半夏泻心汤及不同配伍对大鼠肝微粒体中黄芩苷和黄芩素代谢的影响

目的:研究大鼠肝微粒体温孵育体系中黄芩苷和黄芩素的代谢动力学,比较半夏泻心汤全方及不同配伍组对其肝微粒体代谢的影响。方法:超高效液相色谱法(UPLC)测定大鼠肝微粒体温孵体系中黄芩苷和黄芩素含量。采用在体诱导-体外肝微粒体温孵方法,考察半夏泻心汤全方、辛温开痞配伍、苦寒降逆配伍及甘滋补益配伍对黄芩苷和黄芩素在大鼠肝微粒体系中的代谢变化影响。结果:黄芩苷温孵时间在60 min内,黄芩素在10 min内呈线性消除;黄芩苷和黄芩素质量浓度为0.5～25μg/mL内与峰面积呈良好的线性关系;肝微粒体蛋白质量浓度在0.2～1.0 g/L内,黄芩苷和黄芩素随着肝微粒体蛋白质量浓度的增大,呈线性消除。空白肝微粒体中黄芩素的代谢速率大于黄芩苷;与空白对照组比较,全方组对黄芩苷和黄芩素的代谢较其他配伍组抑制作用强,苦寒降逆配伍组次之,辛温开痞配伍组无显著性差异,甘滋补益配伍组对黄芩苷无抑制作用,对黄芩素抑制作用不显著。结论:半夏泻心汤抑制黄芩苷和黄芩素的代谢,且抑制作用较其他配伍组强,为半夏泻心汤组方合理性及临床配伍发挥相须相使的疗效提供了重要的药理学依据。     

吴茱萸次碱对5种黄连生物碱大鼠体外肝代谢的抑制作用

目的 考察吴茱萸主要成分吴茱萸次碱对黄连中5种生物碱肝代谢的抑制作用,为深入研究黄连吴茱萸药对配伍机制提供依据。方法 采用大鼠体外肝微粒体温孵法,考察吴茱萸次碱对黄连中5种生物碱（黄连碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀和药根碱）肝代谢的抑制作用。结果 吴茱萸次碱对黄连碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀、药根碱均存在体外肝代谢抑制作用,半数抑制浓度（IC₅₀）均大于50 μmol/L,表现为体外弱抑制作用;抑制常数（K_i）的差异性具有统计学意义（P<0.05）,抑制作用强弱程度顺序为小檗碱>药根碱>巴马汀>表小檗碱>黄连碱。结论 为了解吴茱萸对黄连生物碱主要作用环节和揭示黄连吴茱萸药对配伍机制提供依据。     

黄连与吴茱萸合用大鼠体外肝代谢研究

目的:研究黄连配伍吴茱萸后对盐酸小檗碱(ber)大鼠肝脏代谢以及对大鼠肝脏药物代谢酶活性的影响,探讨黄连吴茱萸药对配伍的机制.方法:HPLC测定大鼠肝微粒体温孵体系中ber的含量,采用在体诱导-体外肝微粒体温孵的方法,考察ber在吴茱萸、黄连、连萸配伍(6:1)诱导组及溶媒对照组肝微粒体系中的代谢变化;采用Nash显色,分光光度法测定空白组、阳性药物组(酮康唑)、黄连组、吴茱萸组、连萸配伍(6:1)组大鼠肝微粒体中红霉素N-脱甲基酶(ERD)、氨基比林N脱甲基酶(ADM)活性.结果:与空白对照组相比,ber在各给药组大鼠肝微粒体温孵液中的代谢速率均有明显下降(P＜0.001),且代谢速率连萸配伍组＜吴茱萸组＜黄连组＜空白对照组.与空白组大鼠比较,酮康唑组、吴茱萸组和连萸配伍组ERD活性均明显受到抑制(P＜0.01),同时吴茱萸和连萸配伍组还可使ADM活性显著降低(P＜0.01);黄连组对ADM活性抑制作用明显(P＜0.05),但对ERD活性作用不明显.结论:连萸配伍合用通过抑制大鼠肝药酶ERD和ADM活性降低黄连主要有效成分盐酸小檗碱的肝脏代谢,这可能是连萸配伍相瓦作用的重要机制.     

