丹酚酸B促进卵巢早衰小鼠卵泡发育的研究

目的：探究丹酚酸B对卵巢早衰模型小鼠卵泡发育的影响。方法：选取27只6周龄雌性昆明小鼠,按照随机数字表法分为对照组、模型组和实验组,每组9只,对每只小鼠均给药,定期测量体重,给药结束后收集小鼠血清和卵巢组织。ELISA检测血清E2、AMH和FSH水平;HE染色观察卵巢窦状卵泡;免疫组化检测颗粒细胞PCNA的表达;TUNEL检测卵巢颗粒细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR和Western blot测定卵巢组织中Bcl-2和Bax mRNA表达和其蛋白表达情况。结果：模型组小鼠体重明显低于对照组和实验组(P<0.05);与模型组比较,实验组血清E2和AMH水平升高且FSH水平降低,窦状卵泡数量增多,颗粒细胞中PCNA与Bcl-2表达增加,同时Bax表达减少,凋亡细胞数量减少(P<0.05)。结论：丹酚酸B能抑制卵巢早衰小鼠颗粒细胞凋亡,促进卵泡发育。     

卵巢早衰卵泡膜功能的研究进展

卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)是一种性腺衰竭的病症,其特征是闭经、低雌激素血症和高促性腺激素血症,POF主要存在于40岁以下的女性中,发生率为1%~3%。尽管大多数POF的病因仍然是特发性和未知的,但近期已有大量研究指出,女性胚胎期和出生后的卵泡膜功能被破坏会导致异常的卵泡形成和生长,致使原始卵泡发育障碍,从而诱发女性卵巢早衰。因此,本文对POF卵泡膜功能的研究进展进行综述,以期为POF疾病的病因学和治疗学的未来发展提供参考。     

地贞颗粒对幼鼠卵泡颗粒细胞凋亡的影响

采秀25d雌性幼鼠皮下注射孕与血清促性腺激素（PMSG)15u制作颗粒细胞凋亡模型,通过原位末端标记法观察地贞颗粒和己烯雌酚（DES）对该调亡模型的影响。结果显示也贞颗粒给药后第3d和第5d时间点比模型组卵巢内凋亡的卵泡减少,而DES则几乎完全抑制颗粒凋亡的发生。提示地贞颗粒对卵泡颗粒细胞凋亡有轻度抑制作用。     

滋阴活血法对卵巢早衰小鼠卵泡颗粒细胞凋亡的影响

【立论依据】 在中医滋阴活血理论的指导下,采用具有滋阴活血作用的补肾活血方对卵巢早衰小鼠进行研究,检测其卵泡颗粒细胞凋亡情况,阐明滋阴活血法对卵泡颗粒细胞凋亡影响的机制,为临床治疗卵巢早衰提供新的方法思路。 【设计思路】 (1)以雷公藤多甙片造成卵巢早衰为模型,随机将清洁级雌性小鼠分为空白组、模型组、西药物组、中药组。(2)给药:根据小鼠与人的体表面积进行换算后灌胃给药治疗15 d。(3)指标检测:摘取卵巢,子宫,胸腺组织称重计算脏器指数;病理形态学观察卵巢内正常卵泡和闭锁卵泡的形态变化;放免法检测E2、FSH、LH激素水平;RT-PCR法检测Fas和Fas-L的mRNA表达情况。 【实验内容】 研究滋阴活血法对卵巢早衰小鼠卵泡的作用;对卵巢早衰小鼠卵巢、子宫脏器指数的干预;对卵巢早衰小鼠E2、FSH、LH激素水平的调节;对卵巢早衰小鼠 Fas和Fas-L的mRNA表达的影响。 【材料】 清洁级雌性小鼠;药物:补肾活血方组药、补佳乐、雷公藤;灌胃针、离心机、清洁试验台、RNA提取试剂盒、PCR仪、移液器等。 【可行性】 (1)补肾活血方具有补肾、活血、软坚的功效,可改善肾虚血淤所致病理变化,具有调节下丘脑-垂体-卵巢-性腺轴,促进卵巢分泌E2,抑制卵巢卵泡细胞凋亡,增强机体免疫力等作用。(2)本组成员跟随老师进行课题研究,具有一定的科研基础和实验能力,并已学习过生化、免疫,组胚及病理学课程,掌握了与本项目密切相关的形态学、免疫组织、分子生物学技术。(3)所需试剂、仪器、材料,医学基础实验中心基本都有配备,这为研究提供了硬件的保障,同时具备SPF级实验中心。 【创新性】 (1)治法新用:该研究从滋补肝肾阴虚,养血活血着手研究凋亡机制,为临床治疗卵巢早衰提供新的思路。(2)Fas/Fas-L介导的凋亡新用。     

