产白僵菌素镰孢菌发酵培养基的初步研究

目的本文为找到镰孢菌(Fusarium concentricum)发酵产白僵菌素的适合发酵条件,在固液两种发酵方式下研究了影响白僵菌素合成的关键因素。方法对固态发酵培养基的含水量、液态发酵培养基组分以及培养条件进行了考察。结果发现固态发酵培养基含水量为1mL水/g玉米渣时白僵菌素产量最高。经初步优化后的液态发酵培养基为(g/L):淀粉40;酪蛋白胨10;NaNO31.5;MgSO4·7H2O 0.05;KH2PO44;KCl 1,摇床转速为200r/min。结论液态发酵条件下较高溶氧在一定程度上能促进白僵菌素的合成,但是剪切力对菌体生长及白僵菌素合成有不利影响。     

液态发酵法生产达托霉素的培养条件优化研究

目的 研究液态发酵法生产达托霉素的发酵工艺,提高达托霉素的产量.方法 通过用玫瑰孢链霉菌液态发酵法生产达托霉素的优化实验,对发酵的主要影响因素进行了单因素的试验,并用正交试验对发酵温度、前体量、接种量进行了优化,确定了最佳培养基组成和培养条件.结果 最佳的培养基组成和培养优化条件为:黄豆粉3％、豆粕2％、补前体量50μL、初始pH8.5、接种量0.5％、转速250r/min、装液量80mL/500mL、发酵温度32℃,优化后罐上效价较以前配方提高了近50％.结论 新工艺为达托霉素的工业化大生产打下了良好的基础.     

21-8 用Tolypocladium inflatum固态发酵生产环孢素

环孢素是一种环状１１肽,具抗真菌、抗寄生物、消炎及免疫抑制等广谱药理活性,现已作为免疫抑制药物使用。环孢素的生产广泛使用深层发酵法。Ｍｕｒｔｈｙ等首次报道利用Ｔ．ｉｎｆｌａｔｕｍ菌株固态发酵生产环孢素,在最适发酵条件下,产量高达５０４３ｍｇ／ｋｇ。进行固态发酵时,取５ｍｌ孢子悬液种入装有５０ｍｌ种子培养基的２５０ｍｌ锥形烧瓶。培养基成分（ｇ／Ｌ）：葡萄糖２０,玉米浆２０,硫酸铵４,硫酸钙５,灭菌前调ｐＨ至５．５。烧瓶置于２７±１℃、１５０ｒ／ｍ旋转式摇床上培养７２ｈ。固态发酵在装有１０ｇ麦■的２…     

Wortmannilactone F产生菌邬氏黄丝曲霉F01Z0195的培养条件优化

本研究通过单因素实验和响应面分析法相结合的方法,以新组织蛋白酶B抑制剂wortmannilactone F的生成量为考察对象,对邬氏黄丝曲霉F01Z0195的培养条件进行优化.确立邬氏黄丝曲霉F01Z0195的培养方式为固态静置发酵培养,培养基为含水的玉米渣,接种量7%,培养周期为14d,最优培养基为40.0g玉米渣和18.3mL含有2.2%DMSO的1/15mol/L磷酸盐缓冲液(自来水配制,pH值为7.46),在此条件下wortmannilactone F生成量为3.90mg/g,与理论值基本一致,与初始培养条件相比提高了341倍.     

十二碳二元酸菌种发酵工艺优化

目的 以热带假丝酵母菌为试验菌株,通过发酵工艺优化,提高菌种发酵产酸量。方法 对发酵培养基中碳源和氮源等成分进行优化,同时研究了种龄、发酵培养温度、摇瓶转速、发酵接种量、发酵瓶装量和发酵pH值对发酵产酸量的影响。结果 发酵培养最适碳源为2 g/L蔗糖,最适氮源为3 g/L酵母浸膏,菌体发酵在28℃,200 r/min,25 mL/250 mL装量,以15%接种量条件下培养,发酵pH值调至7.0～7.5时,十二碳二元酸平均产量可达到130 g/L。结论 对发酵培养基碳氮源成分进行优化、发酵工艺进行优化,发酵产酸量提高至130 g/L。同时发酵培养基中添加氯化钠和硫酸镁后,均不利于菌种产酸。     

