奥沙利铂对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞生长抑制和凋亡作用的研究

目的:观察奥沙利铂对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的生长抑制和凋亡作用,为其临床应用提供理论依据.方法:将浓度为0、10、20、40、80μg/ml的奥沙利铂与CNE-2细胞作用24、36、48h,用SRB法检测奥沙利铂对CNE-2细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态学变化.结果:奥沙利铂对CNE-2细胞的生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大.流式细胞仪分析显示奥沙利铂主要将CNE-2细胞阻滞于G2/M期.奥沙利铂浓度为80μg/ml 作用48小时,CNE-2细胞生长抑制率为(97.46 ± 1.76)%,CNE-2细胞的早期凋亡率为(4.48 ± 1.23)%、晚期凋亡和继发坏死率为(9.48 ± 2.30)%.荧光显微镜下观察用药组有凋亡细胞存在.结论:奥沙利铂能够抑制人低分化鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的增殖,能使CNE-2细胞阻滞于G2/M期,可诱导CNE-2细胞发生一定的凋亡.     

顺铂诱导人小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞的凋亡

背景与目的:近年的研究表明,诱导细胞凋亡是多种作用于核酸代谢不同环节的化疗药物抗肿瘤的重要机制。但顺铂杀灭人小细胞肺癌(SCLC)细胞的药物效应除了损伤其DNA外,诱导该类恶性肿瘤细胞凋亡是否是其杀灭细胞的重要机制尚无相应研究。基于此,本研究旨在探讨顺铂诱导人SCLC细胞系H446细胞凋亡的机制及其在SCLC化疗中的作用。方法:分别采用形态学观察、流式细胞仪分析技术和原位DNA断裂点的末端标记法,检测顺铂诱导H446细胞的凋亡作用。结果:终浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μg/m l的顺铂均可诱导H446细胞凋亡,且呈浓度依赖性(处理48 h时,其凋亡指数分别为1.47±0.03、8.28±0.54、11.02±1.05、12.74±1.08、27.16±1.15);终浓度为2μg/m l的顺铂在24~72 h持续诱导细胞凋亡且诱导凋亡作用逐渐增强,呈时间依赖性;终浓度为5μg/m l的顺铂可阻滞H446细胞于细胞周期的S期,终浓度<5μg/m l顺铂可阻滞H446细胞于细胞周期的G2期和S期。结论:诱导细胞凋亡可能是顺铂抗肿瘤作用的重要机制。     

长春新碱对鼻咽癌细胞增殖和周期的影响

[目的]探讨长春新碱(VCR)对鼻咽癌CNE鄄2Z细胞增殖和周期的影响。[方法]MTT法检测增殖抑制率和IC50,流式细胞术分析细胞周期。[结果]不同浓度的VCR分别处理细胞24h、48h、72h时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50分别为(2.01±0.26)、(1.59±0.23)、(0.92±0.11)μg/ml,各IC50间的差异有非常显著性意义(P<0.01)。0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/mlVCR分别处理细胞6h、12h、24h时,G0/G1期细胞明显下降,G2/M期细胞明显升高,随时间的延长变化更明显(P<0.01)。[结论]VCR对CNE鄄2Z细胞具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;阻滞细胞于G2/M期,此阻滞作用具有时间依赖性;一定剂量的VCR可能通过阻滞CNE鄄2Z于G2/M期而抑制其增殖。     

小分子HIF-1α干扰RNA逆转鼻咽癌细胞耐药的实验

目的探讨小分子HIF-1α干扰RNA对人鼻咽癌耐药细胞株CNE2/DDP耐药性的影响。方法采用药物大剂量冲击和逐渐增加剂量相结合的方法建立人鼻咽癌顺铂耐药细胞株CNE2/DDP,瞬时转染法将HIF-1α小片段RNA导入CNE2/DDP细胞沉默HIF-1α基因,MTS法及流式细胞仪分别检测顺铂对CNE2/DDP细胞增殖、凋亡的影响,Western blot法分析细胞HIF-1α及MDR1表达水平。结果成功建立了人鼻咽癌顺铂耐药细胞株CNE2/DDP,耐药系数达16。当顺铂≥1.0μg/ml时,CNE2组与siHIF-1αsiRNA组细胞抑制率均明显高于CNE2/DDP组与siCtrl-siRNA组(P<0.05);同样,CNE2组与siHIF-1αsiRNA组细胞凋亡率也明显高于CNE2/DDP组与siCtrl-siRNA组(P<0.05);Westernblot显示siHIF-1αsiRNA组HIF-1α及MDR1蛋白的表达低于CNE2/DDP组。结论小分子HIF-1α干扰RNA沉默HIF-1α提高了人鼻咽癌顺铂耐药细胞CNE2/DDP对顺铂的敏感度,逆转了CNE2/DDP对顺铂的耐药性。     

