肝炎患者中TT病毒DNA及其IgG抗体的检测

目的：了解肝炎患中TTV的感染情况，方法：应用Nested-PCR对137份甲－庚型肝炎、31份非甲－庚型肝炎及104份献血员进行TTV DNA检测，同时用ELISA法检测抗TTVIgG。结果：TTV基因检出率分别为甲－庚型肝炎20．44％，非甲－庚型肝炎29．03％，献血员13．46％，抗TTVIgG检出率分别为甲－庚型肝炎27．74％，非甲－庚型肝炎35．48％，献血员14．42％；甲－庚型肝炎、非甲－庚型肝炎与献血组相比TTV DNA及抗TTV IgG均存在显性差异（P＜0．01）。结论：肝病中存在TTV感染，TTV存在健康携带状态。     

PCR-ELISA法检测输血传播病毒在输血感染调查中的应用

目的:利用PCR-ELISA法调查广西南宁市不同人群输血传播病毒(TTV)感染状况.方法:检查正常人群和特殊人群(包括血透患者、性病患者、静脉毒瘾者、受血者和非甲～庚型肝炎患者)的血清TTV感染指标,用PCR-ELISA法检测TTV-DNA.结果:1 540例正常人群的TTV-DNA阳性率为12.8%(197/1 540),各年龄组人群都能检出TTV-DNA阳性者,以26～35岁组最高,为15.8%(61/385),与18～25岁组TTV-DNA阳性率比较差异有显著性(P<0.01).调查258例血透患者、304例性病患者、106例静脉毒瘾者、235例受血者和197例非甲～庚肝炎患者TTV-DNA阳性率分别为23.6%(61/258)、21.1%(64/304)、37.7%(40/106)、34.9%(82/235)和36.0%(71/197),均显著高于正常人群(P<0.01).结论:静脉毒癌者、受血者和非甲～庚型肝炎患者TTV感染率较高.PCR-EUSA法可用于TTV感染的检测.     

基因芯片检测输血传播病毒方法的实验研究

目的建立基因芯片快速检测经输血传播病毒核酸的方法,进而探讨该方法用于检测临床标本的可行性。方法通过PCR获得TTV病毒ORF1基因的DNA片段,克隆,从重组质粒扩增DNA片段,并点到玻璃载体上,制成芯片。与TTV病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒及戊型肝炎等病毒的PCR产物进行杂交,以检测探针的特异性。结果该基因芯片探针仅与TTV毒株的PCR产物杂交呈阳性,与对照病毒的PCR产物杂交呈阴性。敏感性试验显示,用该方法检测了27份疑似TTV临床病料,22份阳性;而用PCR法扩增TTV ORF1基因确诊为阳性的只有19份。结论利用基因芯片检测TTV的PCR产物,特异性和敏感性强,可作为TTV临床标本检测方法。     

微孔杂交快速检测黄热病及乙型脑炎病毒方法的建立

聚合酶链反应(PCR)技术已广泛应用于疾病诊断，但由于临床标本复杂，常出现非特异性扩增条带或电泳拖尾现象，给结果的判定带来困难。为了探讨更加敏感、特异的流行性乙型脑炎病毒(JEV，乙脑)及黄热病病毒(YF)快速检测方法，我们分别设计了黄热及乙脑病毒的特异性包被探针及检测探针，建立了快速检测YF及乙脑病毒的微孔杂交(PCR-ELISA)方法。     

聚合酶链反应检测SEN病毒D亚型方法的建立

目的：研究建立SEN病毒D亚型（SENV－D）聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法：选择SENV－D开放读码框1高度保守序列，设计合成2对特异性引物，建立检测SENV－D感染的套式PCR方法。对327例无偿献血和职业献血者进行SENV感染的检测，并对部分PCR阳性产物进行克隆测序，结果：该方法特异性和灵敏度均较高，检测结果显示无偿献血人群SENV－D感染率为5．5％，职业献血人群为6．7％，两者无统计学差异，结论：我国广东部分地区无偿献血和职业献血人群中存在SENV－D亚型感染；建立的该方法适用于SENV感染的检测。     

