抗HBS-碱性磷酸酶双功能抗体的分析及试用

采用ＷｅｓｔｅｒｎｔＢｌｏｔ对表达产物进行分析鉴定。重组抗ＨＢｓＡｇ－碱性磷酸酶双功能抗体非还原态分子量为２００ＫＤ左右，显著，其为有活性的双聚体；为了评价重组双功能抗体在临床检测中的应用价值，     

抗HBsAg-碱性磷酸酶双功能抗体融合蛋白分子的构建

为构建带有碱性磷酸酶活性的双功能基因工程抗体,我们将已克隆的大肠杆菌碱性磷酸酶基因重组到抗ＨＢｓＡｇ Ｆａｂ段的Ｆｄ羧基端,构建了重组融合蛋白表达载体ｐＨＢＦＡＰ,转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ,经ＩＰＴＧ诱导表达后,采用ＥＬＩＳＡ法检测到培养上清中存在与ＨＢｓＡｇ的结合活性和碱性磷酸酶的催化活性,显示抗ＨＢｓＡｇ－碱性磷酸酶双功能抗体分子在大肠杆菌中获得了表达。     

单链抗体—碱性磷酸酶检测系统的建立

目的：建立简便快速的单链抗体检测方法。方法：用PCR法和DNA重组技术构建了突变型碱性磷酸酶基因和单链抗体－突变型碱性磷酸酶融合基因;利用IPTG诱导融合基因的表达,并用pNPP底物液检测碱性磷酸酶的活性,用ELISA法检测和比较了不同单链抗体的相对活性。结果：实现重组突变型碱性磷酸酶基因在大肠杆菌中的功能性表达,且活性较重组野生型碱性磷酸酶活性高30倍左右。重组单链抗体－突变型碱性磷酸酶融合基因在大肠杆菌中获得功能性表达,周质中表达产物具有双功能,并成功地利用该系统分析了不同单链抗体的相对活性。结论：该单链抗体－碱性磷酸酶检测系统能够方便地应用于单链抗体的活性分析。     

人抗HBsAg噬菌体抗体Fab段基因的序列分析及表达

对已建的噬菌体抗体库分离出来的人抗－ＨＢｓ克隆进行了序列分析和表达研究，发现４个克隆中３个克隆的重链和轻链完全相同，ＤＮＡ序列分析表明ＶＨ分别属于ＶＨ１亚群和Ⅱ亚群，其轻链ＶＬ分别属于ＶλⅡ亚群和ＶλⅠ亚群。构建了可溶性Ｆａｂ段表达载体，显示出在细菌中表达的Ｆａｂ段抗体与ＨＢｓＡｇ特异性结合，这说明所筛选出来的噬菌体抗体具有ＨＢdisplay status     

人抗乙型肝炎表面抗原Fab片段的表达及活性鉴定

人抗乙型肝炎表面抗原Ｆａｂ片段的表达及活性鉴定２００００３上海第二军医大学长征医院范列英，韩焕兴，胡东平，孔宪涛关键词ＨＢｓＡｇ，Ｆａｂ片段，噬菌体抗体中国图书资料分类号Ｒ５１２．６２噬菌体抗体技术不仅能大量制备人源性单克隆抗体，而且为制备其他的具有...     

甲状腺功能亢进症98例血中碱性磷酸酶的变化

甲状腺功能亢进症 (甲亢 )患者 ,约半数有碱性磷酸酶 (Ａｌｐ)增高 ,其机制不明。 1998年 7月～2 0 0 0年 8月 ,我们对收治的甲状腺功能亢进症 98例进行碱性磷酸酶测定 ,发现Ａｌｐ增高与甲亢病程、是否合并肝脏和骨骼系统病变有关。1　临床资料1 1　一般情况　甲状腺功能亢进症 98例 ,男 32例 ,女 66例 ;年龄 18～ 78岁 ,平均 36 4岁。均符合甲状腺功能亢进症的诊断标准。其中Ａｌｐ增高 5 4例 ,男 15例 ,女 39例 ;年龄 18～ 67岁 ,平均 32 5岁。均排除合并原发性肝病、骨骼和肌肉系统疾病。1 2　测定方法　清晨空腹抽血查肝功、Ｔ3 (三碘…     