镉对小鼠卵泡颗粒细胞凋亡的影响

目的：主要研究镉对卵泡颗粒细胞凋亡和DNA完整性的影响。方法通过向培养液中添加不同浓度的CdCl2使小鼠卵泡颗粒细胞处于Cd暴露的条件下,采用流式细胞术、 DNA Ladder和台盼蓝染色的方法检测细胞的凋亡和DNA完整性。结果低浓度(5μM)的CdCl2处理细胞24 h可引起小鼠细胞的大量死亡,高浓度(20μM和50μM) CdCl2处理颗粒细胞12 h即可引起细胞的大量死亡;流式细胞术结果显示, CdCl2处理颗粒细胞后,随着Cd浓度的增加,无论凋亡早期、凋亡后期和死细胞所占比例都会极显著的增加(P<0.01); Cd引起的细胞凋亡过程中伴随着DNA的片段化。结论5μM的镉即可引起小鼠颗粒细胞的凋亡,进而可能影响小鼠卵巢的正常正理功能。     

怕诊断卵巢颗粒细胞—卵泡膜细胞瘤1例

患者 ,女 ,33岁 ,因月经紊乱 2年 ,发现盆腔包块 1年入院。两年前出现月经紊乱 ,表现为月经周期、经期时间不等 ,经量不一 ,1年前Ｂ超检查发现盆腔包块 ,随访中包块逐渐长大。入院检查 :一般情况好 ,生命体征平稳 ,心肺无异常 ,肝脾未扪及。妇科检查 :外阴发育正常 ,已婚生育型 ,阴道通畅 ,宫颈光滑 ,子宫前位 ,正常大小。右附件区扪及一个约7ｃｍ× 5ｃｍ× 3ｃｍ包块 ,活动 ,质稍硬。入院诊断 :右卵巢肿瘤。超声检查 :于右附件区探及一个实质性椭圆形低回声包块 ,边界清楚 ,规则 ,大小约 6ｃｍ× 5 3ｃｍ×3ｃｍ ,内部可见多个散在的低回…     

卵巢颗粒细胞瘤及卵泡膜细胞瘤临床病理分析

通过随访，病理复查，单变量及多因素逐步回归分析，探讨５２例卵巢颗粒细胞瘤及卵泡膜细胞瘤的转移，复发及死亡率，判断其恶性程度和预后，结果显示，颗粒细胞瘤３９例，术后转移复发死亡率低于其它类卵巢恶性肿瘤，早期预后好，晚期预后类似其它类卵巢恶性肿瘤，预后与临床分期，病理类型及其分级，病程，手术种类及化疗均有关，卵泡膜细胞瘤１３例无复发死亡。     

卵泡发育过程中的细胞间通讯

卵泡的良好发育对女性生殖至关重要。其发育是一个复杂的过程,从卵泡的形成到卵泡发育成熟并排卵的过程在很大程度上依赖于卵泡内的生殖细胞和体细胞这两种主要细胞类型之间的通讯合作。近年来,有越来越多的研究发现在卵泡中存在着一种旁分泌途径-间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)。它由连接蛋白(connexin,Cx)介导,在参与卵泡的启动、窦卵泡腔的形成、卵母细胞的减数分裂等方面发挥着重要作用。故本文旨在通过细胞间通讯探索卵泡发育过程中细胞交互的机制,为提高女性生殖能力提供新思路。     

双酚A对卵泡发育影响的研究进展

双酚A是人们普遍接触的一类环境类雌激素.研究发现不同浓度的双酚A会影响不同阶段的卵泡发育,且影响卵泡对类固醇激素的合成和分泌.为进一步阐明双酚A对卵巢卵泡发育的干扰机制,本文从颗粒细胞增殖、激素合成、卵母细胞减数分裂和卵泡凋亡等方面展开了综述,探讨了双酚A的影响作用,为人类预防双酚A对生殖系统的损伤提供借鉴.     

