大鼠肾脏冷缺血-再灌注损伤模型的建立

目的　建立一种简便、实用的大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤模型,为研究缺血再灌注损伤与移植后肾脏损伤的关系提供实验基础。方法　雄性SD大鼠36只,腹正中切口,采用显微外科技术在后腹膜间隙游离左、右侧肾蒂、肾脏和腹主动脉和下腔静脉。实验组(A组)和对照组(B组)各18只。A组:阻断左侧肾脏血流,2 4GA静脉留置针经腹主动脉缓慢匀速灌注10mL0℃～4℃HC A液至肾脏颜色变白,缺血1h后恢复左肾血流,切除右肾;B组:假手术组,采用同样方法游离左右侧肾脏后,不实施阻断左肾脏血流和肾脏灌注,切除右肾;A、B组分别于肾脏复灌后1d、3d、7d检测肾功能和切除左肾作病理检查。结果　A组1d和3d血清Cr、Bun值均高于B组,差异无统计学意义(P <0 .0 1) ;7d时血清Cr、Bun值略高于B组,但差异无统计学意义(P >0 .0 5 ) ;A组术后1d和3d肾脏病理切片可见典型肾脏缺血再灌注损伤改变,B组未见明显改变。结论　大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤模型手术操作简便,手术成功率高,充分模拟临床上肾移植时以冷缺血为主的特点,是研究肾脏移植缺血再灌注损伤的理想动物模型。     

促红细胞生成素对失血性休克大鼠肾损伤的保护作用

[目的]探讨促红细胞生成素（Erythropoietin, Epo）对失血性休克大鼠肾损伤的保护作用.[方法]建立失血性休克大鼠肾损伤模型,选用SD大鼠36只随机分为假休克组、休克组、Epo治疗组,进行组织学观察,并检测血浆丙二醛（MDA）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）和肾组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、白介素-6（IL-6）的变化.[结果]Epo治疗组血浆MDA、Cr、BUN水平较休克组显著下降（P〈0.05）;肾组织匀浆SOD显著升高、IL-6显著降低（P〈0.05）.[结论]Epo对失血性休克大鼠肾损伤具有保护作用,这种作用可能与提高肾组织中SOD水平,降低肾组织中IL-6水平有关.     

Toll-Like Receptor-4 Coordinates the Innate Immune Response of the Kidney to Renal Ischemia/Reperfusion Injury

Toll-like receptors (TLRs) can detect endogenous danger molecules released upon tissue injury resulting in the induction of a proinflammatory response. One of the TLR family members, TLR4, is constitutively expressed at RNA level on renal epithelium and this expression is enhanced upon renal ischemia/reperfusion (I/R) injury. The functional relevance of this organ-specific upregulation remains however unknown. We therefore investigated the specific role of TLR4 and the relative contribution of its two downstream signaling cascades, the MyD88-dependent and TRIF-dependent cascades in renal damage by using TLR4−/−, MyD88−/− and TRIF-mutant mice that were subjected to renal ischemia/reperfusion injury. Our results show that TLR4 initiates an exaggerated proinflammatory response upon I/R injury, as reflected by lower levels of chemokines and infiltrating granulocytes, less renal damage and a more preserved renal function in TLR4−/− mice as compared to wild type mice. In vitro studies demonstrate that renal tubular epithelial cells can coordinate an immune response to ischemic injury in a TLR4-dependent manner. In vivo we found that epithelial- and leukocyte-associated functional TLR4 contribute in a similar proportion to renal dysfunction and injury as assessed by bone marrow chimeric mice. Surprisingly, no significant differences were found in renal function and inflammation in MyD88−/− and TRIF-mutant mice compared with their wild types, suggesting that selective targeting of TLR4 directly may be more effective for the development of therapeutic tools to prevent I/R injury than targeting the intracellular pathways used by TLR4. In conclusion, we identified TLR4 as a cellular sentinel for acute renal damage that subsequently controls the induction of an innate immune response.     

