抗PSMA7单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备抗蛋白酶体α7亚基(PSMA7)的单克隆抗体,为PSMA7的功能研究奠定基础。方法以纯化的重组蛋白PSMA7为抗原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备PSMA7单克隆抗体,并用间接ELISA法和Western blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定。结果成功建立两株稳定分泌抗PSMA7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为B013和B001。检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1∶128和1∶256,腹水效价为1∶25600和1∶32000。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。Westernblot及免疫组化实验证实,两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性PSMA7蛋白。结论成功建立了两株效价高、特异性好的抗PSMA7单克隆抗体杂交瘤细胞,制备的单克隆抗体可用于PSMA7蛋白的鉴定,为其生物学功能研究奠定了基础。     

抗牛心肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

血清肌酸激酶(CK)及其同工酶在诊断急性心肌梗塞及骨胳肌损伤有重要的临床价值。近年来国内外已广泛应用,其方法有离子交换柱层析法,电泳法和定量的动力学法(DTT对CK-MB选择活性作用)以及免疫学方法等。前三种方法均较繁琐且有的特异性差。免疫学方法较为省时省力,尤其特异性、敏感性均较高,但目前使用的均为多克隆抗体。为进一步提高CK检测中特异性和敏感性,且由于人心CK-MM抗原来源较困难,我们制备了抗牛心CK-MM单克隆抗体。     

抗Erbin特异性单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗Erbin单克隆抗体.方法:应用基因工程技术构建含Erbin PDZ序列的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)以获得重组蛋白的表达;采用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白;通过质谱鉴定重组蛋白;利用纯化的重组蛋白免疫小鼠,通过细胞融合技术制备单克隆抗体.结果:构建了原核表达载体pET-28a(+)-Erbin PDZ,获得了重组蛋白在工程菌中的高效表达.通过对以包涵体形式存在的重组蛋白进行洗涤、溶解、复性和纯化,获得了纯度在90%以上的重组蛋白.经质谱鉴定确证表达的重组蛋白为Erbin PDZ.用重组蛋白免疫小鼠后,经细胞融合、筛选及鉴定,获得了高效价的单克隆抗体.讨论:该抗体可识别天然状态下的Erbin蛋白,可用于ELISA、免疫荧光和免疫沉淀实验.抗Erbin单克隆抗体的制备为研究Erbin的功能奠定了基础.     

抗河流弧菌单克隆抗体的建立及初步鉴定

目的 制备高效、特异的抗河流弧菌单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),为海洋致病细菌的快速免疫诊断提供技术支持.方法 选用雌性BALB/c小鼠(8周龄)制备成为灭活河流弧菌免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备出抗河流弧菌杂交瘤细胞株,用Giemsa染色对其进行染色体鉴定,并用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法筛选其与河流弧菌及其他重要海洋细菌的交叉反应特异性.结果 共获得4株抗河流弧菌mAb,均符合杂交瘤细胞染色体特点,具有良好的特异性和免疫反应性,分别命名为01H10,02F12,05F3和03G10.结论 本研究制备、筛选出抗河流弧菌的mAb,有助于建立抗河流弧菌快速免疫检测试剂盒.     

抗人肺炎支原体单克隆抗体的制备与鉴定

肺炎支原体是侵犯人呼吸道的重要病原体,其感染广泛存在于世界各地。能引起咽炎、支气管炎,尤以婴幼儿肺炎较常见,有时也可引起其他系统的并发症,如脑膜脑炎、心肌炎、心包炎、肾炎和免疫性溶血性贫血等。目前病原学诊断主要用分离培养和常规血清学试验、这些方法费时、敏感性也不高。研制抗人肺炎支原体单克隆抗体,将有助于对支原体感染进行早期快速诊断,对临床合理用药有重要意义。     

抗PEA受体结合区单克隆抗体的制备及鉴定

目的探讨绿脓杆菌外毒素A(PEA)中和性单克隆抗体在预防和治疗绿脓杆菌感染中的免疫保护作用.方法以重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法筛选细胞培养上清,采用有限稀释法对阳性孔进行克隆,3次克隆后获得4株能稳定分泌抗PEA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1C4,1D4,2E12和3C6.结果细胞培养上清ELISA效价为4000～8000,腹水ELISA效价可达25600～51200,其中3C6抗体在细胞上的中和试验显示具有较高的中和效价,其亲和常数为8.93×108.结论获得的单克隆抗体可在抗烧伤绿脓杆菌感染中发挥重要作用.     

