脂质过氧化对血管内皮细胞源性生长因子分泌的影响

脂质过氧化对血管内皮细胞源性生长因子分泌的影响杨向红陈铁镇一、材料和方法（１）牛主动脉内皮细胞的培养：于无菌条件下取牛主动脉，以消化法进行内皮细胞的原代培养。培养液为含１０％小牛血清的ＤＭＥＭ培养液。第２～５代继代细胞用于实验。（２）脂质过氧化实验：...     

内皮细胞脂质过氧化损伤对平滑肌细胞增殖的影响

内皮细胞脂质过氧化损伤对平滑肌细胞增殖的影响高岩陈铁镇杨向红洪伟本实验以巯基氧化剂联胺引发培养的人血管内皮细胞（ＥＣ）的脂质过氧化损伤，再以脂质过氧化损伤的ＥＣ条件培养液（ＥＣ－ＣＭ）作用于培养的兔血管平滑肌细胞（ＳＭＣ），研究其对ＳＭＣ增殖的影响，...     

Ox-LDL对内皮细胞粘附分子表达及粘附功能影响的研究

目的 :大量的研究已证明高脂血症是动脉粥样硬化的重要危险因素 ,血脂异常可引起血管内皮细胞和血细胞的功能改变。近年来的研究发现 ,其中氧化低密度脂蛋白(Ｏｘ ＬＤＬ)起主要作用。故尔观测Ｏｘ ＬＤＬ对血管内皮细胞粘附分子ＩＣＡＭ 1、ＶＣＡＭ 1、Ｐ ｓｅｌｅｃｔｉｎ表达和粘附作用的影响。方法 :本研究采用人脐静脉内皮细胞 (ＨＵＶＥＣ)作研究载体 ,采用单核细胞系Ｕ937细胞观测Ｏｘ ＬＤＬ对内皮细胞 (ＥＣ)粘附功能的影响 ,采用免疫组化ＡＢＣ法和ＥＬＩＳＡ二种方法观测Ｏｘ ＬＤＬ(10 0 μｇ/ｍｌ和 2 0 0 μｇ/ｍｌ二种浓度 …     

尼莫地平对大鼠原代神经细胞缺血再灌损伤的保护作用

目的 :脑缺血再灌后海马ＣＡ 1区神经细胞发生迟发性神经元死亡 (ＤＮＤ) ,与兴奋性神经毒有关。本文观察尼莫地平对原代神经细胞缺血再灌的变化影响。方法 :采用新生正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,原代神经细胞培养。用缺氧缺糖并复氧复糖模拟缺血再灌模型。实验分组 :正常组、缺血组、缺血再灌组、ＮＩＭ1组 (缺血 ＮＩＭ)、ＮＩＭ2组 (缺血再灌 ＮＩＭ) ,ＮＩＭ浓度为 1 0 μｍｏｌ/Ｌ。观察指标 :1 倒置相差显微镜、ＨＥ染色。2 扫描电镜。 3 ＡＯ染色。 4 ＭＴＴ法神经细胞活性的测定。 6 测定神经细胞培养液中的ＬＤＨ。表明 :1 正常原…     

同型半胱氨酸对培养内皮细胞损伤的研究

目的:本研究拟探讨同型半胱氨酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应,以揭示同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的可能机制。方法:将人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸24h后,观察细胞形态并测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果:(1)同型半胱氨酸不仅可诱导细胞凋亡而且在较高浓度时可致细胞坏死;(2)同型半胱氨酸有较强的促脂质过氧化的效应,并呈量效关系;(3)同型半胱氨酸的上述效应因加入LDL而增强,示同型半胱氨酸与LDL有协同作用。结论:同型半胱氨酸可能是通过氧化应激机制导致内皮细胞出现坏死,凋亡等损伤的改变。     