Macrophages Expressing Heme Oxygenase-1 Improve Renal Function in Ischemia/Reperfusion Injury

Acute kidney injury has a high mortality and lacks specific therapies, with ischemia/reperfusion injury (IRI) being the predominant cause. Macrophages (Mφ) have been used successfully in cell therapy to deliver targeted therapeutic genes in models of inflammatory kidney disease. Heme oxygenase-1 (HO-1) catalyzes heme breakdown and has important cytoprotective functions. We hypothesized that administration of Mφ modified to overexpress HO-1 would protect from renal IRI. Using an adenoviral construct (Ad-HO-1), HO-1 was overexpressed in primary bone marrow–derived Mφ (BMDM). In vitro Ad-HO-1 Mφ showed an anti-inflammatory phenotype with increased phagocytosis of apoptotic cells (ACs) and increased interleukin (IL)-10 but reduced TNF-α and nitric oxide (NO) following lipopolysaccharide/interferon-γ (IFNγ) stimulation compared to control transduced or unmodified Mφ. In vivo, intravenously (IV) injected Mφ homed preferentially to the post-IRI kidney compared to uninjured control following experimental IRI. At 24 hours postinjury, despite equivalent levels of tubular necrosis, apoptosis, and capillary density between groups, the injection of Ad-HO-1 Mφ resulted in preserved renal function (serum creatinine reduced by 46%), and reduced microvascular platelet deposition. These data demonstrate that genetically modified Mφ improve the outcomes in IRI when administered after the establishment of structural injury, raising the prospect of targeted cell therapy to support the function of the acutely injured kidney.     

臭氧氧化预处理对大鼠肾I/R组织Toll样受体4表达的影响

目的观察臭氧氧化预处理(OzoneOP)对大鼠肾缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,I/R)组织内Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法将48只大鼠随机分为假手术组、假手术+OzoneOP组、I/R组、I/R+OzoneOP组,每组各12只。术前15d始对包含OzoneOP的大鼠经直肠吹入氧气和臭氧的混合气体5～5.5 ml(臭氧浓度50 mg/L,1 mg/kg,每日1次),之后按分组要求建立原位大鼠单侧肾I/R动物模型。24 h后检测尿素(BUN)、肌酐(Cr)、TLR4 mRNA表达、TLR4蛋白表达情况。结果 I/R组和I/R+OzoneOP组BUN、Cr、TLR4 mRNA含量、TLR4蛋白含量明显高于假手术组和假手术+OzoneOP组,差异有统计学意义(P<0.05),而I/R组上述4项指标又明显高于I/R组+OzoneOP组,差异均有统计学意义(P<0.05),而假手术组与假手术+OzoneOP组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OzoneOP可以减轻肾I/R,其机制可能通过抑制TLR4的表达而发挥作用。     

趋化因子阻滞剂对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨趋化因子阻滞剂-溶血磷脂酸对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:雄性Wis-tar大鼠,体重(230±20)g,随机分为三组(n=10),即假手术组、模型组及溶血磷脂酸组。建立大鼠肾缺血再灌注模型,在再灌注4 h点检测肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量(ELISA方法)、肾功能指标及光镜观察肾脏病理改变,同时观察溶血磷脂酸(LPA)对上述指标的影响。结果:假手术组大鼠肾脏组织中含有少量MCP-1,模型组MCP-1含量明显升高;LPA组血Cr、BUN比模型组均降低(P<0.01),肾组织MCP-1含量减少(P<0.01),肾脏组织病理学改变减轻(P<0.01)。结论:细胞因子-MCP-1参与了肾脏缺血再灌注损伤,LPA可通过其抗炎作用,抑制单核细胞趋化蛋白-1,保护肾脏缺血再灌注损伤后的肾功能紊乱。     

加贝酯对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

[目的]探讨加贝酯对SD大鼠肝脏抗缺血再灌注损伤（HIRI）的效应及其可能的机制。[方法]采用Pringle＇s法建立大鼠HIRI模型,将40只SD大鼠随机分成四组,每组10只：A组（假手术组）、B组（模型组）、C组（加贝酯处理组）、D组（盐水对照组）。分别测定血浆中天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）浓度;测定肝组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量及光镜观察各组病理形态学变化。[结果]B、C、D三组ALT、AST、MDA均显著高于A组（P〈0．05或P〈0．01）,B、D两组又显著高于C组（P〈0．01）;A组的SOD含量明显地高于其他三组,而C组又明显地高于B、D两组（P〈0．01）。光镜下观察肝组织形态学变化,A组形态基本正常;B、D两组损伤最严重;而C组较B、D两组轻微。[结论]肝脏缺血再灌注时,肝细胞功能受损,蛋白酶抑制剂加贝酯能明显减轻这种损伤,保护肝功能。     

Preparation and Improvement of Rat Model of Myocardial Ischemia Reperfusion Injury

目的 总结并改进大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)模型的制备方法.方法 将SPF级成年雄性SD大鼠60只,随机分为3组,每组20只.分别采用切断第4肋法,切断第2、3、4肋骨牵拉固定结扎线法,不切断肋骨使用小型扩胸器及双移液器枪头套叠代替打结法制备MIRI模型.结果 3种方法模型制备成功率分别为45％、50％ 、70％,成功率比较差异无统计学意义(P＞0.05).3种方法模型制备时间分别为(7.5±1.2)min、(9.0±1.9) min、(5.9±0.8)min,3组比较差异有统计学意义(P＜0.05),方法三组与方法一、二组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).3组大鼠模型制备成功者再灌注后CK-MB值(1215±223) U/L与缺血时CK-MB值(1654±313)U/L比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 不切断肋骨,使用小型扩胸器及双移液器枪头套叠代替打结法制备MIRI模型是目前较优良的模型制备方法.     

