CD34+造血干细胞混合CD3+T细胞移植分离移植物抗宿主病和移植物抗白血病效应

目的探讨在异基因造血干细胞移植中能否采用纯化CD34+造血干细胞混合一定量纯化CD3+T细胞移植达到既控制移植物抗宿主病(GVHD)又保留移植物的抗白血病效应(GVL). 方法 (C57BL/6×615)F1代接种L615白血病细胞株建立小鼠白血病模型作为移植受鼠,利用免疫磁珠纯化骨髓CD34+造血干细胞及脾脏CD3+细胞,流式细胞仪分析纯化前后CD34+、CD3+细胞百分比,观察单纯移植CD34+细胞及混合不同数量级CD3+细胞后受鼠生存时间、GVHD、GVL效应,移植后骨髓造血重建细胞来源. 结果纯化CD34+细胞1×10+6移植组100%死于白血病复发;CD34+细胞+纯化CD3+细胞(1×10+7)移植组生存期明显延长,50%死于白血病复发,无GVHD表现;CD34+细胞+CD3+细胞(5×10+7)移植组长期存活,无白血病复发,无GVHD表现;CD34+细胞+CD3+细胞(1×10+8)移植组62.5%死于GVHD,37.5%长期存活;CD34+细胞+CD3+细胞(1.5×10+8)移植组100%死于GVHD.移植后生存时间>60 d的受鼠骨髓造血重建细胞y染色体检出率为100%. 结论移植物中CD3+细胞数量与GVHD和GVL效应密切相关,通过限定移植物中的CD3+淋巴细胞的含量能够保留GVL作用而有效控制GVHD发生.     

CD34+细胞自身移植治疗儿童难治型系统性红斑狼疮

目的探讨治疗儿童难治型系统性红斑狼疮(SLE)积极、有效的方法.方法对2例病程分别为5年和7年,狼疮肾Ⅲ级和Ⅳ级,主要表现为持续性血小板减少、蛋白尿和浆膜炎的患儿进行CD34+细胞分选的自身干细胞移植.首先经惠尔血动员、CS-3000血细胞分离机获取单个核细胞,通过CliniMACS CD34+细胞分选仪分别得到了1.7×106/kg及1.0×106/kg CD34+细胞,采集物中分别尚存2×105/kg和1×104/kg的CD3+细胞.用CTX 50 mg/kg·d×4 d+ATG(Fresennius S 5 mg/kg·d×3 d)预处理.结果两患者分别于+9 d和+7 d获粒细胞重建,自+15 d起血小板维持于正常水平.现已分别随访13月和6月,原发病症状完全消失,自身免疫相关抗体全部转阴,但细胞免疫功能仍未恢复,CD4细胞仍处于低水平.结论CD34+细胞分选的自身干细胞移植治疗儿童难治型红斑狼疮近期疗效满意.     

自体外周血干细胞移植治疗难治性恶性血液病8例

目的　评价自体外周血干细胞移植联合大剂量化疗治疗恶性血液病的近期疗效 .方法　 8例恶性血液病 (非霍奇金淋巴瘤 7例 ,多发性骨髓瘤 1例 )采用化疗联合G CSF动员外周血干细胞 ,CobeSpectra血细胞分离机采集循环血中的单个核细胞 ,8例平均单个核细胞数 3.0× 10 8·kg-1,平均CD34+ 细胞为 3.5× 10 6·kg-1,- 80℃冰箱冻存 .8例均在大剂量化疗后回输细胞 .结果　外周血干细胞回输后WBC恢复至 2× 10 9·L-1平均为 11d ,血小板恢复至 5 0× 10 10 ·L-1平均为 13d .8例移植后短期内均达缓解 .结论　化疗联合G CSF是一高效、低毒的动员方案 ;自体外周血干细胞移植联合大剂量化疗是治疗难治性恶性血液病的一种安全、近期疗效肯定的治疗方法 .     