抗A型肉毒毒素鼠源性单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备与鉴定抗A型肉毒神经毒素重链C端（ heavy chain of botulinum neurotoxin serotype A, BoNT／AHc）特异性鼠单克隆抗体。方法通过纯化BoNT／AHc抗原、免疫BALB／c小鼠并建立杂交瘤细胞以制备鼠单抗,用ELISA、Western印迹实验和抗体分型试剂盒进行分析鉴定,并通过ELISA检测鼠单抗与BoNT／AHc突变体结合,初步鉴定其在BoNT／AHc的结合表位。结果得到纯度较高的BoNT／AHc抗原,制备了4株特异性鼠单抗1A4、3H3、3H7、5H8。间接ELISA结果显示,单抗细胞上清效价均＞3．0×103;Western印迹检测结果显示,单抗均能与BoNT／AHc特异性结合;抗体亚型鉴定结果为1A4、3H7属于IgG1（Κ）,3H3属于IgM（Κ）,而5H8属于IgG2b （Κ）;叠加ELISA实验表明,4株单抗抗原识别表位相近;用ELISA检测单抗与BoNT／AHc突变体结合实验结果初步确定了4株单抗与BoNT／AHc的结合表位。结论对抗A型肉毒毒素鼠源性抗体完成了制备和鉴定,为肉毒毒素中和抗体的开发与阐明中和抗体的表位奠定了基础。     

分泌抗HBe单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

HBeAg与HBcAg是乙型肝炎特有的两类抗原性不同的抗原,但均由同一基因区所编码。我们采用内切酶定位剪切及简易快速克隆的方法,选择了仅N末端3个氨基酸编码子差别的PMM2166和PMM2066作了系统比较,获得HBeAg在大肠杆菌中高效表达。将基因工程菌制备的HBeAg(下称基因HBeAg)用十二烷基磺酸钠(SDS)和2巯基乙醇(2-ME)处理后常规免疫BALB/c小鼠。取小鼠脾细胞与同系小鼠SP2/O骨髓瘤细胞融合,选用两种不同的酶免疫试验进行筛选,结果共获16个分泌HBe单克     

抗炭疽芽孢杆菌菌体抗原单克隆抗体的制备及其鉴定

炭疽芽孢杆菌 (简称炭疽菌 )是经典的生物战剂 ,被列入国际禁止生物武器公约生物战剂清单。“9·11”事件以后 ,在被列入美国国家反恐预案红色警报 (最高级别 )的可引起生物恐怖的烈性病原微生物中 ,炭疽菌是第一个。炭疽菌用于生物恐怖袭击一般是以喷洒和放置的形式实施。快速侦检是确定是否发生生物恐怖袭击的重中之重 ,“炭疽邮件”事件后 ,美国投入大量经费对环境中炭疽菌污染的快速检测进行研究。美国 2 0 0 2年报道了抗炭疽细胞壁和荚膜多糖抗原单克隆抗体 (McAb)用于直接免疫荧光法 (DFA)检测。在 2 30株炭疽菌中 ,只有 1株未检出 …     

抗α2巨球蛋白单克隆抗体的制备及临床初步应用

α_2巨球蛋白(α_2M)大多由单核细胞产生,它是一种在血液中具有生物学活性的大分子糖蛋白,分子量80万左右,除具有抗放射损伤作用外,尚可参与免疫调控作用。业已证实α_2M在体内外能抑制多种免疫反应,与慢性肝、肾疾病的关系较为密切。我们用细胞融合技术,建立了分泌抗α_2M的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,并初步应用于临床标本的检测,现将结果报告如下。 材料和方法 一、动物免疫:有关α_2M提取,按文献方法进行。     

抗人IgK和Igλ链单克隆抗体的制备及临床初步应用

用初乳和血清IgA免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP_2/O和NS-1瘤细胞融合,以ELISA双抗原夹心法检测获得5株杂交瘤细胞。其中3株(1D1、5C3、11A7)分泌抗人游离和结合型λ轻链;2株(4G12、14A6)分泌抗人游离和结合型K轻链。4G12与结合型K链反应比游离K链好。这些细胞株在长达1年的培养中仍能稳定分泌特异性单克隆抗体,经液氮冻存10个月后杂交瘤细胞仍保持原有的特性。用固相抗原竞争ELISA试验表明,两个抗K链McAb是针对不同的抗原位点,而3株抗λ链则针对相同的抗原位点。用于检测副蛋白和本周氏蛋白具有很好的特异性和敏感性。把McAb4G12-HRP和1D1-HRP混合,用于检测-EB病毒早期抗原(EA)和壳抗原(VCA)抗体被证明是满意的,同时试用于抗核抗体的检测也获得了初步的结果。     

