银杏叶提取物对泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞增殖及Survivin, TIP30基因表达的影响

探讨银杏叶提取物(EGB)对泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞增殖、凋亡的影响, 并从基因和蛋白水平上分析EGB对Survivin和TIP30基因表达的影响。不同浓度EGB处理体外培养的人泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞, 应用MTT法检测细胞增殖;Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;RT-PCR和Western blotting分析Survivin, TIP30基因和蛋白的表达。结果发现EGB对ACC-2细胞的体外增殖具有抑制作用, 量效关系显著, 与对照组比较有统计学差异(P <0.01), 半数抑制浓度(IC₅₀)为88 mg·L。经流式细胞仪检测表明, EGB能使ACC-2细胞G₀/G₁期逐渐增加, G₂/M期和S期逐渐减少, 并且随着剂量的增加, ACC-2细胞凋亡率明显增加(P <0.05或P <0.01)。RT-PCR与Western杂交结果一致表明随着EGB浓度的升高, Survivin基因表达明显减少(P <0.01), 而TIP30基因表达则显著提高(P <0.01)。因此, EGB能有效抑制人泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞Survivin基因表达, 并促进TIP30的表达, 诱导ACC-2细胞凋亡, 从而抑制肿瘤细胞增殖。该研究为中药成分在肿瘤治疗中的应用提供了一定的理论和实验依据。     

丹酚酸B干预PI3K/AKT通路对STZ诱导大鼠胰岛细胞凋亡的影响

[目的] 研究丹酚酸B是否对受损的大鼠胰岛团有保护作用。[方法] 纯化的大鼠胰岛团分为5组：空白对照组（Control），链脲佐菌素（STZ）处理组，丹酚酸B（SalB）低、中、高剂量组（STZ+SalB 15 μmol/L、STZ+SalB 30 μmol/L、STZ+SalB 60 μmol/L）。空白对照组的胰岛团以柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液处理；STZ处理组的胰岛团以8 μmol/L的STZ处理4 h后换成普通完全培养基；STZ+SalB各剂量组先以STZ处理4 h，换掉STZ溶液，以不同浓度的SalB处理72 h。TUNEL染色法检测各组胰岛团凋亡情况。ELISA法检测各组胰岛团上清液中的胰岛素水平。SalB低、中、高剂量直接处理胰岛团72 h，荧光二乙脂/碘丙啶（FDA/PI）双染法检测胰岛团活细胞和晚期凋亡细胞比例。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组胰岛团中PI3K、Akt和p-Akt蛋白的表达。[结果] 与空白对照组比较，STZ处理组的TUNEL阳性率显著升高（P<0.01）；与STZ处理组比较，中、高剂量SalB组TUNEL阳性率显著下降（P<0.01），表明中、高剂量SalB有效抑制STZ诱导的大鼠胰岛细胞凋亡。与空白对照组比较，低、中、高剂量SalB组的FDA阳性（活细胞）的百分比无统计学差异（P>0.05），表明低、中、高剂量SalB对正常的胰岛细胞没有损伤作用。与空白对照组比较，STZ处理组胰岛团的胰岛素分泌水平显著下降（P<0.01）；与STZ处理组比较，中、高剂量SalB促进胰岛团胰岛素释放（P<0.05）。与STZ处理组比较，中、高剂量SalB升高PI3K蛋白水平，对Akt蛋白表达无影响，显著升高p-Akt的水平。[结论] SalB抑制STZ诱导的胰岛细胞凋亡，且SalB本身对胰岛细胞无损伤，其抑制凋亡的机制可能与促进Akt磷酸化激活PI3K/Akt信号通路有关。     

