1,2-二氯乙烷对大鼠体外血脑屏障细胞损伤的形态学观察

[目的]进一步探讨1，2-二氯乙烷对血脑屏障细胞的损伤作用。[方法]在体外建立了血脑屏障细胞模型，并从形态学上观察1，2-二氯乙烷对血脑屏障细胞的损伤作用。体外培养脑微血管内皮细胞和神经胶质细胞，将生长良好的脑微血管内皮细胞和神经胶质细胞分为4组，即对照组、5、10、20μl／ml组，用1，2-二氯乙烷对脑微血管内皮细胞和神经胶质细胞染毒，染毒0、10、30、60min后于光镜和电镜下密切观察细胞的形态学变化。[结果]染毒后的脑微血管内皮细胞呈进行性破坏，随着染毒剂量的加大细胞体积逐渐增大，胞膜模糊，细胞与细胞间、细胞与突触间连接减少，甚至消失；随着染毒时间的延长，在10、30、60min后可以观察到有进行性的细胞膜溶解破坏，胞核模糊，界限不清，突触变短。随着染毒浓度的增加或时间的延长，神经胶质细胞树突数量减少，轴突减少变短，细胞与突触间、胞体与胞体间连接减少甚至消失，超微结构显示胞浆中线粒体膜的破坏、缺失，嵴断裂、肿胀及空泡变，粗面内质网轻度扩张、脱颗粒，细胞核内染色质在核周凝集，胶质细胞间及突触间的连接松解。[结论]1，2－二氯乙烷可造成血脑屏障细胞的损伤，引起血管源性脑水肿。     

电磁辐射对血脑屏障通透性的影响及其机制研究进展

血脑屏障(blood-brain-banjer,BBB)是存在于血液与脑组织之间的屏障结构,由脑微血管内皮细胞、基膜和星形胶质细胞足突组成.脑的毛细血管属连续型,毛细血管内皮细胞之间以紧密连接(tight junction,TJ)封闭,内皮外有基膜、周细胞以及星形胶质细胞突起的足突围绕.与机体其他部位的微血管相比,BBB的通透性极低,其目的是防止血液中的有害物质通过BBB而对神经元造成损伤,维持大脑微环境的相对稳定.     

1，2－二氯乙烷对大鼠神经细胞内钙离子浓度的影响

[目的]用体外实验方法研究1,2-二氯乙烷（1,2-DCE）染毒后大鼠神经细胞内钙离子（Ca^2＋）浓度的变化。[方法]体外培养新生SD大乳鼠脑皮质细胞,分别用0．5、1．0、2．0mL/L1,2-DCE染毒,另设对照组,观察各组神经细胞形态学变化。同时应用激光共聚焦显微镜测定各组细胞内Ca^2＋浓度,探讨1,2-DCE对大鼠神经细胞内Ca^2＋浓度的影响。[结果]神经细胞染毒后,神经细胞形态发生明显改变：胞体肿胀崩解、胞核模糊不清、突触变短变粗、细胞间连接减少、细胞膜不完整;随着染毒剂量的增高,神经细胞损伤的严重程度呈上升趋势。各染毒组神经细胞活力较对照组有所下降,差异有统计学意义（P〈0．01）;染毒2h后随着染毒剂量的增加,各组神经细胞内Ca^2＋浓度呈上升趋势,各染毒组细胞与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;染毒24h后,低、中剂量组与对照组细胞内Ca^2＋浓度比较差异有统计学意义（P〈0．01）,高剂量组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。[结论]1,2-DCE可以导致神经细胞水肿坏死,有剂量依赖关系,神经细胞内Ca^2＋浓度亦见升高,提示Ca^2＋可能与1,2-DCE致神经细胞中毒性脑水肿有关。     

