F1k1胞外1—3区基因的克隆及核酸疫苗的构建

目的：克隆并构建小鼠F1k1胞外1—3区核酸疫苗，并检验疫苗引起特异性免疫反应的能力。方法：RT—PCR克隆F1k1胞外1—3区，构建核酸疫苗pcDNA3．1( )-F1k1Domainl-3，脂质体转染COS7细胞，western—bolt检测表达；疫苗免疫小鼠；以小鼠血管内皮细胞为靶细胞，以免疫的小鼠脾细胞作为效应细胞，采用标准4h^51Cr释放法计算CTL特异性杀伤率。结果：扩增出1252bp片段。疫苗DNA自动测序证明所获基因片段序列阅读框架正确。Western—blot检测转染疫苗的COS7细胞显示细胞中有分子质量为44kDa的蛋白表达；疫苗组与对照组比较，CTL杀伤率差异有显著性。结论：pcDNA3．1( )F1k1—Domainl-3核酸疫苗可有效的引起针对F1k1的免疫反应。     

HBV S基因重组体的构建及免疫小鼠的实验

目的 :探讨 HBV核酸免疫的可行性。方法 :采用 PCR技术 ,扩增得到编码 HBV HBs Ag的 S基因片段 ,将其插入到真核表达载体 pc DNA3,酶切鉴定并测序确证 ,得到质粒 pc DNA3- S,转染至 COS- 7细胞表达。将所构建的核酸疫苗免疫小鼠 ,观察其诱导产生的特异性体液免疫和细胞免疫功能。结果 :HBV S基因序列与文献报道一致 ,转染真核细胞后能表达目的蛋白。免疫小鼠后实验组和阳性对照组抗 - HBs阳性率分别为 70 % (7/ 10 )和 80 %(8/ 10 ) ,抗体水平分别为 (32 .14± 13.79) m IU/ ml和 (2 8.5 0± 11.87) m IU/ ml,两者比较无显著性差异 (P>0 .0 5 )。对照组和空白组抗 - HBs均为阴性 ,小于 10 m IU/ ml。实验组和阳性对照组的特异性 CTL杀伤率在效∶靶比为 2 0∶ 1时分别为 (35 .4 0± 4 .85 ) %和 (38.2 0± 7.6 9) % ,效∶靶比为 10∶ 1时则分别为 (2 3.95± 3.98) %和 (2 4 .5 5±3.5 9) % ,两者比较无显著性差异 (P>0 .0 5 )。对照组和空白组的 CTL杀伤率在效∶靶比为 2 0∶ 1和 10∶ 1时均小于 5 %。结论 :pc DNA3- S直接经肌肉免疫小鼠可诱导产生特异性体液和细胞免疫反应     

丙型肝炎病毒CTL-Th表位嵌合DNA疫苗的构建

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)CTL-Th表位嵌合DNA疫苗并探讨其体内免疫学效应。方法:基于我们前期从HCV中鉴定的4条HLA-A*0201限制性CTL(细胞毒性T细胞)表位(NS4b78-86、NS5a367-375、C181-189和NS2172-180),2条HLA-A*1101限制性CTL表位(NS3609-617和NS5b251-259),1条HLA-A*2402限制性CTL表位(NS5b382-390)和2条Th(辅助性T细胞)表位(P73-15和NS5A276-288),合成编码串联CTL表位和Th表位的基因并克隆入真核表达质粒pc DNATM3.1/myc-His(-)A;阳性重组质粒分别免疫HLA-A*0201、HLA-A*1101和HLA-A*2402转基因小鼠,采用ELISPOT实验和CTL杀伤实验检测小鼠脾细胞内单个CTL表位特异性T细胞的水平及其杀伤靶细胞的效应。结果:合成了含有Kozak序列和编码Igκ信号链序列、7条CTL表位、2条Th表位的基因序列并顺利克隆入了真核表达质粒。阳性重组质粒免疫三种转基因小鼠后,采用ELISPOT实验检测到小鼠脾细胞内存在单个CTL表位特异性分泌IFN-γ的CTL,后者可杀伤负载单个CTL表位的脾细胞。结论:成功构建了可诱导CTL反应的HCV的CTL-Th表位嵌合DNA疫苗。     