高糖加高胰岛素对人血管平滑肌细胞增殖及细胞内游离钙水平的影响

目的：了解高糖加高胰岛素对人血管平滑肌细胞（ＨＶＳＭＣ）增殖的影响及其有关机制。方法：用含与不含维拉帕米（Ｖｅｒ）的高糖、高胰岛素、高糖加高胰岛素ＤＭＥＭ培养液分别培养人脐动脉平滑肌细胞３５ｄ；并以正常糖（５６ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖）ＤＭＥＭ培养液培养为对照。结果：高糖、高胰岛素、高糖加高胰岛素培养液培养的各组ＨＶＳＭＣ计数及细胞内游离钙水平均显著高于对照组和含１μｍｏｌＶｅｒ的高糖、高胰岛素、高糖加高胰岛素培养液培养的各组（Ｐ＜００１）。高糖加高胰岛素培养液培养组ＨＶＳＭＣ计数及细胞内游离钙水平显著高于高糖、高胰岛素培养液培养的各组（Ｐ＜００１）。结论：高糖加高胰岛素具有协同促进ＨＶＳＭＣ增殖的作用，这主要是通过增加细胞膜上钙通道开放而实现的。     

EB病毒LMP1促鼻咽癌细胞生长与CD23、bcl-2表达和凋亡的关系

目的 :探讨ＥＢ病毒ＬＭＰ1表达的促鼻咽癌细胞生长作用与ＣＤ2 3、ｂｃｌ- 2表达和细胞凋亡的关系。方法 :用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＬＭＰ1、ＣＤ2 3和ｂｃｌ- 2蛋白的表达 ;用ＭＴＴ法测定鼻咽癌细胞的生长能力 ;用ＤＮＡ电泳法、流式细胞仪测定法和末端脱氧核苷酸转移酶介导核苷酸缺口标志 (ＴＵＮＥＬ)法检测癌细胞凋亡 ;用ＭＴＴ法观察ＣＤ2 3单克隆抗体对鼻咽癌细胞生长能力的影响。结果 :用含ＬＭＰ1基因质粒转染并表达ＬＭＰ1的鼻咽癌细胞 (Ｌ -ＣＮＥ1 )在 1 5%血清和无血清培养液培养下的生长能力均明显增强 ,并表达ＣＤ2 3蛋白 …     

开心散对大鼠肾缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 :研究中药开心散对肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :制作大鼠肾缺血再灌注损伤模型 ,用开心散进行治疗 ,测定血清和肾组织ＳＯＤ、ＭＤＡ、ＮＯ ;观察肾组织病理变化 ,并对肾组织化学ＬＤＨ用计算机图像分析。结果 :肾缺血 1ｈ再灌注 1 5ｍｉｎ后 ,血清和肾组织ＳＯＤ、ＮＯ活性下降 ,ＭＤＡ含量升高 ,肾组织出现明显病理改变 ,肾小管ＬＤＨ活性增加。应用开心散后血清和肾组织ＳＯＤ、ＮＯ活性升高 ,ＭＤＡ含量下降 ,肾组织病理变化有所改善。结论 :开心散具有减轻脂质过氧化反应、清除自由基、保护血管内皮细胞等作用 ,这可能是药…     

慢性粒细胞白血病树突状细胞激活抗白血病免疫的实验研究

树突状细胞 (ＤＣｓ)是体内功能最强的抗原提呈细胞 (ＡＰＣ) ,在抗肿瘤免疫中发挥重要作用[1] 。Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙ[2 ] 用荧光原位杂交 (ＦＩＳＨ)研究表明 ,在慢性粒细胞白血病 (ＣＭＬ) ,外周血获得的ＤＣｓ含ＢＣＲ/ＡＢＬ融合基因 ,在ｒｈＩＬ 2存在下能刺激自体外周血Ｔ细胞杀伤白血病细胞并抑制白血病细胞的生长。由于骨髓中含一定数量的Ｔ细胞 ,我们设想 ,在ＣＭＬ病人骨髓中加入自体ＤＣｓ可以活化这些Ｔ细胞 ,产生抗白血病免疫反应。1　材料与方法1 1　病人选择　为 3例经临床、血液学及细胞遗传学确诊的ＣＭＬ病人 ,其中女性 2…     

