帕金森病大鼠纹状体神经元及黑质网状部神经递质变化的研究

本研究采用免疫细胞化学方法和形态计量学技术，观察了由6－OHDA单侧微量注射制成的帕金森病大鼠纹状体头部P物质神经元和体部GABA能神经元的变化，以及黑质网状部突触岛内P物质终末数和GABA终末数及终未总数的改变，以探讨神经递质在帕金森病发病中的作用。结果显示：6－OHDA注射侧纹状体面积、纹状体P物质神经元和GABA能神经元数量均较正常对照侧明显减少；注射侧黑质网状部突触岛单位树突膜长度内终末总数较正常侧减少54％；P物质终末数和GABA终末数亦分别减少44％和33％。本研究表明帕金森病大鼠黑质与纹状体之间团有的神经递质失衡，这可能是帕金森病发病的重要因素之一。     

马桑内酯致癫痫大鼠黑质网状部的形态计量研究

用光镜和电镜定量研究了马桑内酯致SD大鼠急性局灶型癫痫发作1小时后黑质网状部的结构变化，与对照组（5只）比较，在实验组（5只）脑的重量，体积及黑质横切面积均无明显改变的前提下，实验组黑质网状部单位面积内神经元数量，神经元胞体，胞核的直径以及神经元胞体，胶质胞体，血管和神经毡的面积分数均无显著性变化，表明实验组黑质网状部神经元的数目及大小没有显著性变化，实验组神经元胞体内粗面内质网，游离核糖体的面积分数以及游离核糖体的数密度显著减少，神经元胞质基质的面积分数则显著增加，线粒体，高尔基复合体和溶酶体的面积分数无显著性改变，马桑内酯所致急性局灶型癫痫发作1小时，黑质网状部神经元的粗面内 质网和游离核糖体的显著减少，表明该神经元合成蛋白质的活性有所减弱，本文对该结果的意义进行了讨论。     

下丘脑弓状核内GABA神经元与P物质神经元相互关系的免疫电镜双标研究

为了探讨下丘脑神经内分泌功能的突触调控机制和Ｐ物质（ＳＰ）神经元与γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）神经元之间的相互关系，我们用包埋前免疫电镜ＰＡＰ双标技术，研究了大鼠弓状核内ＳＰ和ＧＡＢＡ神经元的超微结构分布。先以ＤＡＢ为呈色剂显示ＳＰ的免疫反应，然后用钢酸铵－ＴＭＢ法显示ＧＡＢＡ免疫反应，再经ＤＡＢ－氧化钴稳定后作免疫电镜研究。结果观察到，在弓状核内有大量含ＤＡＢ和ＴＭＢ免疫反应产物的神经元结构，ＤＡＢ反应产物为颗粒状或絮状沉淀，电子密度高，弥漫分布；ＴＭＢ反应产物呈针状或块状，散在分布。含ＤＡＢ免疫反应的结构有ＳＰ神经元的胞体、树突和轴突。含ＴＭＢ免疫反应的结构有ＧＡＢＡ神经元的胞体、树突和轴突。两种神经元均为中、小型细胞，在弓状核内混杂分布。含ＳＰ的轴突接受免疫反应阴性轴突的非对称性突触连接；含ＳＰ的树突与含ＧＡＢＡ的轴突形成对称性的轴一树突触。含ＧＡＢＡ的树突接受免疫反应用性轴突的非对称性突触连接，也接受含ＳＰ轴突的非对称性突触连接。本研究不仅在超微水平进一步证实了大鼠弓状核内存在着ＳＰ和ＧＡＢＡ神经元及其末梢，而且首次在形态学上为下丘脑氨基酸能神经元与肽能神经元之间的相互调控提供了超微结构依据。     

大鼠尾壳核对同侧黑质网状部神经元电活动的影响

研究大鼠尾壳核神经元对黑质网状部神经元电活动的影响。通过在尾壳核注射谷氨酸钠,同时利用Plexon多通道数据采集处理系统进行黑质网状部神经元放电的胞外记录,然后运用NeuroExplorer软件对所记录的电信号进行直观分析,通过SPSS 16.0对所采集信号数据进行统计分析。实验成功在6只大鼠的黑质网状部记录到11个神经元的放电情况,麻醉状态下大鼠黑质网状部神经元放电频率为12.20±6.60 Hz,当向尾壳核注射谷氨酸钠后降低至1.80±1.00 Hz,P<0.01。化学刺激尾壳核后,黑质网状部神经元放电频率显著性降低,提示尾壳核对黑质网状部神经元有明显的抑制作用。     

