茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧和TGF-β1表达的影响

目的 探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧(ROS)和转化生长因子β1，(TGF-β1)表达的影响及茶多酚的干预作用。方法 培养人肾小球系膜细胞，分为正常对照组、高糖组、茶多酚组和茶多酚干预组，培养0、12、36h后，用分光光度比色法测定细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，用半定量RT-PCR和免疫细胞化学法检测细胞内TGF-β1，mRNA和蛋白表达的变化。结果 高糖导致系膜细胞SOD活性下降和MDA含量升高，上调TGF-β1，mRNA和蛋白表达，随时间延长更为明显；茶多酚干预可拮抗高糖时系膜细胞的上述改变。结论 高糖能促进人肾小球系膜细胞ROS产生增加，上调TGF-β1 mRNA和蛋白表达，茶多酚能抑制高糖对系膜细胞的作用。     

高糖对大鼠肾小球系膜细胞ERK转导通路的影响

目的： 探讨高糖环境下系膜细胞中ERK转导途径的活性变化及其对TGF-β1 mRNA表达的影响。方法： 分离培养大鼠肾脏系膜细胞，调整培养液浓度为以下3组，即正常糖组、高糖组、甘露醇组。分别于干预24 h、48 h、72 h后用免疫细胞化学法和Western blotting法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2（pERK1/2）的表达进行定位、定性及半定量分析，用RT-PCR法检测细胞中TGF-β1 mRNA的表达。结果： 高糖组系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达明显高于正常糖组，并由胞浆向胞核内转移，随培养时间延长其表达上升(P<0.01)，高糖组TGF-β1mRNA的含量也明显高于正常糖组(P<0.01)，甘露醇组上述指标与正常糖组差异不显著(P>0.05)。结论： 高糖环境下系膜细胞中ERK信号转导通路可被激活，进而使TGF-β1 mRNA表达上调，这可能是糖尿病肾病系膜细胞受损、肾小球硬化的机制之一。     

Decorin 基因转染抑制高糖培养的大鼠肾系膜细胞细胞外基质mRNA表达

目的： 观察核心蛋白聚糖Ⅱ（DCN）基因转染对高糖培养的大鼠肾系膜细胞（RMCs）细胞外基质（ECM）mRNA表达的影响。方法： 用已构建的AD-DCN腺病毒感染高糖环境培养的大鼠肾系膜细胞，采用半定量RT-PCR测定decorin、转化生长因子β₁（TGF-β₁）、纤维粘连蛋白（fibronectin）和IV型胶原（collagen IV） mRNA水平。结果： 高糖培养的RMCs感染AD-DCN后，DCN mRNA水平显著增高，24 h至第7 d，该组DCN mRNA水平始终显著高于高糖组及AD－LacZ感染组(P<0.05)，decorin mRNA水平增高后表现出对TGF-β₁ mRNA 水平的抑制作用，在mRNA水平，AD-DCN感染的RMCs细胞外基质fibronectin和collagen IV随TGF-β₁ mRNA水平下降而下降。结论： DCN重组腺病毒感染大鼠肾系膜细胞后能高效表达目的基因decorin并拮抗 TGF-β₁ 的生物活性，其下调ECM成分 mRNA水平的作用与使用TGF-β抗体的效果相似。     

细胞相互作用对PAF、系膜细胞paf-R基因表达的影响及阿托伐他汀的干预作用

目的:探讨高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞相互作用对PAF产生、系膜细胞paf-R基因表达的影响及阿托伐他汀的干预作用。方法:内皮细胞与系膜细胞共培养和系膜细胞单独培养后随机,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、阿托伐他汀组,培养24h后,ELISA法检测各组细胞上清液PAF含量,实时荧光定量检测系膜细胞paf-RmRNA表达。结果:(1)高糖高脂促进共培养组和单培养组PAF升高(P0.05),共培养组PAF均较单培养组升高(P0.05);(2)高糖高脂可上调系膜细胞paf-R mRNA表达(P0.05);(3)共培养和单培养条件下,阿托伐他汀可抑制高糖高脂引起的PAF升高(P0.05),并可抑制高糖高脂引起的系膜细胞paf-RmRNA表达上调(P0.05)。结论:(1)高糖高脂环境下,系膜细胞和内皮细胞存在异常的相互作用,这种作用促进PAF产生;(2)高糖高脂促进系膜细胞paf-R基因表达,使PAF的生物效应进一步放大;(3)阿托伐他汀可影响高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞之间的相互作用。     

