聚合酶链反应检测乙型肝炎患者肝外组织中的乙型肝炎病毒DNA

应用巢式聚合酶链（ＰＣＲ）技术对１８例石蜡包埋的胆囊、肾、脾、肾上腺、心、睾丸、胰腺及肝脏组织的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ进行了检测，并与其免疫组化及原位杂交方法作比较。二组引物检测的结果表明：肝组织中均有ＨＢＶ感染，其中５例有ＨＢＶ的复制。肝外组织中ＨＢＶ检出率分别为胆囊８５．７％、７５．０％、肾７２．７％、肾上腺６６．７％、心脏５５．６％、睾丸５５．６％和胰腺５４．５％，但均未检测出ＨＢＶ的复制，ＰＣＲ检测发现与免疫组化及原位杂交结果基本一致。ＨＢＶ可以感染肝外组织但并不在这些组织中复制的发现可以解释受感染的肝外组织可以作为肝外感染源，但并不引起这些脏器出现明显的病理变化。     

聚合酶链反应检测乙型肝炎患者心肌组织中HBV DNA

应用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１８例乙型肝炎（乙肝）患者石蜡包埋心、肝组织中的ＨＢＶ ＤＮＡ，并与其免疫组化及原位杂交结果作了比较。二组引物检测的结果表明：在肝组织中均有ＨＢＶ感染，其中５例有ＨＢＶ复制。心肌组织中ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率为５５．６％，不存在ＨＢＶ的复制。心脏病理检查可见一些非特异性改变，如脂变、水肿和纤维素样坏死等。病理变化与心电图、临床症状、体征及ＰＣＲ检测结果无相关性     

套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA

为了更准确、简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究。发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平。检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）、ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝炎１３例（Ｂ组）、ＨＢｓＡｇ阴性和乙型肝炎病毒核心抗体（抗－ＨＢｃ）阳性正常对照组３０例（Ｃ组）及ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（－）肝硬化患者１２例（Ｄ组），分别有４５．５％、３０．８％、１３．３％和１００％患者血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性。ＨＢＶＤＮＡ在一些抗－ＨＢｓ（＋）肝病患者和所谓健康人的血清中也存在。Ａ、Ｂ两组检出有ＨＢＶ和（或）ＨＣＶ感染患者分别占８１．８％和５３．８％。提示套式和免疫套式ＰＣＲ是简便、快速而又高度敏感的检测方法；ＨＢＶ感染可能是引起ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝病的重要原因，且ＨＢｓＡｇ阴性肝病病因大多与病毒感染有关；应该重新认识自然感染者血清中抗－ＨＢｓ的临床意义。     

聚合酶链反应检测HBV DNA的临床意义

应用ＰＣＲ对１７１例肝病血清检测结果，ＨＢＶＤＮＡ阳性率５９．１％，ＥｌｉＳＡ检测ＨＢｓＡｇ阳性率４３．２７％，二者比较有显著性差异（Ｐ〈０．０１），ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（＋）组ＨＢＶＤＮＡ阳性率７９．５％，而ＨＢｓＡｇ（＋）抗－ＨＢｅ（＋）组主５７．９％，ＨＢｓＡｇ（－）／抗－ＨＢｓ（＋）组，ＨＢＶＤＮＡ阳性率３６．８％。     

聚合酶链反应研究丙型肝炎病毒与肝癌的关系

聚合酶链反应研究丙型肝炎病毒与肝癌的关系谢小明，苏先狮，张铮，郑宣鹤，陈一德丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是输血后肝炎和散发非甲非乙肝炎的主要致病因子。近年来国内外已报道，在肝细胞癌（ＨＣＣ）患者特别是乙型肝炎病毒标志阴性者中，抗－ＨＣＶ有高检出率。作者为进...     

应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.     