血库血液中输血传播病毒的检测和基因序列分析

输血传播病毒（ＴＴＶ）是继庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）后新发现的一种可经血源传播的病毒,系日本学者新近在１名输血后转氨酶升高患者体内发现的新型ＤＮＡ病毒［１］。国际上尚未正式对该病毒命名,目前以发现该病毒第１例患者的名字（ＴＴ）命名,巧合的是经输血传播病毒的缩写也是ＴＴＶ（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ）。由于该病毒可引起输血后肝炎,且国外也陆续报道在血库血液中也有较高的阳性率［２］,因此,血源的污染有可能是该病毒传播的主要途径之一。我国血库血液中是否存在该病毒的污染、其基因…     

PCR-ELISA法检测宫颈癌组织中HPV型别

已知的人乳头状瘤病毒(HPV)型别有80多种,其中至少30多个型与人泌尿生殖道肿瘤有关[1].检测少数几种型与宫颈癌的关系有报道,但同时检测十种型别的研究未见国内的报道.本研究选择较常见的HPV6、11、16、18、31、33、35、39、45型,另加作者研究发现并在GeneBank注册(注册号:AF276910)的新亚型[2],共十种型别(或亚型).分型采用聚合酶链反应-微孔板杂交(PCR-ELISA)法,可实现一次PCR后对以上十种型别的鉴别诊断,且结果可量化.     

血液病毒核酸检测工作推广交流会

中国输血协会定于2013年7月17—19日在青海省西宁市举办“血液病毒核酸检测工作推广交流会”。此次会议邀请美国、台湾等国内外核酸检测专家就血液病毒核酸检测技术开展情况、血液病毒核酸检测、输血传播病毒核酸检测技术的新进展、血站核酸检测实验室的建设等方面授课。会议期满将授予国家级医学继续教育学分证书,现将有关事项通知如下。     

滤纸片干血斑检测TT病毒DNA

目的 建立一种快速、方便、准确的方法检测TT病毒的基因片段。方法 采集被检者全血滴在经EDTA--蛋白酶预处理的滤纸片上,室温干燥后,密封并保存于-20℃,然后进行PCR检测;同时取血清用传统方法作对照。结果 在相同时间内,本法测得的结果,与传统方法所得结果无异。结论 该方法具有特异、敏感、方便等特点,用此法检测TTV DNA是切实可行的。     

巢式聚合酶链反应检测SEN病毒方法的建立

目的 建立用于SEN病毒（SENV）检测的巢式聚合酶链反应（nPCR）方法。方法 选择SENV各亚型间高度保守的5′端非编码区（5′－NCR）序列设计2对特异性引物，建立可同时检测SENV所有亚型的nPCR方法。对173例慢性乙型肝炎（CHB）患血清和96份正常人血清进行SENV检测，并随机选择3份PCR阳性产物进行克隆测序。结果 倍比稀释实验表明该方法的终检稀释度为10^3。PCR产物克隆测序结果显示：各分离株与Genbank收录的SENV序列相应区段同源性为95％－96％。CHB患SENV感染率为86．1％，正常人为85．1％，二差异无显性（χ^2=0.381,P=0.537)。结论 该方法敏感、特异且简便经济，适于开展SENV的流行病学研究。     

巢式聚合酶链式反应检测布鲁氏菌核酸DNA方法的建立

目的建立一种具有灵敏性高,特异性强的巢式聚合酶链式反应(PCR)方法检测血液标本中布鲁氏菌核酸DNA。方法使用细菌基因组提取试剂盒提取纯菌核酸DNA;使用血液等组织基因组核酸DNA提取试剂盒提取血液标本核酸DNA,对提取的核酸DNA先行常规PCR预扩增,以扩增的PCR产物为模板进行荧光定量PCR第二次扩增(即巢式PCR)。对纯菌提取的核酸DNA进行灵敏度和和特异性测试,构建巢式PCR的Ct值与核酸DNA拷贝数之关系曲线;检测临床血液标本核酸DNA,同时比较常规两种PCR方法检测结果。结果常规PCR检测的灵敏度为512个核酸DNA拷贝数;巢氏PCR检测有效范围为921.6 ng/μl^6.8 fg/μl,对应的Ct值为12.04~37.50,其指数关系为:y=(e-0.695x)×1012;R2=0.9986,巢式PCR扩增效率为2.28×109倍,检测限为2个布鲁氏核酸DNA拷贝数。巢式PCR的灵敏度为91.67%,特异度为93.10%,阳性预测值为91.67%,阴性预测值为93.10%。对一起羊养殖场采集的25份血液标本应用巢式PCR方法检测,结果阳性率为92.00%(23/25);27份健康人群血液标本没有检测出(无Ct值)。结论巢式PCR具有较好的灵敏性和特异性,特别适合于血液标本布鲁氏菌核酸DNA的检测。     

