银杏叶提取物EGB761对阿尔茨海默病家兔模型ACAT1和LCAT mRNA表达的影响

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对阿尔茨海默(AD)病家兔模型胆固醇酰基转移酶(ACAT1)和卵磷脂-胆固醇酰基转移酶(LCAT)mRNA表达的影响。[方法]以2%高胆固醇饲料喂养雄性新西兰大白兔,建立AD家兔模型。模型建立后,用50 mg/(kg·d)EGB761灌胃3周作为EGB761组,以5 mg/(kg·d)辛伐他汀作为阳性药对照组。干预结束后,通过实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测海马卵磷脂-胆固醇酰基转移酶mRNA和胆固醇酰基转移酶1 mRNA的表达。[结果]银杏叶提取物EGB761可以下调ACAT1 mRNA的表达,不影响LCAT mRNA的表达。[结论]银杏叶提取物EGB761可下调AD家兔模型ACAT1 mRNA表达,对LCAT mRNA表达无调节作用。     

肌苷衍生物的碱基核糖化研究

目的研究N1-核糖肌苷衍生物的合成反应。方法用丙叉保护肌苷2′,3′-OH,单甲氧基三苯甲基保护5′-OH,在碳酸钾、18-冠醚-6作用下与2,3,5-O-三苄基-1-溴代核糖反应。结果反应得到N1-核糖肌苷衍生物。结论用酰基做保护基易发生酰基重排反应,改用丙叉保护肌苷2′,3′-OH,再用单甲氧基三苯甲基保护5′-OH与2,3,5-O-三苄基-1-溴代核糖在碳酸钾18-冠醚-6作用下得到目的物N1-(2,3,5-O-三苄基-D-核糖)-2′,3′-O-异亚丙基-5′-O-单甲氧基三苯甲基肌苷。     

神经肽Ghrelin和Nesfatin-1的研究进展

具有调节能量平衡和摄食功能的肽类激素Ghrelin和Nesfatin-1近年来被越来越多地证实参与、影响了学习、记忆、睡眠、癫痫等多种脑功能,已引起人们广泛的关注,成为研究的热点.     

ALCAT1缺失在KRAS诱导肺腺癌中的作用及机制研究

目的：探究心磷脂酰基转移酶 1(cardiolipin acyltransferase 1，ALCAT1)在 Kirsten 大鼠肉瘤病毒癌基因同源物 (Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog，KRAS)诱导的肺腺癌中的作用及机制。方法：动物实验：在CC10rtta?KRAS小鼠中敲除ALCAT1基因，并使用多西环素饮食诱导肺腺癌发生，通过微计算机断层扫描(micro?computed tomography，micro?CT)以及 HE染色分析小鼠肺腺癌的发生。细胞实验：将A549细胞分为对照组、Jenu组、缺氧组、缺氧+Jenu组，通过氯化钴(CoCl2)处理模拟缺氧条件，并使用ALCAT1抑制剂Jenu抑制其酶活性；试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平和乳酸水平， RT?PCR 和 Western blot 分析相关信号分子的 mRNA 转录以及蛋白表达。结果：动物实验结果显示，ALCAT1 缺失减缓小鼠肺腺癌发展，肺部肿瘤体积减小。细胞实验结果显示，Jenu显著降低缺氧条件下ROS 和乳酸的生成，并下调缺氧诱导因子 1α(hypoxia inducible factor 1α，HIF1α)表达以及Akt磷酸化水平。结论：ALCAT1缺失可以抑制ROS生成并下调HIF1α表达以及Akt磷酸化水平，从而改善肿瘤糖酵解代谢，最终减缓肺腺癌的发展。     

DGAT1基因K378N多态性与2型糖尿病及糖尿病肾病的关系

目的:探讨二酰基甘油酰基转移酶1(DGAT1) K378N基因多态性与中国人2型糖尿病(T2DM)及糖尿病肾病(DN)的关系. 方法: 运用荧光偏振-模板依赖的染料掺入反应法(TDI-FP)技术检测DGAT1 K378N基因多态性在71例T2DM患者[29例糖尿病肾病患者(DN 组)和42例糖尿病非肾病患者(DN-组)]和45例健康对照者中的等位基因和基因型分布频率. 结果:KK,KN和NN基因型在T2DM组的分布分别为:42, 40, 12例;DN 组:14, 11, 4例;DN-组:22, 14, 6例;正常对照组:13, 23, 9例. ① T2DM患者DGAT1 K378等位基因频率(66.0%)高于健康对照组(54.4%),但未达显著性水平;② DN 组与DN-组K378N等位基因及基因型分布无显著差异(P>0.05). 结论:K378等位基因频率在T2DM患者组有升高,但未见DGAT1 K378N基因多态性与中国人T2DM及DN发生的明显相关关系.     