大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的制备及改进

目的总结并改进大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)模型的制备方法。方法将SPF级成年雄性SD大鼠60只,随机分为3组,每组20只。分别采用切断第4肋法,切断第2、3、4肋骨牵拉固定结扎线法,不切断肋骨使用小型扩胸器及双移液器枪头套叠代替打结法制备MIRI模型。结果 3种方法模型制备成功率分别为45%、50%、70%,成功率比较差异无统计学意义(P>0.05)。3种方法模型制备时间分别为(7.5±1.2)min、(9.0±1.9)min、(5.9±0.8)min,3组比较差异有统计学意义(P<0.05),方法三组与方法一、二组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3组大鼠模型制备成功者再灌注后CK-MB值(1215±223)U/L与缺血时CK-MB值(1654±313)U/L比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论不切断肋骨,使用小型扩胸器及双移液器枪头套叠代替打结法制备MIRI模型是目前较优良的模型制备方法。     

Nrf2基因转染对缺血再灌注心肌炎症反应和氧化应激的影响

[目的]探讨心肌细胞过表达核因子相关因子2（Nrf2）基因后对缺血再灌注损伤导致的炎症反应和氧化应激的影响.[方法]30只SD大鼠随机分成3组（n=10）,A组为对照组,B组为缺血再灌注组,C组为Nrf2组.A组和B组经冠脉转染携带绿色荧光蛋白的腺病毒载体（Ad-EGFP）,C组转染携带Nrf2基因的腺病毒载体（Ad-Nrf2）至心肌组织.稳定3 d后,各组行心肌缺血再灌注损伤（或假实验）.光学显微镜下观察心肌的炎症改变,测定心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）的含量.[结果]缺血再灌注后,光镜下B组亚细胞结构损伤明显,C组结构损伤较B组明显减轻; B、C两组SOD的活性与A组比较明显降低（P〈0.05）,而B组明显低于C组（P〈0.05）;B、C两组MDA含量与A组比较明显升高（P〈0.05）,B组明显高于C组（P〈0.05）.[结论]过表达Nrf2基因能通过抗炎和抗氧化应激保护缺血再灌注心肌.     

复方虫草精华对心脏缺血/再灌注损伤的保护作用

目的：观察复方虫草精华（Lungfit)对大鼠离体心脏缺血／再灌注损伤是否存在保护作用。方法：Lungfit分小、大两个剂量（160、325mg/kg.d^-1)给大鼠连续灌胃给药10天后，取心脏，用Langendorff装置逆行恒压灌流，左心室内置乳胶水囊和换能器相连，分别测定缺血前后各组心脏的心功能参数值。结果：缺血前，Lungfit灌胃大鼠离体心脏的各项心功能参数值与对照组相比无显著差异（P＞0．05）；缺血30min后的再灌注期间，Lungfit灌饲的大鼠心脏的心率、冠脉流量及心肌舒缩功能的改善明显优于对照组（P＜0．05或P＜0．01）。结论：Lungfit对心肌缺血／再灌注损伤具有保护作用。     

四氢巴马汀对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨四氢巴马汀(l-THP)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:Wistar大鼠24只,分为假手术组、模型组和l-THP治疗组,结扎大鼠冠状动脉左前降支30min再灌注120min造成心肌缺血再灌注损伤模型,分别于缺血30min、再灌注30min、60min、90min、120min观察l-THP对大鼠心功能、心肌酶学和脂质过氧化的影响。结果:l-THP能够对抗心肌缺血再灌注损伤引起的左心室内压(LVSP)、左心室内压最大上升与下降速率(±dp/dtmax)下降,左心室舒张末期压力(LVEDP)的升高,并能够稳定心肌组织Na -K -ATPase和Ca2 -Mg2 -ATPase活性,降低丙二醛(MDA)含量和增高超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结论:四氢巴马汀(l-THP)对大鼠心肌缺血再灌注引起的心功能降低具有明显的保护作用,其机制可能与改善能量代谢障碍和抑制自由基生成或清除氧自由基作用有关。     