不同发酵条件对中国弯颈霉发酵产物成分影响的实验观察

目的:探讨不同发酵条件对中国弯颈霉(tolypocladium sinense)发酵产物成分的影响。方法:实验选用4种不同培养基进行该菌摇瓶培养,3种不同培养基通气发酵培养,用高效液相色谱法、紫外分光光度法、容量法等分别测定培养产物中的甘露醇、腺苷、多糖、粗蛋白和氨基氮等主要活性成分。结果及结论:不同培养基中的碳源和氮源种类及数量、发酵不同时间和供氧方法对中国弯颈霉人工发酵产物成分影响较大,可能影响产物的药理活性。因此应对产品成分和生产成本等因素综合考虑确定生产工艺。     

抗MRSA小链霉菌NIM521发酵工艺的优化

小链霉菌NIM521能产生对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)有强烈抑制作用的活性物质.利用单因素多浓度和正交实验法对其发酵培养基组分及发酵条件进行了优化,并在优化后的条件下进行了20 L罐发酵放大实验.实验表明该菌的最适培养条件为:培养基含麦芽汁9%、蛋白胨6%、L-甲硫氨酸0.02%、维生素C 0.02%;培养温度30℃、转速250 r/min、接种量15%、发酵时间6 d.优化发酵条件下,20 L发酵罐发酵5 d时发酵液抑菌圈直径可达37.5 mm.     

抗MRSA链霉菌NJ0510的抑菌活性及发酵影响因素的研究

从土壤中分离到一株有效抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的链霉菌NJ0510。考察了抗菌谱及各种发酵影响因素对链霉菌NJ0510抑菌活性物质产生的影响,通过正交实验对培养基中碳、氮源的组成及发酵天数进行了优化。实验表明该菌的最适培养条件为:培养40h的种子培养液以10%的接种量接入到含1%葡萄糖、2%糊精和4%蛋白胨,40mg/LFeCl3、20mg/LCuSO4.5H2O和1mg/LCoCl2.6H2O的发酵培养基中,在200r/min振荡条件下,培养5d。     

产诺加霉素链霉菌摇瓶发酵条件的研究

诺加霉素是由黑胡桃链霉菌Streptomyces nogalater产生的结构复杂的蒽环类抗生素,具有较强的抗肿瘤活性。该文对实验室保藏的Streptomyces nogalater ATCC 27451进行菌种选育,得到了一株发酵效价高,遗传稳定的高产菌株。通过摇瓶培养,从发酵培养基和培养条件两方面进行发酵工艺的优化。培养基方面,从单一碳源,单一氮源的最佳种类和组合的筛选,到前体氨基酸以及油的添加进行尝试;培养条件方面,考察了温度,pH,装量,放瓶时间等因素,最终获得的最佳培养基和培养条件,与出发初始菌株和初始培养条件相比,从最初的发酵产量0.048 g/L提高到了0.312 g/L,最终发酵单位提高了6.5倍。这些工作为我们以后大规模的发酵诺加霉素奠定了基础。     

RGD-TRAIL工程菌发酵工艺的摸索研究

经过培养基筛选、培养温度和诱导条件的优化,确定了表达RGD-TRAIL(RGD-TNF related apoptosis inducing ligand)融合蛋白的基因工程菌RT发酵的最佳条件为:TB培养基分别作为RGD-TRAIL的发酵培养基,发酵生长温度控制在37℃,诱导温度控制在25℃,IPTG的最佳诱导浓度为0.8 mmol/L。诱导16 h后目的蛋白表达量到30%,可溶性目的蛋白表达量达15%。并在10 L发酵罐进行验证,确定了发酵工艺。     

水蛭素基因工程菌的培养

采用正交实验法优化了水蛭素基因工程菌的发酵培养基，得到较佳培养基配方及培养条件，并优化了发酵工艺，摇瓶培养22h，发酵液抗凝血酶活力可达850ATU/ml，25L发酵罐培养18h，发酵液中抗凝活力亦可达800ATU/ml，水蛭 素表达量在原有基础上有了大幅度提高，为大规模培养及工业生产建立了可行路线。     