薄层色谱扫描法测定黄连吴茱萸药对中黄连生物碱的含量

目的:比较黄连中主要生物碱成分在黄连-吴茱萸药对配伍前后的差异.方法:采用TLCS法对黄连单煎液、黄连吴茱萸合煎液、黄连吴茱萸单煎混合液中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的含量进行测定.结果:黄连与吴茱萸配伍后,盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的含量均显著降低,以盐酸小檗碱的减少较为明显.结论:两药合用,黄连生物碱含量均有不同程度降低,说明吴茱萸可制约黄连苦寒之性,为临床两药配伍使用提供了实验依据.     

5种黄连生物碱大鼠体外肝代谢特征比较

目的 探讨黄连中5种结构相似异喹啉生物碱大鼠体外肝代谢的选择性。方法 采用大鼠体外肝微粒体温孵方法,通过考察温孵时间、微粒体蛋白浓度以及底物浓度对小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱和药根碱代谢的影响,求得代谢反应动力学参数K_m、V_max和CL_int。结果 5种黄连生物碱成分的体外肝代谢动力学参数K_m和CL_int间差异明显（P＜0.05）。结论 黄连中5种异喹啉生物碱大鼠体外肝代谢存在显著选择性。     

葛根芩连汤及不同配伍组中生物碱类成分的肠外翻吸收研究

目的 应用肠外翻模型研究葛根芩连汤(葛根、黄芩、黄连和炙甘草)及其不同配伍组中4个生物碱类成分在大鼠不同肠段的吸收特征.方法 采用肠外翻模型,考察葛根芩连汤中黄连碱、药根碱、小檗碱、巴马汀4个生物碱类成分的肠吸收机制;同时考察不同肠段、药物浓度等因素对它们吸收的影响并比较各组分在全方和不同配伍组给药时的吸收变化情况.结果 各组分在不同肠段的吸收均为线性吸收,符合零级吸收速率.药根碱在各肠段的吸收方式除被动扩散外还存在主动转运.小檗碱、巴马汀的吸收速率常数(Ka)均随剂量的增加而增加,显示它们为被动扩散.黄连碱在空肠中的吸收表现为主动转运;而在十二指肠、回肠、结肠中表现为被动扩散.肠道不同部位的吸收实验表明,全方中小檗碱、巴马汀的最佳吸收部位为空肠;黄连碱、药根碱的最佳吸收部位为结肠.结论 比较不同配伍组的Ks,4个生物碱成分在全方中吸收最好,其他三个配伍组的吸收没有显著性差异.     

半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝脏 CYP450酶活性的影响

目的:研究半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝微粒体CYP450亚型酶的影响,从肝脏代谢角度评价半夏泻心汤组方的合理性。方法:将大鼠随机分为全方组、辛开组、苦降组、甘补组及空白对照组,分别灌胃水煎液,运用肝微粒体体外温孵法,对探针底物进行孵育,并结合超高效液相检测方法,测定各探针底物代谢产物的含量,计算代谢速率,以反映各给药组的肝微粒体CYP2C6,CYP2E1,CYP3A1/2亚型酶活性。结果:与空白组相比,全方组,苦降组对各亚型酶均起抑制作用(P<0.01);辛开组对CYP2C6有抑制作用(P<0.01),而对CYP2E1和CYP3A1/2无显著抑制作用;甘补组对CYP2C6和CYP2E1亚型起抑制作用(P<0.01),而对CYP3A1/2无抑制作用。结论:全方对大鼠肝微粒体CYP450酶起抑制作用,比较各配伍组间差异,苦降组抑制作用较其他配伍组显著。     