糖尿病大鼠肾脏氧化应激的实验研究

目的　研究糖尿病大鼠肾脏氧化应激反应 ,求证氧化应激在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法　将实验动物分为正常组与糖尿病组 ,用链脲佐菌素 (STZ)诱导糖尿病大鼠模型 ,8周后检测两组大鼠血糖、血脂、尿蛋白、肾重 体重等各指标的变化以及肾组织中丙二醛 (MDA)的含量 ,铜、锌超氧化物歧化酶 (Cu ,Zn SOD) ,谷胱甘肽过氧化酶(GSH Px)的活性。结果　与正常组相比 ,糖尿病组血糖、血脂、尿蛋白、肾重 体重等指标明显增高 ,肾皮质MDA含量亦增加 ,而肾脏抗氧化酶的活性则降低。结论　糖尿病大鼠肾脏存在氧化应激反应 ,肾组织抗氧化酶缺乏在糖尿病肾病发病机制中起重要作用     

CRMP2真核表达质粒在大鼠缺血/再灌注脑皮质 转染效率的对比研究

目的:筛选Collapsin反应调节蛋白2(CRMP2)真核表达质粒转染大鼠脑皮质的适宜注射部位。方法:成年雄性SD大鼠150只随机分为空白质粒(VP)组、侧脑室(LV)组、海马(H)组、皮质(C)组及嗅球(OB)组。选定质粒注射部位后,20只大鼠随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(MCAO)组、缺血再灌注+空白质粒(MCAO+GFP)组、缺血再灌注+CRMP2真核质粒干预(MCAO+CRMP2/GFP)组。大鼠脑缺血/再灌注模型成功后,分别于相应4个部位立体定向注射CRMP2真核表达质粒/空白质粒,转染后24 h和48 h,采用Western blot及RT-PCR检测缺血区皮质CRMP2蛋白及m RNA的表达;激光共聚焦检测GFP的表达。TTC检测脑梗死体积,同时行神经功能评估。结果:不同部位注射CRMP2真核表达质粒后,皮质CRMP2的表达均有增高,其中LV组及H组的转染效率明显高于C组及OB组(P0.05),LV组与H组之间差异无统计学意义(P0.05)。与MCAO及(MCAO+GFP)组相比,CRMP2真核质粒干预之后能缩小脑梗死体积,促进神经功能恢复(P0.05)。结论:CRMP2真核表达质粒能够成功转染大鼠脑组织,使缺血区皮质CRMP2蛋白及m RNA的表达明显增高。侧脑室的转染效率较其他三个部位更高。     

兔肾缺血-再灌注损伤血清白细胞介素-6水平动态变化及其意义

目的：观测兔肾脏缺血-再灌注损伤（IRI）后血清白细胞介素-6（IL-6）动态变化及病理改变,探讨其潜在临床意义。方法成年新西兰大白兔10只用无创性动脉夹夹闭左肾肾蒂60 min制作肾IRI损伤模型,分别于IRI前、IRI后12 h、24 h、48 h抽取耳缘静脉血进行血清IL-6生化定量分析,并观察IRI肾形态学及组织病理学变化。结果(1)建模前、IRI-12h、IRI-24h及IRI-48h的血清IL-6均值分别为2.52±0.40μg/L、3.29±0.50μg/L、3.80±0.62μg/L和2.12±0.24μg/L,4组数据之间差异有统计学意义（F=33.56,P＜0.01）;(2)IRI-12h见近曲小管上皮细胞肿胀,空泡变性;IRI-24h细胞变性加重,间质有炎性细胞浸润,管周血管明显扩张淤血。IRI-48h病变程度均较IRI-24h减轻。结论兔肾IRI后血清IL-6浓度可间接评估IRI的严重程度。     