诱变红酵母RY-17生物合成番茄红素的研究

文章对诱变红酵母RY-17菌株生物合成番茄红素的培养基组成和培养条件进行了初步研究,通过生长曲线的测定,各种发酵条件的优化,确定发酵培养时间,培养温度,初始pH值等参数,使菌体生物合成色素达到最大量,并采用薄层层析方法及高效液相色谱法分析确定诱变红酵母生物合成番茄红素。研究结果表明,在最优条件下,红酵母的生物量为6.92 g/100 ml、番茄红素含量为5.53 mg/L。     

紫外分光光度法快速测定庆大霉素含量在优化培养基中的应用

目的 在庆大霉素发酵培养基优化过程中,探索庆大霉素含量的快速测定方法.方法 以紫外分光光度法作为庆大霉素含量测定手段,采用正交试验方法,对紫色小单孢菌产庆大霉素的发酵培养基及发酵条件进行优化.结果 通过统计学分析,确定发酵培养基最优组合为:黄豆饼粉3.5%,CaCO,0.5%,淀粉5.5%,CoCl20.0006%.优化的发酵条件为:种龄60h,接种量12mL,装液量50mL/500mL摇瓶.在此优化条件下添加一定量的氨基酸培养6d,庆大霉素效价较优化前提高了85.5%.结论 本文用紫外分光光度法与微生物法测定庆大霉素发酵液效价产生的误差小于4%,该方法可以用于庆大霉素液体发酵培养基优化的快速筛选.     

液态发酵法合成雪峰虫草活性成分的初步研究

目的:探索液态发酵法合成雪峰虫草活性物质的基础工艺,为雪峰虫草资源的综合开发提供必要技术支持。方法:利用液态发酵技术对雪峰虫草菌丝体进行培养,并通过培养基组成和培养条件控制来实现活性物质的高效合成。以雪峰虫草菌为出发菌株,分别考察不同碳源(蔗糖、葡萄糖和可溶性淀粉)、不同氮源(蛋白胨、酵母浸粉、酵母浸膏、硝酸钠、硝酸钾和尿素)、不同维生素B(维生素B1和复合维生素B)和不同初始p H(p H为4、5、6、7、8、9)对雪峰虫草菌丝生长和胞外多糖、胞内多糖、虫草酸、胞内三萜合成的影响,进而筛选最佳培养基成分。结果:最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为酵母浸粉,最佳维生素B为维生素B1,最佳初始p H为8。在碳源为蔗糖、氮源为酵母浸粉、添加0.1 g/L维生素B1和初始p H为8时可得到较高的生物量和代谢产物积累水平。结论:雪峰虫草可在液态发酵体系高效积累代谢产物;可通过发酵过程优化控制,实现该菌株细胞生长和活性代谢产物合成的优化。     

副溶血弧菌噬菌体的发酵优化及中试制备工艺探索

目的 为了以低成本的方法制备出高效价的噬菌体制剂，对副溶血弧菌噬菌体Vpas_PP24的发酵条件和关键工程化制备工艺进行探索。方法 采用单因素实验法，研究噬菌体Vpas_PP24发酵体系的不同培养基、金属离子、pH、接种量及培养时间对其效价的影响；在中试规模对优化发酵工艺进行了工程化放大；并以膜过滤结合热除菌法进行了下游工程化噬菌体分离及终端除菌工艺探索。结果 确立了副溶血弧菌噬菌体Vpas_PP24的最优培养基及最佳发酵条件。摇瓶水平最适出发培养基为2216E液体培养基；Mg2+和Ca2+可促进Vpas_PP24的增殖，且最适浓度为30 mmol·L-1；最适pH为8；VP8最适接种量为1%；最适培养时间为16 h。在摇瓶水平优化后的效价达到3.0×1010 PFU/mL，较优化前提高了14倍。随之，基于该优化条件，成功将噬菌体发酵放大到50 L中试规模，并建立上游液体深层发酵工程化生产Vpas_PP24的上游工艺，效价达到3.2×1010 PFU/mL，与此同时，建立了下游噬菌体除菌工艺，得到效价为2.5×108 PFU/mL的噬菌体Vpas_PP24批量液体制剂。结论 系统优化了噬菌体Vpas_PP24的发酵条件，并在中试规模进行了工艺放大，成功建立了中试上游噬菌体发酵工艺及下游噬菌体分离工程化工艺及末端去除宿主菌的技术手段，为噬菌体类替抗产品的工程化生产提供了可参考的范例。     

