辐射小鼠骨髓CD34~ 细胞的变化及其意义

目的　研究γ射线照射后C5 7小鼠骨髓中CD34 细胞的数量变化规律及其意义。方法　流式细胞仪测定CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例 ;AnnexinV FITC试剂盒检测骨髓细胞的凋亡 ;细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果　①CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例随照射剂量的加大而降低 ,在 5 5Gy照射后 14d内小鼠CD34 细胞的减少表现为持续性 ;②小鼠照射后6h骨髓细胞凋亡率最高 ,以 5 5Gy照射组最为明显 ;③ 5 5Gy照射后小鼠骨髓细胞周期紊乱。 结论　γ射线损伤骨髓中的干祖细胞 ,造成骨髓中干祖细胞的数量减少 ,其途径之一是诱导骨髓细胞凋亡。     

辐射小鼠骨髓CD34+细胞的变化及其意义

目的 研究γ射线照射后C57小鼠骨髓中CD34^ 细胞的数量变化规律及其意义。方法 流式细胞仪测定CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例;Annexin V-FITCy试剂盒检测骨髓细胞的凋亡;细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果 ①CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例随照射剂量的加大而降低,在5．5Gy照射后14d内小鼠CD34^ 细胞的减少表现为持续性;②小鼠照射后6h骨髓细胞凋亡率最高,以5．5Gy照射组最为明显;③5．5Gy照射后小鼠骨髓细胞周期紊乱。结论 γ射线损伤骨髓中的干祖细胞,造成骨髓中干祖细胞的数量减少,其途径之一是诱导骨髓细胞凋亡。     

Hp/DNA双参数分析放射损伤小鼠骨髓细胞周期、凋亡和Hp

目的：建立结合珠蛋白(Hp)／DNA双参数流式细胞技术，以探讨放射损伤小鼠骨髓细胞中Hp含量与细胞周期和凋亡的关系。方法：小鼠骨髓细胞经70％乙醇固定后，Triton-X100破膜，间接免疫荧光技术标记Hp，PI标记DNA，上流式细胞仪测试。用ModFit软件设双门法分析Hp^ 和Hp^-细胞的细胞周期和凋亡，CELLQuest软件分析Hp^ 细胞比例。结果：γ射线照射后6h小鼠骨髓有核细胞中Hp^ 细胞的比例明显高于未照射对照组，骨髓细胞的凋亡来自于Hp^-细胞，Hp^ 细胞未见凋亡，Hp^-细胞发生的G2/M阻滞比Hp6 细胞严重。这些信息是单用Westem印迹法或单纯DNA分析所不能提示的。结论：Hp/DNA双参数流式细胞技术可用于分析Hp与细胞周期和凋亡的关系，是一种快速、客观的分析方法。     

rhIL-11对急性放射病小鼠骨髓细胞凋亡的影响

目的　研究rhIL 11对急性辐射损伤后骨髓造血细胞凋亡的影响。方法　应用原位末端标记、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法分别在照射后不同时间观察了rhIL 11对 5 5Gy6 0 Coγ射线全身照射小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响。应用免疫组织化学法观察了各组小鼠骨髓细胞Bcl 2和P5 3蛋白的表达变化。结果　①照射前应用rhIL 11可使照射后 6h小鼠骨髓造血细胞凋亡率下降 ,而照射后给药组照射后 12h凋亡率下降更加明显。②照射后 3d给药组P5 3蛋白表达均较照射对照组明显降低 (P <0 0 1) ,Bcl 2蛋白表达则明显升高 ;照射后 7d给药组Bcl 2升高仍明显。结论应用rhIL 11可有效抑制照射后小鼠骨髓造血细胞凋亡 ,有利于造血功能的恢复。rhIL 11对细胞凋亡的影响可能与Bcl 2和P5 3等蛋白的调节密切相关。     

