蓖麻毒素单抗制备及上转发光免疫层析定量检测方法研究

目的：建立一种可快速、精确地对蓖麻毒素（ RT）进行定量检测的上转发光免疫检测技术（ UPT-LF）,即RT-UPT-LF。方法采用杂交瘤细胞技术制备蓖麻毒素单克隆抗体并对效价进行评价;采用效价最高的4种单抗分别与上转发光纳米颗粒（ UCP-NP）共价偶联,分别作为检测带,进而两两配伍,确定最优的配伍组合条件建立RT-UPT-LF方法;对RT-UPT-LF的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价。结果与结论所建立的RT-UPT-LF方法可在15 min内完成对蓖麻毒素的检测,灵敏度可达0．5 ng／ml,定量范围为0．5～1000 ng／ml,与其他高浓度毒素无非特异反应,该法为蓖麻毒素检测提供了一种新手段。     

单核细胞增生李斯特菌致脑膜炎1例

<正>病人,女,42岁。2012年4月16日上午无明显诱因出现持续性全头胀痛或跳痛,伴恶心,无呕吐,自觉发热,未测体温,无意识障碍、四肢抽搐、大小便失禁。门诊以"颅内感染"于4月17日收入院。入院时患者意识、体力欠佳,进食少,睡眠差,大小便正常。查体:体温:38.2℃,血压:128/80 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)。皮肤、巩膜无黄染。结核抗体阴性(-);血沉50.0 mm/h;C-反应蛋白149.0 mg/L;乙肝表面抗原(发光)10 392.0 COI;     

基于上转发光免疫层析技术的常见食源性致病菌快速检测方法研究与评价

目的：研制针对4种常见食源性致病菌：甲型副伤寒沙门菌（ Salmonella paratyphi A）、乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）、大肠埃希菌O157∶H7（Escherichia coli O157∶H7）、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的基于上转发光免疫层析技术（ UPT－LF）的快速定量检测试纸,并对其检测性能进行评价。方法以上转发光纳米颗粒（ UCP－NPs）作为示踪物,基于双抗体夹心检测模型,研制针对上述4种靶标菌的UPT－LF试纸;以4种靶标菌的系列浓度标准菌悬液作为标准样品,评价试纸的敏感性、特异性、线性和精密性,并进行模拟染菌食品的检测,评价模拟样品阳性检出率。结果针对4种靶标菌的UPT－LF试纸均具有良好的线性,相关系数r为0．985～0．996;检测敏感性达105～106 CFU／ml,与其他近缘菌株无交叉反应;对乳制品、饮料、小食品、水产、肉类等细菌污染的食品检出率较高。结论该研究建立的对4种常见食源性致病菌进行快速检测的UPT－LF,简便快速,具有良好的敏感性、特异性和线性定量能力,操作性能可满足食品安全检测的要求。     

多重环介导等温扩增快速检测沙门菌、副溶血弧菌和单核细胞增生性李斯特菌方法的建立

目的：建立能够同时检测沙门菌、副溶血弧菌（VPH）和单核细胞增生性李斯特菌（LM）的多重环介导等温扩增（mLAMP）方法。方法分别针对沙门菌 bcfD 基因、VPH 的 tlh 基因和 LM的 iap 基因设计 mLAMP 引物,以LAMP 进行单重 LAMP 检测。实时浊度监测扩增结果,优化引物浓度配比,进而建立此3种食源性致病菌的mLAMP 检测体系,以 PCR 检测灵敏性作为比较,进行特异性和灵敏性分析。结果实时浊度监测表明,该 mLAMP体系具有良好特异性,可在45 min 内一次性检测以上3种致病菌,且无非特异扩增产生。这3种菌的检测最低限分别为300 fg／μl、4．2 pg／μl 和4．5 pg／μl,与 PCR 检测灵敏度相当。结论该多重 LAMP 可同时检测食品中的沙门菌、VPH 和 LM,可作为大规模样品的初筛或传统方法的辅助方法,用于快速判定样品中是否含有这3种致病菌。     

Tim-3在单核细胞增生李斯特菌脑膜炎小鼠中的作用研究

目的 构建李斯特菌脑膜炎小鼠模型,以评价T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域分子3(Tim-3)在李斯特菌脑膜炎小鼠中的可能作用.方法 体内实验通过延髓池注射李斯特菌的方法构建半数致死量的李斯特菌脑膜炎小鼠模型,应用Tim-3敲除(knock out,KO)模式小鼠和Tim-3抗体评价Tim-3对李斯特菌脑膜炎的作用.体外实...     