蹄叶橐吾萃取物通过NF-κB通路降低细胞炎症反应＊

目的 探究蹄叶橐吾提取物（ethanolic extract of ligularia fischeri，EEOLF）的抗炎作用机制，为蹄叶橐吾（Ligularia fischeri, LF）的临床应用提供理论依据。方法 采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）作用于RAW264.7细胞建立体外细胞炎症模型。实验分6组，即空白对照组、EEOLF组、LPS组、LPS + 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC）组、LPS + EEOLF组、LPS + EEOLF + PDTC组。Western blot法检测药物作用于RAW264.7细胞后，细胞核内因子κB p65（nuclear factor-κB，NF-κB）的表达水平和磷酸化水平。ELISA法测定药物作用于RAW264.7细胞后IL-1β及TNF-α的释放量。结果 与空白组对照比较，LPS能显著增加细胞核内NF-κB p65蛋白表达及其磷酸化水平（P < 0.001）；与LPS组比较，EEOLF能显著下调LPS诱导增加的NF-κB p65蛋白表达及其磷酸化水平（P < 0.001）。与空白组比较，LPS能显著增加炎症因子L-1β及TNF-α的分泌（P < 0.001）；与LPS组比较，蹄叶橐吾提取物（ethanolic extract of ligularia fischeri，EEOLF）能显著降低LPS诱导增加的L-1β及TNF-α的分泌（P < 0.001）。在NF-κB抑制剂PDTC作用下，LPS诱导的细胞炎症反应减弱，并且在PDTC存在下，EEOLF能更加明显降低LPS所诱导的细胞炎症反应。结论 EEOLF通过作用于NF-κB通路抑制炎性因子的分泌，从而达到抗炎作用。     

丹参多酚酸盐通过抑制内质网应激减轻小肠缺血再灌注损伤的研究

[目的] 探讨丹参多酚酸盐（SAL）对大鼠小肠缺血再灌注（I/R）后肠组织的保护作用并探索其机制。[方法] 将144只大鼠按照随机数字表法平均分为假手术组（Sham组），I/R组，SAL低（10 mg/kg）、中（20 mg/kg）、高（40 mg/kg）剂量组和银杏叶提取物（EGB）组（3.15 mg/kg）；造模前30 min腹腔注射给药；采用夹闭肠系膜上动脉60 min的方法复制小肠I/R大鼠模型。再灌注120 min后，采用干湿比重法计算肠组织含水量；分别通过苏木精-伊红（HE）染色法、原位末端转移酶标记（TUNEL）法行肠组织病理学检查和细胞凋亡观察，计算损伤评分（Chiu’s氏评分）和凋亡指数（AI）；酶联免疫吸附（ELISA）法检测肠组织炎症因子[C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）]水平；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测内质网应激相关蛋白[糖调节蛋白78（GRP78）、c-Jun氨基端激酶（p-JNK）、增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）]、核因子-κB（NF-κB）、激活型半胱氨酸蛋白酶-3（Cleved Caspase-3）蛋白表达。[结果] 与I/R组比较，SAL中、高剂量组和EGB组大鼠肠组织含水量降低，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；肠系膜细胞脱落、固有层分离、炎性细胞浸润等病变和细胞凋亡状况明显改善，Chiu’s氏评分和AI降低，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；肠组织CRP、TNF-α、IL-1β水平降低，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；GRP78、p-JNK、CHOP、NF-κB、Cleved Caspase-3蛋白表达下调，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与EGB组比较，SAL高剂量组大鼠Chiu’s氏评分、AI降低，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；肠组织CRP、TNF-α水平降低，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；GRP78、CHOP、NF-κB、Cleved Caspase-3蛋白表达下调差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。[结论] SAL对大鼠小肠I/R损伤具有保护作用；其机制可能与SAL抑制内质网应激通路，进而抑制炎症反应和细胞凋亡有关。     

葛根素对氧糖剥夺大鼠海马神经细胞Ca2+和NO的影响

 目的研究葛根素(puerarin,Pur)对缺氧缺糖状态下海马神经细胞内Ca²⁺和NO水平的影响。方法选用新生大鼠体外培养8 d的海马神经细胞,进行3 h的氧糖剥夺(oxygen/glucose deprivation,OGD)或30 min的L-谷氨酸(0.5mmol·L^-1)处理后再正常培养24 h,Pur处理组在OGD或谷氨酸处理的同时和以后24 h给予不同剂量(40,100μmol·L^-1)Pur,Annexin V联合流式细胞仪检测细胞的凋亡率和坏死率;以Fluo-3或DAF-2为荧光标记,用激光共聚焦显微镜观测30 min的OGD过程中海马神经细胞Ca²⁺和NO的动态变化以及Pur的影响。结果OGD诱导海马神经细胞Ca²⁺和NO水平快速升高,其最高值分别达正常对照组的2.9和1.9倍;Pur明显减缓OGD期间神经细胞Ca²⁺内流和NO合成,与OGD组相比,40和100μmol·L^-1的Pur分别使细胞Ca²⁺峰值降低29.2%和37.1%(P<0.05和P<0.01),NO峰值降低23%和33%(P<0.05和P<0.01),显著抑制细胞内Ca²⁺和NO水平的升高;同时Pur可有效抑制OGD和谷氨酸引起的神经细胞死亡。结论Pur可通过抑制神经细胞谷氨酸/Ca²⁺/NO通路的活动而有效保护缺氧缺糖对神经细胞的损伤作用。     