分泌抗HIVp24单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其初步鉴定

以含人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）核心抗朱ｐ２４全部氨基酸序列的重组蛋白ｐＧ１免疫小鼠，用免疫脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，成功地建立了５株分泌抗ＨＩＶｐ２４单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株。经鉴定，这５株ＭｃＡｂ与乙肝核心抗原（ＨＢｃＡｇ），丙肝Ｃ区，ＮＳ－３区抗原不发生交叉反应，而与重组ｐ２４抗原产生特异反应，本组单抗的研制成功为建立检测ＨＩＶｐ２４抗原的方法奠定了基础。     

抗人红细胞膜血型糖蛋白A单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗人红细胞膜血型糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）的特异单克隆抗体,对研究ＧＰＡ基因突变和ＧＰＡ蛋白糖基化变异有重要意义。方法;分别用ＯＭ和纯化Ｍ－ＧＰＡ蛋白以及ＯＮ红细胞和纯化Ｎ－ＧＰＡ蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓细胞Ｓｐ２／０融合,经正常和酶处理人细胞凝集筛选,间接免疫荧光,酶联免疫分析及蛋白质印迹鉴定。制备了鼠抗人ＧＰＡ的单克隆抗体。结果;获得抗ＧＰＡ蛋白１～３９位肽投入及相关糖链     

抗-HIV单克隆抗体的筛选与鉴定

我们用HIV抗体阳性者血浆包被聚苯乙烯条,加入纯化的HIV组织培养抗原,通过夹心ELISA法,筛选出3株能分泌抗HIV单克隆抗体杂交瘤细胞,传代稳定。培养上清经Western blot染色鉴定含有抗-HIV gag蛋白。夹心ELISA法测得杂交瘤细胞培养上清中单克隆抗体滴度达到1∶6400,接种BALB/C小鼠获腹水抗体效价为1∶2430000。实验表明,用此单克隆抗体检测HIV病人血清抗体敏感、特异、稳定、重复性好,是一种良好的试剂。     

破伤风毒素单克隆抗体的制备及鉴定

目的 一株抗破伤风毒素鼠源单克隆抗体的制备与鉴定.方法 从实验室前期以破伤风类毒素为抗原筛选得到的6株稳定细胞株中选取4E12进行制备及鉴定,首先将4E12细胞株扩大培养后腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水,经Protein G柱和PD10脱盐柱两步纯化鼠源单抗;其次通过SDS-PAGE电泳检测抗体纯度并通过分型试剂盒鉴定抗体轻重链亚型,免疫印迹法鉴定抗体结合区域及表位类型,非竞争ELISA法测定抗体亲和力常数以及小鼠中和实验评价抗体中和活性.结果 获得能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株4E12,其细胞培养上清效价为4×103,抗体轻重链分别为κ型和IgG1型,CDR3序列分别为SQSTHVPPT和ARKGTGTGFNY;4E12腹水抗体效价为3.2×104,抗体经纯化后纯度＞95％,以线性表位与TeNT/Hc结构域特异性结合,两者的亲和力常数为3.6×10-10 mol/L,小鼠中和实验结果显示,4E12抗体可部分中和破伤风毒素.结论 筛选到一株高亲和力的鼠源单抗,为破伤风毒素检测及中和抗体研发奠定了基础.     

抗人Toll样受体4合成肽单克隆抗体的制备与鉴定

在对Toll样受体4（TLR4）B细胞优势表位预测的基础上，合成该B细胞表位多肽，并以此为抗原免疫BABL／C小鼠，经鼠－鼠杂交，ELISA筛选，有限稀释克隆化，得到一株分泌抗TLR4合成肽的杂交瘤细胞株B4，腹水效价为1：100000。其免疫球蛋白为IgG2,k型。ELISA鉴定表明该抗体能识别TLR4^ 性细胞，Western blot分析显示在分子量约90kD处呈现单一免疫色带。