1，2-二氯乙烷致中毒性脑病中神经细胞的变化

目的用体外实验方法研究1,2-二氯乙烷染毒后神经细胞形态学的变化。方法将体外培养的新生SD大鼠的脑皮质细胞,分为设对照组、低、中、高剂量组,观察各组细胞形态学、超微结构和细胞活力的变化。结果染毒后神经细胞形态和超微结构均发生明显变化：在荧光显微镜下随着染毒剂量的增高,细胞核由亮绿色变为桔红色,胞体胀大甚至消失;在透射电镜下染毒组神经细胞的细胞核核膜溶解消失,染色质聚集深染,线粒体和内质网等细胞器肿胀,崩解,且线粒体嵴排列紊乱甚至消失;各染毒组神经细胞活力比对照组有所下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论1,2-二氯乙烷可以导致神经细胞水肿坏死,并且有剂量依赖关系,随着染毒剂量的增加神经细胞破坏程度越大。     

低浓度铅对大鼠血脑屏障超微结构的损害

目的观察低浓度铅暴露对动物神经系统的影响。方法以硝酸镧为示踪物，观察分别给饮用铅（乙酸铅溶液，以Ｐｂ２＋计）１０和３０ｍｇ／Ｌ３个月的大鼠血脑屏障超微结构和通透性的变化，及其有关的血铅和脑铅浓度。结果当染毒大鼠血铅浓度为对照组的１．６５倍时，脑铅浓度无明显增加，可见镧盐颗粒沿着毛细血管内皮细胞膜整齐排列，基膜处没有镧盐颗粒；当染毒大鼠血铅浓度为对照组的２．４５倍时，脑铅浓度明显增高，在血管腔大而内皮细胞质复盖管腔面较薄的毛细血管的某些部位可见镧盐颗粒渗到基膜。结论神经细胞受损与血脑屏障的通透性增高有关，血管腔较大的毛细血管的某些部位通透性增加是低浓度铅对大脑损害的较早期指标     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应

目的观察醋酸铅对动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应,探讨醋酸铅通过血脑屏障的可能机制。方法醋酸铅处理动脉内皮细胞和星形胶质细胞后进行Giemsa或HE染色,检测观察细胞形态学变化;细胞免疫化学法检测P53、Bax、Bc1-2的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24h后Giemsa,H.E染色均显示出醋酸铅组细胞成凋亡形态学改变。动脉内皮细胞和星形胶质细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的P53和Bax阳性表达升高,而Bc1-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可损伤动脉内皮细胞和星形胶质细胞,促进凋亡及影响血脑屏障。     

维生素Ｅ对1，2-二氯乙烷中毒性脑水肿保护作用的研究

目的探讨维生素E (vitamin E,Vit E)对1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)中毒性脑水肿的保护作用。方法将雌性昆明种小鼠随机分为空白对照组、Vit E对照组、1,2-DCE单纯染毒组及Vit E低、中和高剂量干预组。连续给予药物灌胃4 d后,采取静式吸入方式染毒3. 5 h/d,持续3 d。结果与空白对照组相比,单纯染毒组小鼠脑组织呈现明显脑水肿病理改变,脑含水量、脑组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及细胞色素P450 2E1 (cytochrome P450 2E1,CYP2E1)蛋白和mRNA表达水平显著升高,脑组织中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase assay kit,CAT)活性、Occludin蛋白和mRNA及Claudin 5蛋白表达水平显著降低。与单纯染毒组相比,各干预组小鼠的脑含水量、脑组织MDA含量、CYP2E1蛋白和mRNA表达水平显著降低,GSH含量、Occludin蛋白及mRNA水平显著升高;中和高剂量干预组的小鼠脑组织中SOD和CAT活性及Claudin 5蛋白表达水平亦显著升高(P0. 05)。结论单纯1,2-DCE染毒可引起小鼠脑水肿,诱导脑组织中CYP2E1的表达,诱发脑组织氧化损伤,破坏紧密连接蛋白,并抑制Occludin和Claudin 5的表达;而Vit E干预可显著抑制CYP2E1的表达,缓解CYP2E1介导的氧化损伤,有效预防1,2-DCE引起的中毒性脑水肿。     