6种黄连生物碱对鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1活性影响的体内外研究

为探讨黄连与其他药物代谢性相互作用的机制,对6种黄连生物碱与尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)及UGT1A1的相互作用进行了考察。采用大小鼠肝微粒体,以及生物碱小鼠体内诱导后的肝微粒体,构建微粒体体外孵育模型,以4-硝基酚(4-NP)为底物检测UGTs活性,β-雌二醇为底物检测UGT1A1活性,利用UV和HPLC测定底物或代谢物含量。结果,在大鼠体外实验中,小檗碱、表小檗碱、黄连碱及药根碱均能显著抑制UGTs活性,其中表小檗碱抑制作用最强;对UGT1A1,药根碱表现为弱的抑制作用(IC50≈227μmol·L-1),而黄连碱和巴马汀则呈显著的激活作用。小鼠体外实验中,小檗碱、黄连碱、药根碱和巴马汀对UGTs均呈显著的抑制作用;而6种生物碱对UGT1A1均表现为显著的激活作用。小鼠体内诱导实验中,只有小檗碱对UGTs,药根碱对UGT1A1活性呈现显著升高作用,其他生物碱的作用不明显。综上,黄连生物碱在对UGT的作用上显示出明显的种属和体内外的差异,同时生物碱结构的变化对UGT活性也会产生较大的影响,这种影响可能是黄连与其他药物发生代谢性相互作用的原因之一。     

吴茱萸成分在大鼠肝微粒体对盐酸小檗碱代谢的影响

 目的 研究大鼠肝微粒体温孵系统中盐酸小檗碱代谢动力学以及吴茱萸中多种化学成分对其代谢的影响。方法 采用体外肝微粒体温孵法研究盐酸小檗碱代谢的酶动力学,分别考察了温孵时间、微粒体质量浓度以及底物浓度对盐酸小檗碱代谢速率的影响,并探讨吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对其代谢的影响。结果 盐酸小檗碱在大鼠肝微粒体温孵系统中发生较强的代谢, 其在大鼠肝微粒体中37 ℃温孵0～60 min呈时间依赖的线性消除;当肝微粒体蛋白浓度在0.5～2.0 mg·mL-1,温孵时间为60 min时,盐酸小檗碱代谢速率表现出微粒体蛋白浓度依赖性增快;当底物盐酸小檗碱浓度大于10.0 μg·mL-1时,盐酸小檗碱的代谢速率不再随底物浓度的增加而增加,表现出明显的饱和特性。其表观酶促动力学参数,米氏常数Km为（2.41 ± 0.617) mg·mL-1,最大反应速度V_max为 (6.88±1.89) μg·g-1·min-1。吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯均能显著抑制盐酸小檗碱的代谢,3个组分对盐酸小檗碱的代谢抑制常数K_i分别为 (140.85±16.48), (15.34±3.04)和(25.98±6.47) μmol·L -1,其中吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的代谢抑制作用明显强于吴茱萸碱（P＜0.001）。结论 盐酸小檗碱在大鼠肝微粒体内被迅速代谢;吴茱萸中化学成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对盐酸小檗碱的代谢有抑制作用,此结果有可能对小檗碱体内药动学产生影响。     

黄连生物碱在大鼠体内的代谢转化及分布

目的:测定黄连生物碱在大鼠体内的药代动力学、组织分布,及药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱4种生物碱在大鼠体内的转化。方法:大鼠分别灌胃黄连总碱、小檗碱,采用反相高效液相色谱法测定大鼠的血浆、组织、胃肠道中黄连4种生物碱的含量。结果:小檗碱在大鼠体内的血药浓度出现2个峰值,达峰时间分别2,5h,其中血药浓度分别为Cmax3.7,2.8mg.L-1;小檗碱在大鼠血液中可以转化为药根碱;给大鼠灌胃黄连总生物碱后,小檗碱在大鼠胃中的浓度单调下降,而黄连碱、巴马汀和药根碱逐渐增加,表明在大鼠的胃中小檗碱可转化为药根碱;小檗碱和巴马汀主要分布在动物的肺部,其次分布在肝脏中,而药根碱和黄连碱主要分布在动物的肝脏中,其次分布在肺部。结论:小檗碱可以转化为药根碱,根据胃肠道推进实验部分解释了小檗碱在血液中出现2次峰值的原因。     