MXC对小鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的:研究甲氧滴滴涕(MXC)对颗粒细胞凋亡的影响,探讨MXC对雌性小鼠性腺毒性的作用机制.方法:以孕马血清(PMSG)处理的雌性昆明小鼠为模型,制备颗粒细胞悬液,以不同浓度的MXC(1.25,2.50,5.00和10.00μg/mL)对其作用24,48 h后,应用TUNEL法及流式细胞术,检测MXC对离体培养颗粒细胞凋亡的影响.结果:体外培养的颗粒细胞存在自发性凋亡,对照组和MXC不同浓度实验组的颗粒细胞都有不同程度的体积变小、细胞浓缩、变圆、离壁等类似凋亡的特征.MXC 1.25μg/mL浓度组凋亡的颗粒细胞最少,其余3个实验组随MXC浓度的升高,凋亡细胞也逐渐增多,MXC 10.00μg/mL浓度组的颗粒细胞凋亡数量显著高于对照组和其他各组(P<0.05).采用3'-末端原位标记法在细胞中检测到棕色深染的凋亡颗粒细胞;流式细胞术分析结果显示处于早期凋亡的细胞所占百分率明显升高(最高达53.5%).结论:环境污染物高浓度MXC可抑制除血清后体外培养的颗粒细胞生长,导致颗粒细胞凋亡,它的作用是双向的并具有剂量依赖性.     

卵巢颗粒细胞瘤及卵泡膜细胞瘤临床病理分析

通过随访、病理复查、单变量及多因素逐步回归分析，探讨５２例卵巢颗粒细胞瘤及卵泡膜细胞瘤的转移、复发及死亡率，判断其恶性程度和预后。结果显示：颗粒细胞瘤３９例，术后转移复发死亡率低于其它类卵巢恶性肿瘤。早期预后好，晚期预后类似其它类卵巢恶性肿瘤。预后与临床分期、病理类型及其分级、病程、手术种类及化疗均有关。卵泡膜细胞瘤１３例无复发死亡。     

糖皮质激素或雄激素治疗自身免疫性卵巢早衰小鼠

目的：利用自身免疫性卵巢早衰（premature ovary failure, POF）小鼠模型,为临床采用糖皮质激素和雄激素治疗自身免疫性POF提供理论依据。方法：利用小鼠Pzp3诱发小鼠卵巢发生自身免疫反应,制作成自身免疫性卵巢早衰动物模型。选择60只模型小鼠,随机均分为3组：治疗组分别给以糖皮质激素、雄激素治疗,对照组给以注射三蒸水。以性周期的改变、血清抗透明带抗体浓度、病理学检查及免疫组织化学法检测卵巢组织中CD45阳性细胞的浸润程度作为疗效观察指标,判断分析其治疗效果。结果：性周期正常者两治疗组与对照组均存在显著差异（P＜0.01）。两治疗组小鼠血清抗透明带抗体平均浓度均明显低于对照组（P＜0.01）;糖皮质激素组明显高于雄激素组（P＜0.01）。两治疗组小鼠组织学检查生长卵泡比例均明显高于对照组（P＜0.01）。两治疗组小鼠CD45阳性细胞浸润的比例均明显低于对照组（P＜0.01）。结论：糖皮质激素和雄激素均能显著改善自身免疫性卵巢早衰小鼠的病情,二者的治疗效果相似。     

脐带基质干细胞移植在卵巢早衰模型小鼠体内的分布

目的观察人脐带基质干细胞(umbilical cord-matrix stem cells,UC-MSCs)移植后在卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)小鼠模型中的分布与生长情况。方法用环磷酰胺(cyclophosphamide,CPA)和白消安(busulfan,BUS)处理,建立小鼠POF模型;分离扩增UC-MSCs,采用腺病毒介导Ad-GFP转染方式对其进行标记;将GFP阳性细胞移植入POF小鼠体内,分别于移植后1、10、20 d留取组织,通过激光共聚焦显微镜观察UC-MSCs在小鼠卵巢及其他组织中的定位与生长情况。结果腺病毒介导Ad-GFP转染UC-MSCs效率达95%左右。POF小鼠经尾静脉接受UC-MSCs移植后1 d,卵巢可见GFP阳性细胞,移植后10 d及20 d的卵巢GFP阳性细胞明显增加,而小鼠骨髓、大脑、肝脏、肾脏、胰腺等组织无明显GFP阳性细胞存在。结论人UC-MSCs经尾静脉移植可向POF小鼠卵巢归巢,并能在局部存活生长,提示其可能具有卵巢损伤修复的作用。     