伊立替康对胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2MD3体外抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨伊立替康(CPT-11)对人胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2M D 3的体外增殖作用的影响及其作用机制。方法人胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2M D 3于DM EM培养液中(含10%热灭活胎牛血清),在37℃、5%的CO2、饱和湿度下培养传代。M TT法检测0.97、1.94、3.88、7.75、15.5、31、62、124μg/m l 8个不同浓度伊立替康分别作用24、48、72小时后对细胞增殖的抑制效应并计算抑制率。利用中效原理方程计算各时段药物作用的中效浓度(IC 50)。检测CPT-11对OCUM-2M D 3细胞作用的时间效应和剂量效应。利用流式细胞仪分析伊立替康作用24小时前后细胞周期的分布及凋亡情况。结果CPT-11对胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2M D 3的体外增殖有明显的抑制作用。在相同时间段不同药物浓度CPT-11对OCUM-2M D 3细胞的抑制率差异有显著性(P<0.01)。而在相同药物浓度时,作用不同时间,其抑制率差异也有显著性(P<0.01)。且药物浓度与药物作用时间之间有交互作用(P<0.01)。124μg/m l CPT-11作用72小时后,OCUM-2M D 3细胞生长抑制率可达80.6%。CPT-11作用24、48、72小时的IC 50分别为49.889μg/m l、9.775μg/m l、6.481μg/m l。流式细胞仪分析显示以1/2 IC 5024.945μg/m l CPT-11处理24小时后,对照组细胞周期分布为G0/G1期(39.30±4.81)%,S期(37.40±3.91)%,G2/M期(23.33±8.05)%;用药组为G0/G1期(56.50±7.69)%,S期(43.90±7.69)%,G2/M期消失,细胞周期被阻滞于G0/G1及S期。流式细胞仪检测凋亡率分别为(1.00±0.11)%、(34.29±0.79)%,用药组凋亡率明显升高,差异有显著性(P<0.01),出现明显的凋亡峰。结论伊立替康能够明显抑制人胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2M D 3的体外增殖活性。     

Tsα1诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡和抑制bcl-2基因的表达

目的:研究胸腺肽α1(Tsα1)在诱导肿瘤细胞凋亡中的作用。方法:应用MTT比色分析法研究Tsα1对人肝癌SMMC7721细胞株的细胞毒作用。流式细胞仪检测法分析Tsα1作用后处于G1期SMMC7721细胞的比率和对凋亡抑制基因bcl2蛋白的抑制率。结果:Tsα1(4000μg/mL)体外培养24、48和72h,对SMMC7721肿瘤细胞抑制率分别是(1.92±0.02)%、(3.27±0.03)%和(7.69±0.03)%,P<0.005;凋亡率分别是(2.5±0.1)%、(18.3±0.2)%和(11.6±0.1)%,P<0.001;bcl2蛋白的抑制率为(1.35±0.1)%、(2.2±0.01)%和(5.53±0.01)%,P<0.005,并呈现细胞凋亡的形态学改变,具有剂量和时间依赖性。结论:Tsα1可直接抑制人肝癌SMMC7721细胞株增殖,抑制bcl2基因表达和诱导肿瘤细胞凋亡。     