三种乙型肝炎病毒DNA定量聚合酶链反应试剂比较及其假阴性原因分析

乙型肝炎e抗原（HBeAg）是乙型肝炎病毒（HBV）复制的一个标志，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性、HBeAg阳性、抗-HBc阳性的患者体内HBV DNA亦较高。有报道所有该类标本均可检测到HBV DNA，且绝大部分（83．33％）的HBV DNA滴度高于10^6拷贝／ml。然而，我们在对临床标本进行HBV DNA定量检测中发现，相当一部分该类血清标本不能检测到HBV DNA或检测结果低于试剂盒检测下限。为了排除所用试剂盒缺陷造成的可能，我们对目前国内医疗机构常用的三种HBV DNA荧光定量聚合酶链反应（PCR）试剂进行了比较与分析。     

聚合酶链反应对母婴乙型肝炎病毒感染的反馈调查

聚合酶链反应对母婴乙型肝炎病毒感染的反馈调查杨德春尚世强洪文澜为了揭示ＨＢｓＡｇ阴性母亲所引起的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）垂直传播及影响ＨＢＶ传播的某些因素，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合血清学方法，反馈性地（即由ＨＢＶＤＮＡ阳性新生儿调查其母ＨＢＶ感染...     

乙型肝炎病毒DNA聚合酶链反应测定室间质量评价

乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测是国内开展最早也最为普遍的临床聚合酶链反应(PCR)检验项目，其定性、定量检测分别对处于HBV感染“窗口期”的患者确诊、乙型肝炎患者抗病毒治疗的动态观察，具有重要的应用价值。卫生部临床检验中心(以下简称部中心)从1998年开始对全国的HBV DNA临床PCR测定进行室间质量评价，近年PCR测定技术的临床应用发展颇快，使用的方法主要有实时荧光PCR和PCR-ELISA两种方法，临床测定正在进入规范化的轨道。     

聚合酶链反应检测肝硬化,肝癌患者血清HBVDNA,HCVRNA

作者应用聚合酶链反应对３３例肝硬化，２０例原发性肝癌患者血清中乙型和丙型肝炎病毒进行了检测。结果显示：乙型肝炎病毒检出率在肝硬化和肝癌中高于丙型肝炎病毒检出率，但在两种疾病之间，乙型、丙型肝炎病毒检出率差异均无显著性（Ｐ〉０．０５）。提示乙型、丙型肝炎病毒与肝硬化、肝癌相关，但以乙型肝炎病毒为主。     

套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患…

为了更准确，简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究，发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平，检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）     

PCR检测肝癌组织中HBVX基因

本文应用ＰＣＲ法检测２６例肝癌组织中的ＨＢＶＣ及Ｘ基因。结果显示，２６例中Ｃ区基因全部阳性。Ｘ基因２０例阳性；Ｃ区基因呈单一条带，Ｘ基因除５例为单一条带外，另有８例为三条带，７例为二条带，呈多态分布，提示Ｘ基因区有基因缺失、变异或插入状态存在，而两种基因的阳性对照均在预期位置出现单一条带，阴性对照未出现扩增条带，本文还对Ｘ基因致癌机制以及对其反式激活作用与其产物对细胞代谢的影响。对ＨＣＣ的形成、发     

SYBR实时定量聚合酶链反应检测鸭乙型肝炎病毒的研究

采用SYBR实时定量聚合酶链反应(PCR)检测鸭乙型肝炎病毒(DHBV)，现将结果报道如下。     

用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎疫苗免疫后无抗体反应者血清…

为了解乙型肝炎（乙肝）疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，作者用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了正常人君中乙肝疫苗免疫后１５例不产生抗－ＨＢｓ和２０例产生抗－ＨＢｓ者血清的ＨＢＶ ＤＮＡ，同时用Ａｂｂｏｔｔ试剂检测血清的ＨＢｅＡｇ。结果发现，不产生抗－ＨＢｓ者的１５例中有６例（４０％）第２次ＰＣＲ扩增ＨＢＶ ＤＮＡ为阳性，其中３例（５０％）为ＨＢｅＡｇ阳性，产生抗－ＨＢｓ者的２０例其血清ＨＢＶ     

逆转录－套式－聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞癌的关系

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链；用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ。结果发现：５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性；１例三者均阴性；１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性的癌组织和癌旁组织均检出了ＨＣＶＲＮＡ负链，但血清中未检出负链。在２２例ＨＣＣ中１３例血清、８例癌组织和１５例癌旁组织中检出ＨＢＶＤＮＡ。５例有ＨＣＶＲＮＡ和／或抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者血清、和／或癌组织、和／或癌旁组织中均伴随ＨＢＶＤＮＡ和／或ＨＢ－ＶＭ阳性。提示ＨＣＶ可在癌旁肝细胞或肝癌细胞中感染并复制；ＨＢＶ感染与肝癌发生的关系比ＨＣＶ感染更密切。     

聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶ ＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢属于无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１