大鼠尾壳核对同侧黑质网状部神经元电活动的影响

研究大鼠尾壳核神经元对黑质网状部神经元电活动的影响。通过在尾壳核注射谷氨酸钠,同时利用Plexon多通道数据采集处理系统进行黑质网状部神经元放电的胞外记录,然后运用NeuroExplorer软件对所记录的电信号进行直观分析,通过SPSS 16.0对所采集信号数据进行统计分析。实验成功在6只大鼠的黑质网状部记录到11个神经元的放电情况,麻醉状态下大鼠黑质网状部神经元放电频率为12.20±6.60 Hz,当向尾壳核注射谷氨酸钠后降低至1.80±1.00 Hz,P〈0.01。化学刺激尾壳核后,黑质网状部神经元放电频率显著性降低,提示尾壳核对黑质网状部神经元有明显的抑制作用。     

帕金森病大鼠黑质和纹状体神经元的变化

本研究采用免疫细胞化学方法观察了由６－ＯＨＤＡ单侧微量注射制成的帕金森病大鼠黑质酪氨酸羟化酶样（多巴胺能）神经元及其纤维和纹状体头部Ｐ物质神经元及体部ＧＡＢＡ能神经元的变化，以进一步揭示黑质、纹状体间的功能联系。结果显示，６－ＯＨＤＡ注射侧黑质酪氨酸羟化酶样神经元及其纤维显著减少，注射侧纹状体面积、纹状体Ｐ物质神经元和ＧＡＢＡ能神经元数量均较正常对照侧明显减少。本研究表明黑质多巴胺能神经元的损毁，破坏了黑质纹状体间正常的递质运送，进而导致纹状体的改变。     

Mrh-aFGF对帕金森病大鼠黑质神经元的保护

目的 探讨重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子(Mrh-aFGF) 对帕金森病(PD) 大鼠黑质神经元病变的影响。 方法 SD大鼠72只,随机分为4组：对照组、PD组、生理盐水（NS）处理组、　Mrh-aFGF 处理组,每组18只。 6-OHDA 分别注入左侧黑质和腹侧被盖区后建立PD 大鼠模型,侧脑室内注射Mrh-aFGF,用阿扑吗啡诱导旋转行为;Nissl 染色法观察大鼠黑质神经元病理学改变;电子显微镜观察黑质神经元超微结构的变化。 结果 对照组均未出现旋转行为;PD组术后旋转速度逐渐加快;NS 处理组旋转行为未见明显改善;Mrh-aFGF 处理组旋转速度明显减慢(P<0.05);PD组及NS 处理组大鼠损毁侧黑质神经元数目较健侧显著减少(P<0.05);Mrh-aFGF 处理组术后1周、2周、4周损毁侧神经元数目均较PD组及NS 处理组明显增加(P<0.05);PD组大鼠黑质神经元超微结构明显受损,出现核固缩,线粒体肿胀、嵴消失,粗面内质网扩张、脱颗粒,以及突触前后膜肿胀,突触间隙消失,Mrh-aFGF处理组黑质神经元超微结构有明显改善。 结论 Mrh-aFGF能改善PD大鼠的旋转行为,减少PD大鼠黑质神经元的丢失,并改善其黑质神经元的超微结构。     

帕金森病小鼠模型黑质纹状体通路的形态学改变

目的 观察帕金森病小鼠模型黑质纹状体通路随病程进展而发生的形态学变化,从新的视角探讨帕金森病的病理生理机制。方法 正常C57小鼠36只,随机分为生理盐水组和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）组,每组18只,于注射后第7、14、21、25、28、35天取材,利用免疫组织化学、免疫荧光技术和激光扫描共焦显微镜观察黑质多巴胺能神经元的数量、在纹状体内投射的神经纤维密度及其在纹状体直接通路和间接通路神经元（D1R/D2R阳性神经元）上的分布比例。结果 注射MPTP后,黑质多巴胺能神经元减少40%～50%;纹状体内多巴胺能神经纤维数量呈现先减少后增加的过程：第21天最少,仅为正常的20%;第35天最高,达到正常的45%;多巴胺能神经纤维在纹状体D1R/D2R阳性神经元上的分布比例也有先低后高的表现：第21天最低,第35天最高,与生理盐水组相比差异有显著性。结论 MPTP帕金森病模型小鼠的黑质纹状体通路呈现多巴胺能神经纤维再生现象,再生的多巴胺能神经纤维更多地分布于其直接通路的神经元上。     