日本蛇菰中咖啡酰基葡萄糖类化合物抑制HIV-1进入的机制

目的 研究从日本蛇菰中分离的咖啡酰基葡萄糖类化合物抑制HTV-1进入的作用机制.方法 利用HTV-1假病毒体系,并结合针对gp41包膜蛋白的ELISA以及分子对接方法,对日本蛇菰分离的咖啡酰基葡萄糖类化合物抑制HIV-1进入机制进行研究.结果 我们首先用HIV-1 Env假病毒来检测六个咖啡酰基葡萄糖类化合物(终浓度:25μg·ml-1)的抑制活性.发现1,2,6-三-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖(TCGP)和1,3-双-O-咖啡酰基-4-O-没食子酰-β-D-吡喃葡萄糖(DCGGP)具有较好的抑制病毒进入靶细胞的作用.进一步量效关系研究表明,两个化合物的病毒抑制活性呈剂量依赖性,它们的IC50值分别是(5.5±0.2)和(5.3±0.1)μg·ml-1.这两个化合物的抑制活性与其抑制gp41六螺旋束结构形成的机制有关.分子对接表明,它们均能靶向gp41上N-螺旋三聚体的靶穴位置.结论 1,2,6-三-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖(TCGP)和1,3-双-O-咖啡酰基-4-O-没食子酰-β-D-吡喃葡萄糖(DCGGP)可以较好的抑制HIV-1 Env假病毒感染靶细胞,可作为先导化合物来研发抗HIV-1新药.     

组蛋白乙酰化转移酶亚型类固醇受体共激活因子1在发育心脏的时空表达

目的研究组蛋白乙酰化转移酶亚型类固醇受体共激活因子1(SRC1)在小鼠心脏中的时空表达规律,初步探讨其与心脏发生发育的关系。方法取胎龄E7.5～18、出生1d和3个月成年小鼠正常心脏,每个时间点选9个标本,采用免疫组织化学SP法观察SRC1蛋白在不同发育阶段心脏的空间表达;每个时间点选6组标本,利用蛋白质印迹分析技术检测其在小鼠心脏发育过程中时序性表达变化。结果免疫组织化学结果显示,SRC1蛋白在E7.5胚胎心脏原基中不表达;E8.5～E9.5心管中微弱表达;E10.5后心脏发育各时期,小梁弱表达,心脏其他区域均有较强而广泛表达。蛋白质印迹分析结果显示,E10.5以后的心脏发育阶段,SRC1蛋白在E10.5较低表达,与E11.5、E12.5相比表达差异有统计学意义(P<0.05),与其他发育时间点相比表达差异无统计学意义(P>0.05);E11.5～E12.5达到表达高峰,此两个发育时间点相比表达差异无统计学意义(P>0.05),与其他发育时间点相比表达差异有统计学意义(P<0.05);此后表达下降并持续低表达至成年鼠期,此阶段表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SRC1蛋白广泛表达于E8.5后的发育...     

12-脂氧化酶影响胃癌细胞AGS中P21及bcl-2的表达

目的 研究12-脂氧化酶(12-LOX)对胃癌细胞中P21、bcl-2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2) 表达的影响及与ERK1/2信号传导通路的关系.方法 胃癌细胞AGS常规培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中24 h至对数生长期,改用无血清RPMI-1640培养基培养24 h加入干预药物.P21...     

奥曲肽抑制人胃癌细胞株MKN45的生长

目的 探讨奥曲肽（Octreotide,OCT)对人胃癌细胞株MKN45生长的调控作用。方法 采用MTT比色分析法分别测定OCT对生长于无血清培养基及含10％胎牛血清（FBS）培养基中MKN45细胞的调控作用。结果 OCT10^-2,10^-3,10^-4g/L对培养于无血清培养基中的MKN45的生长均有抑制作用，以10^-3g/L浓度的抑制作用最显著，为10．4％；而OCT10^-2,10^-3,10^-4,10^-5,10^-6g/L对生长于含10％FBS培养基中的MKN45均未显示出抑制作用。结论 OCT可抑制无血清培养基中的MKN45的生长。胎牛血清中可能含有可快速降解OCT的肽酶，使得OCT未显示出对生长于含10％FBS培养基中的MKN45的抑制作用。     