CD137L在HBsAg DNA疫苗诱导小鼠细胞免疫应答中的佐剂效应

目的:研究共刺激分子CD137L重组质粒对HBsAg DNA疫苗诱导小鼠细胞免疫应答和回忆反应的佐剂作用.方法:将小鼠CD137L真核表达载体(pcD137L)体外转染NIH3T3细胞,RT-PCR、流式细胞仪和免疫荧光法分别检测CD137L mRNA和蛋白的表达;pcD137L与HBsAg DNA疫苗(pcDS)通过肌肉注射联合免疫BALB/c小鼠,LDH释放法测定体外脾细胞特异性CTL杀伤活性;流式细胞仪分析小鼠脾脏CD8+记忆T细胞数量;流式细胞仪检测CD8+T细胞及淋巴细胞中IFN-γ和IL-4的表达水平.结果:重组质粒pcD137L在NIH3T3细胞中获得有效表达.与pcDS单独免疫组比较:免疫后1周,pcDS+pcD137L免疫组能诱导更强的HBsAg特异性CTL杀伤活性(P<0.05);免疫后1周和12周,pcDS+pcD137L免疫组CD8+T细胞CD44high和CD127表达水平均显著增高(P<0.05或P<0.01);免疫后1周、12周和13周(即再次给予pcDS刺激后1周),pcDS+pcD137L免疫组分别明显上调CD8+T细胞和淋巴细胞中IFN-γ产生细胞的百分比,差异有显著意义(均P<0.05).结论:共刺激分子CD137L能显著增强HBsAg DNA疫苗诱导的Tc1(I型)细胞免疫、特异性CTL应答及回忆反应,是诱导HBV特异性T细胞应答的有效佐剂.     

甲胎蛋白DNA疫苗的构建及诱导小鼠抗肿瘤免疫的实验研究

目的克隆小鼠甲胎蛋白(murineα-fetoprote in,mAFP)基因,构建mAFP DNA疫苗并检测其诱导mAFP特异性CTL反应及抗肿瘤免疫的能力。方法利用RT-PCR从Hepa 1-6细胞总RNA中克隆出mAFP基因,亚克隆于pcD-NA3.1中构建DNA疫苗pmAFP,酶切、测序和表达鉴定;pmAFP稳定转染EL-4细胞建立EL-4(mAFP)细胞系;pmAFP免疫小鼠,接种EL-4(mAFP)细胞,观察肿瘤生长情况;E lispot法检测免疫后小鼠脾脏细胞中产生IFN-γ的细胞频数;另外,对免疫的小鼠采血进行肝、肾功能检测。结果RT-PCR成功克隆出小鼠AFP基因;酶切、测序和表达鉴定证实DNA疫苗pmAFP构建成功;RT-PCR证实EL-4(mAFP)细胞中有mAFP mRNA的表达;pmAFP免疫组小鼠的肿瘤体积(1 042.42±123.71)mm3明显小于pcDNA3.1组(P<0.01)和PBS组(P<0.01);pmAFP免疫小鼠的脾脏细胞产生IFN-γ的细胞频数显著高于pcDNA3.1组(P<0.01)和PBS组(P<0.01)。各组肝、肾功能无显著差异。结论mAFP DNA疫苗构建成功,此疫苗能诱导AFP特异性的CTL增殖并诱导小鼠产生明显的抗肿瘤免疫力,对小鼠肝、肾功能不产生影响。     

