枯草芽孢杆菌产生μ—葡聚糖酶的研究：高产突变株CW—06的选…

从２２份土样中，分离得到６株β－葡聚糖酶产生菌，经鉴定为枯草芽孢杆菌。以其中２株产酶活性较高的（６１和５５Ｕ／ｍｌ），为出发株，用ＮＴＧ诱变处理，最后得到突变株ＣＷ－０６。通过优化发酵培养基和发酵条件，使其产酶能力达到１６０Ｕ／ｍｌ以上。     

枯草芽孢杆菌产生在β－葡聚糖酶的研究：高产突变株CW－06的选育及其发酵条件的优化

从２２份土样中，分离得到６株β－葡聚糖酶［ＥＣ．３．２．１．７３］产生菌，经鉴定为枯草芽孢杆菌。以其中２株产酶活性较高的（６１和５５Ｕ／ｍｌ），为出发株，用ＮＴＧ诱变处理，最后得到突变株ＣＷ－０６。通过优化发酵培养基和发酵条件，使其产酶能力达到１６０Ｕ／ｍｌ以上。     

枯草芽孢杆菌突变株CW－06产生β－葡聚糖酶的纯化及其性质的初步研究

枯草芽孢杆菌突变株ＣＷ－０６产生β－葡聚糖酶的纯化及其性质的初步研究吴江，徐虹，陈代杰，黄为一（南京农业大学微生物系，江苏９１００９６；南京化工学院，江苏；上海医药工业研究院，上海２４０００４０）ＳＴＵＤＩＥＳＯＮＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮＡＮＤＰＲＯ...     

枯草芽孢杆菌BS224菌株抑菌作用的初步研究

目的 研究枯草芽孢杆菌BS224菌株抑菌物质的产生及作用机制。方法 分别取发酵后离心所得上清液和菌体破碎液以杯碟法测抑菌活性。结果 2500rpm一4000rpm离入所得上清液与菌体破碎液抑菌圈半径有显著差异。结论 枯草芽孢杆菌BS224菌株抑菌物质大多外分泌于发酵液中，以2500rpm一4000rpm离心可获取抑菌物质。     

枯草芽孢杆菌纤溶酶的生物分析方法及其在猕猴体内的药动学研究

目的：研究猕猴单次静脉滴注注射用枯草芽孢杆菌纤溶酶（BSFE）的药动学。方法：6只猕猴静脉滴注BSFE2.5mg/kg,采用ELISA法测定动物的血药浓度,实验数据用DAS2.0药动程序拟合并计算药动参数。结果：6只猕猴静脉滴注2.5mg/kg的BSFE,浓度-时间数据经药代动力学参数计算,表明药物消除符合二房室模型。6只猕猴的达峰时间（tmax）均为0.5h,峰浓度（Cmax）均值为（592.3±150.9）μg/L;平均消除t1/2β为（5.78±1.19）h;平均清除率（CL）为（4.42±1.19）L.h^-1.kg^-1;药时AUC0-24.5h均值为（557.1±211.1）μg.L^-1.h。结论：本试验所建立的双抗体夹心ELISA法,灵敏度高、特异性强、操作简便,适于BFSE的药代动力学研究。     

芽孢杆菌产生的胞外GL—7—ACA酰化酶

半合成头孢菌素因其低毒与广谱抗菌活性,临床应用日益增多.生产这些头孢菌素的关键中间体7—氨基头孢烷酸(7-ACA)由头孢菌素C(CPC)经化学裂解制得.由于化学转化需使用有毒化合物,具危险性,故现已逐渐被酶解法取代.在工业生产上,优先选用的是两步酶解工艺(图1).     

枯草芽孢杆菌guaB基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

克隆枯草芽孢杆菌guaB基因,构建穿梭表达载体,使其在大肠杆菌中获得表达,为构建鸟苷高产工程菌奠定基础。从枯草芽孢杆菌JSIM-G-518基因组扩增出guaB基因,将其连接到pMD19-T上,得到重组质粒pMD-guaB,进行测序和Blast比对分析。该重组质粒经PstI、BamHI双酶切,获得guaB片段连接至pHP13载体上,构建穿梭表达载体pHP13-guaB,并采用双酶切电泳进行鉴定。将该载体转化入大肠杆菌BL21中,通过SDS-PAGE电泳检测guaB基因的表达效果。克隆的guaB基因长度为1 510 bp,与GenBank登录的枯草芽孢杆菌同源性为99%,编码500个氨基酸,确认为控制IMP脱氢酶的基因。穿梭载体pHP13-guaB经双酶切后产生1 510 bp和4.9 kb两个期望的目的条带。SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量的大小为52.9 k,与预期的IMP脱氢酶分子量一致,且该目的蛋白的表达效果比对照组更明显。论文成功实现了枯草芽孢杆菌guaB基因在大肠杆菌中的表达。     