小鼠受γ射线全身照射后FL表达变化的研究

目的 FL(fit3 ligand)是一种作用于早期造血细胞的生长因子，为进一步研究FL水平与辐射所致造血损伤的相关性，观察了小鼠受γ射线全身照射后FL的表达变化。方法以^60Coγ射线全身一次性均匀照射所致骨髓型急性放射病小鼠为模型，应用ELISA、流式细胞术、Western blot法检测照射前后小鼠外周血、骨髓、胸腺与脾脏中FL的表达变化。结果 小鼠受2～10Gyγ射线照射后24h，血清中FL浓度即有增加，并且随时间推移FL水平逐渐升高；吸收剂量在2～6Gy之间时，FL的水平随剂量增加而增加。6Gyγ射线照射后24h，外周血白细胞膜表面FL的表达增加，但24h后细胞膜表面FL的表达没有升高。6Gyγ射线照射后24h，骨髓、胸腺和脾脏有核细胞膜表面FL的表达明显升高，总蛋白中FL的水平亦明显增加。结论 辐射后早期小鼠FL可溶性与膜结合型蛋白的水平都有升高，而且辐射后血清中FL的水平与受照剂量及照射后时间存在相关性。     

X射线全身照射对小鼠骨髓细胞CyclinD、CDK4表达的影响

目的 研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞CyclinD、CDK4表达的影响，以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G1阻滞的分子机理。方法 采用Northern blot和半定量RT－PCR方法分别检测CDK4、CyclinD基因转录水平变化；流式细胞仪检测了X射线全身照射小鼠骨髓细胞CyclinD、CDK4的表达及周期时程的变化。结果 2Gy X射线全身照射后12h骨髓细胞出现G1期细胞百分数升高（P＜0．05），G2＋M期细胞百分数于照后4h及12h升高（P＜0．05）；CyclinD基因转录水平从2h开始下降，48h达到最低，照后72h恢复至正常水平，CDK4的变化趋势与CyclinD相似，只是从8h开始下降，48h达到最低，照后72h恢复假照组水平；CyclinD蛋白表达在照射后2、4、24、48h显著降低（P＜0．01），CDK4蛋白表达在照射后2h开始急剧下降，持续至照射后48h仍未恢复到对照水平（P＜0．01）。结论 2Gy X射线全身照射可诱导小鼠骨髓细胞发生G1、G2阻滞；CyclinD、CDK4基因及其蛋白产物可能在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞周期阻滞中起重要作用。     

中子辐射后骨髓造血功能损伤以及IL-11受体的表达变化

目的 探讨IL-11受体在中于照射骨髓造血细胞损伤后的变化规律及其意义。方法 100只雄性BALB／c小鼠经2．5和4．0Gy中子全身照射，于照射后6h，1、2、3、5、7、14和28d分批活杀，应用光镜和电镜观察骨髓病理变化；流式细胞术和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞凋亡；免疫组化和图像分析定量检测IL-11Rα及gp130的表达。结果 2．5Gy中子照射后3d内，小鼠骨髓造血细胞见凋亡与坏死，数量进行性减少；至照射5d后逐渐恢复，28d恢复至正常。4．0Gy中子照射，骨髓损伤更严重，未见恢复。2．5Gy中子照射后1d内，IL-11Rα在造血细胞膜及胞浆略有增加，2～7d减少，14d后逐渐恢复；而gp130于照射后7d内在造血细胞膜及胞浆减少，14d后逐渐恢复。4．0Gy照射后2d内，IL-11Rα和gp130均进行性减少，较2．5Gy减少更为明显。结论 IL-11Rα及gp130表达在中于照射后骨髓损伤期减少，而于恢复期逐渐恢复，参与了骨髓辐射损伤后造血功能重建的病理生理过程。     

血管内皮生长因子在放射损伤小鼠骨髓基质细胞中的表达

目的 探讨辐射对小鼠骨髓基质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及凋亡率变化。方法 采用RT—PCR和Western blot方法，初步检测了昆明小鼠经6．0Gy^60Coγ射线全身照射后小同时间骨髓基质细胞VEGF mRNA和蛋白表达水平的变化；并用流式细胞术检测相应时间的骨髓基质细胞凋亡率。结果 辐射损伤后，小鼠骨髓基质细胞VEGF表达在mRNA水平和蛋白水平均显著降低，骨髓基质细胞凋亡率显著升高；随时间延长，骨髓基质细胞VEGF表达有所恢复，凋亡率也逐渐降低，但14d时仍未恢复正常。结论 6．0Gy^60Coγ射线可抑制骨髓基质细胞VFGF表达，引起细胞凋亡。说明辐射所致骨髓微环境损伤与基质细胞中VEGF表达异常有关。     