阿托伐他汀对高糖高脂环境下人脐静脉内皮细胞与人肾小球系膜细胞相互作用的影响

 目的 探讨高糖高脂环境下人脐静脉内皮细胞与人肾小球系膜细胞间的相互作用及阿托伐他汀对内皮细胞与系膜细胞相互作用的影响。方法人脐静脉内皮细胞与人肾小球系膜细胞共培养和人肾小球系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、BN52021组、阿托伐他汀组。ELISA法检测细胞上清液纤维联接蛋白（Fn）、血小板活化因子（PAF）含量,实时荧光定量检测系膜细胞血小板活化因子受体（PAF-R）mRNA表达。结果 (1)高糖高脂条件下,共培养和单培养Fn、PAF升高（P <0.05）;高糖高脂条件下,共培养Fn、PAF较单培养升高（P <0.05）,BN52021和阿托伐他汀可抑制高糖高脂引起的Fn升高（P <0.05）,阿托伐他汀可抑制高糖高脂引起的PAF升高（P <0.05）;（2）高糖高脂可上调系膜细胞PAF-R mRNA表达（P <0.05）,阿托伐他汀可显著抑制PAF-R mRNA表达上调（P<0.05）。结论 (1) 高糖高脂环境下,系膜细胞和内皮细胞存在异常的相互作用。(2)阿托伐他汀可影响高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞的相互作用。     

高糖对人肾系膜细胞GSH-PX和PDGF-B表达影响及茶多酚干预作用

目的探讨高糖条件下系膜细胞氧化失衡与血小板源性生长因子—B（PDGF—B）表达之间的关系,通过抗氧化剂茶多酚证实氧化应激在早期糖尿病中的作用。方法将培养的系膜细胞分为正常对照组、高糖组、茶多酚对照组和茶多酚干预组,分别在0、12、24、36、48h采用分光光度法检测上清液还原型谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活性,以及免疫细胞化学法和RT—PCR法检测0、12、36h的PDGF—B mRNA和蛋白的表达情况。结果①高糖条件下GSH—PX活性下降,抗氧化能力下降,氧化失平衡;茶多酚可增加抗氧化酶GSH—PX的活性。②高糖组系膜细胞PDGF—B mRNA和蛋白的表达比正常对照组均增加（P〈0．05）;茶多酚干预组比高糖组有明显下降（P〈0．05）。结论高糖能促进系膜细胞活性氧和PDGF—B的表达增加,茶多酚可抑制该作用。     

EPA、DHA对脂多糖刺激大鼠系膜细胞的保护作用

目的:观察EPA、DHA对脂多糖(LPS)刺激大鼠系膜细胞(GMCs)的氧化应激及MCP-1和TGF-β1表达的影响。方法:用LPS(10mg/L)刺激大鼠GMCs,经EPA(10μmol/L、100μmol/L)、DHA(10μmol/L、100μmol/L)培养,采用试剂盒分别测定培养24h、48h、72h培养上清中的SOD、GSH-Px和MDA。采用免疫细胞化学方法测定培养系膜细胞MCP-1和TGF-β1的表达,采用实时定量PCR方法测定MCP-1和TGF-β1mRNA的表达。结果:LPS刺激后,系膜细胞SOD、GSH-Px活力降低,MDA含量增加。EPA、DHA能明显升高SOD、GSH-Px活力,减少MDA生成。LPS刺激可使系膜细胞表达MCP-1、TGF-β1增加,经EPA、DHA处理后,MCP-1、TGF-β1mRNA和蛋白表达明显减少。DHA作用强于同剂量EPA。结论:EPA、DHA能提高系膜细胞的抗氧化酶SOD、GSH-Px活力,减少细胞内MDA生成。EPA和DHA可以降低LPS刺激的GMCs的TGF-β1与MCP-1的表达,从而起到保护肾功能的作用。     