枯草芽孢杆菌喷雾剂对小鼠皮肤创伤愈合的影响

目的:观察枯草芽孢杆菌喷雾剂对小鼠皮肤创伤愈合疗效的影响。方法:采用小鼠皮肤创伤为模型,连续给药6d,第9天测定创面的缩小程度,并于第15天,观察各试验组的愈合率,并用直径12毫米的打孔器,取下创面新生皮肤并称重,观察肉芽生长的情况。结果:枯草芽孢杆菌喷雾剂高剂量组和磺胺嘧啶银组创面面积显著小于空白对照组(p<0.05);枯草芽孢杆菌喷雾剂的愈合率显著高于空白对照组(p<0.05)。结论:枯草芽孢杆菌喷雾剂能够显著缩小创面面积,增加创面肉芽的重量,增加创面的愈合率。     

微波杀灭口腔石膏模型上枯草芽孢杆菌的效果观察

目的通过观察微波炉杀灭石膏模型上枯草芽孢杆菌黑色变种的效果,为快速杀灭石膏模型表面的细菌提供依据。方法试验菌为枯草芽孢杆菌黑色变种（ATCC9372）,石膏模型染菌后放入美的牌家用箱式微波炉,选用不同功率档和不同时间进行试验。结果在输出功率700W×17%和输出功率为700W×55%时,作用7min不能够全部杀灭石膏模型表面的枯草芽孢杆菌黑色变种;在输出功率700W×100%时,作用3min和5min亦不能完全杀灭枯草芽孢杆菌黑色变种,只有作用达7min方能完全杀灭枯草芽孢杆菌黑色变种。结论微波能有效杀灭口腔石膏模型上枯草芽孢杆菌黑色变种,但要保证一定的微波功率和作用时间。     

枯草芽孢杆菌的孢子液在微生物限度检查试验中的应用

目的:合理的菌悬液制备方法及使用可保证微生物限度试验操作简便、省时及检验结果的可靠性。方法:采用枯草芽孢杆菌的孢子液与枯草芽孢杆菌菌液进行回收率比较实验。结果:枯草芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌孢子回收率无显著差异,孢子略高于枯草芽孢杆菌。结论:枯草芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌孢子液均可用于微生物限度检查。     

枯草芽孢杆菌活菌制剂促进创伤皮肤愈合的实验研究

目的：探讨枯草芽孢杆菌活菌制剂对创伤皮肤愈合的影响。方法：以大鼠后背全层皮肤切除创伤愈合过程为模型，局部外用枯草芽孢杆菌活菌制剂并设对照，制作病理组织切片，测定创面羟脯氨酸含量变化，同时测量创面愈合面积，记录愈合时间。结果：应用枯草牙孢杆菌活菌制剂可促进成纤维细胞增生，提高胶原含量，创面愈合时间较对照组明显缩短。结论：枯草牙孢杆菌活菌制剂具有促进创伤皮肤愈合的作用。     

微生物验证试验中枯草芽孢杆菌菌悬液制备的探讨

目的 探讨采用培养7 d芽孢量达到85%以上的枯草芽孢杆菌菌悬液代替培养18～24 h的菌悬液作为微生物菌落计数方法验证用菌液的可行性.方法 选取对枯草芽孢杆菌有抑制作用的6种药品,按<中国药典>2005年版附录微生物限度检查法的要求,采用2种菌悬液分别进行微生物验证试验,对验证结果进行比较.结果 2种菌悬液对同一供试品的验证结果保持一致.结论 采用培养7 d的枯草芽孢杆菌菌悬液作为微生物验证用菌液是可行的且更为合理.     

H2O2对枯草芽孢杆菌生长代谢以及腺苷发酵的影响

通过摇瓶发酵试验研究H2O2对枯草芽孢杆菌ATCC 21616生长代谢及产苷的影响.结果表明：添加时间、浓度以及两者的交互作用显著影响腺苷的积累,在12h添加20mg/L的H2O2最利于腺苷的合成,产苷量由7.03g/L增至7.79g/L.同时也研究了H2O2添加对代谢过程中糖耗及pH的影响.     