电离辐射诱导EL-4细胞Caspase-3、P53蛋白表达及其生物学作用

目的研究电离辐射对EL-4细胞中Caspase-3和P53蛋白表达的影响，及其对辐射诱导细胞凋亡及多倍体细胞的作用。方法采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术检测蛋白表达的变化，采用PI荧光标记及流式细胞术检测细胞凋亡及多倍体细胞的变化。结果实验表明，4．0GyX射线照射后8及12h，EL-4细胞中Caspase-3蛋白表达与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；照射后2、4、8、12及24h，P53蛋白表达与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。实验还表明，4．0Gy照射后2、4、8、12、24、48及72h，EL-4细胞凋亡与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05～P〈0．001）；而照射后2～48h，多倍体细胞数与对照组比较则未见明显变化。结论电离辐射可诱导EL-4细胞Caspase-3及P53蛋白表达增高，可能在辐射诱导细胞凋亡中起重要作用，而辐射诱导多倍体细胞的分子通路则可能是P53非依赖性的。     

中子和γ射线照射对小鼠骨髓造血细胞死亡方式的探讨

目的探讨中子和γ射线照射后小鼠骨髓造血细胞的死亡方式及其意义。方法采用不同剂量中子和^60Coγ射线全身照射350只BALB／c小鼠，通过光镜、电镜、流式细胞术、原位末端标记和DNA凝胶电泳等观察造血细胞凋亡与坏死情况。结果中子照射后小鼠骨髓中坏死和凋亡的造血细胞均明显增多，5．5Gy组以坏死为主；而γ射线照射后则以凋亡为主，且呈剂量相关性。凋亡的细胞表现为核染色质浓缩、边移，呈半月型、环状或不规则状，凋亡小体形成，电泳下见DNA梯状图谱。坏死的细胞表现为核肿胀、溶解，线粒体膜、核膜等膜性结构破坏。结论2．5～5．5Gy中子及5．5～12Gy γ射线照射可使骨髓造血细胞死亡方式不同：中子照射见凋亡与坏死并存，5．5Gy组以坏死为主；而γ射线照射则以凋亡为主。     

右归丸对骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期和凋亡的影响

目的观察右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓细胞周期和凋亡的影响,探讨其可能造血调控作用机制。方法用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法和流式细胞术（FCM）分别检测右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数以及骨髓细胞周期和调亡的影响。结果右归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、骨髓有核细胞（BMC）数,右归丸高剂量对血小板（PLT）和白细胞（WBC）有明显升高作用。右归丸低、高剂量组均能促进骨髓GO／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化,从而导致G2／M期细胞比例明显升高,增殖指数（PI）也明显升高。中、低剂量组右归丸的骨髓细胞凋亡比例显著下降。结论右归丸可能通过促进骨髓细胞修复受损的DNA,加速通过GI／S和S期监测点,进行增殖和分化;抑制造血细胞的凋亡;调节造血细胞增殖与凋亡之间的平衡等机制,从而促进损伤骨髓造血功能恢复。     

Microarray analysis of differentially expressed genes in mouse bone marrow tissues after ionizing radiation

Purpose: To identify differentially expressed genes in mouse bone marrow involved in radiation-induced injury.

Materials and methods: Microarray analysis was used to identify the differentially expressed genes and other techniques, e.g., polymerase chain reaction (PCR), western-blotting and antisense were also used to validate the results.

Results: DNA microarray analysis demonstrated that the mRNA of 34 genes increased and 69 genes decreased in mouse bone marrow cells (BMC) from C57BL mice 6h after a whole body dose of 6.5 Gy. These differentially expressed genes were involved in a number of processes including DNA replication/repair, proliferation/apoptosis, cell cycle control and RNA processing. In these experiments, a decline of the mammalian homolog Sir2a (an acronym for the silent mating type information regulation 2 homolog [SIRT1]) mRNA accompanied by an increase of P53 protein acetylation was observed in irradiated BMC. To determine whether the reduced SIRT1 is related to the higher acetylation status of P53 after irradiation, we designed and synthesized antisense oligonucleotides (AS) targeting human SIRT1 mRNA. Notably, AS transfection increased tumor protein 53 (P53) protein acetylation and bax-luciferase activity in human bone marrow stromal cell line (HS-5) after radiation. Furthermore, the AS transfer stimulated cell apoptosis in post-irradiation HS-5 cells.