高糖高脂对系膜细胞产生细胞外基质及PAF的影响

目的： 探讨高糖高脂对系膜细胞产生细胞外基质（ECM）和血小板活化因子（PAF）的影响。方法：人系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、PAF受体拮抗剂BN52021+高糖高脂组, ELISA法检测各组细胞上清液中纤维连接蛋白（Fn）、IV型胶原（Col IV）、血小板活化因子（PAF）含量,实时荧光定量检测系膜细胞血小板活化因子受体（PAF-R） mRNA表达。结果：高糖高脂可引起系膜细胞培养上清液Fn和Col IV含量升高（均P<0.05）,BN52021可抑制高糖高脂引起的Fn和Col IV含量升高（P<0.05）;高糖高脂可引起系膜细胞培养上清液PAF含量升高（P<0.05）;高糖高脂可上调系膜细胞PAF-R mRNA表达（P<0.05）。结论: 高糖高脂刺激系膜细胞Fn、Col IV、PAF产生,高糖高脂刺激的ECM分泌增加部分与PAF有关; 高糖高脂可促进系膜细胞PAF-R基因表达,使PAF的生物效应进一步放大。     

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白和TGF-β1表达的影响

目的：研究醛固酮（ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（SPI）对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白（FN），以及对转化生长因子B1（TGF-β1）基因表达的影响。方法：（1）以不同浓度的ALD（10^-11、10^-9、10^-7mol／L）及／或10^-7mol／L SPI刺激肾小球系膜细胞48h后，用ELISA法测定培养上清中FN的浓度。用半定量RT-PCR法检测该细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。（2）以10^-9mol／L的ALD刺激系膜细胞不同时间（24、48、72h）后，分别用上述方法测定培养上清中FN的浓度和细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。结果：（1）ELISA的结果显示，ALD可促进系膜细胞合成分泌FN，且呈剂量和时间依赖性，SPI能拮抗ALD的作用。（2）半定量RT-PCR的结果显示，ALD可促进系膜细胞FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达，也呈剂量和时间依赖性，SPI也能拮抗ALD的作用。结论：ALD在蛋白和基因水平上均可促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN，及TGF-β1mRNA的表达，SPI能拮抗ALD的作用，具有一定的肾脏保护作用，从而有益于延缓肾小球硬化的进展。     

缬沙坦抑制高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质及CTGF的表达

目的　探讨高糖状态下体外培养的肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子（CTGF）的表达以及缬沙坦的影响。方法 体外培养大鼠系膜细胞,分别给予高糖和缬沙坦干预,采用Western blot检测CTGF、p38丝裂原活化蛋白激酶 （p38 MAPK）、cAMP反应元件结合蛋白1（CREB1）及各自磷酸化蛋白的表达,RT-PCR检测CTGF mRNA和纤维黏连蛋白（FN）mRNA的表达。放免法测定细胞上清液中层黏连蛋白(LN)和IV型胶原的含量。结果 与低糖组相比,高糖组系膜细胞CTGF、p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,CTGF mRNA和FN mRNA表达增加,细胞上清中LN和IV型胶原含量增加。缬沙坦组CTGF、p-p38 MAPK、p-CREB1的表达明显下调,CTGF mRNA和FN mRNA表达降低, LN和IV型胶原的含量减少。 结论　缬沙坦抑制高糖状态系膜细胞CTGF表达 和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响p38 MAPK及其下游核因子CREB1的激活而实现。     