偏侧帕金森病大鼠基底神经节亚区GABA能神经元的免疫组织化学研究

为探讨基底神经节各亚区γ-氨基丁酸能神经元在帕金森病时的变化。本研究应用免疫组织化学和图象分析技术对 6-羟基多巴胺脑内注射制备的偏侧帕金森病大鼠模型基底神经节亚区 γ-氨基丁酸能神经元的变化进行了观察和计数。结果发现 ,与假手术对照组比较 ,6-羟基多巴胺损毁侧基底神经节亚区γ-氨基丁酸免疫反应阳性神经元的数量均明显减少 (P<0 .0 5 )。本研究结果提示 ,帕金森病时基底神经节直接回路和间接回路兴奋—抑制失衡 ,可能与 γ-氨基丁酸表达减少有关。     

左旋多巴加速帕金森病大鼠黑质细胞凋亡的实验研究

目的:研究左旋多巴(L-dopa)对黑质细胞的神经毒性作用,探讨合理应用L-dopa治疗帕金森病(Parkinson disease,PD)的方法。方法:通过6-OHDA脑立体定向注射术建立大鼠PD模型,采用行为学、细胞凋亡(TUNEL观测法)、原位杂交的方法观察L-dopa小、中、大三种不同剂量[10 mg/ (kg·d)、50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)]在1、3、5、7天不同的作用时间对PD大鼠黑质细胞的毒性作用,以及治疗7天后各项指标的变化。结果:PD大鼠旋转行为、细胞凋亡数、Bcl-2 mRNA随着L-do- pa治疗的时间的延长和剂量的增加而增加,P53 mRNA在1天迅速达高峰,此后逐渐下降。除小剂量组外,中、大剂量L-dopa组各项指标均高于对照组(P＜0．05),停止治疗7天后,L-dopa治疗各组指标均得到改善。结论:L-dopa能加速PD大鼠黑质细胞凋亡,这种作用受到Bcl-2 mRNA、P53 mRNA调控,小剂量、间隔使用L-dopa能有效减少其神经毒性作用。     

电刺激大鼠黑质网状部对脚桥核神经元自发放电的影响

目的:观察电刺激大鼠黑质网状部(substantia nigra pars reticulata,SNr)对脚桥核(pedunculopontine nucleus,PPN)神经元自发放电活动的影响,进一步探讨脑内电刺激治疗帕金森病(Parkinson's disease,PD)的机制.方法:应用细胞外记录方法观察不同...     

大鼠中脑黑质致密部突触构筑的研究

本研究采用透射电镜方法对黑质致密部的突触类型进行详细观察。结果表明：黑质致密部虽以轴一树突触为主，但轴－树－突触的数量明显增多，并可观察到并列突触。对结果的讨论提示：致密部不同类型突触是黑质执行其重要调控功能的保证，而并列突触很可能是神经回路中易化过程的基本结构。     

P物质参与大鼠外侧网状核痛觉调制的可能机制

延髓腹侧尾端的外侧网状核 (LRN)在痛觉的下行抑制过程中起重要作用 ,并参与了电刺激中脑导水管周围灰质(PAG)的镇痛过程。P物质 (SP)是与痛觉调制有关的速激肽。微量SP注入中脑导水管周围灰质、背缝核可产生镇痛效应。但有关SP在LRN中参与痛觉调制的作用 ,尚未见报道。本文采用核团内微量注射方法 ,以甩尾反射潜伏期(TFL)为痛阈指标 ,对SP在大鼠LRN中参与痛觉调制的作用及其可能机制进行了探讨。1　材料与方法SD大鼠 (2 0 0～ 2 5 0g)经戊巴比妥钠 (4 0mg kg)腹腔麻醉。实验过程中静脉持续给予戊巴比妥钠 [3～ 6mg (kg·h) ]以…     

大鼠弓状核内神经紧张素能和P物质能阳性结构的免疫电镜双标记研究

用包埋前免疫电镜双标记技术研究大鼠下丘脑内的神经紧张素(NT)和P物质(SP)分布的超微结构。证实在弓状核内存在NT样和SP样免疫反应阳性的胞体、树突和轴突。NT样和SP样免疫反应阳性的树突和轴突均可接受免疫反应阴性结构的非对称性传入突触。SP样免疫反应阳性轴突终末除可与免疫反应阴性的树突和胞体形成对称性传出突触外, 还可与NT样免疫反应阳性胞体形成对称性轴-体突触。本研究首次直接证实大鼠弓状核内的NT能神经元接受SP能神经的支配。     