Conclusion: Ionizing radiation (IR) affects the expression of a series of genes including genes involved in G1/S transition and the P53 pathway. Among those, reduction of SIRT1 was seen to be involved in transactivation of P53.     

AMPKα信号途径参与吡格列酮对人肝癌细胞的凋亡诱导作用

目的观察吡格列酮干预对体外培养的HepG2细胞凋亡和细胞周期的影响,并探讨其药理作用机制。方法以不同浓度的吡格列酮干预体外培养HepG2细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期以及激活的胱天蛋白酶（Caspase）3蛋白表达,RT-PCR检测PPARγmRNA的表达,Western印迹检测PPARγ蛋白、磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPKα）蛋白和磷酸化AMPKα（p-AMPKα）蛋白的表达;并将PPARγ小干扰RNA（pGCsi-PPARγ）表达质粒转染HepG2细胞,观察PPARγ基因沉默后吡格列酮对细胞凋亡作用的影响。结果不同浓度的吡格列酮干预HepG2细胞后,诱导细胞的凋亡,在此过程中G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,并呈一定的剂量依赖关系;但在上述过程中,PPARγmRNA和蛋白的表达没有显著变化;吡格列酮在高浓度（20μmol/L）时对pGCsi-PPARγ表达质粒转染的HepG2细胞仍表现出凋亡诱导作用。不同浓度的吡格列酮干预后未见激活的caspase 3表达峰,对NF-κB的DNA结合活性也无明显影响,但其在高浓度（20μmol/L）时明显增加对照组和pGCsi-PPARγ转染组p-AMPKα的表达,而总AMPKα则无明显变化。结论吡格列酮能够干扰细胞周期、诱导其凋亡,这种作用不是完全通过PPARγ依赖途径实现的,AMPKα信号途径参与上述过程。     

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞周期和增殖活性的影响及restin基因表达的初步研究

目的:检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)在乳腺癌MCF-7细胞周期、增殖、分化和凋亡过程中的作用,以及对。restin基因表达的影响,从而为研究其功能提供线索。方法:用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化;MTT 法检测细胞增殖活性;RT-PCR检测restin基因表达。结果:在ATRA诱导下,细胞出现G1期阻滞和生长抑制,增殖活性下降,restin基因开始表达,并呈增长趋势。结论:在ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡过程中,ATRA能使MCF-7细胞 G1期阻滞,并能抑制MCF-7细胞生长,促使其凋亡,restin基因参与细胞周期的调控,特别是细胞凋亡。     

Microarray analysis of differentially expressed genes in mouse bone marrow tissues after ionizing radiation

PURPOSE: To identify differentially expressed genes in mouse bone marrow involved in radiation-induced injury. MATERIALS AND METHODS: Microarray analysis was used to identify the differentially expressed genes and other techniques, e.g., polymerase chain reaction (PCR), western-blotting and antisense were also used to validate the results. RESULTS: DNA microarray analysis demonstrated that the mRNA of 34 genes increased and 69 genes decreased in mouse bone marrow cells (BMC) from C57BL mice 6 h after a whole body dose of 6.5 Gy. These differentially expressed genes were involved in a number of processes including DNA replication/repair, proliferation/apoptosis, cell cycle control and RNA processing. In these experiments, a decline of the mammalian homolog Sir2a (an acronym for the silent mating type information regulation 2 homolog [SIRT1]) mRNA accompanied by an increase of P53 protein acetylation was observed in irradiated BMC. To determine whether the reduced SIRT1 is related to the higher acetylation status of P53 after irradiation, we designed and synthesized antisense oligonucleotides (AS) targeting human SIRT1 mRNA. Notably, AS transfection increased tumor protein 53 (P53) protein acetylation and bax-luciferase activity in human bone marrow stromal cell line (HS-5) after radiation. Furthermore, the AS transfer stimulated cell apoptosis in post-irradiation HS-5 cells. CONCLUSION: Ionizing radiation (IR) affects the expression of a series of genes including genes involved in G1/S transition and the P53 pathway. Among those, reduction of SIRT1 was seen to be involved in transactivation of P53.     