基于上转发光技术的奶粉及牛奶中黄曲霉毒素M1快速定量检测方法研究

目的：利用上转发光免疫层析技术（ AFM1-UPT-LF）建立奶粉及牛奶中黄曲霉毒素M1的快速检测方法。方法以UCP颗粒作为标记物,无需样品前处理,采用竞争免疫反应建立AFM1-UPT-LF方法。以AFM1阴性的奶粉、牛奶配制系列浓度AFM1标准品,确定检测方法的灵敏度、特异性、标准曲线与定量范围、精密度、准确度及回收率,并对实际样品进行定性和定量检测评价。结果利用AFM1-UPT-LF可实现奶粉及牛奶中AFM1定性及定量检测,20 min内即可完成。奶粉中检测下限可达0．1μg／kg,在0．1～0．7μg／kg间具有较好线性（r＝－0．99359, P＜0．01）,牛奶中检测限为0．3μg／L,在0．3～0．7μg／L间具有较好线性（r＝－0．99938,P＜0．05）。在定性检测中,对奶粉检测灵敏度为100％,特异性为85％,受试者工作特征（ROC）的曲线下面积（AUC）为0．978±0．036;牛奶检测中灵敏度为81％,特异性为88％, ROC的AUC为0．891±0．099;与LC-MS结果进行χ2检验,P值均大于0．05,两种方法差异无显著性意义。在定量检测评价中,AFM1-UPT-LF对于奶粉及牛奶中AFM1检测均具有较好回收率,与LC-MS比较差异无显著性意义（奶粉：t＝0．66,P＞0．05;牛奶：t＝1．01,P＞0．05）。结论利用UPT-LF所建立的AFM1-UPT-LF方法可实现奶粉及牛奶中AFM1定性及定量快速检测,检出限满足国标限量标准要求;该法无需样品处理,操作简便,可满足食品安全中对现场快速检测的需求。     

基于重组酶聚合酶扩增结合侧流层析技术的B、E型腺病毒快速可视化检测方法的研究与评价

目的 建立一种快速、准确、可视化、易开展的B、E型腺病毒检测技术.方法 针对B、E型腺病毒壳蛋白保守序列设计通用引物,建立可同时检测出这两种腺病毒型别的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条(recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,LFD-RPA)检测技术,评价其灵敏度与特异性,并验证最佳反应温度与反应时间,同时利用该法对19例B、E型腺病毒感染患者及10例健康志愿者鼻咽拭子标本进行检测.结果 腺病毒LFD-RPA法检测灵敏度可达10拷贝/μl,与qPCR方法相近,且不会与其他亚属腺病毒及其他病毒发生交叉反应.反应可在25~45℃温度范围内高效进行,检测全程仅需15~20 min.利用临床咽拭子标本对检测体系进行评估,其灵敏度及特异性均达100%.结论 该检测方法灵敏度高、特异性强、操作简单,反应快速,能脱离对大型仪器、专业操作人员及正规实验室的依赖,在基层卫生部门,尤其在野外及现场检测中具有极大的应用潜力.     

基于Luminex悬浮芯片的鼠疫耶尔森菌SNP分型方法研究

目的利用Luminex悬浮芯片技术,基于单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）建立我国鼠疫耶尔森菌东方型菌株（以下简称东方型鼠疫菌）的基因分型方法,为进一步研究东方型鼠疫菌多态性并分析其系统发育关系奠定基础。方法利用多重PCR,同时扩增东方型鼠疫菌中18个具有分型意义的SNP位点,扩增产物进行多重等位基因特异性引物延伸（allele specific primer extension,ASPE）反应以及Luminex悬浮芯片技术分析,随后利用MasterPlex GT V2.3软件计算平均荧光强度（median fluorescence intensity,MFI）比值,判断各SNP位点的碱基状态;并对SNP分型方法的重现性进行评价。结果 Luminex多重SNP技术能够快速、高通量地检测出各SNP位点的MFI值,从而在8 h内一次性成功确定东方型鼠疫菌中18个SNP的碱基状态;36株东方型鼠疫菌基于18个SNP可以分为7个基因型。结论本文建立的Luminex多重SNP检测方法作为一种高通量检测SNP的技术平台,为后期的东方型鼠疫菌SNP分型及系统发育分析奠定了基础。     

An evaluation of an enquiry based learning strategy for the science of imaging technology

Diagnostic radiography is a science based health course. Due to the variation in science background of the students at entry level the imaging science modules can be problematic. Enquiry based learning (EBL) was introduced as teaching strategy in an imaging science module in order to promote learner autonomy and enhance the student experience. The module was evaluated using a questionnaire containing both open and closed questions.The impact of working as a team was a strong theme emerging from the evaluation of the project, with the majority of students viewing teamwork as beneficial to their learning. It was identified that they gained support from the team, and this assisted their learning. The enhancement of transferable skills and the promotion of learner autonomy were achieved. Areas for further investigation are the utilisation of peer assessment and a science event for the summative assessment.     

基于FPGA的实时脉冲信号峰值检测方法

目的：基于现场可编程门阵列（ field programmable gate array ,FPGA）应用平台,提出一种新的脉冲信号峰值检测方法———动态阈值半峰检测法。方法在传统检测方法的基础上,以符合高斯型分布的脉冲信号为检测目标,在检测过程中仅通过保留关于检测脉冲的采样起点、最大值以及脉冲宽度3个检测参数,实现在FPGA平台中针对脉冲峰值的实时快速检测。结果该法解决了传统方法在检测时无法检测基线浮动以及重复检测等问题,检测结果与多项式拟合方法相比,差异性仅为3．2％,与流式细胞仪检测结果相比,差异性为9．3％。结论该方法具有检测速度快,占用内存小,样本缓存少,无需固定阈值的优点,在FPGA应用中可作为一种有效的快速检测方法。