补肾活血方对免疫性卵巢早衰小鼠卵泡凋亡相关蛋白的影响

目的研究补肾活血方对卵巢早衰(POF)小鼠卵泡凋亡调控相关基因的表达,为临床中医药预防和治疗卵巢早衰提供思路。方法采用透明带3作抗原,对BALB/c雌性小鼠皮下多点注射,建立免疫性POF模型。用补肾活血方低、中、高剂量进行治疗,设倍美力为阳性对照药,采用ELISA法测定外周血清抗透明带抗体(AzpAb)的含量,进行脏器指数及卵巢病理学观察,免疫组织化学SABC法检测卵泡凋亡调控基因(bcl-2/Bax)表达变化。结果与空白组比较,模型组AzpAb表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,各剂量组、倍美力组表达均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);与空白组比较,模型组卵巢指数、胸腺指数均明显下降,脾脏指数明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),与模型组比较,高剂组和倍美力组卵巢指数(P<0.01)、胸腺指数(P<0.05)增加,脾脏指数降低(P<0.05);与空白组比较,模型组bcl-2蛋白表达明显下降、Bax蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.01),与模型组比较,各剂量组、倍美力组bcl-2蛋白表达明显增高(P<0.01),Bax蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论补肾活血方可能通过调节凋亡调控基因(bcl-2/Bax)的表达,使AzpAb表达明显下降,从而调节免疫反应,抑制抗体集聚,阻止卵泡的过度凋亡,改善卵巢的免疫功能,使有生机卵泡增加,淋巴细胞、浆细胞浸润减少,达到抑制自身免疫损伤、保护卵巢、改善卵巢功能的目的。     

线粒体通透性转换孔在慢性心力衰竭中的作用及n-3PUFA的保护机制

目的 观察线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeablity transition pore, MPTP)在慢性心力衰竭模型中的作用,并初步探讨n-3PUFA的干预作用及其可能机制。方法 采用阿霉素腹腔注射Wistar大鼠建立心力衰竭模型。正常对照组10只,青年和老年心力衰竭组各20只(安慰剂组和n-3PUFA组各10只)。进行超声心动图心功能检测和心肌病理组织学检查;ELISA法检测各组大鼠血清中BNP的表达;提取心肌线粒体,检测膜电位和MPTP孔活性;TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数;免疫组化法检测各组大鼠左心室心肌细胞Cleaved-Caspase3的表达。结果 n-3PUFA治疗组与安慰剂组相比,各项心功能指标均明显改善,LVEDD和LVESD明显降低,LVEF及LVFS明显升高(P<0.05),而且心肌损害明显减轻,血清BNP明显降低(P<0.05)。心力衰竭组与对照组相比,心肌线粒体膜电位降低,MPTP孔活性增加,通透性增强,心肌细胞凋亡指数增加,心肌Cleaved-Caspase3蛋白表达升高(P<0.05)。n-3PUFA治疗组与安慰剂组相比,心肌线粒体膜电位增加,MPTP孔活性降低,通透性降低,心肌细胞凋亡指数降低,心肌Cleaved-Caspase3表达下调(P<0.05)。结论 n-3PUFA可能通过抑制心肌线粒体MPTP孔活性,抑制心肌细胞凋亡,有效改善年心力衰竭模型的心功能。     