人源抗HBsAg噬菌体抗体的筛选、鉴定及基因序列分析

目的筛选与鉴定人源抗乙肝表面抗原(HBsAg)噬菌体抗体,并对其进行基因序列分析。方法利用噬菌体表面递呈技术,从人的外周淋巴细胞中分离和扩增抗体基因,构建抗体组合文库,经亲和淘洗从该文库中筛选人源抗HBsAg噬菌体抗体,通过ELISA及竞争抑制实验鉴定其活性和特异性,并分析获得的抗HBsAg人源抗体重链和轻链基因序列。结果从第3轮淘洗洗脱下来的噬菌体感染细菌长出的菌落中挑出30个,进行ELISA检测,取A490值最高(1.47±0.08)的一株进行竞争抑制试验,结果A490为0.35±0.10,抑制率为76%,所筛出的噬菌体抗体为HBsAg的特异性抗体,酶切分析显示其包含重链和轻链基因,序列分析表明重链可变区(VH)属人免疫球蛋白VHⅠ亚群,轻链可变区(VL)属于VκⅠ和VκⅢ亚群。结论从所构建的抗体库中,筛选出能特异结合HBsAg的抗HBsAg噬菌体抗体,说明通过噬菌体抗体库筛选人源抗HBsAg噬菌体抗体在技术上是可行的,这为抗HBsAg基因工程抗体的应用以及设计针对乙型肝炎的新型靶向治疗策略奠定了基础。     

急性乙型肝炎前S1抗原及抗体的测定与临床研究

急性乙型肝炎前Ｓ＿１抗原及抗体的测定与临床研究３００１４２　天津　解放军第２５４医院王洪莉，冯福民，米志宝，陈玲宜，李庚元中国图书资料分类号Ｒ５１２．６前Ｓ１抗原是由乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的前民区编码的多肽。它与前Ｓ２抗原、ＨＢｓＡｇ均为ＨＢＶ...     

种间抗—HBs的抗独特型抗体诱导特异性抗—HBs

用亲和层析纯化的马抗-HBs 四次免疫家兔,获得含抗-马抗-HBs 的抗独特型抗体血清。该血清反复通过正常马 IgG 偶联的亲和层析柱,除去血清中的抗同型和抗同种异型抗体后,再通过马抗-HBs 偶联的免疫吸附柱,经洗脱获得抗-马抗-HBs 的抗独特型抗体。用纯化的抗独特型抗体免疫两只家兔,四次免疫后,两只家兔都产生了特异性的抗-HBs,其滴度均为1:512。这说明,种间的抗-HBs 的抗独特型抗体也能模拟 HBsAg诱导抗-HBs。     

21d卧床期间血清碱性磷酸酶及电解质的变化

目的观察模拟失重对血清碱性磷酸酶 (ALP)及Ca2 +、Mg2 +、Cl- 、P3+代谢的影响。方法 6名健康男性志愿者 ,年龄 2 4 .8± 6.1岁 ,进行 2 1d头低位 ( - 6°)卧床试验。在卧床前第 3天 ,卧床第 3、1 0、2 1天及卧床后第 2天 (d + 2 )测定了被试者血清ALP及Ca2 +、Mg2 +、Cl- 、P3+含量的变化。血清Ca2 +测定用甲基麝香草酚蓝比色法 ,P3+测定用紫外分光光度法 ,Mg2 +和Cl- 测定用酶法 ,血清碱性磷酸酶测定用对 -硝基苯磷酸盐比色法。结果卧床期间 ,血清Ca2 +较卧床前显著增加 ,在卧床第 1 0天和 2 1天有统计学意义 (P <0 .0 1 ) ,卧床后第 2天仍显著高于卧床前 ;P3+在卧床第 2 1天和卧床前比较显著性降低 (P <0 .0 1) ;Mg2 +在卧床期间和卧床后均显著低于卧床前 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ;Cl- 在d2 1和d+ 2均较卧床前显著增加 (P <0 .0 1 )。血清碱性磷酸酶在卧床第 2 1天较卧床前显著增加 (P <0 .0 1 )。结论 2 1d头低位卧床过程中 ,血钙升高 ,血磷、镁降低 ,氯离子升高 ,血清ALP高于卧床前 ,可能反映机体处于代谢不平衡状态     

红斑狼疮(SLE和DLE)抗核抗体、抗ENA抗体和抗dsDNA抗体的检测及意义

目的：探讨抗核抗体（ANA）、抗ENA抗体和抗dsDNA抗体在红斑狼疮（SLE和DLE）的实际临床实用价值和特点。方法：ANA和抗dsDNA抗体采用间接免疫荧光检测，ANA检测灵长类动物的肝组织印片和人类上皮细胞（Hep-2细胞）为抗原底物，抗dsDNA抗体的实验基质为血鞭毛虫属的绿蝇短膜虫。抗ENA抗体检测采用酶免疫斑点（条带）实验。结果：ANA在SLE患者阳性率为90．4％，DLE患者为75．0％，dsDNA阳性率为63．5％，ENA总阳性率为84．5％。结论：ANA是诊断红斑狼疮的重要指标，但与病情活动性平行关系，抗dsDNA抗体是SLE活动的重要标志。     