月见草籽粗提物对致病性枯草芽孢杆菌的抑菌能力

目的通过月见草籽粗提物(Evening primrose,EP)对致病性枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,B. subtilis)的抑菌能力的实验,以探究EP对B. subtilis的抑菌能力和抑菌机制。方法取不同浓度的EP采用滤纸片法与TTC法测定其抑菌活性;将最低抑菌浓度(MIC)浓度下的EP与1Χ10~8CFU·L~(-1)B. subtilis悬浮液共培养6 h,每30 min取样1 m L进行AKP酶、可溶性蛋白及核酸泄露的检测,且4 h后取样10 m L超声破碎后用SDS-聚乙烯酰胺凝胶电泳法测定菌体全蛋白量;利用溶氧仪测定EP对菌体的呼吸速率的影响确定其作用途径。结果 EP对B. subtilis有抑菌效果,抑菌圈直径为13.61 mm,MIC为0.5 g·L~(-1)。与对照组相比,加入EP后,随着时间的增加AKP酶活性及核酸泄露程度均逐渐增加,在1.5 h达到最大值后逐渐下降,6 h后趋于平稳;可溶性蛋白浓度随时间增加逐渐增加;EP全蛋白条带明显浅于对照组;EP能通过抑制糖酵解途径抑制菌体的呼吸作用。结论 EP通过改变细胞膜和细胞壁透性及抑制氧化呼吸代谢作用抑制B. subtilis的生长繁殖。     

中国根霉12#产生的抗生物质对枯草芽孢杆菌的作用方式

枯草芽孢杆菌等芽孢杆菌属的细菌是食品发酵工业中常见的污染菌。中国根霉12#可产生一种对芽孢杆菌属有强烈抗菌作用的抗生物质。本文利用抗生物质溶液浓度梯度培养法和透射电镜观察法研究了该抗生物质对枯草芽孢杆菌的作用方式。抗生物质溶液浓度梯度培养法的结果表明，当抗生物质的浓度达9000U／ml时，枯草芽孢杆菌的延滞期无限变长。透射电镜的观察结果表明该抗生物质主要作用于细胞壁，使细胞内容物溢出。由此可知。该抗生物质对枯草芽孢杆菌的作用方式为溶菌。     

枯草芽孢杆菌发酵产物CLPs抗肿瘤活性研究

由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)发酵并分离纯化得到环脂肽(CLPs),研究其对肿瘤细胞MCF-7和正常细胞HELF的细胞毒作用,探索CLPs对LDH释放的影响,并用流式细胞仪检测CLPs对MCF-7细胞凋亡的影响。采用MTT法检测CLPs对肿瘤细胞和正常细胞的细胞毒性,LDH试剂盒检测对LDH释放的影响,AnnexinV/PI染色观察CLPs对肿瘤细胞凋亡的影响。CLPs对肿瘤细胞MCF-7有细胞毒性,CLPs作用24 h时抑制率可达88%,CLPs对正常HELF细胞无细胞毒性;CLPs导致MCF-7细胞LDH释放,CLPs质量浓度100μg/mL,作用24 h时,LDH释放率由5.10%增加到31.67%,CLPs对HELF细胞LDH没有影响;CLPs能导致MCF-7细胞发生凋亡。CLPs能选择性作用于MCF-7细胞,增加MCF-7细胞LDH释放,并导致MCF-7细胞发生凋亡。     

芽孢杆菌BI1的鉴定及其抑菌性研究

目的 对本实验室分离得到芽孢杆菌B11进行鉴定.方法 将该菌株的16S rDNA基因序列与GeneBank中已鉴定的16S rDNA序列对比,并结合生理生化实验综合分析.结果 菌株B11与枯草芽孢杆菌亲缘关系最为接近,16S rDNA基因相似性达到99.6%,生理生化实验结果与标准枯草芽孢杆菌一致.结论 将芽孢杆菌B11鉴定为枯草芽孢杆菌.     

枯草芽孢杆菌活菌产品对皮肤用药的安全性分析

目的 探讨皮肤应用枯草芽孢杆菌活菌产品的安全性.方法 4只家兔背部皮肤左右分别设给药组和空白对照组,用枯草芽孢杆菌活菌产品多次局部涂抹家兔的皮肤进行刺激,观察皮肤刺激性;将豚鼠完全随机分为空白对照组、给药组和阳性对照组,每组10只,空白对照组给予赋形剂,给药组给予枯草芽孢杆菌产品,阳性对照组给予1％ 2,4-二硝基氯代苯.对皮肤多次局部涂抹致敏,观察过敏反应.结果 枯草芽孢杆菌活菌产品对家兔皮肤刺激强度为0.14分,小于0.5分,后续观察未出现可逆反应,无明显皮肤刺激性反应;给药组豚鼠致敏率为0分,致敏等级为Ⅰ级,无皮肤过敏反应.结论 枯草芽孢杆菌活菌产品局部毒性小,皮肤用药具有良好的安全性.