两种HCV不同结构基因重组质粒DNA诱导免疫应答的比较研究

目的　探讨丙型肝炎病毒 (HCV)包膜基因 E1E2 ,对核心基因 C DNA疫苗诱生的免疫应答有无增强作用 .方法　构建包含HCV C或 CE1E2基因片段的真核表达载体 p HCV- C和 p HCV- CE1E2 ,分别接种于 BAL B/c小鼠股四头肌 (以空载体 pc DNA3作为对照 ) ,每间隔 2 wk加强免疫 1次 .用 EL ISA法检测免疫小鼠血清中抗 HCV C特异性抗体的产生 .以 p HCV- C转染并表达 HCc Ag的 Sp2 /0细胞为靶细胞 ,采用 5 1 Cr释放试验检测特异性 CTL的杀伤作用 .结果　两个实验组免疫的 2 0只小鼠均产生抗 HCV C特异性抗体 ,当效 /靶细胞比例为 10 0∶ 1时 ,CTL 的杀伤率均明显高于对照组 (P<0 .0 1) ;而 p HCV- CE1E2与 p HCV-C组之间 ,无论是抗 HCV C抗体的滴度还是 CTL的杀伤率均无显著性差异 (P>0 .0 5 ) .结论　 E1E2基因的加入 ,并没有增加HCV C基因 DNA疫苗诱导的抗 HCc Ag特异性抗体的滴度和 CTL 的杀伤作用 .     

融合DNA疫苗CRT180/HPV6E7的构建及其免疫学特性研究

目的 构建融合DNA疫苗CRT180/HPV6E7,并评价其体外实验和动物模型上的免疫学特性,尤其是抗病毒致病基因的特异性细胞免疫反应.方法 分别构建DNA重组体pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7,pcDNA3.1-CRT180,pcDNA3.1-HPV6E7.将pcDNA3.1-HPV6E7质粒经脂质体介导转染B16细胞,以G418筛选阳性细胞集落,荧光显微镜观察和RT-PCR鉴定表达HPV6E7的阳性细胞株.将质粒DNA肌注免疫C57BL/6小鼠,3次后取全血经流式细胞仪检测T细胞亚群的变化,LDH法检测小鼠的脾细胞和淋巴细胞与靶细胞B16/HPV6E7孵育后的CTL活性以及ELISA法检测共孵育上清中IL-2和IFN-γ浓度的变化.结果 各组质粒经鉴定表明构建正确.转染后细胞株稳定表达HPV6E7.DNA疫苗免疫小鼠后,pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7免疫组较pcDNA3.1-HPV6E7免疫组的外周血CD8 T细胞和TCRγδT细胞的比例显著增加,脾细胞和淋巴细胞针对靶细胞B16/HPV6E7的CTL杀伤活性更明显,分泌IL-2和IFN-γ的水平升高(P＜0.05).结论 CRT180与HPV致病基因6E7相连的重组质粒疫苗pcDNA3.1-CRT180/HPV6E7能引发小鼠T细胞亚群CD8 分化并诱导出显著的特异性CTL反应.推测CRT180/HPV6E7 DNA疫苗在动物模型上可以有效激活抗HPV特异性细胞免疫,有利于病毒感染的清除.     

IL-12对乙型肝炎DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的影响

目的　观察编码鼠 IL - 12的真核表达载体对 HBVDNA疫苗诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响 .方法　肌肉注射 DNA疫苗 ,EL ISA法检测小鼠血清抗 HBs,4h5 1 Cr释放法检测小鼠脾细胞 CTL杀伤活性 .结果　免疫 8wk后 ,单纯注射 p CR3.1- S及共注射 IL - 12真核表达载体的小鼠血清 45 0 nm A值分别为 0 .87± 0 .1及 1.6 7± 0 .15 .CTL 细胞杀伤活性分别为 (5 0 .5± 6 .4) %及 (73.3± 8.8) % ,两组均有明显差异 (P<0 .0 1) ,脾细胞悬液经抗 CD4+ 单克隆抗体处理后 CTL 细胞杀伤活性分别为 (48.3± 5 .9) % ,(75 . 6±9.1) % ,抗 CD8+单克隆抗体处理后分别为 (10 .6± 1.4) % ,(16 .9± 2 .3) % .结论　 IL - 12的真核表达载体能够提高小鼠对 DNA疫苗的免疫应答 ,CTL细胞杀伤活性主要由 CD8+执行 .基因疫苗可能用于预防及治疗 HBV感染     

