8% )。VEGF表达随癌组织分化程度的减低而增高, 9例死亡病例均为阳性表达;VEGF- C表达随癌组织分化程度的减低而减低,乳头状癌阳性表达(88 .9% )高于其它类型,VEGF- C阳性率在有淋巴结转移组(92. 0% )明显高于无淋巴结转移组(68. 4% ) (P<0. 05)。9例死亡病例中7例为阳性表达,且7例同时VEGF呈阳性表达。结论　VEGF、VEGF- C表达与甲状腺癌病理分型及预后可能有一定关系,VEGF- C与甲状腺癌淋巴结转移密切相关。     

阻断VEGFR-3表达对肿瘤细胞诱导的淋巴管内皮细胞增殖的影响

目的观察阻断VEGFR-3(F lt 4)表达对肿瘤细胞(前列腺癌细胞株PC3)诱导的淋巴管内皮细胞增殖的影响。方法实验分4组,第1组为对照组。每组有6孔,每孔具有相同细胞数2×105/m l,实验组每孔各加入试剂100 m l/L。第1组(对照组)加入淋巴管内皮细胞完全条件培养液(LEC)1 m l,第2组加入LEC 1 m l+兔血清100μl,第3组加入LEC 1 m l+PC3细胞上清100μl。第4组加入LEC+抗F lt 4抗体100μl。并于24、48、72、96 h观察各组淋巴管内皮细胞生长情况。各时间段计数第1~3组细胞数,第4组于72 h计数后,去除抗体,重新加入LEC+PC3细胞上清继续培养至120 h;除96 h外,其余各时间段均计数细胞数。比较各组细胞增殖情况。结果第1、2组淋巴管内皮细胞在加试剂后各时间段两组细胞数及形态无明显差别,第3组加入PC3细胞上清后,细胞数明显多于第1、2组。第4组加试剂后24、48、72 h细胞计数均少于前24 h。清除抗体后加入PC3细胞上清48 h计数细胞,细胞数仅略见增加。结论VEGF-C高表达的PC3细胞上清能显著刺激淋巴管内皮细胞增殖,阻断F lt4表达,可在一定程度上阻断PC3细胞上清促淋巴管内皮细胞增殖作用。     

PAI-1反义RNA对人主动脉平滑肌细胞中血管内皮生长因子的影响

目的 探讨纤溶酶原激活物抑制剂－1（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)反义RNA对离体培养的主动脉平滑肌细胞（smooth muscle cell,smc)PAI-1表达的作用及对血管内皮生长因子（vscular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法 PCR扩增PAI－1第2外显子,将PCR产物纯化克隆后连入真核细胞表达载体pcDNA3．1,构建PAI－1反应RNA重组质粒。将pcDNA3.1-反应PAI－1重组质粒转染SMC中。通过免疫组化、Western印迹、ELISA检测细胞中PAI－1表达的改变;通过免疫荧光技术观察细胞中PAI－1表达量的变化对VEGF的影响。 结果 转染后第3天、细胞中PAI－1含量最低,VEGF的表达也减少。第5天、PAI－1含量逐渐高,VEGF也相应增加。第7天、PAI－1含量接近于正常,VEGF也增至正常水平。结论 反义PAI－1RNA能有效阻断SMC中PAI－1的蛋白合成,同时抑制细胞中VEGF的表达。     

Effects of vascular endothelial growth factor released from cultured dermal substitute on proliferation of vascular endothelial cells in vitro

Allogeneic cultured dermal substitute (CDS) was prepared by culturing fibroblasts on a two-layered spongy matrix of hyaluronic acid and atelocollagen. CDS can be cryopreserved and transported to other hospitals in a frozen state. The present study was designed to analyze the amounts of vascular endothelial growth factor (VEGF) released from fibroblasts in fresh and cryopreserved CDS and to investigate the effects of this VEGF on proliferation of vascular endothelial cells in vitro. The culture medium used in preparing CDS (fresh CDS culture medium sample) was collected and stored at –30°C for the quantitative analysis of VEGF. After thawing cryopreserved CDS, it was recultured in a culture medium for 1 week. The culture medium used was collected and stored at –30°C for quantitative analysis of VEGF. The amounts of VEGF released from the fresh and cryopreserved CDS into the culture medium were about 610pg/ml and 640pg/ml, respectively. This finding suggests that the cryopreserved CDS retains its ability to release VEGF. Immunohistological analysis indicated that some of the VEGF adhered to the matrix. Human vascular endothelial cells were cultured in medium mixed with the fresh or cryopreserved CDS culture medium sample. Proliferation of vascular endothelial cells was enhanced by increasing the concentration of both CDS culture medium samples. When antihuman VEGF antibody was added to the culture medium, the proliferative activity of vascular endothelial cells was reduced. These findings confirm that VEGF released from CDS promotes proliferation of vascular endothelial cells.     