人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞诱导凋亡作用

目的探讨人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞的诱导凋亡作用。方法用浓度梯度Rg3处理Hela细胞,用流式细胞仪方法检测细胞凋亡及细胞周期的变化,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、bax表达。结果 10、20、40 mg/L Rg3作用Hela细胞24 h后的凋亡率分别为(5.6±1.4)%、(10.3±2.7)%、(21.2±4.9)%,均高于对照组(P<0.01);同时随着Rg3浓度的增加,G2/M期细胞比例升高,Bcl-2表达明显降低,bax基因表达明显升高(P<0.01)。结论 Rg3能将Hela细胞阻滞在G2/M期,通过上调bax和下调Bcl-2表达诱导肿瘤细胞凋亡。其作用呈浓度依赖性。     

rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用

目的 探讨rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用。方法 将BALB/c小鼠130只用随机数字表法分为对照组(30只)、照射组(40只)、rhIL-11治疗组(30只)、rhIL-11+rhG-CSF治疗组(30只),用3.0 Gy中子照射,并于照射后给予600 μg·kg^－1·d^－1 的rhIL-11和50 μg·kg^－1·d^－1的rhG-CSF,1次/d,共3 d;用血细胞自动分析仪、HE染色、AgNOR染色、流式细胞术、免疫组织化学染色和图像分析等,检测小鼠外周血细胞、骨髓病理形态变化、有核细胞计数、AgNOR含量、凋亡与坏死率和Bax蛋白含量的变化。结果 照射组和rhIL-11治疗组于照射后6 h～3 d,小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞计数和AgNOR含量进行性下降,Bax蛋白于造血细胞胞质内呈阳性至强阳性表达,含量进行性增加(F=0.003,P＜0.01);照射后6 h,照射组小鼠造血细胞凋亡与坏死率增加,以坏死为显著;照射后3 d,rhIL-11+rhG-CSF治疗组小鼠的骨髓有核细胞计数和AgNOR含量均增加(F=0.037、0.026,P＜0.05),Bax蛋白含量减少(F=0.018,P＜0.05);rhIL-11治疗组各指标较照射组差异无统计学意义。结论 3.0 Gy中子照射可使小鼠骨髓造血功能严重受损,rhIL-11和rhG-CSF对照射后小鼠的造血功能恢复有一定改善作用,联合使用效果优于单独使用。     

三羟异黄酮对正常和辐射损伤小鼠骨髓造血细胞周期的影响

目的 三羟异黄酮（genistein,GEN）对正常和辐射损伤小鼠骨髓造血细胞（bone marrow hematopoietic cell,BMHC）的细胞周期、增殖能力及bc1-2基因表达的影响,以期阐明其防护放射性造血损伤的分子机制.方法 照射前24h,GEN以160 mg/kg体重剂量给予小鼠灌胃,流式细胞仪观察BMHCs细胞周期及增殖能力变化,RT-PCR及Western blot方法分析BMHCs bcl-2 mRNA和蛋白表达情况.结果 ①GEN可诱导正常小鼠BMHCs细胞周期一过性改变,即给药后1 d,BMHCs增殖抑制,大量细胞阻滞于G0/G1期;给药后2 d,GEN诱导BMHCs由G0/G1期向S期转换,S期细胞明显增多;4d后逐渐恢复正常.②照射前24 h给药,GEN可减少射线导致的BMHCs增殖抑制,使照后阻滞于G0/G1期细胞减少;S期和G2/M期细胞增多,细胞增殖能力较强.同时,GEN预处理组bcl-2 mRNA及蛋白的表达均较高.结论 改变BMHCs细胞周期、降低BMHCs的辐射敏感性、抑制BMHCs凋亡和提高残留BMHCs的增殖分化能力可能是GEN防护放射线造血损伤的分子机制之一.