木香内酯诱导人脑星形胶质母细胞瘤细胞凋亡

[目的] 探究木香内酯诱导人脑星形胶质母细胞瘤细胞凋亡的作用机制。[方法] 通过 CCK8 法检测木香内酯对 U87 细胞增殖作用的影响; 采用 Annexin V-FITC/PI 双染法检测木香内酯对 U87 细胞凋亡率的影响, 采用 JC-1染色法检测木香内酯对 U87 细胞线粒体膜电位的影响; 采用 DCFH-DA 探针检测木香内酯对 U87 细胞中 ROS 含量的影响;采用生化法检测木香内酯对 U87 细胞氧化应激指标丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、微量还原型谷胱甘肽（GSH）和一氧化氮（NO）含量的影响; 采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测木香内酯对U87 细胞 Caspase-3、Bax、Bcl-2 的 mRNA 表达水平的影响; 采用分子对接寻找木香内酯与 Caspase-3、Bax、Bcl-2 的具体结合位点。[结果] 木香内酯呈剂量依赖性抑制 U87 细胞的生长, 细胞半抑制浓度 IC₅₀ 为 11.27 μmol/L;细胞凋亡水平检测结果显示木香内酯 20 μmol/L 组 U87 细胞凋亡率增加, 差异具有统计学意义（P<0.001）; 线粒体膜电位水平检测结果显示木香内酯 5 μmol/L 组、10 μmol/L 组、20 μmol/L 组 U87 细胞线粒体膜电位降低, 差异具有统计学意义（P<0.001）;氧化应激检测水平显示, 木香内酯呈剂量依赖性上调 U87 细胞中 ROS、MDA、NO 水平; 下调 SOD、GSH 水平, 差异具有统计学意义（P<0.05）; 木香内酯 20 μmol/L 组 U87 细胞 Caspase-3、Bax mRNA 表达水平均上调, 差异具有统计学意义（P<0.01）, 而 Bcl-2 mRNA 表达水平下调, 差异具有统计学意义（P<0.05）。分子对接结果显示木香内酯分别与 Caspase-3、Bcl-2、Bax 氨基酸残基 ARG-164, LEU-168, ARG-66 形成稳定的结合能。[结论] 木香内酯能明显抑制 U87 细胞生长和介导细胞高氧化应激水平, 降低线粒体膜电位并促进细胞凋亡。     

怀菊花提取物对皮质酮诱导的抑郁模型的保护作用及机制研究

目的 通过皮质酮诱导的小鼠抑郁症模型和肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞损伤模型,研究怀菊花提取物的抗抑郁作用。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀（5 mg/kg）组和怀菊花提取物低、中、高剂量（1.67、3.33、6.67 g/kg）组,模型组和各给药组连续21 d sc皮质酮（20 mg/kg）,造模同时ig相应药物,给药结束后进行糖水偏好实验、悬尾实验和旷场实验;采用ELISA法检测小鼠血清中皮质酮及神经递质水平;采用Western blotting检测海马组织中环磷腺苷效应元件结合蛋白（cyclic adenosine monophosphate-response element binding protein,CREB）通路关键蛋白表达。皮质酮诱导PC-12细胞建立细胞损伤模型,采用流式细胞术检测怀菊花提取物对细胞凋亡及活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平的影响;采用In-Cell Western法检测凋亡相关蛋白及CREB通路关键蛋白表达。结果 怀菊花提取物能够显著改善小鼠的糖水偏好率（P＜0.05、0.01）,增加小鼠的站立次数（P＜0.05、0.01）,减少小鼠悬尾实验的不动时间（P＜0.01）,显著降低血清中皮质酮水平（P＜0.01）,升高血清中5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）、多巴胺（dopamine,DA）、乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）水平（P＜0.05、0.01）,上调海马组织中CREB、磷酸化CREB（phosphorylated CREB,p-CREB）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）蛋白表达水平（P＜0.05、0.01）。怀菊花提取物显著抑制皮质酮诱导的PC-12细胞凋亡率及细胞内ROS水平（P＜0.01）,抑制凋亡相关蛋白表达（P＜0.01）,上调CREB通路关键蛋白表达（P＜0.01）。结论 怀菊花提取物可能通过调节CREB通路、抑制神经细胞凋亡,从而改善抑郁。     