GM-CSF表达质粒对pcDNA3/MDC-VP1 DNA疫苗的增强作用

目的:观察粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对pcDNA3/MDC-VP1DNA疫苗免疫作用的影响,为柯萨奇病毒B组3型(CVB3)疫苗的研制提供理论和实验依据。方法:4～6周龄雄性BALB/c小鼠随机分成pcDNA3组、pcDNA3/MDC-VP1组、pcDNA3/mGM-CSF组、pcDNA3/MDC-VP1与pcDNA3/mGM-CSF混合注射组,每组10只。每3周接种1次,共3次。每次接种的第20天眼眶采血,用微量中和试验(固定病毒-稀释血清法)检测血清中和抗体效价。第3次免疫后3周,每组取3只小鼠脾脏制备淋巴细胞悬液,检测淋巴细胞增殖活性与特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果:pcDNA3/MDC-VP1+pcDNA3/mGM-CSF组的血清中和抗体滴度明显提高,小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性均有增强。结论:GM-CSF可以增强pcDNA3/MDC-VP1DNA疫苗的特异性免疫应答。     

HIV-2 gp105重组疫苗联合免疫引起小鼠更强的免疫应答

目的：探讨应用prime-boost免疫策略进行HIV-2外膜蛋白重组鸡痘病毒与重组DNA疫苗联合免疫引起小鼠的免疫应答。方法：将HIV-2 gp105重组DNA疫苗与重组鸡痘病毒以prime-boost免疫策略,免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠脾CD4⁺、CD8⁺ T细胞亚群的数量、脾特异性CTL杀伤活性和血清抗 体滴度。结果：重组DNA疫苗和重组鸡痘病毒prime-boost免疫策略和两种疫苗单独免疫均刺激小鼠产生针对HIV-2靶细胞的特异性CTL杀伤活性及特异性抗体,联合免疫组特异性CTL杀伤活性及特异性抗体水平高于单独免疫组(P<0.05)。结论：以HIV-2 gp105重组DNA疫苗进行基础免疫、以HIV-2 gp105重组鸡痘病毒进行加强免疫的prime-boost免疫策略能诱导小鼠产生更强的特异性细胞和体液免疫应答。     

Anti-angiogenesis Effect on Glioma of Attenuated Salmonella Typhimurium Vaccine Strain with flk-1 Gene

To investigate the anti-vasculature effects and the anti-glioma effects of attenuated Salmonella typhimurium vaccine strain expressing VEGFR2 (flk-1) gene, plasmid pcDNA3, 1-flk1 was constructed and electro-transfected into live attenuated Salmonella typhimurium strain SL7207. Mouse models of intracranial G1261 glioblastoma were treated with an orally administered attenuated Salmonella typhimurium expressing flk-1 gene. The survival period was recorded and vessel density was observed by immunofluorescence. CTLs activity was measured by MTT assay. Our results showed that attenuated Salmonella typhimurium vaccine strain expressing flk-1 gene could significantly inhibit glioblastoma growth, reduce vessel density, prolong the survival period and improve the survival rate in these mice. The flk-1 specific CTLs activity was increased obviously after the vaccination. Our study showed that attenuated Salmonella typhlmurium vaccine strain expressing flk-1 gene could break peripheral immune tolerance a in glioma gainst this self-antigen and kill endothelial cells by the orally administered vaccine and can be used for both prophylactic and therapeutic purposes.     

单纯疱疹病毒1型截短糖蛋白B基因疫苗的构建及其诱导小鼠细胞免疫应答

目的:构建、制备单纯疱疹病毒1型截短糖蛋白B DNA疫苗，检测其诱导机体产生的细胞免疫应答效果。方法:利用PCR技术从HSV-1 SM44毒株基因组中扩增出编码HSV-1 gB14～507氨基酸序列的一段基因。定向插入真核表达质粒pcDNA₃载体中，构建出重组真核表达质粒pcDNA₃-gBt，并对其进行酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定。于BALB/c鼠注射免疫3次，抗体分析CD4⁺、CD8⁺T细胞亚群的变化，羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)/碘化丙碇(PI)双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果:PCR及测序鉴定结果显示，插入的克隆基因与GenBank中HSV-1F株gB基因序列一致，证实了HSV-1 gBt核酸疫苗的构建；pcDNA₃-gBt免疫组BALB/c鼠的CD4⁺T细胞数较空质粒（pcDNA₃）对照组和生理盐水对照组增加，CTL活性也较对照组明显增强，但是pcDNA₃-gBt免疫组BALB/c鼠的CD8⁺T细胞、CD4⁺/ CD8⁺T细胞比值与对照组比较差异均无显著性（P＞0.05）。结论:HSV-1 gBt核酸疫苗诱导较强的细胞免疫应答。     