异丙酚对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾组织ICAM-1表达的影响

目的探讨异丙酚不同给药时机对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾组织ICAM-1表达的影响。方法50只SD大鼠随机分为5组,每组10只:假手术对照组(C)、缺血再灌注组(I)、及异丙酚预先给药组(P1),异丙酚即时给药组(P2),异丙酚延迟给药组(P3)。缺血前1h,C、I组经鼠尾静脉以2mL/h速度输注生理盐水,P1组阻断前1h经鼠尾静脉缓注异丙酚30mg/kg/h,继以持续输注30mg/kg/h至松开后3h,P2组阻断肾动脉同时静脉缓注异丙酚30mg/kg/h至松开后4h,P3组在松开阻断同时静脉缓注异丙酚30mg/kg/h至松开后4h 45min。阻断肾动脉后关闭腹腔,缺血45min后,再次打开腹腔,显露肾脏,松开动脉夹,逐层缝合腹部正中切口,再灌注24h处死大鼠。观察血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN),肾组织ICAM-1mRNA表达及ICAM-1蛋白的变化。结果I组血Cr、BUN与C组比明显增高(P<0.05),P1和P2组较I组明显下降(P<0.05),P3组与I组相比无统计学意义(P>0.05)。肾缺血再灌注后,肾组织ICAM-1 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.01),P1和P2组与I组相比可明显减少ICAM-1 mRNA及其蛋白表达(P<0.01或<0.05),P3组的变化不明显,无统计学意义(P>0.05)。结论异丙酚预先和即时给药对大鼠肾缺血再灌注损伤有明显的保护作用,此保护部分是通过减少ICAM-1 mRNA及其蛋白表达来实现的,而延迟给药无此保护作用。     

依托咪酯对大鼠肝缺血再灌注损伤时内皮素-1的影响

目的：探讨依托咪酯对大鼠肝缺血再灌注损伤时内皮素-1（ET-1）的影响。方法：40只大鼠分为缺血再灌注组（A组）、缺血再灌注加氯化钠溶液（B组）、缺血再灌注加依托咪酯（C组）和假手术对照组（D组）。各组于再灌注后30、60min测定肝组织和血浆中ET-1。结果：与D组比较,A、B、C组于再灌注后30min及60min时,肝组织和血浆中ET-1均呈上升,但C组的上升程度低于同时间点的A、B两组。结论：依托咪酯对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用。     

全脑缺血／再灌注大鼠海马核转录因子-κB的表达及其在神经元损伤中的作用

目的探讨核转录因子-κB（NF—κB）在缺血致神经元损伤中的作用。方法建立Wistar大鼠全脑缺血／再灌注模型。研究脑缺血10min后不同再灌注时间内海马组织NF—κB的活性，TNF—α含量变化，脑组织含水量的变化，同时观察用PDTC治疗后对上述指标的影响。结果随再灌注时间的延长，脑海马组织中NF—κB活性、TNF—α含量，脑组织水含量显著升高（P〈0．05和P〈0．01）。使用NF-κB特异性抑制剂PDTC治疗后，上述各指标的异常变化明显减轻，与损伤组比有显著性差异（P〈0．05和P〈0．01）。结论全脑缺血／再灌注后，海马出现NF—κB的表达且活性增高，同时伴有炎性细胞因子TNF-α含量增加，脑水含量增加，提示NF-κB的活化参与了脑缺血神经元的损伤，应用NF—κB特异性抑制剂能减轻脑缺血神经元的损伤。     

VEGF/VEGFR在脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用

目的:研究VEGF/VEGFR在脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用。方法:SD大鼠108只,随机分为假手术组、对照组与VEGFR抗体组,每组36只,制备大脑中动脉缺血再灌注损伤(MCAO)模型,假手术组不造成缺血。VEGFR抗体组在造模前20 min侧脑室注射VEGF抗体,假手术组、对照组侧脑室注射等量生理盐水。比较3组在造模后1、3、7 d Bederson评分、VEGFR及缺血半暗带VEGFR2的变化。结果:VEGFR抗体组的Bederson评分在第1、3天高于对照组(P<0.05),VEGFR的表达在第1、3天低于对照组(P<0.01),但较假手术组高;VEGFR抗体组VEGFR2表达在第1、3天低于对照组(P<0.01)。结论:脑缺血再灌注损伤时,VEGF活化刺激VEGFR表达上调,促进血管内皮细胞增殖,加速新生血管形成。     

NOS在脑缺血再灌注大鼠肺肝肾组织中的作用

目的：检测脑缺血再灌注大鼠肺、肝、肾组织中一氧化氮合酶（NOS）的活性及作用。方法：按改良的Pulsinelli方法建立大鼠脑缺血再灌注模型，分别测定假手术组（S组）、缺血再灌注组（I组）2、6、12、24及48h时肺、肝、肾组织中NOS活性。结果：与S组比较，1组总NOS活性在2、12及24h时均升高，以12h时最显著（P〈0．01），其中2h时以结构型NOS（cNOS）上升为主（P〈0．05）。12h时以诱导型NOS（iNOS）上升为主（P〈0．01）；在24h时iNOs仍高（P〈0．05），48h时基本接近S组水平。结论：不同类型NOS在脑缺血再灌注不同阶段肺、肝、肾组织中活性不同，早期（〈6h），cNOS活性升高，对器官损害具有保护作用；后期（1224h），iNOS活性显著上升，介导了迟发性组织损伤。