简单节杆菌17α-羟基-16β-甲基-孕甾-4,9(11)二烯-3,20-二酮脱氢酶产酶条件研究

目的优化简单节杆菌17α-羟基-16β-甲基孕甾-4,9(11)-二烯-3,20-二酮(简称HMPDD)脱氢酶产酶条件。方法采用摇瓶培养方法,考察培养基组成及发酵条件对HMPDD转化率的影响。结果较佳产酶培养基为:葡萄糖0.4%、玉米浆1.2%、KH2PO40.2%、蛋白胨0.3%。较佳产酶条件为:培养基初始pH7.0;接种量20%;摇瓶装量100mL/250mL三角瓶;接种后4h内添加0.05g/L底物作为诱导物对产酶有利;添加10-4mol/LCo2+和Mg2+,可使酶活分别较对照提高12.9%和6.1%;菌体培养12h时酶活达最大值,为24.46μmol/g·min。结论通过培养基组成及产酶条件的优化,酶活力有较大幅度的提高。     

海洋真菌Penicillium sp.产抗肿瘤天然产物brefeldin A的发酵优化研究

目的 对海洋来源真菌Penicillium sp.产抗肿瘤天然产物brefeldin A的发酵优化,以期获得高产率目标化合物。方法 运用单因素实验设计,重点考察了培养方式、发酵培养基组成 (如碳源、氮源、盐度等)以及培养条件 (温度、摇床转速)等因素。结果 最佳发酵条件为：马铃薯200 g/L,麦芽糖10 g/L,淀粉20 g/L,海盐15 g/L,28 ℃, 摇床转速160 r/min,培养14天。结论 在该发酵条件下,brefeldin A的实际产量达到40 mg/L,较优化前提高了近10倍。     

重组复合干扰素摇瓶发酵条件的研究

目的对表达重组复合干扰素(con-IFN)的工程菌E.coli DH5α的摇瓶发酵条件进行研究。方法利用单因素比较实验及正交试验等方法考查工程菌摇瓶发酵条件,探讨发酵条件对工程菌的生长和con-IFN表达的影响。结果优化后条件为培养基含玉米粉6%、牛肉膏5.5%、谷氨酸钠0.5%,发酵液初始pH 7.2,30℃培养7 h后升温至42℃诱导表达6 h,转速220r/min,装样量10%,接种量2%。结论优化后平均蛋白质表达量达到36.39%,和LB培养基相比,目的蛋白质表达量提高了4.8%,为工程菌的大规模发酵提供参考。     

欧文氏菌发酵生产紫杉醇工艺的优化

考察了植物内生细菌欧文氏菌(Erwinia taxi)生产紫杉醇的摇瓶发酵和30 L罐发酵工艺条件。结果显示,培养基中添加不同的前体对紫杉醇产量影响显著。较高浓度的乙酸钠(>0.01 mmol/L)和较低浓度的苯丙氨酸(<0.05 mmol/L)有利于紫杉醇积累。在此基础上进行了30 L罐发酵试验,得优化培养基配方(g/L):大豆蛋白胨20,工业酵母抽提物5,氯化钠0.5,氯化钾0.1,葡萄糖4,氯化镁1,乙酸钠0.1,苯丙氨酸5×10-4;pH 6.5。发酵培养条件:接种量5%,发酵温度22℃,通气速率0.17 vvm,转速50 r/min,发酵时间60 h。在此条件下,30 L发酵罐中紫杉醇的产量为102 g/L。     

地衣芽孢杆lw-72合成纤溶酶的摇瓶发酵工艺优化

通过单因素试验和正交试验确定地农芽孢杆菌lw-72摇瓶发酵合成纤溶酶的最佳条件,最佳培养基组成为:玉米粉0.5%、黄豆饼粉2.0%、Na_2HPO_4 0.4%、NaH_2PO_4 0.2%、CaCl_2·2H_2O 0.01%、KCI 0.01%;培养摹初始pH为7.0;最佳培养条件:装液量30 ml/250 ml摇瓶,接种量10%,发酵时间为72 h.在该条件下发酵液中纤溶酶酶活力为622 u/ml,是初始发酵培养基的3.4倍.