黄连解毒汤中生物碱含量的拆方研究

目的：研究黄连解毒汤及拆方中生物碱的含量和溶出率的变化。方法：采用HPLC法对黄连解毒汤及折方中4种生物碱：小檗碱、药根碱、黄连碱、巴马汀的含量进行了测定。结果：传统汤剂生物碱的溶出率较低，黄连和黄柏合煎生物碱呈现加和性，加入黄芩、栀子后生物碱含量显著下降：结论：有效控制黄连解毒汤中生物碱类有效成分，应采用黄连的特有成分黄连碱的含量和4种生物碱的比例作为质量控制指标。为制定合理的质控标准提供了依据。     

生物碱和黄酮类成分在泻心汤复方配伍中的含量研究

 目的建立同时测定泻心汤中黄连碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量的方法,并探索配伍对各成分含量的影响。方法采用C₁₈柱,流动相:甲醇-2%甲酸水溶液(0.1%三乙胺)梯度洗脱;流速:1.0 mL·min^-1;柱温:40℃;检测波长:346 nm;不同配伍之间的差异采用SPSS软件进行方差分析。结果建立了同时测定生物碱和黄酮类成分含量的方法,这7个成分在一定浓度范围内线性关系良好,高、中、低质量浓度加样回收率稳定。与单味黄连、黄芩相比,复方中7个成分含量均降低。大黄使黄连碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷和汉黄芩苷含量降低,使黄芩素和汉黄芩素含量增加;黄连使黄芩素和汉黄芩素的含量降低,使汉黄芩苷含量增加,对黄芩苷影响不大;黄芩使黄连碱、小檗碱和巴马汀的含量降低。结论本法准确可靠,重现性好,结果稳定,适合于泻心汤中生物碱和黄酮类成分的分析。不同配伍对各成分含量有影响,其影响非常复杂。     

Simultaneous Determination of Seven Alkaloids in Fufang Zhenzhu Tiaozhi Capsule by HPLC Coupled with DAD

Objective To establish a reverse-phase liquid chromatography method for the determination of seven alkaloids (magnoflorine, columbamine, jatrorrhizine, epiberberine, coptisine, palmatine, and berberine) in Fufang Zhenzhu Tiaozhi Capsule. Methods Chromatography was performed on a Dionex Acclaim C 18 column (250 mm × 4.6 mm, 5.0 μm) at 30 ℃ .The mobile phase was composed of acetonitrile-potassium dihydrogen phosphate solution (0.015 mol/L, 40:60, including 1.7 g/L sodium dodecyl sulfate and phosphoric acid used to regulate pH value to 3.0), with a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 270 nm. Results The calibration curves of magnoflorine, columbamine, jatrorrhizine, epiberberine, coptisine, palmatine, and berberine were linear in the range of 1.07- 10.65, 0.78-7.55, 0.75-7.50, 1.60-15.95, 2.69-26.85, 2.31-23.10, and 6.04-60.40 mg/mL. The average recoveries of magnoflorine, columbamine, jatrorrhizine, epiberberine, coptisine, palmatine, and berberine were 101.0%, 101.2%, 100.1%, 100.0%, 100.1%, 101.1%, and 99.7%, respectively. Conclusion The method could be used for the quantitative determination of the preparation.     

Cocktail探针药物法评价半夏泻心汤及不同配伍组对CYP450酶活性的影响

目的:采用Cocktail探针药物法研究半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝细胞色素P450酶活性的影响.方法:大鼠连续7d灌胃半夏泻心汤全方组,甘补组,苦降组和辛组的煎煮液(15 mL·kg-1)后尾静脉注射Cocktail探针药物咖啡因(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A1/2).建立LC-MS/MS法测定大鼠血浆中4种探针药物的浓度,DAS 2.0软件计算其药动学参数.结果:与空白组相比,全方组中甲苯磺丁脲的AUC0-24h值明显增大,CL显著减小,说明全方组对大鼠体内CYP2C6起抑制作用,而氯唑沙宗的AUC明显减少,CL增大,说明对CYP2E1起诱导作用;而对CYP1A2,3A1/2无显著性差异.同理,辛开组仅对CYP2C6起抑制作用,对其他的亚型酶无显著性差异;苦降组对CYP1A2,CYP2C6具有显著抑制作用,对CYP2E1有诱导作用,而对CYP3A1/2无显著性差异;甘补组对CYP1A2,CYP2E1有诱导作用,抑制CYP2C6,而对CYP3A1/2亦无显著性差异.结论:半夏泻心汤及不同配伍组对肝脏CYP450酶的活性影响不同,为阐明半夏泻心汤组方配伍的规律用以推测其在联合用药中可能发生的药物相互作用,指导临床合理用药.     