人外周血来源的成熟树突状细胞的体外无血清培养

目的探讨无血清条件下健康人外周血单个核细胞（PBMC）快速诱导生成成熟树突状细胞（dendritic cell,DC）的体外培养方法。方法分离获取健康者外周血PBMC,将细胞分为血清组和无血清组：设血清组A组为对照组,B、C、D组为无血清组。A组加入10%FCS的RPMI1640完全培养液,B组加入单核/巨噬细胞无血清培养液MΦ-SFM,两组均加入rhGM-CSF＋IL-4＋rhTNF-α培养9d;C组加入钙离子载体（CI）A23187,D组加入rhGM-CSF＋A23187,两组细胞均培养于MΦ-SFM中48h。于倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞术分析细胞表型,MTT比色法检测各组细胞刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。结果在无血清条件下,单独给予A23187或A23187＋rhGM-CSF联合刺激48h,均可诱导PBMC分化成具有典型形态的DC;与血清组细胞相比,细胞表面标志CD80、CD86和CD83分子具有相似的高表达（P〉0.05）,对同种异体T淋巴细胞的刺激能力无显著性差异（P〉0.05）。结论在无血清培养条件下配合使用钙离子载体A23187,可以更快速、有效地诱导健康人PBMC分化成更成熟、功能更强的DC。     

12-脂氧化酶影响胃癌细胞株AGS蛋白激酶C活性

目的 研究胃癌细胞中蛋白激酶C(PKC)活化与12-脂氧化酶(12-LOX)的关系.方法 胃癌细胞株AGS于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中常规培养,AGS细胞培养24 h至对数生长期改用无血清RPMI 1640培养基培养24 h加入干预药物.PKC活性采用非同位素标记法测定.分别采用12-LOX催化合成产物12-羟基廿碳四烯酸(12-HETE)及12-LOX特异性抑制剂--黄芩素干预AGS细胞,测定其PKC活性变化.结果 AGS细胞经12-HETE干预后PKC活性明显增高,而经黄芩素干预后PKC活性明显下降,且呈时间、剂量依赖性.结论 12-LOX对PKC活性具有调节作用;PKC参与了12-LOX影响胃癌细胞增殖凋亡的信号传导.     

葡萄糖和胰岛素对SW480肿瘤细胞分泌IGF-1的影响

目的本实验模拟2型糖尿病病程中葡萄糖、胰岛素的浓度改变,研究不同浓度的葡萄糖、胰岛素对SW480肿瘤细胞分泌IGF-1的影响。方法体外培养SW480肿瘤细胞。依据培养液中加入葡萄糖、胰岛素浓度的不同,将实验细胞分为六组：0组（对照组）：RPMI1640细胞培养液;第1组：RPMI1640细胞培养液＋5mmol／L葡萄糖和5uIU／ml胰岛素;第2组：RPMI1640细胞培养液＋5mmol／L葡萄糖和125gIU／ml胰岛素;第3组：RPMI1640细胞培养液＋25mmol／L葡萄糖和125uIU／ml胰岛素;第4组：RPMI1640细胞培养液＋25mmol／L葡萄糖和5uIU／ml胰岛素;第5组：RPMI1640细胞培养液＋25mmol／L葡萄糖和1．25uIU／ml胰岛素。每个组设3个复孔,于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中培养48h,培养结束后,收集细胞培养上清,用ELISA方法检测IGF-1的浓度。结果在高浓度的胰岛素组（第2组、第3组,培养液中均含有125uIU／ml的胰岛素）IGF-1的浓度[（286．85±23．51）ug／L、（293．43±30．57）ug／L]高于对照组0组[（197．99±22．50）ug／L],差异有统计学意义（F=9．726,P〈0．01）;而第1、4、5组（培养液中分别含有5uIU／ml、5uIU／ml、1．25uIU／ml的胰岛素）IGF-1的浓度[（203．22±28．89）ug／L、（209．47±25．77）ug/L、（195．33±20．88ug/L）]与对照组0组相比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论高浓度的胰岛素能够上调SW480肿瘤细胞IGF-1的表达。     