Anti-angiogenesis effect on glioma of attenuated Salmonella typhimurium vaccine strain with flk-1 gene

Summary To investigate the anti-vasculature effects and the anti-glioma effects of attenuatedSalmonella typhimurium vaccine strain expressing VEGFR2 (flk-1) gene, plasmid pcDNA3, 1-flk1 was constructed and electro-transfected into live attenuatedSalmonella typhimurium strain SL7207. Mouse models of intracranial Gl261 glioblastoma were treated with an orally administered attenuatedSalmonella typhimurium expressing flk-1 gene. The survival period was recorded and vessel density was observed by immunofluorescence. CTLs activity was measured by MTT assay. Our results showed that attenuatedSalmonella typhimurium vaccine strain expressing flk-1 gene could significantly inhibit glioblastoma growth, reduce vessel density, prolong the survival period and improve the survival rate in these mice. The flk-1 specific CTLs activity was increased obviously after the vaccination. Our study showed that attenuatedSalmonella typhimurium vaccine strain expressing flk-1 gene could break peripheral immune tolerance a in glioma gainst this self-antigen and kill endothelial cells by the orally administered vaccine and can be used for both prophylactic and therapeutic purposes. FENG Keke, male, born in 1976, M. D., Ph. D.     

A型流感病毒HA(H1N1)基因真核表达载体的构建及序列分析

[目的]构建A型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因真核表达载体,研究其作为DNA疫苗的免疫效果。[方法]从流感病人体内分离流感病毒(A/Guangdong/376/2001/H1N1),提取RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增HA基因,先将其克隆到pMD18-T Vector,进行序列测定和分析;然后将HA基因亚克隆到真核表达载体(pCI-neo),进行鉴定。[结果]获得一个核苷酸长度为1698bp的基因,编码565个氨基酸;同源性比较结果表明:和A/Hong Kong/1131/98(GenBank/NCBI:AF386775)有98％同源,序列分析表明有10个氨基酸出现变异;酶切和序列测定表明HA基因正确插入pCI-neo载体(HA-pCIN)。[结论]HA基因真核表达载体的成功构建,可以进一步研究其免疫功能。     

抗肿瘤血管生成VEGFR2 DNA疫苗的构建

目的 构建一种新的抗肿瘤血管生成DNA疫苗pcDNA3．1＋／flk-1（nl-4）．方法 采用RT-PCR技术，从BALB／c胎鼠组织中扩增出鼠血管内皮生长因子受体flk-1胞外区1-4个袢的cDNA片段，并将其插入真核表达载体质粒pcDNA3．1＋中，构建成重组质粒pcDNA3．1＋／flk-1（nl-4），经DNA序列分析证实后，将重组质粒经脂质体法转染真核表达系统COS-7细胞，通过Western blot实验检测重组质粒在真核表达系统COS一7细胞中蛋白的表达．结果 RT-PCR扩增产物为1248bp大小的基因片段，经过DNA序列分析证明与GeneBank所公布的flk-1胞外区1-4结构域碱基一致，成功构建了重组质粒pcDNA3．1＋／ilk-1（nl-4），并且该重组质粒在真核表达系统COS-7细胞中成功得到表达．结论 成功地制备了抗肿瘤血管生成DNA疫苗pcDNA3．1＋／flk-1（nl-4），为进一步开展有关抗肿瘤血管生成的动物实验和临床应用奠定了基础。     