红豆杉提取物对乳腺癌T47D细胞生长与凋亡的影响

目的: 探讨红豆杉提取物对乳腺癌T47D细胞生长与凋亡的影响。 方法: 以乳腺癌T47D细胞为研究对象,实验设空白组、不同质量浓度红豆杉提取物组(200,100,50,25 mg ·L^-1)和阿霉素组(3 μmol ·L^-1),各给药组处理乳腺癌T47D细胞24 h,MTT法检测T47D细胞增殖,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)及半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性,Hoest33342荧光染色检测细胞凋亡,Western blot法检测T47D细胞凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2,Caspase-3的表达。 结果: 与空白组比较,红豆杉提取物明显抑制乳腺癌T47D细胞的增殖,增加LDH及Caspase-3活性,诱导细胞凋亡及上调促凋亡蛋白Bax的水平,下调抗凋亡蛋白Bcl-2水平,均具有明显的统计学差异(P<0.05,P<0.01),且具有浓度依赖性。 结论: 红豆杉提取物对乳腺癌细胞T47D增殖具有直接抑制作用,并且具有浓度依赖性,其作用机制与促进细胞凋亡有关。     

重组人肿瘤坏死因子受体融合蛋白诱导胶原诱导型关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的研究

 目的胶原诱导大鼠类风湿性关节炎(CIA)为动物模型,探讨重组人肿瘤坏死因子受体融合蛋白(rhTNFR:Fc)对CIA滑膜细胞凋亡的影响。方法Wistar大鼠模型随机分组,rhTNFR:Fc组和甲氨喋呤(MTX)阳性对照组按1.75mg·kg^-1剂量每日皮下注射给药,阴性对照组和正常对照组皮下注射等量生理盐水,31d后抽取膝关节滑液以ELISA法测定TNF-α水平;膝关节滑膜作苏木素-伊红染色(HE)、电镜、缺口末端标记法(TUNEL)标记检测凋亡。结果电镜下可见早期滑膜凋亡细胞,MTX组和rhTNFR:Fc组滑膜细胞凋亡数与阴性对照组比较明显增加,突变型p53的表达被明显抑制,P<0.05;MTX组和rhTNFR:Fc组膝关节滑液TNF-α、NO水平显著下降,与阴性对照组比较差异具显著性,P<0.01。结论首次阐明rhTNFR:Fc诱导CIA大鼠滑膜细胞凋亡,抗类风湿性关节炎可能通过下调p53,降低TNF-α、NO来诱导滑膜细胞凋亡,减轻CIA大鼠的关节炎症。     

炒紫苏子提取物的抗氧化作用研究

 目的　研究炒紫苏子提取物的抗氧化作用。方法　15月龄昆明种小鼠,随机分组,每日1次灌胃炒紫苏子醇提药物和水提药物,给药21次后,杀鼠取脑和血。采用MDA试剂盒、SOD试剂盒,测定血浆中MDA,SOD值,采用紫外分光光度法测小鼠脑匀浆中MAO。结果 炒紫苏子醇提物269,134 mg·kg^-1剂量组均能显著降低MDA水平(P<0.001),提高SOD酶活性(P<0.05),而134 mg·kg^-1剂量组能显著降低MAO水平(P<0.05);炒紫苏子水提物213 mg·kg^-1剂量组均能显著降低MDA,MAO水平(P<0.001,P<0.01),提高SOD酶活性(P<0.05),而106 mg·kg^-1剂量组能显著降低MDA水平(P<0.001),MAO水平(P(0.05)。结论 炒紫苏子醇提取物和水提取物具有较强的抗氧化作用。     

银杏提取物EGB761对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用研究

目的探讨银杏提取物EGB761对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用及发生机制。方法采用500μmol/L浓度的过氧化氢(H2O2)作用于对数生长期的肾小管上皮细胞(NRK52E),建立细胞氧化损伤模型。银杏提取物EGB761分为高中低3个浓度组进行干预,应用细胞生长曲线检测细胞生长情况,用流式细胞术检测肾小管上皮细胞的凋亡率,RT-PCR检测Caspase-3基因的表达差异。结果与过氧化氢组比较,高、中浓度组银杏提取物EGB761的凋亡阳性率均明显降低,而低浓度组虽有减少趋势但无显著性差异;高、中浓度组银杏提取物EGB761的Caspase-3表达阳性率较过氧化氢组明显降低,且随着浓度的增加而表达逐渐减少(P0.05)。结论银杏提取物EGB761可以拮抗过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的效应,其机制估计与下调Caspase-3的表达有关。     