脂质过氧化物与抗氧化剂对内皮细胞前列环素合成的影响

本研究以氢过氧化枯烯作用于培养的人血管内皮细胞,激发和促进细胞的脂质过氧化反应,并以各种抗氧化剂作用,观察脂质过氧化与抗氧化作用对内皮细胞前列环素(PGI_2)合成的影响。     

脂质过氧化对人血管内皮细胞NO合成的影响及维生素E的作用

一、材料与方法1.细胞培养 :人脐静脉内皮细胞 (ＨＵＶＥＣ)培养采用本实验室改进的Ｊａｆｆｅ培养法。经免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原阳性 ,鉴定为血管内皮细胞。2 .实验分组 :分 8组 ,第 1组为正常对照组 ;第 2组为氢过氧化枯烯 0 0 1ｍｍｏｌ/Ｌ ;第 3组为氢过氧化枯烯 0 0 5ｍｍｏｌ/Ｌ ;第 4组为氢过氧化枯烯 0 10ｍｍｏｌ/Ｌ ;第 5组为氢过氧化枯烯 0 5 0ｍｍｏｌ/Ｌ ;第 6组为氢过氧化枯烯 1 0 0ｍｍｏｌ/Ｌ ;第 7组为氢过氧化枯烯 0 5 0ｍｍｏｌ/Ｌ +维生素Ｅ(ＶｉｔＥ) 5 0ｍｇ/Ｌ ;第 8组为氢过氧化枯烯 1 0 0ｍｍｏｌ/Ｌ +…     

脂质过氧化对培养的人内皮细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响

目的:观察脂质过氧化对培养的人内皮细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响。方法:培养的人脐静脉内皮细胞随机分为实验组和对照组。实验组与不同浓度联胺(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)作用8h, 对照组不加联胺。细胞原位杂交和细胞酶联免疫吸附法分别测定内皮细胞血管细胞粘附分子-1mRNA和蛋白表达。结果:细胞原位杂交结果图像分析表明, 实验组平均吸光度值分别为0.147±0.013、0.292±0.020和0.396±0.022, 是对照组(0.077±0.011)的1.91倍、3.79倍和5.14倍。方差分析表明, 各组间两两比较有显著差异(P<0.01)。细胞酶联免疫吸附测定结果, 实验组平均吸光度值分别是0.158±0.008、0.220±0.017和0.321±0.023, 为对照组(0.104±0.016)的1.53倍、2.12倍和3.09倍。各组间两两比较有显著差异(P＜0.01)。结论:人脐静脉内皮细胞脂质过氧化增加血管细胞粘附分子-1mRNA和蛋白表达, 这可能促进单核细胞粘附血管内皮, 在动脉粥样硬化发生发展中起重要作用。     

还原型谷胱苷肽对肺泡巨噬细胞凋亡的影响

肺泡巨噬细胞 (ａｌｖｅｏｌａｒｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ,ＡＭ)是肺部防御病原微生物和肺损伤的第一道防线 ,ＡＭ凋亡的异常可影响肺免疫防御的完整性。中性粒细胞(ＰＭＮ)肺内聚集是导致肺损伤的重要因素 ,ＰＭＮ释放介质对ＡＭ有一定的影响。我们采用体外培养细胞方法原代培养大鼠ＡＭ ,分离并激活ＰＭＮ ,收集上清液与ＡＭ共同孵育 ,观察ＡＭ的形态变化 ,测定培养上清液中ＬＤＨ和ＮＯ的释放情况 ,并以原位凋亡检测法和免疫组化测定Ｆａｓ等反映ＡＭ凋亡的变化 ,以期研究还原型谷胱甘肽 (Ｒ ＧＳＨ)对ＡＭ凋亡的影响。材料和方法ＰＭＮ的…     