不同大小机械牵张力对成骨细胞增殖及碱性磷酸酶的影响

目的究不同大小机械牵张力对成骨细胞增殖能力及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响,以了解牙槽骨改建机制。方法 通过自行研制的多通道细胞牵张应力加载系统对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1同时施加0％、6％、12％和18％的机械牵张力,作用24h和48h后,用MTT法检测细胞受力后的增殖变化,ALP试剂盒检测ALP的变化。结果细胞受力后,其增殖能力随牵张力值的增大而明显增强（P〈0．01）,而ALP活性随牵张力值的增大明显降低（P〈0．01）。结论不同大小机械牵张力可以影响成骨细胞的增殖能力及ALP活性,与力值大小密切相关。     

利用碱性磷酸酶融合表达技术研究神经导向因子netrin-4的功能

目的：采用碱性磷酸酶（AP4）标记技术研究netrin-4的神经导向功能和受体结合特征，并评估碱性磷酸酶作为标签分子在真核基因功能研究中的意义。方法：将netrin-4全长及3个结构域编码区cDNA克隆到碱性磷酸酶表达载体APtag4，成功构建真核表达载体AP4-netrin4、AP4-LNT、AP4-EGFL和AP4-NCT，进而在COS7细胞中表达出含有AP标签的融合蛋白，并通过神经组织块培养技术和神经元原代培养技术对其活性进行鉴定。结果：确认了netrin-4的神经突起导向功能。进一步通过对AP标签进行检测，发现netrin-4全长、LNT和NCT可与原代培养的神经元表面相结合，而EGFL不结合，说明神经元表面舍有netrin-4受体或结合位点，且可能通过LNT和NCT结构域起作用。结论：netrin-4具有明确的神经突起导向功能，在神经元表面舍有结合位点，同时发现碱性磷酸酶标签融合表达技术在真核基因功能研究方面具有一定优势。     

原发性肝癌与血清中HBxAg和抗—HBx的关系

用病例对照的方法，研究了原发性肝癌与血清中HBxAg和抗-HBx的关系。结果表明，肝癌病人与非肝癌的其他肿瘤病人（所有两组病人皆有乙型肝炎感染标记），他们血清中HBxAg和抗-HBx的阳性率差别都不显著，提示HBxAg或抗-HBx与肝癌的关系不密切，二者都不适于作为肝癌的早期诊断指标。     

HBv—M血清学标本23 621份HBsAg／HBsAb双阳性结果的临床意义

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝脏炎性损害，是我国当前发病率较高的一种传染病，而且很容易发展为慢性。HBV—M血清学检测是目前广泛应用于临床的首选检测手段和诊疗依据，但近年来在检测过程中经常会出现HBsAg／HBsAb双阳性的模式，给临床的诊治和解释工作带来困扰。     

抗人BlyS嵌合抗体的研制及功能鉴定

目的:在具有中和功能的母本抗体基础上,进行人源化改造,获得具有相同功能的嵌合抗体.方法:本研究以一株具有中和活性的抗人BlyS鼠单抗(B20)为母本,将抗人BlyS鼠单抗B20的轻、重链可变区基因分别插入到含有人κ链和IgG1重链恒定区基因的真核表达载体中,构建了人-鼠嵌合抗体表达载体,转染真核细胞,通过ELISA、RT-PCR、免疫印迹、体外中和实验分别对嵌合抗体(CB20)进行检测.结果:RT-PCR结果显示,转染后细胞系有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录;ELISA、免疫印迹实验鉴定表明,该嵌合抗体与人BlyS特异性结合;体外中和实验表明,此抗体能中和BlyS对B淋巴细胞促增殖效应.结论:成功地构建人-鼠嵌合抗体CB20.     

模拟微重力诱导小鼠成骨细胞微丝变化对碱性磷酸酶及骨钙蛋白的影响

目的 研究模拟微重力诱导小鼠成骨细胞微丝结构改变对碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）及骨钙蛋白（osteocalcin,OCN）的影响,探讨失重导致骨质疏松的机制.方法本研究以已建株的小鼠成骨样细胞株（MC3T3-E1）作为对象,以回转器模拟微重力效应.实验将细胞分为4组：模拟微重力组、0.5 μg/ml细胞松弛素B组、模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组及正常重力组（对照组）.培养48 h后,利用异硫氰酸荧光素鬼笔环肽（fluoresceine isothiocyanate phalloidin,FITC-phalloidin）进行免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察各组细胞微丝的变化;同时用ALP试剂检测各组细胞培养液内ALP的酶活性,采用ELISA法检测各组细胞裂解液中OCN的表达量.结果 除正常重力组外,其余各组细胞微丝结构都出现了不同程度的解聚,张力纤维减少,失去方向性,以模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组改变最为明显.和正常重力组比较,其余各组ALP的酶活性和OCN的表达量均成下降趋势（F=17.23、121.91,P〈0.01）,且模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组与模拟微重力组和0.5 μg/ml细胞松弛素B组这两组之间的差别都有统计学意义（P〈0.05）.结论 微重力影响成骨细胞ALP的酶活性及OCN的表达可能与微重力诱导细胞骨架微丝解聚相关.