罗格列酮对ox-LDL诱导的系膜细胞Lox-1表达的影响及其抗氧化作用的研究

目的:观察罗格列酮对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（Lox-1）表达及其抗氧化作用。 方法:培养大鼠系膜细胞，分为空白对照组、ox-LDL组、罗格列酮组和罗格列酮+ox-LDL组，培养24 h后,用RT-PCR检测系膜细胞Lox-1 mRNA表达情况，用分光光度比色法测定细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。 结果:系膜细胞中有Lox-1表达，ox-LDL诱导后表达增加，并导致系膜细胞SOD活性下降和MDA含量明显高于（分别为SOD：15.250±0.083，MDA：2.270±0.004）对照组（分别为SOD：19.950±0.079，MDA：1.250±0.002），P<0.05。罗格列酮可明显降低ox-LDL诱导引起Lox-1表达水平，P<0.05，同时也使SOD活性增加（20.060±0.082）和MDA含量（1.360±0.003）降低。 结论:罗格列酮可能通过抑制ox-LDL的受体Lox-1的表达及由其引起的氧化应激，从而减轻ox-LDL对肾脏的损伤。     

五味子多糖对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞炎症因子和细胞外基质FN和COLⅠ表达的影响

目的：探讨五味子多糖（SCP）对TGF-β1诱导的人肾小球系膜细胞炎症因子和细胞基质（ECM）表达的影响。方法：体外培养人肾小球系膜细胞，采用4 ng/ml TGF-β1诱导人肾小球系膜细胞构建系膜增生性肾炎细胞模型，分为正常对照（Con）组、模型（TGF-β1）组、SCP低、中、高浓度（SCP-L、SCP-M、SCP-H）组，MTT检测细胞增殖活性，ELISA检测炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量，qRT-PCR和Western blot分析纤连蛋白（FN）和Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）表达，Western blot评估TLR4/NF-κB信号传导途径关键蛋白表达。结果：与Con组相比，TGF-β1组细胞增殖活性明显升高，IL-6、IL-1β、TNF-α和MCP-1含量明显升高，FN、COLⅠ、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子（MyD88）和磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)表达明显上调（P<0.05）；与TGF-β1组相比，不同浓度SCP干预均能够抑制细胞增殖活性，降低IL-6、IL-1β、TNF-α和M...     

PKC信号通路与醛糖还原酶对转化生长因子β1诱导人肾系膜细胞纤连蛋白表达的影响

目的 探讨PKC信号通路与醛糖还原酶在非高糖条件下对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾系膜细胞(HMC)细胞外基质成分纤连蛋白表达的影响.方法 应用醛糖还原酶抑制剂、PKC信号通路抑制剂G(O)6983、转染pcDNA3-醛糖还原酶及siRNA分别作用于人系膜细胞后,再用TGF-β1刺激,观察刺激前后人系膜细胞表达纤连蛋白的情况.Western blot检测系膜细胞内纤连蛋白和醛糖还原酶的变化,即时RT-PCR鉴定转染和干扰效果.结果 系膜细胞在TGF-β1作用后,醛糖还原酶和纤连蛋白表达升高;单独使用醛糖还原酶抑制剂并不能下调纤连蛋白的表达;但预先使用醛糖还原酶抑制剂孵育后,再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达减少为对照组的34%(P<0.05).单独使用PKC信号通路抑制剂并不能下调纤连蛋白的表达;用PKC信号通路抑制剂后,再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达下降为对照组的42%(P<0.05).预先使用醛糖还原酶抑制剂、PKC抑制剂孵育细胞后,再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达下降;转染pcDNA3-醛糖还原酶后,系膜细胞中醛糖还原酶mRNA表达增多超过10倍,纤连蛋白表达增加了2.5倍(P<0.05),再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达增加了3.6倍(P<0.05);转染siRNA后,系膜细胞中醛糖还原酶mRNA表达减少为对照组的20%,纤连蛋白表达减少为对照组的6%(P<0.01),即使再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达仍然下降,为对照组的12%(P<0.01).结论 醛糖还原酶基因参与了系膜细胞中TGF-β1诱导纤连蛋白表达过程的调控,这一过程可能与PKC信号通路的活化有关.     