银杏叶提取物对高胆固醇家兔模型过氧化损伤的影响

目的观察银杏叶提取物(EGB761)对高胆固醇家兔模型血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平的影响。方法参照D.Larry Sparks等的方法,复制高胆固醇血症家兔模型,利用50 mg/(kg.d)EGB761灌胃3周后,检测血清SOD、MDA、GSH-Px水平。结果模型组家兔血清SOD、MDA和GSH-Px水平均明显升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,EGB761组血清SOD、GSH-Px、MDA水平均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,EGB761组血清MDA水平与GSH-Px水平均明显升高(P<0.05);SOD水平呈下降趋势,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论高胆固醇血症家兔模型体内存在明显的过氧化损伤,EGB761对高胆固醇血症引起的过氧化损伤具有一定的保护作用。     

糖痹康对糖尿病周围神经病变大鼠氧化应激的影响

目的:观察中药糖痹康对DPN大鼠血清SOD、NO和NGF的影响,从而探讨其对DPN大鼠的抗氧化效果。方法:健康SD大鼠80只随机选取10只为正常对照组,普通饲料喂养,其余高脂饲料喂养,8周后STZ造模:用0.1 mmol·L~(-1)无菌枸橼酸钠缓冲液(PH 4.5,4℃),将STZ配成0.45%的溶液,按45 mg·kg~(-1)的剂量标准一次性给大鼠左下腹腔内注射。72 h后用血糖仪测尾尖血血糖,选持续血糖水平≥16.7 mmol·L~(-1)以上且血糖稳定3 d者为造模成功,按体质量随机进入各治疗组,模型复制成功后,按体质量随机分为以下5组,每组10只:模型组、弥可保组(西药组)、糖痹康低剂量组、糖痹康中剂量组、糖痹康高剂量组,加上正常组,共6组。糖痹康低剂量组:按成人剂量5倍给药,即生药4.175 mg·(kg·d)~(-1);糖痹康中剂量组:按成人剂量10倍给药,即生药8.35 mg·(kg·d)~(-1);糖痹康高剂量组:按成人剂量20倍给药,即生药16.7 mg·(kg·d)~(-1),均换算成糖痹康为3 m L灌胃;弥可保组:按成人剂量10倍给药,即1.97 mg·(kg·d)~(-1),用蒸馏水配成混悬液3 m L灌胃;模型组及正常组给予等量蒸馏水灌胃。采用ELISA法测定实验大鼠血清SOD、NO、NGF酶活性,按SOD、NO、NGF ELISA试剂盒说明操作。结果:与模型组相比较,糖痹康各剂量组有显著升高,高剂量组效果优于对照组;糖痹康各剂量组可以明显提高血清NGF水平。结论:中药糖痹康可以升高血清SOD、NO和NGF水平,抑制体内过高的氧化应激水平,阻止和/或延缓了DPN的发生和发展。     

Therapeutic effects and molecular mechanisms of Ginkgo biloba extract on liver fibrosis in rats

Oxidative stress can be implicated as a cause of liver fibrosis. In this sense, Ginkgo Biloba Extract (EGB), an antioxidant, may be beneficial in restraining liver fibrosis. The aim of this study was to evaluate the effects of EGB on experimental liver fibrosis. Rat liver fibrosis was induced by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride (CCl4) twice a week for 8 weeks. Three groups of rats received EGB (0.25, 0.5 and 1.0 g/kg, respectively) by stomach everyday. CCl4 administration induced liver fibrosis, which was inhibited by EGB in a dose-dependent manner. The histopathologic score of fibrosis, liver function and the levels of plasma hyaluronic acid (HA) and laminin (LN) were significantly improved in rats treated with CCl4 + EGB, compared with those treated with CCl4 only (p < 0.01 or p < 0.05). The activities of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) were notably elevated, while malondialdehyde (MDA) content was significantly decreased in the rats treated with CCl4 + EGB (p < 0.01 or p < 0.05). Inhibition of hepatic stellate cell (HSC) activation and nuclear factor kappaBP65 (NF-kappaBP65) expression was demonstrated in the livers of EGB-treated rats. The activation of NF-kappaB was significantly suppressed in EGB-treated rats determined by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). Furthermore, EGB reduced expressions of transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1) and collagen I mRNA. In conclusion, EGB is able to ameliorate liver injury and prevent rats from CCl4-induced liver fibrosis by suppressing oxidative stress. This process may be related to inhibiting the induction of NF-kappaB on HSC activation and the expression of TGF-beta1.     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视路SynⅠ和Nissl小体的影响