大鼠中脑黑质致密部突触构筑的研究

本研究采用透射电镜方法对黑质致密部的突触类型进行详细观察。结果表明,黑质致密部虽以轴—树突触为主,但轴—树—轴突触的数量明显增多,并可观察到并列突触。对结果的讨论提示:致密部不同类型突触是黑质执行其重要调控功能的保证,而并列突触很可能是神经回路中易化过程的基本结构。     

猫黑质外侧部和网状部至上丘的定位投射——HRP法逆行性研究

关于黑质至顶盖的传出联系,Carpenter和McMaster曾用损毁黑质的方法进行过研究,近年来又有不少资料证实黑质顶盖路径源于黑质网状部,其传出纤维主要终止于同侧上丘中间灰层或深层。这些研究对黑质网状部至上丘的定位投射虽有描叙,但其结果不尽一致,而黑质外侧部至上丘的投射则报导甚少。本实验采用HRP逆行追踪法进一步证实了黑质外侧部和网状部至上丘的投射,并观察了其定位投射关系。     

帕金森病大鼠黑质区神经干细胞分化的观察

目的:探讨帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠中脑黑质区神经干细胞(NSCs)的分化情况.方法:将6-OHDA注入纹状体内制作PD大鼠模型.随机将成功模型分为3 d、5 d、7 d、14 d、28 d组,每组6只;另设假手术及正常对照组各3只.向成功模型鼠腹腔注射5-溴脱氧尿苷(Brdu).用Brdu/NeuN、Brdu/GFAP、Brdu/TH免疫双标组织化学方法检测黑质区内源性NSCs向神经元、神经胶质细胞和多巴胺(DA)能神经元的分化情况.结果:PD模型7 d组,在黑质区Brdu /GFAP 、Brdu /NeuN 细胞开始出现,14 d组双标的阳性细胞数量逐渐增加,28 d达到高峰,14 d、28 d组与其它组比较差异显著(P＜0.05).在这些双标细胞中,Brdu /GFAP 细胞数量较多,Brdu /NeuN 细胞数量较少(P＜0.05),未发现Brdu /TH 细胞.结论:PD大鼠模型黑质区NSCs多数分化为神经胶质细胞,少数分化为神经元,在没有诱导和干预下,未见有向DA能神经元分化.     

一氧化氮对大鼠黑质致密部神经元自发放电及Glu能和GABA能传入活动的影响

目的:研究一氧化氮(NO)对大鼠黑质致密部(SNc)神经元自发放电活动及对谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)能神经纤维输入活动的影响,为进一步研究Parkinson病(PD)的发病机制奠定神经生理学基础。方法:采用微电泳技术观察NO供体硝普钠(SNP),Glu及GABA对SNc神经元自发放电活动的影响及神经递质间的相互作用。结果:微电泳SNP使81.25%(39/48)受试神经元自发放电频率加快,此兴奋性作用与微电泳电流强度正相关,随着电流强度的增加(20nA～80nA),SNc神经元自发放电频率进一步加快。在35个受试神经元上分别微电泳Glu或GABA后,可以观察到分别有31神经元兴奋或所有神经元表现为抑制作用。在已经被Glu兴奋的31个神经元上同时微电泳SNP可使SNc神经元自发放电频率进一步加快。相反,在微电泳GABA的同时应用SNP可使已经被抑制的神经元放电频率增加。结论:NO对SNc神经元产生兴奋性作用。NO与Glu、GABA能投射在SNc有汇聚作用,NO协同Glu对SNc神经元产生兴奋性作用,但拮抗GABA对SNc神经元抑制性作用。     

下丘脑弓状核内GABA神经元与P物质神经元相互关系的免疫…

为了探计下丘脑神经内分泌功能的突触调控机制和Ｐ物质神经元与γ－氨基丁酸神经元之间的相互关系，我们用包埋前免疫电镜ＰＡＰ双标技术，研究了大鼠弓状核内ＳＰ和ＧＡＢＡ神经元的超微结构分布，先以ＤＡＢ为呈色剂显示ＳＰ的免疫反应，然后用钼酸铵－ＴＭＢ法显示ＧＡＢＡ免疫反应，再经ＤＡＢ－氧化钱稳定后作免疫电镜研究。结果观察到，在弓状核内有大量含ＤＡＢ和ＴＭＢ免疫反应产物的神经元结构，ＤＡＢ反应产物为颗粒状或絮