重组痘苗病毒嵌合巨蛋白的免疫学研究

目的　pSFJ1 6与pSFJ38均是以牛痘病毒包涵体 (ATI)启动子和分别串联的 1 6个和 38个p7 5突变型早期启动子为基本构件组成的复合型启动子 (ATI-p7 5)、痘苗病毒复制非必需区血凝素 (HA)基因为侧翼的痘苗病毒表达载体。分别插入编码艾滋病病毒 (HIV - 1 )外膜蛋白env、核心蛋白gag与编码干扰素 (IFNα - 2b)基因 ,观察其表达产物诱导的机体内产生抗体效价的变化规律。方法　利用分子克隆技术构建重组质粒 ,经脂质体转染与野生型痘苗病毒在Cos- 7细胞内同源重组 ,筛选、纯化、获得重组痘苗病毒vJ1 6env/IFNα - 2b和vJ38gag/IFNα - 2b。免疫小鼠后 ,经间接ELISA分折免疫小鼠血清抗体的OD4 90 值变化。结果　免疫小鼠后体内抗体的OD4 90 值 ,实验组与阴性对照组平均数有显著性差异 (P <0 0 5) ,实验组与阳性对照组之间无显著性差异 (P >0 0 5)。结论　重组痘苗病毒vJ1 6env/IFNα - 2b和vJ38gag/IFNα- 2b免疫小鼠后可诱导机体产生高滴度的抗HIV - 1env、gag与IFNα - 2b巨蛋白抗原的抗体 ,蛋白稀释度与血清抗体OD4 90 值呈负相关     

非复制型重组痘苗病毒细胞培养特性研究

目的研究非复制型重组痘苗病毒(non-replicating vaccinia virus,non-replicating rVV)的培养特性。方法比较了不同的病毒接种方式、不同的病毒培养温度、不同的病毒接种量及不同的培养细胞上非复制型重组痘苗病毒的增殖量。结果在制备鸡胚成纤维细胞的同时接种重组痘苗病毒,可提高病毒滴度,并且缩短了病毒的收获时间;33.5℃是重组痘苗病毒比较理想的培养温度。在本实验条件下,重组痘苗病毒的感染复数为0.05PFU/细胞时的增殖量最大;该重组痘苗病毒在鸡胚成纤维细胞中增殖量较高,在非洲绿猴肾传代细胞中的增殖力明显减弱,而在人胚肺二倍体细胞中几乎不增殖。结论该非复制型重组痘苗病毒可以尝试用于开发安全、高效的人用基因工程疫苗。     

不同年龄组痘苗病毒IgG抗体水平的调查研究

用ＥＬＩＳＡ方法检测了１６５例不同年龄组正常人血清中痘苗抗体水平，结果１２岁以下儿童痘苗病毒ＩｇＧ抗体全部阴性，１３岁以上各年龄组痘苗ＩｇＧ抗体阳性率在５３．８～８０．０％左右，阳性抗体效价分布在１∶２００～１∶１６００之间，几何平均滴度为１∶２６９～１∶２９５之间。虽然３１岁～４０岁年龄组痘苗ＩｇＧ抗体阳性率略有升高，但各年龄组之间痘苗抗体几何平均滴度无显著差异（Ｐ＞０．０５）。用间接免疫荧光方法检测，结果１～１２岁年龄组痘苗病毒ＩｇＧ抗体全部阴性，与ＥＬＩＳＡ方法检测结果一致，１３岁以上１００例血清中痘苗抗体阳性数２０例，阳性率２０％，但不同年龄组之间阳性率有所变化，但无明显差异。     

Zeocin和GFP双筛选标记重组痘苗病毒载体的构建

目的 为研究重组痘苗病毒通用载体,构建融合Zeocin和GFP双筛选标记质粒pCB-ZeoGFP.方法 质粒LeGo-G/Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段,通过PCR反应、BamHI酶切后连接替换空白质粒pCB的筛选基因gpt,通过菌落PCR,酶切图谱分析及测序分析鉴定重组质粒,构建成功后将其与野生型痘苗病毒进行位点特异性同源重组,经Zeocin药物筛选2代后,用流式细胞仪观察重组痘苗病毒GFP表达.结果 经菌落PCR,1号、5号和10号菌落中扩增出426 bp 的目的条带,与预期的大小完全一致,经酶切分析和DNA测序进一步验证了重组质粒pCB-Zeo-GFP;该质粒与野生型痘苗病毒同源重组,得到了重组的痘苗病毒；Zeocin 筛选2代后,病毒上清感染细胞,流式细胞分析7.18％的细胞中有CFP的表达,而阴性对照仅有1.43％；Zeocin 药物筛选5代后,通过激光共聚焦可在80％以上的细胞中观察带GFP;提取的重组痘苗基因组DNA也扩增出预期大小目的条带.结论 含Zeocin和GFP双筛选标记的新型重组痘苗病毒不仅具有可观察性且具有药物抗性,非常容易进行筛选鉴定.     