基于脑微透析联合LC-MS/MS技术的交泰丸在正常与失眠大鼠的脑内药动学特性比较研究

目的：比较交泰丸口服给药后,其主要活性成分（小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱和药根碱）在正常和失眠大鼠的脑内药动学特性。 方法：运用液相色谱-串联质谱结合脑微透析方法对五种原小檗碱型生物碱进行测定。于大鼠的大脑海马体内植入脑微透析探针,交泰丸提取物灌胃给药后每30 min 收集一管透析液,持续10 h。采用BDS Hypersil C18色谱柱进行分离,流动相为乙腈-水（含5 mmol 乙酸铵并调pH至5.0）,时长4 min。检测方式为多反应检测模式,MS/MS条件分别为小檗碱m/z 336.0-320.1,巴马汀m/z 352.0-336.1,药根碱m/z 338.0-322.1,表小檗碱m/z 336.0-320.1,黄连碱m/z 320.0-292.1,四氢巴马汀（内标）m/z 356.4-192.1。 结果：建立的LC-MS/MS方法的线性、准确度、精密度、稳定性和基质效应均符合要求,定量下限为0.05 ng•mL-1。五种原小檗碱型生物碱能迅速分布于脑内,其在正常组和模型组的脑内药动学行为具有显著性差异,主要表现在AUC和半衰期。 结论：本实验有效地使用了LC-MS/MS结合脑微透析的方法对交泰丸中的五种原小檗碱型生物碱进行脑内药动学研究。结果显示,这五种原小檗碱型生物碱能直接作用于海马体,且其在失眠大鼠中的吸收显著高于正常大鼠。     

基于高分辨质谱数据库的黄连炮制前后生物碱变化规律

目的 构建黄连Coptis chinensis生物碱类成分的高分辨质谱数据库(HR-MS-Database),研究不同炮制方法炮制前后黄连生物碱类化学成分的变化。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(UPLC/Q-TOF-MS)技术手段,借助SCIEX公司LibraryView数据库平台,建立黄连生物碱类成分高分辨质谱数据库,并对不同黄连炮制品中炮制前后的生物碱类成分含量进行测定和差异分析。结果 建立黄连生物碱类成分高分辨质谱数据库,包含黄连生物碱类成分31种;对姜黄连、酒黄连、萸黄连及黄连生品4种样品测定结果显示,黄连炮制前后生物碱成分差异明显。黄连经姜炙后,药根碱、表小檗碱、非洲防己碱含量略有上升,黄连碱、小檗碱含量略有下降,巴马汀含量未见改变;萸黄连中药根碱、表小檗碱、小檗碱含量下降,黄连碱、巴马汀及非洲防己碱含量未见变化;而酒黄连中所测定的6种生物碱含量均显著提高(P<0.05)。结论 建立了一种黄连炮制前后生物碱类成分变化规律的快速识别方法,并定量了在黄连炮制前后含量变化显著的6种生物碱,为黄连炮制品的药效物质基础与质量控制标准研究提供参考。     

黄连酒炙过程中5种生物碱的变化研究

目的探究黄连炮制过程中5种生物碱的量变和质变。方法采用高效液相色谱法测定不同炮制方法、不同炮制温度对黄连酒炙品中生物碱含量的变化。结果酒炙黄连随着加热温度的增加,小檗碱、巴马汀、药根碱、黄连碱、表小檗碱在160℃时含量最高,此后含量逐渐降低。表小檗碱和黄连碱分别在170、240℃时含量降至最低以致高效液相色谱仪无法检出,在170℃时开始出现新的化学成分小檗红碱。结论黄连酒炙过程中5种生物碱发生了量变与质变,黄酒闷润与加热是关键的步骤,可以促进黄连生物碱的含量增加或转化为新的化学物质。辅料黄酒不能被乙醇替代。