TTV病毒检测方法的建立及在维吾尔族人群中的应用

目的建立TTV-DNA聚合酶链反应方法并应用于新疆地区不同人群TTV感染的检测。方法根据已报道的TTV基因序列(DDB）序列号：AB008394)．通过引物设计软件SQNCE和OLIGO在其ORF1区设计一对PCR引物,扩增产生一个315bp的扩增片段,产物经Bg1Ⅱ酶切分别产生一个219bp和96bp的酶切片段。结果用建立的PCR方法检测临床标本,在15例维吾尔族转氨酶升高的非甲～非庚型肝炎患血清标本中检测到6份TTVDNA阳性,表明新羞地区存在TTV感染．维吾尔旗人群中有较高的TTV感染率。结论我们建立的TTV DNA-PCR灵敏度高、特异性好,可用于各类人群TTV-DNA的检测。     

乙型肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种采用Lightcycler系统进行HBVDNA实时荧光定量PCR的方法,并探讨其临床应用价值。方法针对HBV基因组S区设计一对扩增引物,并通过预实验严格优化反应体系的组成和条件;将T载体与HBVRT区扩增后纯化的产物进行连接反应,然后转染大肠杆菌（DH5a）,经蓝、白斑筛选后挑取阳性菌落,提取质粒,制备外标准品。结果用于制成外标准品的质粒经1：10的缓冲液倍比稀释,制作标准曲线,线性方程为：Y=-3．344X＋37（r2=0．9999）;通过检测已知浓度并经倍比稀释的HBVDNA,表明其最低检测限为5×10^2 IU／mL;拷贝数介于5×10^2～5×10^8 IU／mI。之间的HBVDNA浓度与ct值具有良好的线性关系。结论外标法实时荧光定量PCR是一种定量相对准确、灵敏度高、特异性强、操作相对简便的方法;该方法可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药;联合该法与血清标志物检测,可更准确评价HBV感染者病情。     

肺炎衣原体Taqman探针实时荧光定量PCR检测法

目的针对Cpn0308基因建立检测肺炎衣原体的Taqman探针实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法。方法根据肺炎衣原体包涵体膜蛋白Cpn0308基因序列设计引物和Taqman探针,建立Taqman FQ-PCR检测体系,对反应体系进行优化,进行灵敏度、特异性、重复性评价;并与商品化肺炎衣原体核酸检测试剂盒检测临床标本进行对比分析。结果肺炎衣原体Taqman FQ-PCR方法的引物浓度300 nmol/L,探针浓度200 nmol/L,Mg~(2+)4.0 mmol/L为最优反应条件;灵敏度为8.36×102copies/μL;该法对常见几种呼吸道病原菌及沙眼衣原体无交叉反应;重复性试验中4个浓度变异系数均小于3%。自建方法与商品化试剂盒对呼吸道感染组、心血管疾病组及正常对照组标本检出率分别为10%vs 10%(χ~2=0.167,P0.05),44.44%vs 40.74%(χ~2=0,P0.05),6.67%vs 3.33%(χ~2=0,P0.05),各组阳性率间差异无统计学意义;2种方法的总阳性率(16.54%vs 14.96%)比较差异无统计学意义(χ~2=0.071,P0.05)。结论本研究建立的Taqman探针实时荧光定量PCR检测肺炎衣原体的方法灵敏度好,特异性高,重复性好,可应用于临床肺炎衣原体核酸检测。     

1型HIV感染多重PCR检测方法的建立

重复性,能覆盖我国最主要的流行病毒株.     

血清中输血传播病毒检测及临床意义的探讨

目的 研究血清中输血传播病毒（TTV）抗体的检测及其临床意义。方法采用间接ELISA法检测88例患者及20例献血员血清中TTV抗体。结果88例患者中11例血液透析患者、35例乙型肝炎患者、26例丙型肝炎患者、4例庚型肝炎患者和12例非甲-庚型肝炎患者以及20例献血员TTV抗体阳性率分别为27．3％、20．0％、7．8％、0．0％、25．0％与5．0％。结论 在正常人群中TTV健康携带者较为常见;血液透析患者与非甲-庚型肝炎患者是TTV感染的高危人群;乙型及丙型肝炎患者常重叠TTV感染。