1,2-二氯乙烷急性吸入染毒脑组织损伤形态学研究

为了研究 1 ,2 二氯乙烷 (1 ,2 -DCE)在静式吸入染毒条件下对脑组织的急性损害。采用连续静式吸入染毒大鼠 1 2h后 ,观察不同染毒剂量下受试动物脑组织的形态学变化 ;测定脑组织干湿重及含水量。结果显示 :染毒剂量为 2 .5g m3 时 ,脑组织在形态学上无明显变化 ,含水量为 80 .41 % ,与对照组 (79.82 % )相比 ,无明显差异 ;5 .0g m3 染毒组在形态学上出现轻微脑水肿 ,脑组织含水量为 82 .1 4 % ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5) ;1 0 .0g m3 组脑组织在形态学上水肿明显 ,其含水量 (83 .65 % )与各组之间差异显著 (P <0 .0 5)。结果提示 :1 ,2 -DCE在短期大量吸入的情况下可导致动物出现脑水肿。     

1,2-二氯乙烷染毒对小鼠脑组织氨基酸类神经递质的影响

探讨1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)对小鼠脑组织氨基酸类神经递质的影响,为揭示1,2-DCE的神经毒性损伤机制提供实验参考数据。将昆明种小鼠随机分为4组,对照组和不同剂量1,2-DCE染毒组(0.25 mg/L、0.50 mg/L、1.00mg/L),每组10只小鼠。静式吸入染毒14 d,每天染毒2 h。染毒结束后取大脑组织,测定小鼠脑脏器系数;高效液相色谱法(HPLC)检测脑组织中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)及γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果小鼠脑脏器系数随染毒剂量的增加呈下降趋势,但各组间差异无统计学意义。各染毒组的Asp、Glu和Tau含量随染毒剂量的增加而升高,且中、高剂量染毒组与对照组比较差异有统计学意义;各染毒组的Gly含量随染毒剂量的增加也有升高的趋势,但与对照组比较差异无统计学意义;中剂量染毒组的GABA含量与对照组比较差异具有统计学意义,但高剂量组与对照组比较未见明显差异。提示亚急性1,2-DCE暴露可引起小鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量的异常,其可能是1,2-DCE神经毒性损伤的主要机制之一。 更多还原     

p38 MAPK/AP-1信号通路在1，2-二氯乙烷中毒性脑水肿形成中对iNOS表达的上调作用

目的探究p38 MAPK/AP-1信号通路在小鼠1?2-二氯乙烷(1?2-DCE)中毒性脑水肿形成过程中对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用及其对脑水肿的影响。方法选取40只雌性昆明种小鼠随机分为对照组、染毒组、低剂量以及高剂量p38抑制剂组。染毒小鼠于染毒柜中1.2 mg/L 1?2-二氯乙烷染毒3.5 h/d,连续染毒3 d,低、高剂量抑制剂组小鼠于染毒前1 h腹腔注射200μl 3.75、15 mg/kg的p38 MAPK抑制剂(SB202190)。染毒结束次日取材,测定各组小鼠脑含水量及HE病理观察脑水肿,Western Blot检测各组小鼠脑组织中磷酸化p38、激活蛋白1(AP-1)两个亚基c-fos、c-jun的磷酸化形式表达水平以及iNOS的蛋白表达,Real-Time RT-PCR检测iNOS mRNA表达水平。结果单纯染毒组的小鼠出现抱爪现象,SB202190干预能够明显改善1?2-DCE中毒小鼠的抱爪症状。染毒组小鼠脑组织含水量与对照组小鼠相比明显增加,SB202190干预能够有效缓解小鼠出现脑水肿。单纯染毒组小鼠脑组织中p-p38蛋白、磷酸化c-jun和c-fos表达水平明显上调,iNOS蛋白和mRNA表达水平也显著增加,而SB202190能够显著降低iNOS、磷酸化c-jun和c-fos的表达水平。结论小鼠脑组织iNOS mRNA和蛋白表达水平在1?2-DCE中毒性脑水肿形成过程中显著上调。p38 MAPK/AP-1信号通路参与iNOS表达增多的调控过程。     