洛伐他汀对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞MCP-1和IL-10表达的影响

目的：观察洛伐他汀(LVT)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)和白细胞介素-10 (IL-10)表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法：体外常规培养HUVECs,分为对照组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液培养;TNF-α处理组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液+TNF-α (20 μg/L) 处理;应用活性氧检测试剂盒检测活性氧含量;LVT干预组,用含10% FBS的 RPMI 1640 培养液+TNF-α (20 μg/L)+LVT (10 μmol/L) 处理。实时定量RT-PCR方法检测各组细胞MCP-1和IL-10 mRNA的表达;Western blotting方法检测各组HUVECs内MCP-1、IL-10和NF-κB蛋白表达。结果：与对照组相比较,TNF-α处理组ROS含量明显增高 (P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组ROS含量明显降低(P<0.05);与对照组比较,TNF-α处理组MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组细胞MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论：LVT抑制HUVECs中TNF-α诱导的MCP-1 mRNA和蛋白上调,增强IL-10蛋白表达。LVT可能通过NF-κB途径对抗炎症反应从而防止AS的形成。
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纳米SiO2粒子特性及其在无细胞体系中氧化能力的检测及意义

目的：检测纳米SiO₂粒子的特性及其在无细胞体系中的氧化能力,为医用纳米SiO₂粒子体内外毒性的预测提供依据。方法：用透射电镜观测2种纳米SiO₂粒子粒径、分散性、形状;用Zeta电位粒度分析仪检测纳米粒子在不同介质（纯水、生理盐水、10% Tween 80溶液、RPMI 1640培养液、含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液,超声30 s）溶液及不同时间（0、24、48和72 h）的粒径分布及团聚状态;用ＤDCFH-DA法Ｆ检测粒子在无细胞体系中自发产生自由基的能力。结果：电镜结果显示,2种纳米SiO₂粒子均呈球形,大小一致,分布均匀、分散性好,粒子平均粒径分别为（43.0±4.2）和（68.0±5.7）nm;在纯水、生理盐水、10% Tween 80溶液、RPMI 1640培养液及含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液中,Si-43 nm及Si-68 nm 粒子粒径变化很大,其中在生理盐水中的粒径最接近电镜结果,为74.0和96.7 nm。超声30 s后0、24、48和72 h时,Si-43 nm及Si-68 nm粒子粒径在生理盐水中不发生团聚;在含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液中发生团聚,形成相似大小的团聚体;在30~100 μg的质量范围内,2种粒子自发产生自由基的能力相似但很弱,相当于2.5 μmol•L^-1左右H₂O₂当量。结论：一定粒径的纳米SiO₂在细胞培养液中形成大粒径团聚体,粒子自身只有较弱的自发产生自由基的能力。     

ACAT-1在单核细胞向泡沫细胞分化过程中的表达变化

目的研究单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)表达及活性的变化。方法复苏、培养人单核细胞株THP-1细胞,与乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、PMA+氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育1～4 d,RT-PCR方法检测单核细胞分化过程中ACAT-1 mRNA表达,Westernblotting检测ACAT-1蛋白表达的变化。结果(1)单核细胞复苏后加入PMA诱导48 h后,分化为巨噬细胞。经PMA+ox-LDL诱导24 h后分化为泡沫细胞。(2)与无血清培养单核细胞对照组比较,在PMA诱导单核细胞株THP-1向巨噬细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平明显增高(P<0.05),呈时间依赖效应。(3)巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平增高,呈时间依赖效应。但和无血清培养巨噬细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单核细胞株THP-1经PMA,PMA/ox-LDL诱导后,可分化为巨噬细胞、泡沫细胞。ACAT-1的表达及活性增高在单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中起着重要作用。     

A771726对经PMA活化的THP-1细胞MMP-2及MMP-9表达的影响

目的 观察来氟米特活性代谢产物A771726对经PMA活化的THP-1细胞MMP-2及MMP-9表达的影响。方法 THP-1细胞悬浮生长于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中。细胞密度达5×105·ml-1时用于实验。THP-1细胞经PMA刺激24h（诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞）后,细胞进行无血清化处理12h,继而加入不同剂量的A771726（5ug/mL、15 ug/mL 、45ug/mL）,干预24h。实时荧光定量PCR检测细胞MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,明胶酶谱法检测细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9的活性。结果 细胞经不同浓度的A771726（5ug/mL、15 ug/mL 、45ug/mL）处理后,MMP-2、MMP-9 mRNA表达量均有下降(P＜0.01) 。中、高剂量的A771726（15 ug/mL 、45ug/mL）可降低PMA活化的THP-1细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9活性(P＜0.01)。结论 来氟米特活性代谢产物A771726可以降低经PMA活化的THP-1细胞MMP-2及MMP-9的表达。