莪术油对鼻咽癌CNE22 细胞的凋亡及放疗 增敏机制的影响

 目的　探讨莪术油、莪术油联合γ2射线照射对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE22 的增殖抑制和诱 导凋亡作用;分析莪术油是否具有放疗增敏的作用,并研究其机制。方法　体外培养CNE22 细胞,莪术 油以体外直接加药的方式作用于CNE22 细胞,采用MTT、流式细胞术、电镜等分子生物学手段,检测莪 术油单用或联合γ2射线对CNE22 的诱导凋亡作用、放疗增敏作用。结果　莪术油单独使用,对CNE22 细胞有确切的增殖抑制及诱导凋亡作用,并与常规化疗药物52Fu 有相近的抑制作用( P > 0. 05) 。莪术 油的药物抑制作用呈现浓度依赖性,最低起效浓度为10μg/ ml ,最佳作用时间为48 小时; 5μg/ ml 、100 μg/ ml 、300μg/ ml 的莪术油联合100 cGy 的γ2射线作用2 天后凋亡率由0. 5 %、2. 15 %、10. 2 %显著提高 到8. 6 %、14 %和26 % ,细胞的死亡率均在5 %以下有明显的协同增效作用( P < 0. 01) ;联合作用96h 后 试验组的细胞主要以死亡为主,凋亡较少;500μg/ ml 的莪术油主要导致细胞死亡,有明显的细胞毒性。 流式细胞仪结果显示较高浓度时,莪术油使CNE22 细胞阻滞在G1 期。电子显微镜观察细胞凋亡的超微 结构可以看到凋亡小体。结论　莪术 油可以抑制鼻咽癌细胞CNE22 的增 殖并诱导其凋亡;莪术油和100 cGy 的 γ2射线联合作用有明显的增敏作用; 其作用机制与诱导肿瘤细胞发生凋亡 及影响细胞生长周期有关。     

三氧化二砷通过线粒体依赖性通路诱导喉癌细胞株及其耐药株细胞凋亡

背景与目的:三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)已作为治疗实体瘤的新药应用于临床,但其作用机理仍不清楚。本研究拟探讨As2O3通过线粒体依赖性凋亡通路介导喉癌细胞及其耐药株细胞凋亡的作用。方法:采用MTT法测定As2O3对喉癌细胞KB及其耐药细胞KBv200的细胞毒作用;用AnnexinVFITC染色法检测凋亡早期细胞;细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)用DiOC6标记,流式细胞仪检测。结果:As2O3对KB及KBv200细胞的生长有明显的抑制作用,IC50分别为(0.22±0.02)μg/ml和(0.20±0.01)μg/ml。用AnnexinVFITC染色检测到As2O3呈时间依赖性介导细胞凋亡,2.5μg/mlAs2O3处理24h、48h,KB细胞凋亡率分别为(20.2±3.1)%和(52.2±11.0)%;KBv200细胞凋亡率分别为(15.8±1.3)%和(36.4±5.9)%。2.5μg/mlAs2O3作用于KB与KBv200细胞,ΔΨm降低呈时间依赖性。结论:ΔΨm降低在As2O3诱导喉癌细胞凋亡过程中起着重要的作用。     

洛铂对鼻咽癌抗肿瘤作用的体外实验研究

目的 探讨洛铂对鼻咽癌的体外抗肿瘤作用及其可能的机制,为洛铂用于鼻咽癌的临床治疗提供实验依据。方法 在体外将不同浓度洛铂分别作用于低分化鼻咽癌细胞株CNE2、HONE1和SUNE1,采用CCK-8法检测细胞活性;碘化丙啶（PI）染色分析细胞中DNA的含量,流式细胞仪检测细胞周期情况;采用Annexin V-FITC／PI双染法检测细胞凋亡情况;采用蛋白印迹法（Western blotting）检测细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达。结果 在体外洛铂作用3种鼻咽癌细胞株48h具有明显的细胞抑制作用,并表现出浓度依赖性。洛铂作用鼻咽癌细胞株CNE2、HONE1、SUNE1的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（4.05±0.49）μmol/L、（4.32±1.17）μmol/L和（2.51±0.15）μmol／L。洛铂作用3种鼻咽癌细胞株48h后,在较低浓度（0.125倍IC₅₀）时将细胞周期阻滞在G₂期,同时伴随G₂期相关蛋白Cyclin B1和phospho-cdc2（Tyr15）表达增高;而在较高浓度（0.5倍IC₅₀）时则诱导细胞呈Caspase依赖性细胞凋亡,并具有浓度依赖性。结论 洛铂对鼻咽癌细胞具有明显的细胞毒作用,且呈浓度依赖性;其机制表现为双重作用,即在较低浓度时阻滞细胞于G₂期和在较高浓度时诱导细胞凋亡,这为洛铂用于鼻咽癌的临床治疗提供可能性。     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡及其可能的分子机制