安宫牛黄丸对大鼠脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿作用机制的实验研究

目的通过探讨安宫牛黄丸对大鼠脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿的作用机制,旨在为临床研究安宫牛黄丸提高大鼠脑外伤及脑水肿的治疗效率提供理论依据。方法采用Marmarou方法制作大鼠弥漫性脑损伤模型,并给予安宫牛黄丸后应用HE染色、RT-PCR、免疫组织化学法及干湿质量法等方法统计脑组织含水量、脑组织梗塞面积、记忆提取能力、脑细胞凋亡及脑组织c-fos和c-jun的表达模式变化情况。结果应用安宫牛黄丸后大鼠脑组织含水量显著下降、脑组织梗塞面积减小、记忆提取能力提高、脑细胞凋亡数量减少,差异显著具有统计学意义(P<0.05)。脑组织c-fos和c-jun的表达模式呈现先增加后减少再增加的双峰模式。结论安宫牛黄丸治疗大鼠脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿,能显著减轻水肿、脑梗塞面积和脑细胞凋亡数,有效保护血脑屏障和脑组织。     

亚急性1,2-二氯乙烷染毒对小鼠行为及脑神经递质含量的影响

目的 探讨亚急性1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)染毒对小鼠行为及脑神经递质含量的影响,为揭示1,2-DCE神经毒性机制提供参考.方法 将昆明种小鼠随机分为4组:对照组和低、中、高剂量1,2-DCE染毒组(225、450、900 mg/m3),每组8只小鼠,静式吸入染毒10 d,每天染毒3.5 h.最后一次染毒结束后立即进行旷场试验,实验结束后处死小鼠,快速取大脑组织,采用高效液相色谱法(HPLC)检测脑组织中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)及γ-氨基丁酸(GABA)的含量.结果 各染毒组小鼠脑组织中Asp和Glu含量随染毒剂量的增加而升高,且各染毒组小鼠的Glu含量[低、中、高剂量染毒组分别为(67.69±9.89)、(67.99±6.23)、(71.16±5.96)μmol/g Pro]与对照组[(50.78±5.15)μmol/g Pro]比较,差异均有统计学意义(P<0.01);低剂量染毒组小鼠脑组织中GABA含量[(8.08±2.37)μmol/g Pro]较对照组[(12.83±3.36)μmol/g Pro]明显降低,但高剂量组[(19.87±5.30)μmol/g Pro]与对照组比较,明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).低剂量1,2-DCE染毒对小鼠的行为有兴奋作用;而高剂量1,2-DCE染毒对小鼠的探索性及运动性行为有抑制作用.结论 亚急性1,2-DCE染毒可引起小鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量及比值的变化,进而导致出现行为的改变,这可能是1,2-DCE神经毒性作用的机制之一.

Abstract：

Objective To explore the effects of 1,2-dichloroethane (1,2-DCE) on the behavior and the brain neurotransmitter levels in mice.Methods Thirty mice were randomly divided into four groups,which were control group and groups of low,meddle and high exposure (225,450 and 900 mg/m3) to 1,2-DCE for 10 days (3.5 h a day) by inhalation.After the last exposure,the open field test was performed immediately.After exposure all mice were killed and the brain tissues were taken up rapidly.The levels of aspartate (Asp),glutamate (Glu) and gamma-aminobutyric acid (GABA) in the brain were detected by high performance liquid chromatography (HPLC ).Results Levels of Asp and Glu in all exposure groups increased with doses.As compared to the control group,levels of Glu in all exposure groups increased significantly (P<0.05 ).Levels of GABA in the low exposure group were significantly lower than those in control group,but those in the high exposure group were significantly higher than those in control group.The results of the open field test showed that effect of low exposure to 1,2-DCE on the behavior was stimulant,but the high exposure to 1,2-DCE inhibited behavior of exploration,excitement and sport.Conclusions Subacute exposure to 1,2-DCE could result in the change of amino acid neurotransmitter content and ratio in the brain,thereby change the behavior of mice appeared,which might be the mechanism of neurotoxicity caused by 1,2-DCE in part.     