眼镜蛇毒直接溶解因子对人肝癌细胞株H7402产生NO和LPO的影响

目的：研究眼镜蛇毒直接溶解因子（ＤＬＦ）对人肝癌细胞株Ｈ７４０２产生一氧化氮（ＮＯ）和脂质过氧化物（ＬＰＯ）的影响。结果：ＤＬＦ对体外培养的Ｈ７４０２细胞有杀伤作用，ＩＣ５０为２４７ｍｇ·Ｌ－１，ＤＬＦ与Ｈ７４０２细胞的生长抑制率呈量效关系。ＤＬＦ可介导Ｈ７４０２细胞产生大量ＮＯ２，ＮＯ２量与ＤＬＦ的剂量呈量效关系。在一定剂量范围内ＮＯ２量与Ｈ７４０２的生长抑制率呈显著正相关。用５７０型粘附式细胞仪测定单个细胞内ＬＰＯ，发现ＤＬＦ可使Ｈ７４０２细胞内ＬＰＯ产生增加。结论：ＤＬＦ可杀伤Ｈ７４０２细胞，其部分机制可能是通过诱导肿瘤细胞产生ＮＯ和ＬＰＯ。     

骨髓基质细胞分泌抑制白血病细胞增殖的细胞因子

在研究骨髓基质细胞对造血调控的作用中 ,我们从人骨髓成纤维细胞克隆亚系 (ＨＦＣＬ - 1 )条件培养液中发现新的能抑制ＨＬ - 60细胞增殖的活性组分。 1 .采用ＭＴＴ实验监测活性组分对ＨＬ - 60细胞增殖的抑制能力。采用ＮＢＴ还原实验和酸性磷酸酶测定观察活性组分对ＨＬ - 60细胞的诱导分化能力。 2 .采用中空纤维柱超滤浓缩、ＤＥＡＥｃｅｌｌｕｌｏｓｅ - 52、ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ、ｃｈｒｏｍａｔｏｆｏｃｕｓｉｎｇ、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ - 1 0 0、Ｐｒｅｐ -ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ等程序 ,从ＨＦＣＬ - 1细胞条件培养液中…     

氧氟沙星、叠氮胸苷单独及与干扰素合用对黄病毒增殖的影响

选用氧氟沙星 (ＯＦＬＸ)和叠氮胸苷(ＡＺＴ)单独投入及与ＩＦＮ并用 ,观察其抗病毒活性结果如下 :1　材料和方法1 1　病毒和细胞　所用黄病毒为乙型脑炎病毒ＪＥＶ的ＪａＧＡｒ - 0 1株。细胞是人肝癌细胞株ＨｅｐＧ2。细胞培养所用培养液为ＤＭＥＭ加 10 %胎牛血清 (ＦＣＳ)。1 2　感染病毒　病毒感染剂量为 10ｍ .ｏ.ｉ(ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ) ,37℃吸附 6 0ｍｉｎ ,在 5 %ＣＯ2 孵箱中培养。将各种浓度的药物添加至含病毒的细胞培养液中 ,2 4ｈ后采取培养上清液 ,测定病毒的含量。1 3　病毒滴定　用空斑形成…     