骨髓来源间充质干细胞对卵巢早衰小鼠的修复作用

目的：研究小鼠同种异体骨髓来源间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在环磷 酰胺诱导的小鼠卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)损伤中的修复作用及其机制。方法：分离培养小鼠BMSCs, 应用流式细胞术检测BMSCs表面标志;小鼠腹腔注射50 mg/(kg.d)环磷酰胺,连续15 d,建立POF模型。建模后第7 天,按每只小鼠2×106个BMSCs尾静脉注射移植到POF模型小鼠体内;移植后第7天,采用HE染色观察细胞移植治疗 后小鼠卵巢结构变化,RT-PCR检测BMSCs移植对POF小鼠卵泡发育相关基因mRNA表达的影响。结果：BMSCs高表达 间充质干细胞标志CD29和CD90,低表达内皮细胞标志标志CD31和造血干/祖细胞标志CD34。POF模型小鼠各级发育 卵泡数量明显减少,闭锁卵泡数量明显增加(P<0.05),颗粒细胞凋亡降解。与对照组比较,BMSCs移植组小鼠卵巢窦 状卵泡和次级卵泡数量明显增加,闭锁卵泡数量明显减少(P<0.05),颗粒细胞数量明显增加,但原始卵泡和初级卵泡 数量两组间差异无统计学意义(P>0.05);BMSCs移植组卵巢组织卵泡发育相关基因Nano3,Nobox,Lhx8 mRNA水平明 显高于对照组(P<0.05)。结论：BMSCs能促进POF小鼠卵泡发育和卵巢组织结构恢复。     

血液滤过对脓毒症犬脂代谢的影响

目的 探讨血液滤过(HF)对脓毒症犬脂代谢的影响.方法 健康雄性犬45只,随机分为对照组、脓毒症组和血液滤过组,每组15只.应用大肠杆菌内毒素(LPS)复制犬内毒素休克模型,检测脓毒症时血中游离脂肪酸(FFA)和多不饱和脂肪酸水平,并观测血液滤过对上述指标的影响.结果 脓毒症时,属于游离脂肪酸的棕榈油酸、亚油酸、软脂酸水平明显降低,在行血液滤过后升高(P＜0.05);而多不饱和脂肪酸亚麻酸、二十二碳六烯酸在脓毒症时升高,经血液滤过后水平降低(P＜0.05).结论 血液滤过能够调节血中游离脂肪酸和多不饱和脂肪酸的浓度,改善机体的脂代谢.     

MSH5基因C85T多态性与卵巢早衰的相关性分析

目的:探讨错配修复蛋白基因MSH5基因C85T多态性与卵巢早衰(premature ovary failure,POF)发病的关系。方法:应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RELF)技术,对65例卵巢早衰患者(POF患者组)和66例健康对照者(对照组)MSH5基因C85T多态性进行分析,并随机抽取50%样本测序进行验证。结果:(1)正常对照组MSH5基因C85T多态性CC、CT、TT基因型频率分别为77.3%、19.7%、3.0%,POF患者组分别为80.0%、18.5%、1.5%;两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);对照组等位基因C、T频率分别为87.1%、12.9%,POF患者组分别为89.2%、10.8%,两组比较,差异也无统计学意义(P>0.05)。(2)DNA测序结果与PCR-RELF结果完全一致。结论:MSH5基因C85T多态性与POF发病无关。     

海藻酸联合福辛普利对腺嘌呤诱导大鼠慢性肾衰的影响

目的：探讨海藻酸（ALG）与福辛普利联合对腺漂呤所致慢性肾衰的影响。方法：腺嘌呤诱导大鼠慢性肾衰，用ALG及ALG联合福辛普利干预，28d后观察大鼠肾脏病理改变，测血生化及转化生长因子β1（TGF－β1）。结果：ALG及ALG联合福辛普利使腺嘌所致大鼠血BUN，Scr及TGF0β1下降，肾脏病理损害减轻，ALG联合较大剂量福辛普利作用更强。结论：ALG与福辛普利联合对腺嘌呤所致大鼠慢性肾衰保护作用较单用ALG强。     

慢性心力衰竭患者血清胆固醇酯脂肪酸组成的变化

目的 :探讨慢性心力衰竭 (CHF)患者血清胆固醇酯脂肪酸组成的变化。方法 :采取空腹静脉血测定CHF患者血清TG ,TC ,HDL和LDL水平 ,采用高效液相色谱法测定血清胆固醇酯脂肪酸的组成 ,并与健康对照组进行比较。结果 :两组间血清TC ,TG ,HDL和LDL水平均差异无显著性 ;CHF患者血清胆固醇酯脂肪酸组成中花生四烯酸含量明显降低 (P <0 .0 5 ) ,而亚油酸含量明显增高 (P <0 .0 5 )。结论 :CHF可导致血清胆固醇酯脂肪酸组成发生变化。