背景与目的：二烯丙基二硫（DADS）是大蒜中的一种脂溶性单体化合物,对多种肿瘤细胞有促凋亡作用.本实验旨在探讨DADS抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖与诱导凋亡的生物学效应及可能的分子机制.方法：分别采用MTT、光学显微镜、流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳与Western blot检测DADS抑制CNE2细胞增殖与诱导凋亡作用及Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase 3）蛋白的表达.结果：MTT结果显示,50、100、200及400 μmol/L DADS作用CNE2细胞48 h,抑制率分别为3.66%、14.25%、29.66%及61.28%,呈浓度依赖性（P＜0.05）.形态学观察发现,DADS处理24 h后,部分CNE2细胞变圆,体积明显缩小,胞质强嗜酸性,核固缩、深染,核染色质积聚至核膜周边,呈现凋亡细胞形态学改变.流式细胞术分析显示,50、100、200和400 μmol/L DADS作用24 h,凋亡率分别为（10.8±1.3）%、（14.8±1.1）%、（21.7±2.0）%及（29.8±2.6）%,呈浓度依赖性诱导CNE2细胞凋亡（n=3,P＜0.05）.200及400 μmol/L DADS分别作用CNE2细胞24 h后,DNA凝胶电泳出现典型梯形条带.Western blot检测显示,50、100、200和400 μmol/L DADS处理CNE2细胞24 h后,Bcl-2蛋白与β-Actin的灰度值比分别是1.92±0.21、1.21±0.18、0.89±0.14及0.41±0.09,与对照组（2.24±0.26）比较,差异有显著性（P＜0.05）;Bax蛋白与β-Actin的灰度值比分别是0.78±0.14、1.12±0.19、1.54±0.22及2.08±0.27,与对照组（0.33±0.08）比较,差异有显著性（P＜0.05）;随浓度的增加,Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调.200、400 μmol/L DADS处理CNE2细胞24 h后,与对照组相比,Caspase 3酶原蛋白条带变细并且可见到蛋白裂解产物,表明DADS可以促进Caspase 3的活化.结论：DADS具有抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调导致Bcl-2/Bax比值下降,促进Caspase 3的活化有关.     

APE1表达变化对人非小细胞肺癌细胞A549增殖的影响

目的:探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)对人非小细胞肺癌细胞A549增殖能力的影响,为肺癌的个性化靶向治疗提供理论依据。方法:使用脂质体转染法将重组表达质粒pSIREN-RetroQ-APE1-shRNA和pOZN-HA-APE1导入A549细胞,免疫印迹检测APE1表达情况。MTT、平板克隆实验、免疫印迹检测APE1对非小细胞肺癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:重组载体pSIREN-RetroQ-APE1-shRNA转染细胞后,显著抑制A549细胞中APE1蛋白的表达,与对照组相比,增殖速率明显下降(P＜0.05),平板克隆形成显著减少(P＜0.05),并阻止细胞周期G0/G1期向S期转化,降低CDK2表达。而过表达APE1可增加A549细胞活力,促进细胞增殖,促进细胞周期G0/G1期向S期转化。结论:APE1表达下调对非小细胞肺癌细胞A549生长具有抑制作用,为临床抑制肿瘤生长提供了新的作用靶点。     

Landscape of immune cell infiltration in clear cell renal cell carcinoma to aid immunotherapy

The tumor microenvironment, comprised of tumor cells and tumor-infiltrating immune cells, is closely associated with the clinical outcome of clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) patients. However, the landscape of immune infiltration in ccRCC has not been fully elucidated. Herein, we applied multiple computational methods and various datasets to reveal the immune infiltrative landscape of ccRCC patients. The tumor immune infiltration (TII) levels of 525 ccRCC patients using a single-sample gene were examined and further categorized into immune infiltration subgroups. The TII score was characterized by distinct clinical traits and showed a significant divergence based on gender, grade, and stage. A high TII score was associated with the ERBB signaling pathway, the TGF-β signaling pathway, and the MTOR signaling pathway, as well as a better prognosis. Furthermore, patients with high TII scores exhibited greater sensitivity to pazopanib. The low TII score was characterized by a high immune infiltration level of CD8⁺ T cells, T follicular helper cells, and regulatory T cells (Tregs). Moreover, the immune check point genes, including CTLA-4, LAG3, PD-1, and IDO1, presented a high expression level in the low TII score group. Patients in the high TII score group demonstrated significant therapeutic advantages and clinical benefits. The findings in this study have the potential to assist in the strategic design of immunotherapeutic treatments for ccRCC.     

Hematopoietic stem cell transplantation in mantle cell lymphoma.