Effect of heparin-binding EGF-like growth factor and amphiregulin on the MAP kinase-induced production of vascular endothelial growth factor by human granulosa cells

The function of granulosa cells is regulated by various hormones and growth factors. Our aim is to clarify the regulation of vascular endothelial growth factor (VEGF) production induced by heparin-binding EGF-like growth factor (HB-EGF) and amphiregulin (AR) in a human granulosa cell line, KGN. KGN cells were cultured and incubated for 24 h with HB-EGF and AR. The levels of VEGF in the culture media were measured by an enzyme-linked immunosorbent assay. The activation of MAP kinase in KGN cells was detected by Western blot analysis. VEGF production was significantly increased by HB-EGF or AR alone in a dose-dependent manner, whereas it was decreased by AG1478 or U0126. The MAP kinase activity was increased by treatment with HB-EGF or AR. The results suggested that VEGF is induced by HB-EGF and AR through mechanisms involving MAP kinase. The increase in VEGF may contribute to neovascularization, which in turn would promote various ovulation phenomena as well as follicular growth.     

脂质体介导的VEGF_(165)基因转染对内皮细胞生长的作用

构建血管内皮细胞生长因子基因VEGF165真核表达载体pcDNA3 VEGF165,以阳离子脂质体介导的基因转染技术 ,将基因转入原代培养的人脐静脉内皮细胞中。结果表明 ,基因转染 1h后细胞内就有VEGFDNA存在 ,VEGFmRNA水平显著上升 ;基因转染 2d后培养液上清VEGF蛋白表达显著上升 (135 5 12± 6 2 34)pg/ml和 (19 2 7± 2 96 )pg/ml,P <0 0 1。转染VEGF165基因 2d的内皮细胞再经程序降温冷冻保存复苏后 ,其存活率显著高于对照组 (pcDNA3 组 ) (90 13%± 2 84 %和81 5 2 %± 2 15 % ,P <0 0 5 ) ,凋亡率显著低于对照组 (7 15 %± 0 4 2 %和 17 6 1%± 1 5 6 % ,P <0 0 5 )。MTT法显示转染VEGF165基因能促进内皮细胞VEGF蛋白的表达 ,促进细胞增殖 ,抑制细胞凋亡。在治疗心脏及下肢动脉缺血性疾病中 ,VEGF165基因治疗可能具有重要的意义。     

体外负压培养对小鼠骨髓间充质干细胞增殖能力和血管内皮生长因子分泌水平的影响

文题释义： 自制负压吸引装置：由一个吸痰机和一个负压可调节吸引器及一个密闭的容器盒组成。手术创面应用负压吸引可促进切口愈合,负压还可以促进间充质干细胞向成骨细胞、表皮细胞分化。 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EDU)：一种胸腺嘧啶核苷酸类似物,在细胞增殖时EDU能够插入正在复制的DNA分子中,利用EDU与染料之间的点击化学(Click Chemistry)反应进行高效快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。 背景：如何增强骨髓间充质干细胞增殖活性使其移植后发挥应有的疗效是目前急需解决的问题。 目的：探讨体外负压培养技术对小鼠骨髓间充质干细胞增殖活性及血管内皮生长因子分泌水平的影响。 方法：取第3代骨髓间充质干细胞,给予间歇性负压培养(-6.65,-13.3,-26.6 kPa),2 h/次,1次/12 h,对照组在正常条件下培养。培养12,24,36,48,60 h,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,ELISA检测细胞分泌血管内皮生长因子水平,RT-PCR检测血管内皮生长因子受体mRNA表达。根据上述结果,选择一个最佳负压条件和时间(-26.6 kPa,24 h),将骨髓间充质干细胞分为正常对照组、负压组、负压+血管内皮生长因子受体抑制剂Axitinib组,CCK-8法检测细胞增殖情况,EDU试剂盒检测EDU细胞阳性率,结晶紫染色观察细胞集落形成单位。 结果与结论：①与对照组比较,3个负压干预组骨髓间充质干细胞显著增殖(P < 0.05);②与对照组比较,3个负压干预组细胞分泌血管内皮生长因子水平显著增高(P < 0.05),血管内皮生长因子受体mRNA表达显著增高(P < 0.05);③经血管内皮生长因子受体抑制剂处理后,细胞增殖吸光度值、克隆形成单位数量及EDU阳性细胞率较负压干预组明显降低;④结果表明,体外负压培养可能通过上调血管内皮生长因子分泌水平促进骨髓间充质干细胞增殖。 ORCID: 0000-0002-3897-6629(吴向未);0000-0002-5063-973X(杨雄峰) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程