α-黑色素细胞刺激素对ECV304细胞与U937细胞黏附作用的影响

研究α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞黏附作用的影响,以探讨α-MSH的抗炎与免疫调节机制。以U937细胞与ECV304细胞相互黏附作为实验模型,观察LPS或TNF-α刺激ECV304细胞,以及α-MSH干预后,对U937细胞黏附于ECV304细胞的影响。用不同浓度α-MSH处理ECV304细胞,或在LPS/TNF-α处理的同时加不同浓度的α-MSH培养ECV304细胞,以FACS检测ICAM-1,RT-PCR检测骨桥蛋白(OPN)mRNA,Westernblot检测OPN蛋白表达。结果显示,LPS或TNF-α处理ECV304细胞可增加ECV304细胞与U937细胞的黏附,而α-MSH降低这种黏附作用。α-MSH抑制ECV304细胞表达ICAM-1和OPN蛋白;LPS或TNF-α刺激后,ECV304细胞表达OPN mRNA上调,而α-MSH能抑制LPS或TNF-α的上调作用。这些结果提示,α-MSH可通过降低ICAM-1和OPN的表达抑制炎症时血管内皮细胞与白细胞的黏附。     

α-黑色素细胞刺激素对ECV304细胞产生促炎因子的调节作用

研究α-黑色素细胞刺激素（α—MSH）对人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞产生促炎因子的调节作用，探讨α—MSH的抗炎与免疫调节机制。用不同浓度α—MSH处理ECV304细胞，或在LPs／TNF-α处理的同时加不同浓度的α—MSH培养ECV304细胞。用ELISA检测上清中TNF-α和IL-8，以Greiss法测定NO，RT-PCR检测组织因子（TF）mRNA，Western blot检测TF蛋白表达。结果显示，α-MSH抑制ECV304细胞产生NO、TNF-α，但促进IL-8的释放。LPS或TNF-α能上调ECV304细胞表达TFmRNA，而α—MSH抑制这种上调作用，并抑制ECV304细胞表达TF蛋白。上述结果提示α—MsH可通过调节血管内皮细胞表达促炎因子而发挥抗炎和免疫调节作用。     

高糖培养人肾小球系膜细胞对JAK2/STAT1信号蛋白活化的影响

目的:观察高糖对人肾小球系膜细胞(HMCs)Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法:将HMCs于高糖(30mmol/L)环境下培养不同时间后,Western blotting检测磷酸化JAK2、STAT1(p-JAK2、p-STAT1)水平;RT-PCR检测TGF-β1和FN mRNA的表达;ELISA测定上清液中TGF-β1和FN的含量,同时以低糖组作为对照。结果:与低糖对照组比较,高糖培养HMCsp-JAK2、p-STAT1蛋白明显上调,TGF-β1和FN mRNA表达和蛋白水平显著增加(P<0.01)。结论:高糖能通过激活HMCs中JAK2/STAT1信号途径,促进TGF-β1和细胞外基质分泌。     

高糖诱导大鼠系膜细胞CTGFmRNA的表达及机制探讨

目的： 观察高糖状态对肾小球系膜细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）及其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1（CREB1）的表达以及对系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）和细胞外基质蛋白表达的影响。方法: 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和p38 MAPK抑制剂SB203580干预,采用Western印迹检测p38 MAPK和CREB1及其磷酸化蛋白(p-p38 MAPK、p-CREB1)的表达,半定量RT-PCR检测CTGF和纤维黏连蛋白（FN） mRNA的表达。放免法测定细胞上清液中层黏连接蛋白(LN)和IV型胶原的分泌含量。结果: 与低糖组和低糖加甘露醇组相比,高糖组系膜细胞p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,CTGF和FN mRNA的表达增加,细胞上清液中FN和IV型胶原含量增加。SB203580能够明显抑制高糖培养系膜细胞p38 MAPK和CREB1的磷酸化,下调CTGF和FN mRNA表达,抑制细胞上清LN和Ⅳ型胶原的分泌。结论: p38 MAPK信号途径可能参与高糖诱导的肾小球系膜细胞CTGF的表达和细胞外基质的分泌。     