BACKGROUND: Patients with mantle cell lymphoma (MCL) have in general, lower response rates and overall survival (OS) than those with other B-cell non-Hodgkin's lymphomas. The role of hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) in MCL is unclear. Hence we decided to study the clinical course of patients who received autologous and allogeneic HSCT for MCL. METHODS: Ninety-seven patients, (80 patients-autologous; 17 patients-allogeneic) who received a HSCT for mantle cell lymphoma were included in the study. RESULTS: The complete response rates at day 100 between the two groups were similar (73% vs. 62%). Day-100 mortality was higher in the allogeneic HSCT group (19% vs. 0%) (P < 0.01). The estimated 5-year relapse rates, 5-year event-free survival (EFS) and 5-year OS among the allogeneic HSCT patients were 21%, 44% and 49%, respectively, similar to 56%, 39% and 47% in the autologous group. Ten patients received HyperCVAD (hyperfractionated cyclophosphamide, vincristine, doxorubicin and dexamethasone + high-dose methotrexate and cytarabine) +/- rituximab prior to transplant. There have been no relapses or deaths amongst these patients at a median follow-up of 16 months. CONCLUSIONS: Patients treated with allogeneic HSCT had a lower relapse rate, but similar EFS and OS to autologous HSCT. Treatment of MCL with HyperCVAD +/- rituximab followed by HSCT seems promising.     

代谢综合征与肾透明细胞癌相关性研究

目的 代谢综合征(metabolic syndrome,MS)是一组临床症候群,MS及其相关组分与癌症发生发展及病理特征具有密切关系.本研究旨在分析MS及其相关组分与肾透明细胞癌(clear cell cenal cell carcinoma,CCRCC)分期、分级及肿瘤大小的相关性.方法 回顾性分析2013-01-01-2015-12-30于山西医科大学第一医院就诊且病理诊断为CCRCC的375例患者的临床资料,包括年龄、性别、身高、体质量、血压、空腹血糖、生化结果、病理分期分级和肿瘤大小等.计数资料采用x2检验,计量资料以(x)±s表示,组间比较采用t检验,多因素分析采用Logistic回归分析.结果 MS组56例患者,其中男性患者32例,女性患者24例;非MS组319例患者,其中男性患者206例,女性患者113例.男女患者比较,差异无统计学意义,P=0.287.MS组与非MS组相比,年龄、吸烟、饮酒等差异无统计学意义,P值分别为0.100、0.691和0.269;而BMI指数、收缩压、空腹血糖、TG、HDL-C等差异均有统计学意义,均P＜0.001.在病理特点方面,MS与非MS相比,CCRCC病理分期(P=0.018)、分级(P=0.026)及肿瘤大小(P=0.026),差异均有统计学意义.MS相关疾病与CCRCC分期分析,糖尿病(P＜0.001)、高血压(P=0.015)、血脂紊乱(P=0.006)与CCRCC的分期有关.结论 CCRCC合并MS者病理分期较高、分级较低、肿瘤更大,糖尿病、高血压和血脂紊乱都可增加CCRCC的病理分期.     

阿霉素诱导粘液表皮样癌细胞凋亡时细胞周期的变化

 在证明10ug／ml阿霉素诱导粘液表皮样癌MEC—1细胞凋亡的基础上，研究细胞凋亡过程中细胞周期变化，以利于临床用药。方法：通过显微镜观察细胞的形态变化和DNA电泳来观察图形，并依靠流式细胞术准确了解用药后细胞周期的变化。结果：光镜下见癌细胞凋亡改变，DNA电泳是典型梯状条图；流式细胞仪测得阿霉素作用5h时，细胞阻于G₂期，24h时细胞阻于G₁期。结论：阿霉素诱导MEC—1细胞凋亡初期，细胞阻于G₂期，后期细胞阻于G₁期。     

Natural killer cell neoplasms

Natural killer (NK) cell tumors are an uncommon and heterogeneous group of disorders. The World Health Organization (WHO) classified mature NK cell neoplasms into 2 types: 1) extranodal NK cell lymphoma, nasal type and 2) aggressive NK cell leukemia. The mature NK cell tumors are prevalent in Asia and Central and South America. These tumors show polymorphic neoplastic infiltrate with angioinvasion and/or angiodestruction, cytoplasmic azurophilic granules, CD2-positive (CD2+)/CD3-negative (CD3-)/cCD3epsilon+/CD56+ phenotype, and strong association with Epstein-Barr virus (EBV). Loss of chromosomes 6q, 11q, 13q, and 17p are recurrent aberrations. Although blastic NK cell lymphoma, currently referred to as CD4+/CD56+ hematodermic neoplasm, also was included in the NK cell lymphoma category in the WHO classification scheme, existing evidence indicates a plasmacytoid dendritic cell derivation as opposed to an NK cell origin. Recently, rare cases of CD56+ immature lymphoid tumors have been reported in the literature. These tumors are characterized by blastic appearance, CD3-/CD4-/CD56+/CD13-/CD33- phenotype, T-cell receptor and immunoglobulin genes in germline configuration, and no evidence of EBV, suggesting a true immature NK cell derivation. For this article, the authors reviewed the recent concepts and progress in clinicopathologic features, pathogenesis, genetic characteristics, diagnosis, differential diagnosis, treatment approaches, and outcomes of all subtypes of NK cell neoplasms.     