间接免疫荧光法与酶联免疫法测定狂犬病病毒抗体的比较

用ＩＩＦ测定狂犬病病毒抗体费时费力，结果的判断易受主观等因素的影响。为此，我们对ＩＩＦ与ＥＬＩＳＡ测定狂犬病病毒抗体的结果以及ＥＬＩＳＡ测定中用肉眼和用酶标仪判断结果的情况进行了比较．１　材料与方法１．１　血清标本：由我站防疫科门诊部采集经狂犬疫苗全程免疫后一个月的血标本９６份，分离血清后待检。１． ２ ＩＩＦ抗原片由浙江省卫生防疫站提供，按说明书操作。结果判断分＜１：５、 １：５、 １：１０、＞１：１０．１．３ ＥＬＩＳＡ试剂由江苏省卫生防疫站（批号：１９９９１１９）和兰州生物制品研究所（批号：９…     

EB病毒重组抗原Rta蛋白的表达及用于鼻咽癌筛查ELISA方法的建立

目的 制备和表达EB病毒重组抗原Rta蛋白,并建立筛查鼻咽癌的ELISA方法,为鼻咽癌的早期筛查提供科学依据。方法 设计引物扩增BRLF1编码区全长序列,构建重组质粒p PICZαA-BRLF1,电转入毕赤酵母GS115,筛选His+Mut+表型转化子并用甲醇进行诱导表达和纯化;建立Ig G/Rta抗体的ELISA检测技术,用于300例鼻咽癌患者和200例健康对照者血清的筛查,对检测结果进行评价。结果 成功构建p PICZαA-BRLF1重组质粒;目的蛋白在毕赤酵母GS115中高效分泌表达(50%),蛋白电泳显示在66.0 k Da处有相应条带;同时Western-blot也证明其有良好的免疫活性;利用该重组Rta蛋白建立的ELISA检测方法对鼻咽癌检测阳性率显著高于Ig A/VCA试剂盒(P0.01)。结论 本研究构建了EB病毒重组抗原Rta蛋白的真核表达载体,表达外源蛋白产量高,免疫活性好,可用于Ig G/Rta ELISA检测技术研究,适合于鼻咽癌的大规模筛查和早期诊断。     

乙型肝炎基因重组与血源性疫苗免疫持久性的比较

乙肝疫苗的应用为在全世界控制乙型肝炎提供了可能性〔1〕。目前临床上最常应用的乙肝疫苗大致为2种:基因重组疫苗和血源性疫苗,至于哪一种疫苗的免疫原性、免疫持久性和效果更佳尚有争议。国外有学者认为:基因重组与血源性疫苗之间在安全、效力和免疫原性方面没有显著性区别〔     

Gag/IFNα-2b融合基因在痘苗病毒中共表达研究

目的　本实验将编码AIDS病毒 (HIV -1)核心蛋白gag与编码干扰素 (IFNα -2b)基因插入以痘苗病毒复制非必需区血凝素 (HA)基因为侧翼 ,牛痘病毒包涵体 (ATI)启动子和串联的p7 5突变型早期启动子为基本构件的痘苗病毒表达载体 (pJ3 8) ,经与野生型痘苗病毒在细胞内同源重组 ,获得具有生物活性的重组痘苗病毒vJ3 8gag/IFNα -2b。方法　经免疫荧光、Dot -ELISA、SDS -PAGE、Western -blot等方法检测表达产物 ,分析免疫小鼠后血清抗体IgGOD4 90 值与T淋巴细胞的变化。结果　vJ3 8gag/IFNα -2b能表达Gag/IFNα -2b融合蛋白 ,分子量约 60kDa。免疫小鼠实验表明血清抗体IgGOD4 90 值、CD+ 4、CD+ 8T淋巴细胞计数的组间比较 (P <0 0 0 1) ,含IFNα -2b与单纯vJ3 8gag组相比 (P >0 0 5) ,但呈渐进性增高的趋势。 结论　重组痘苗病毒表达的gag/IFNα -2b融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性     

Group 2 Vaccinia Virus,Brazil

In 2011, vaccinia virus caused an outbreak of bovine vaccinia, affecting dairy cattle and dairy workers in Brazil. Genetic and phenotypic analyses identified this isolate as distinct from others recently identified, thereby reinforcing the hypothesis that different vaccinia virus strains co-circulate in Brazil.     