目的观察实验性糖尿病大鼠视路神经元组织形态学的病理改变,并探讨补肾活血中药复方防治实验性糖尿病大鼠视路损害的作用机理。方法选用SD大鼠,采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立实验性糖尿病模型。实验大鼠随机分为7组:正常对照组、阴性对照组(模型组)、阳性对照Ⅰ组、阳性对照Ⅱ组、中药低、中、高剂量组。以Nissl染色法和免疫组织化学方法染色显示视网膜、外侧膝状体(external genic-ulate body,EGB)、视皮质(visual cortex,VC)中Nissl小体、突触素I(synapsin I,Syn I)的表达,应用Mias-2000图形分析系统对其进行测定和分析。结果与正常对照组相比,阴性对照组大鼠视路三级神经元的Syn I的表达强度和Nissl小体的含量均明显降低(P0.05或P0.01);与阴性对照组相比,中药治疗组大鼠视网膜、外侧膝状体及视皮质的Syn I表达强度和Nissl小体的含量均明显增高,其中中药高剂量组最为明显(P0.05或P0.01)。结论实验性糖尿病大鼠在高血糖状态持续6个月后,其视路神经元发生不同程度的退行性改变;补肾活血中药能在一定程度上恢复糖尿病大鼠视觉通路神经细胞突触的密度和分布(轴突再生),并改善其神经递质释放调节功能,从而减轻实验性糖尿病大鼠视路神经元病理损害。     

丹参注射液对维甲酸诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的:观察中药复方丹参注射液对全反式维甲酸在体外诱导的兔软骨细胞凋亡的调节作用.方法:取体外培养的兔软骨细胞,分别加入不同浓度维甲酸,维甲酸+丹参注射液,维甲酸+DEVD-FMK混合培养.并于培养后1、2、3、4天用DNA电泳,荧光显微镜和流式细胞仪观察软骨细胞凋亡变化.结果:在体外培养兔软骨细胞加维甲酸10-4M 24小时,流式细胞仪检测发现,凋亡率26.5±3.87%,而对照组为5±2.16% (P<0.01).荧光染色可见典型凋亡细胞形态改变,DNA电泳可见典型梯状条带,同时维甲酸诱导的软骨细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,随着维甲酸浓度升高,时间延长,诱导凋亡作用明显增加.而维甲酸+丹参注射液或+DEVD-FMK混合培养的软骨细胞,其凋亡率明显下降.结论:维甲酸在体外能诱导兔软骨细胞凋亡,丹参注射液能降低维甲酸诱导的软骨细胞凋亡活性,提示其可能是治疗骨关节炎的机制之一.     

补肾活血中药复方对实验性糖尿病大鼠视路神经元病理损害的影响及机理探讨

目的:观察实验性糖尿病大鼠视路神经元组织形态学的病理改变,并探讨补肾活血中药复方防治实验性糖尿病大鼠视路损害的作用机理。方法:用免疫组化及Nissl染色结合图像分析半定量测定视网膜、外侧膝状体及视皮质的神经营养因子-3(neurotrophic-3,NT-3)、突触素I(synapsin I,Syn I)的表达强度和Nissl小体的含量。结果:与正常对照组相比,阴性对照组大鼠视路三级神经元的NT-3、Syn I的表达强度和Nissl小体的含量均明显降低(P<0.05或0.01);与阴性对照组相比,中药治疗组大鼠视网膜、外侧膝状体及视皮质的NT-3、Syn I表达强度和Nissl小体的含量均明显增高,尤以中药高剂量组明显(P<0.05或0.01)。结论:补肾活血中药能减轻实验性糖尿病大鼠视路三级神经元病理损害,其作用机制之一可能是通过增加糖尿病大鼠视路NT-3的表达,一定程度恢复糖尿病大鼠视觉通路神经细胞突触的密度和分布(轴突再生),并改善其神经递质释放调节功能。     