抗氧化剂PDTC抑制氧化的低密度脂蛋白诱导的人肾小球系膜细胞NF_(-k)B活化

目的 研究氧化的低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＨＭＣ）核因子－ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）活化的影响，以及抗氧化剂毗咯二硫氨基甲酸酯（Ｐ ＤＴＣ）对ＮＦ－ＫＢ活化的抑制作用，探讨ＯＸ－ＬＤＬ介导肾损害的基因调控机制及抗氧化剂ＰＤＴＣ防治脂质肾损害的可能性。方法 将Ｏｘ－ＬＤＬ或ＰＤＴＣ与ＨＭＣ共培养后，提取细胞核蛋白进行凝胶迁移率变动分析（ＥＭＳＡ）检测ＮＦ－ＫＢ的活化，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内ＩＫＢα蛋白含量的变化，反映ＩＫＢα的降解及免疫组化染色检测细胞内的Ｐ６５向核转位。结果 正常对照组未见ＮＦ－ＫＢ活化，当用不同浓度（１０、２５、５０及１００ｍｇ／Ｌ）的Ｏｘ－ＬＤＬ，刺激肾小球系膜细胞 ｌｈ后，均可引起细胞 ＮＦ－ＫＢ活化及 ＩＫＢα降解。与对只组相卜较差异显著（ｐ＜０．０５），以５０ｍｇ／Ｌ 的ＯＸ－ＬＤＬ刺激ＨＭＣ１ｈ，ＮＦ－ＫＢ活化及 ＩＫＢα降解最明显。ＮＦ－ＫＢ活化的同时，伴有Ｐ６５由胞浆向胞核的转位。１００μｍｏｌ／Ｌ ＰＤＴＣ，能明显抑制 ＮＦ－ＫＢ的活化、ＩＫＢα降解（ｐ＜０．０１）及 Ｐ６５的核转位。结论Ｏｘ－ＬＤＬ。能诱导ＨＭＣ的ＩＫＢαａ降解、Ｐ６５的核转位，最终使Ｎ     

脂质过氧化对人内皮细胞的损伤及抗氧化剂的保护作用

以氢过氧化估烯作为培养人内皮细胞脂质过氧化反应的引发剂，以亚硒酸钠、维生素E、超氧化物歧化酶作为抗氧剂，应用光镜、脂质过氧化物测定及放射免疫分析等方法观察了抗氧剂对脂质过氧化损伤的内皮细胞形态结构和功能的保护作用。结果表明：氢过氧化枯烯激发和促进了内皮细胞的脂质过氧化反应；而硒、维生素E、超氧化物歧化酶使细胞脂质过氧化物含量减少，由过氧化作用造成的细胞收缩、生物膜系统的损伤程度减轻，对细胞前列腺素（PGI2）合成的抑制作用减弱。提示：上述抗氧剂可能通过对内皮细胞的保护作用，阻止动脉粥样硬化病变的形成和发展。     

当归对氧化低密度脂蛋白致内皮细胞分泌一氧化氮下降和细胞间粘附分子-I表达升高的影响

目的：探讨当归对氧化低密度脂蛋白（ＯＬＤＬ）致血管内皮细胞（ＶＥＣ）损伤的细胞保护作用。方法：以人脐静脉内皮细胞９ＨＵＶＥＣ）为实验模型,采用细胞培养,免疫组化等技术观察ＯＫＬＤＬ对ＶＥＣ分泌一氧化氮（ＮＯ）及细胞间粘分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达的影响并研究当归的保护作用。结果：ＯＬＤＬ使ＥＣ分泌的ＮＯ显著降低,ＩＣＡＭ－１的表达显著升高。当归明显忱一作用,而阿托品能阻断当归的作用结论：当归能拮抗     

联胺诱导培养的人内皮细胞表达血管细胞黏附分子-1

细胞黏附分子涉及许多生理和病理过程 ,如动脉粥样硬化 (AS) [1] 。有些因素可能诱导细胞黏附分子的表达 ,如氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)诱导培养的内皮细胞表达血管细胞黏附分子 1(VCAM 1) [2 ] 。这提示细胞黏附分子可能是导致AS的一种重要因素。我们拟用氧化剂联胺处理培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,诱导其脂质过氧化损伤 ,观察其VCAM 1mRNA和蛋白表达 ,为抗氧化剂防治AS提供实验依据。一、材料与方法1 HUVEC培养与分组 :用胰酶消化法获取HUVEC ,培养于M199培养基 (Gibco公司产品 ) ,含 5 %新生牛血清、10 %胎牛血清、5 …