Pygopus2的表达下调抑制肺癌细胞的增殖能力

目的:探讨肺癌细胞中Pygopus2（Pygo2）的表达及意义。方法:Western Blot明确肺癌细胞系中Pygo 2的表达后,应用 siRNA、MTT、流式细胞术等方法检测及其表达对肺癌细胞增殖凋亡能力的影响。结果:肺癌细胞系中存在Pygo2的过表达,其表达下调能够通过阻滞细胞周期及促进细胞凋亡,进而抑制肺癌细胞的增殖能力。结论:Pygo2的异常表达是导致肺癌发生发展的重要因素。     

VEGF-C在宫颈癌细胞中的表达及与细胞增殖的关系

目的:研究VEGF-C在宫颈癌细胞中的表达及其对宫颈癌细胞增殖的影响。方法:采用反义技术,脂质体介导VEGF-C反义寡核苷酸转染人宫颈癌Hela细胞。应用荧光定量RT-PCR法、间接免疫荧光标记法,检测转染后细胞内VEGF-C在mRNA、蛋白水平的变化。MTT比色法检测细胞生长的变化。结果:脂质体介导VEGF-C反义寡核苷酸,转染宫颈癌Hela细胞的转染效率大于90％。转染了反义寡核苷酸的反义组VEGF-C在mRNA和蛋白水平上,较未转染组和正义组均明显下降（P<0.05）。MTT法检测转染了VEGF-C反义寡核苷酸的细胞,明显看到反义组细胞的生长受到明显抑制。结论:VEGF-C可影响人宫颈癌Hela细胞增殖,本实验通过抑制VEGF-C,进而可阻断宫颈癌的淋巴转移,为实现靶向性基因治疗的可行性,提供了实验依据。     

miR-27a下调肾癌细胞FOXO1表达并促进其细胞增殖

目的 探讨microRNA-27a(miR-27a)在肾癌细胞中的作用及调控机制.方法 应用miR-27a反义寡核苷酸(ASO)在体外转染786-O和Caki-1细胞;qRT-PCR法检测miR-27a及FOXO1 mRNA的表达情况,Western blot检测FOXO1蛋白的表达水平;CCK8检测miR-27a ASO对细胞增殖的影响.结果 786-O和Caki-1细胞中miR-27a表达高于HK2正常肾小管上皮细胞(P<0.05);利用miR-27a ASO抑制786-O和Caki-1细胞miR-27a表达后,发现两个细胞株FOXO1 mRNA和蛋白表达的升高及增殖能力的降低(P<0.05).结论 miR-27a 可能通过调控FOXO1表达在肾癌中起致癌作用.miR-27a ASO可抑制肾癌细胞的增殖,因此miR-27a有可能作为肾癌基因治疗的候选靶点.     

miR-27a下调肾癌细胞FOXO1表达并促进其细胞增殖

目的：探讨microRNA-27a（miR-27a）在肾癌细胞中的作用及调控机制。方法：应用miR-27a反义寡核苷酸（ASO）在体外转染786-O和Caki-1细胞;qRT-PCR法检测miR-27a及FOXO1 mRNA的表达情况,Western blot检测FOXO1蛋白的表达水平;CCK8检测miR-27a ASO对细胞增殖的影响。结果：786-O和Caki-1细胞中miR-27a表达高于HK2正常肾小管上皮细胞（P〈0.05）;利用miR-27a ASO抑制786-O和Caki-1细胞miR-27a表达后,发现两个细胞株FOXO1 mRNA和蛋白表达的升高及增殖能力的降低（P〈0.05）。结论：miR-27a可能通过调控FOXO1表达在肾癌中起致癌作用。miR-27a ASO可抑制肾癌细胞的增殖,因此miR-27a有可能作为肾癌基因治疗的候选靶点。