携带flk-l的减毒沙门疫苗菌抗胶质瘤血管生成的研究

目的观察表达鼠血管内皮生长因子受体2(VEGFR2,flk-1)的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌对胶质瘤荷瘤小鼠的抗肿瘤血管及肿瘤生长抑制作用。方法构建真核表达载体pcDNA3 1.-flk-l,通过电转化法将pcDNA3 1.-flk-1导入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,经由胃管饲于C57BL/6J小鼠,对胶质瘤荷瘤小鼠进行免疫预防及治疗。通过观察免疫动物的生存期,免疫荧光法检测肿瘤血管密度,评价重组疫苗菌的抗血管及肿瘤生长抑制作用。分离免疫小鼠的脾细胞,分析重组疫苗菌免疫后小鼠体内的特异性细胞毒性T细胞(CTL)应答。结果重组疫苗菌免疫能够明显减少肿瘤血管密度,延缓胶质瘤的生长,延长小鼠生存期,获得明显的抗肿瘤效果。重组疫苗菌免疫后可诱导小鼠脾淋巴细胞产生针对flk-l的CTL活性。结论表达鼠flk-l的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌经口服免疫,可打破小鼠对于自身抗原flk-1的免疫耐受,诱导小鼠产生抗flk-1的特异性免疫反应,特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞,预防和治疗小鼠胶质瘤。     

SARS冠状病毒S1基因的克隆及其植物表达载体的构建

目的:为获得抗SARS的转基因植物疫苗,进行了SARS S1基因的克隆,植物表达载体构建的研究。方法:根据SARS S蛋白受体结合结构域318-510氨基酸区域,设计合成长579 bp的序列片断(S1基因)。并以之为模板,进行PCR扩增,扩增产物被克隆至pGEM-Teasy载体进行序列测定。然后将S1基因插入植物表达载体pCAMB IA2301的35S启动子和NOS终止子之间,构建植物表达载体pCS1。将重组体转化大肠杆菌E.coliXL1,并对重组体进行了鉴定。结果:酶切鉴定和序列分析显示,克隆的目的基因与设计的片断序列一致;双酶切表明,植物表达载体的构建完全正确。结论:成功地克隆了S1基因和构建了含有S1基因的植物表达载体,为进一步获得抗SARS的转基因植物疫苗打下了基础。     

丙型肝炎病毒多CTL表位DNA疫苗免疫学特性的初步研究

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)疫苗研制并为抗HCV感染提供实验依据。方法:从HCV J株基因组中,选取小鼠(H-2d)CTL表位基因序列,以pcDNA3.1(+)质粒为载体,构建相应的真核表达质粒,经肌肉免疫后,取受免疫小鼠血清和脾细胞,用ELISA及MTT法检测小鼠血清中IL-2和IFN水平及小鼠脾细胞的增殖活性。结果:实验组小鼠血清中IL-2及IFN水平明显高于对照组[IL-2:(208±8.88)比(106±6.06);IFN:(179.5±2.52)比(90.5±2.52),P<0.05];实验组淋巴细胞增殖指数明显高于对照组(1.56比1.13,P<0.05)。结论:本实验构建的pcDNA3.1(+)/HCV CTL真核表达质粒,经肌肉免疫后可以使受免疫小鼠细胞免疫应答水平提高,淋巴细胞增殖活性增高。     

MAGE-3基因片段真核表达质粒的构建

目的克隆人MAGE-3基因片段，以构建真核重组表达质粒pcDNA3-1-MAGE-3，为制备以MAGE-3基因片段为基础的核酸疫苗及探讨相关的肿瘤免疫治疗提供实验依据。方法RT—PCR法从肝癌组织制备出含BamHI、EcoRI酶切位点的MAGE-3基因片段，pGEM-TEasy为克隆载体，pcDNA3，1为真核表达载体，采用DNA重组技术，将目的基因先克隆至pGEM—TEasy载体再亚克隆至pcDNA3．1载体上，然后，据氨苄青酶素（Amp）抗性、蓝白筛选实验、克隆鉴定引物T7／SP6PCR扩增方法鉴定阳性克隆，并对阳性克隆pcDNA3．1-MAGE-3中的插入序列进行DNA测序。结果扩增出了MAGE-3目的基因片段；经蓝白筛选实验、克隆鉴定引物扩增方法鉴定得到重组子pGEM—T—MAGE-3；引物扩增方法鉴定得到重组子pcD—NA3，1-MAGE-3;DNA测序后与GenBank中MAGE-3相应序列比较，结果完全一致。结论成功构建了重组pcDNA3．1-MAGE-3肿瘤核酸疫苗，为肿瘤免疫治疗提供了条件。