采用能谱法研究铅对大鼠血脑屏障的通透性

目的研究铅从血液进入脑实质的可能机制,血管内皮细胞的连续层对铅的屏障作用。方法用电镜硝酸镧示踪和电子探针能量色散Ｘ射线分析观察大鼠饮用含铅水（１０和３０ｍｇ／Ｌ）３个月后,铅在大鼠脑皮质区毛细血管内、外侧不同细胞中的分布与血脑屏障通透性的变化。结果对照组与１０ｍｇ／Ｌ组血铅浓度虽有差异,但在毛细血管内皮细胞内表面的质膜中都只收集到了铅的Ｌα峰,在内皮细胞外侧的基膜,星形胶质细胞足板及神经细胞轴突中未出现任何铅峰,同时硝酸镧示踪也未显示血管通透性有变化。而在３０ｍｇ／Ｌ组,上述细胞部位均收集到了铅的Ｌα峰和Ｍα峰,同时在管腔较大的毛细血管的某些部位可见镧盐颗粒穿过内皮细胞间的缝隙到达基膜及周细胞。结论血管内皮细胞内表面的质膜是铅作用于脑的最初靶点,血管内皮细胞的连续层对铅有屏障作用,但该屏障作用非常弱,铅在内皮细胞内表面的质膜中积累稍多,便会损害内皮细胞间的紧密联结透至脑实质,与硝酸镧示踪的结果一致。     

远隔缺血后适应减轻大脑缺血再灌注损伤

目的:探讨远隔缺血后适应对局灶性脑缺血再灌注损伤后大脑梗塞面积及血脑屏障(blood brainbarrier,BBB)通透性功能障碍的保护性作用及其程度。方法:制备大鼠缺血再灌注损伤模型,建立远隔缺血后适应。应用TTC法评估脑梗死面积,采用干湿重法计算脑含水量评估脑水肿、应用伊文思蓝(Evans Blue,EB)观察再灌注后BBB通透性变化。结果:大鼠BBB通透性缺血后适应24 h组与缺血再灌24 h组相比明显减轻(P<0.05),缺血后适应48 h组与缺血再灌注48 h组相比明显减轻(P<0.05);TTC梗塞面积缺血后适应24 h组与缺血再灌注24 h组相比明显减轻(P<0.0001),缺血后适应48 h组与缺血再灌注48 h组比明显减轻(P<0.0001);缺血后适应组比缺血再灌注组脑含水量明显减少(P<0.01)。结论:缺血后适应能够保护缺血再灌注后血脑屏障的破坏,减轻梗塞面积和脑水肿。     

兴奋性氨基酸与1,2-二氯乙烷急性中毒性脑病关系的探讨

目的　探讨兴奋性氨基酸 (EAAs)与 1 ,2 二氯乙烷 (1 ,2 DCE)急性中毒性脑病的关系。方法　将SD大鼠随机分为 7组 :对照组、3个染毒组 (5 .0、1 0 .0、2 0 .0g/m31 ,2 DCE)和 3个时间组(1 0 .0g/m31 ,2 DCE染毒后 2、4、6h) ;连续静式吸入染毒 1 2h ;干湿重法测定大鼠脑皮质和髓质含水量 ;高效液相色谱法 (HPLC)检测脑组织中谷氨酸 (Glu)、天冬氨酸 (Asp)、甘氨酸 (Gly)及γ 氨基丁酸(GABA)含量的变化。结果　 (1 )大鼠脑皮质和髓质含水量 :不同剂量染毒组大鼠脑皮质含水量分别为 76 .1 0 %± 1 .41 %、76 .45 %± 0 .75 %、79.95 %± 1 .45 % ,均高于对照组 (74.2 2 %± 1 .77% ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ;髓质含水量仅 2 0 .0g/m3组 (71 .77%± 3 .0 7% )有明显升高 ,差异有显著性(P <0 .0 5)。染毒后 2、4、6h脑皮质含水量分别为 79.36 %± 2 .1 0 %、79.48%± 1 .2 1 %、80 .64 %±1 .93 % ,均高于 1 0 .0g/m3即刻组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5)。 (2 ) 4种氨基酸递质含量 :不同剂量染毒组Asp含量分别为 (4.83± 0 .35)、(7.1 7± 0 .40 )、(1 0 .52± 0 .39) μmol/g ;Glu含量分别为 (2 3 .86± 0 .62 )、(31 .2 1± 2 .50 )、(2 8.2 3± 1 .58) μmol/g;Gly含量分别为 (5 .59±