重组痘苗病毒乙肝基因工程疫苗对乙肝母婴传播阻断的研究

重组痘苗病毒乙肝基,因工程疫苗首次用于母婴乙肝传播阻断。该疫苗对e-抗原阳性母亲所生新生儿,用20μg剂量0、1、6,3针免疫计划,抗乙肝病毒携带的保护率T_7和T_(12)均为82.1％,与30μg剂量血源疫苗比较T_7和T_(12)保护率分别是85.8％和88％,两者无差异。基因苗T_3为81.2％。T_7和T_(12)测抗-HBs阳性率均为84.8％,miu/ml值分别为280.3和230.6;而血源苗T_7和T_(12)抗-HBs阳性率为81.6％和87.7％,miu/ml值为127.7和129.8,而T_3时基因苗已有84.6％的人产生了保护性抗体。     

酶联免疫法检测风疹病毒急性感染结果分析

目的探讨酶联免疫法在诊断风疹病毒急性感染中的应用。方法对2100例无偿献血者血浆样本分别检测风疹病毒IgM抗体、IgG抗体,对IgM抗体阳性和IgM抗体阴性且IgG抗体阳性的样本检测其IgG抗体亲合力。结果 2100例样本中,风疹病毒IgM抗体阳性率为0.76%,IgG抗体阳性率为78.67%,447例样本个体风疹病毒IgM抗体和IgG抗体均为阴性。在对IgM抗体阴性且IgG抗体阳性的样本进行IgG抗体亲合力检测时,有19例样本为低亲合力,可判定为原发性感染。在对IgM抗体阳性的样本进行IgG亲合力检测时,样本SZ0259和SZ1490IgM抗体为可疑值,IgG抗体阳性,IgG抗体高亲合力,可能由于IgM抗体常年保持低水平,并非正处于风疹病毒急性感染期。最终确定风疹病毒急性感染的样本为33例,感染率1.57%。结论可同时检测风疹病毒IgM抗体和风疹病毒IgG抗体亲合力来诊断风疹病毒感染,IgM抗体阳性或IgG抗体低亲合力的样本均可判定为风疹病毒急性感染。     

CEA-rV负荷树突状细胞与CIK细胞共培养后对裸鼠结肠癌移植瘤生长的抑制作用

目的探讨负荷了CEA-rV的树突状细胞与CIK细胞共培养后在裸鼠体内特异性的抑瘤作用。方法在Balb/c裸鼠颈背皮下接种Lovo结肠癌细胞,次日起连续6d给予不同的效应细胞(CIK、DC CIK、CEA-rV DC CIK)治疗,观察其对结肠癌生长的抑制作用。结果裸鼠体内实验表明,CEA-rV DC CIK能够显著抑制CEA阳性的Lovo结肠癌细胞的生长,其抑瘤率可达51.2%,明高于CIK组的25.1%以及DC CIK组的28.5%。结论负荷CEA-rV的DC与CIK细胞共培养后在裸鼠体内对CEA阳性的Lovo结肠癌有特异性抑瘤作用。     

Recombinant fowlpox virus inducing protective immunity in non-avian species

The natural host of fowlpox virus is limited to avian species. When inoculated into non-avian tissue culture cells, however, fowlpox virus can initiate an abortive infection. A fowlpox virus was engineered to express rabies virus glycoprotein. On inoculation of the recombinant virus into either avian (permissive) or non-avian (non-permissive) cells, the rabies glycoprotein was expressed as a membrane-associated antigen. Inoculation of the fowlpox virus recombinant into six different species of mammal resulted in specific immune responses to both fowlpox antigens and to rabies glycoprotein. In mice, cats and dogs the immune response was sufficient to protect against a live rabies virus challenge. The results demonstrate the utility of a fowlpox virus vector in immunizing non-avian species against rabies in the absence of productive viral replication of the fowlpox vector.