银杏叶提取物对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌 GLUT4 表达的影响

 目的 观察银杏叶提取物对高脂饮食所诱导的胰岛素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白 4 （ GLUT4 ）表达的影响,探讨银杏叶提取物改善胰岛素敏感性的分子机制。 方法 采用高脂喂养的方法建立胰岛素抵抗大鼠模型,并给予为期 4 周的不同剂量银杏叶提取物腹腔注射干预,以罗格列酮作为阳性对照。干预后测定大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰岛素等指标,高胰岛素 - 正常葡萄糖钳夹实验评价银杏叶提取物的胰岛素增敏作用。 Western Blot 测定大鼠骨骼肌 GLUT4 蛋白水平,实时荧光定量 RT-PCR 测定大鼠骨骼肌 GLUT4 mRNA 表达。 结果 高脂饮食成功建立胰岛素抵抗大鼠模型,与正常对照组相比,葡萄糖输注率显著下降,空腹血糖、空腹胰岛素、总胆固醇、甘油三酯升高 ( P<0.01) ,骨骼肌 GLUT4 蛋白水平下降 ( P<0.05) ,骨骼肌 GLUT4 mRNA 下降 ( P<0.01) 。银杏叶提取物干预使葡萄糖输注率增加,并不同程度地降低总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰岛素,同时骨骼肌 GLUT4 表达上调,中、高剂量银杏叶提取物对上述指标的改善更加明显,优于低剂量组。 结论 银杏叶提取物能够改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗状态,其胰岛素增敏机制与增加骨骼肌 GLUT4 的表达有关。     

黄芪甲甙保护阿霉素心肌损伤大鼠抗凋亡作用的机制研究

目的 探讨黄芪甲甙（简称黄芪）抗阿霉素所致心肌细胞凋亡的可能机制。方法 取SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪3个剂量（低、中、高）组。空白组腹腔注射生理盐水,余4组分别给予阿霉素造模（15mg／kg,隔日腹腔注射1次,共6次）。黄芪3个剂量组同时用不同剂量黄芪甲甙灌胃治疗,空白组和模型组同时给予羧甲基纤维素钠。采用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡。细胞免疫组织化学检测bcl-2、bax蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测bcl-2、bax基因的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡发生率增高（P〈0．01）,抑制凋亡因子bcl-2基因及蛋白表达下降（P〈0．01）,而促进凋亡因子bax基因及蛋白表达增强（P〈0．01）,bcl-2／baxmRNA比值降低（P〈0．05）。与模型组比较,黄芪高剂量组大鼠心肌细胞的凋亡率显著下降（P〈0．05）,bcl-2基因及蛋白水平表达增强（P〈0．05）,bax基因及蛋白水平表达下降（P〈0．05）,bcl-2／baxmRNA比值明显上升（P〈0．05）。结论 高剂量黄芪甲甙治疗可以抑制阿霉素所致大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与凋亡基因bcl-2表达有关。     

刺五加联合尼莫地平对兔慢性青光眼视网膜损伤的保护作用

目的探讨中药刺五加和钙通道阻滞剂尼莫地平对青光眼视网膜神经节细胞的保护作用及其作用机理。方法用前房注射2.5%羟丙基甲基纤维素的方法建立日本大耳白兔双眼实验性慢性青光眼模型。动态观察眼压,高眼压维持4周后行双眼小梁切除术。实验兔随机分为刺五加组、尼莫地平组、联合用药组和空白对照组,分别喂服上述药物。于前房注射前、注射后4、8、12周抽取双眼玻璃体,利用高效液相色谱分析检测玻璃体谷氨酸浓度。结果各组间前房注射前后、小梁切除术后眼压差异均无显著性(P>0.05)。前房注射前4组间玻璃体谷氨酸浓度差异无显著性(P>0.05),前房注射后4、8、12周,各组玻璃体谷氨酸浓度均高于注射前(P<0.01)。刺五加组、尼莫地平组、联合用药组玻璃体谷氨酸浓度低于对照组(P<0.05)。结论慢性实验性青光眼兔眼玻璃体谷氨酸浓度明显升高;刺五加和尼莫地平通过抑制玻璃体谷氨酸浓度的升高起到保护青光眼兔眼视神经保护的作用。