SUMO化修饰对高糖诱导的大鼠肾系膜细胞IKKγ/NF-κB信号的影响

 目的：探讨小泛素相关修饰物（SUMO）化修饰对高糖诱导的肾系膜细胞IκB激酶γ(IKKγ)/NF-κB信号的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞,设正常对照组、高糖干预组和渗透压对照组：用免疫印迹和RT-PCR法检测各组细胞SUMO1、SUMO2/3、IKKγ和NF-κB p65的表达;用免疫共沉淀检测SUMO与IKKγ蛋白间的相互作用。结果：高糖呈浓度和时间依赖性上调系膜细胞SUMO和NF-κB p65表达（均P<0.01）。各组细胞IKKγ 的蛋白与mRNA表达差异无统计学意义（均P<0.05）;高糖组SUMO与IKKγ蛋白间的相互作用减弱（均P<0.01）。结论:高糖影响IKKγ 的SUMO化修饰,可能参与了高糖诱导的肾系膜细胞NF-κB信号激活的调控。     

过表达THEM4抑制高糖诱导小鼠系膜细胞细胞外基质分泌

目的观察过表达硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)对高糖诱导的小鼠系膜细胞细胞外基质蛋白分泌的影响。方法体外培养小鼠系膜细胞,分别给予高糖(30 mmol/L)刺激0、6、12、24和48 h后收集细胞。提取RNA,RT-PCR技术检测THEM4 mRNA的表达;提取总蛋白,Western blot法检测THEM4、phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达;ELISA法检测细胞上清液Ⅳ型胶原(collagenⅣ,ColⅣ)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的分泌情况。为进一步检测过表达THEM4对高糖诱导的细胞外基质沉积的影响及可能机制,将常规培养的系膜细胞随机分为正常对照组(5.5mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、高糖+p Yr-ads-4-THEM4质粒转染组(高糖+THEM4组)、高糖+p Yr-adshuttle-4空质粒对照组(高糖+V组)。后3组经高糖刺激48 h后终止培养并进行上述检测。结果随着高糖刺激时间的延长,小鼠系膜细胞THEM4表达呈下降趋势,phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达增强,伴随细胞外基质蛋白(包括ColⅣ、FN)的分泌增加;过表达THEM4能逆转高糖刺激所导致小鼠系膜细胞Akt蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1的表达,抑制细胞外基质蛋白(包括ColⅣ、FN)的分泌。结论过表达THEM4能降低高糖诱导的小鼠系膜细胞细胞外基质蛋白的分泌,可能是通过抑制Akt蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达而实现。     

高糖培养人肾小球系膜细胞对TGF-β1、FN、Smad7表达的影响

目的:通过观察高糖对人肾小球系膜细胞(HMCs)转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)、Smad7表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制。方法:将HMCs于高糖(30mmol/L)环境培养不同时间后,采用RT-PCR方法检测TGF-β1、FN、Smad7 mRNA表达,Western blotting检测Smad7蛋白的表达,采用ELISA检测TGF-β1、FN蛋白水平,同时以低糖培养作为对照组。结果:高糖培养24h、48h、72h后,TGF-β1 mRNA及蛋白的表达均较低糖培养对照组增加,在48h时达到高峰;FN mRNA及蛋白的表达亦较对照组增加,且呈时间依赖性;而Smad7 mRNA及蛋白表达下降。结论:TGF-β1/Smad信号转导途径负反馈调节Smad7蛋白的表达减少,可能是DN发病过程中的重要环节之一。