慢性粒细胞白血病骨髓细胞体外培养净化作用实验研究

目的 :采用 FISH方法直接在干细胞水平对慢性粒细胞白血病 (CML )患者自体骨髓体外培养前后的间期细胞进行 bcr/abl融合基因检测 ,从而探讨 CML 骨髓细胞体外培养对自体骨髓移植物的净化作用。方法 :分离初治的慢性期 Ph+ CML 7例骨髓单个核细胞 (MNCs) ,体外培养 10 d,用免疫磁珠 (MACS)富集培养前后的 CD34+ 细胞 ,通过流式细胞仪检测培养前后 MNCs中 CD34+ 干细胞比例 ,然后用 FISH方法检测其中 bcr/abl融合基因 ,同时分别用正常人细胞及 K5 6 2细胞株作阴性及阳性对照。结果 :(1) 7例患者骨髓细胞培养前后 CD34+ 细胞中 bcr/abl融合基因平均检出率分别为 85 .3%± 4 .9%和 78%± 5 .1% ,有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,(2 )培养前培养体系中 CD34+ 细胞数量为 (6 .0 6 0± 1.5 6 4 )× 10 5个 ,培养后体系中的 CD34+细胞数量为 (5 .974± 1.4 2 4 )× 10 5个 ,两者无明显差异 (P>0 .0 5 )。 (3)在对照组中假阳性率为 2 .5 % ,假阴性率为 2 %。结论 :自体骨髓细胞体外培养对 CML 病人的骨髓肿瘤细胞有一定程度的净化作用 ;FISH技术直接在干细胞水平检测 bcr/abl融合基因 ,且能定量分析 ,较传统方法更适合对骨髓净化进行评价 ,为骨髓净化提供了一种更方便、可靠的评定方法     

无血缘关系供体外周血造血干细胞移植治疗白血病的临床研究

目的 :观察无血缘关系供体外周血造血干细胞移植 (PBSCT)治疗白血病的疗效及其并发症的防治。 方法 :用 HL A配型完全相合的无关供体移植治疗白血病 3例。预处理方案为 :例 1采用环磷酰胺 (CTX) +全身照射 (TBI) ;例 2采用 CTX+TBI+抗胸腺细胞球蛋白 (ATG) ;例 3采用 CTX+TBI+ATG+依托泊苷 (VP16 )。 3例患者输入单个核细胞数 (/ kg)分别为5 .90× 10 8、6 .43× 10 8和 6 .0 1× 10 8,CD34 +细胞 (/ kg)分别为 6 .34× 10 6、2 .6 2× 10 6和 2 .30× 10 6;急性移植物抗宿主病(GVHD)预防采用霉酚酸酯 (MMF)联合环孢素 A (Cs A)和短程甲氨蝶呤 (MTX)方案。 结果 :3例患者均顺利造血重建 ,无 1例发生 度或 度以上急性 GVHD;例 1患者移植后 180 d细胞遗传学复发 ,停用 Cs A后 2个月 Ph染色体消失 ,且出现局限性慢性 GVHD;例 2患者移植后 2 2 0 d出现局限性慢性 GVHD;例 3患者移植后 30 0 d有复发趋势 ,停用 Cs A 2周后完全缓解。结论 :无关供体 PBSCT可用于治疗白血病 ;MMF联合 Cs A和短程 MTX可用于预防无关供体移植急性 GVHD的发生。     

外周血干细胞移植前后淋巴细胞免疫表型变化

目的　应用双色流式细胞仪动态检测 10例恶性血液病病人外周血干细胞移植 (PBSCT)治疗前后 ,外周血淋巴细胞免疫表型及其临床意义。方法　 10例PBSCT病例中 ,7例PBSCT ,男性 3例 ,女性 4例 ;年龄 2 1～ 4 2岁 ,4例ANLL -M2 ,1例CML ,2例淋巴瘤 ,3例为异基因外周血干细胞移植 (allo -PBSCT) ,男性 2例 ,女性 1例 ;年龄 37～ 4 6岁 ,CML ,ANLL -M2 ,ANLL -M3 各 1例。结果　 10例病人移植前已出现淋巴细胞表型异常 ,其中以代表T抑制细胞 (Ts)的CD3 + CD8+ 水平增高 ,Th/Ts值下降 ,代表B细胞的CD3 -,CD19+ 水平明显降低。移植后 3个月 :CD3 + CD4+ :(16 .5± 7.5 ) % ,CD3 + D8+ :(5 5 .3± 2 3) % ,Th/Ts:0 .2 7±0 .18,CD3 -CD19-L :未测出 ,CD16+ /CD56+ :(14 .3± 9.5 ) %。移植前后的淋巴细胞 (T +B +NK)、T细胞(CD3 + CD19-)及NK细胞 (CD16+ /CD56+ )的百分率水平上没有明显变化 (P >0 .0 5 ) ,但在其构成比例上有异常 ,特别是CD3 + CD4+ 水平降低 ,CD3 + CD8+ 水平升高 ,Th/Ts比值及CD3 -CD19+ 水平均有明显降低 (P <0 .0 5 )。B细胞在 6个月左右开始恢复 ,Th(CD3 + CD4+ )、Ts(CD3 + CD8+ )及Th/Ts恢复很慢 ,个别病例 1年后仍未恢复正常水平。 10例PBSCT后有 4例病人出现不同程度的感染 ,均发生在     

富集CD34~ 细胞作干细胞移植的临床初步探索

目的　观察富集CD34 的造血干 /祖细胞做肿瘤患者同种异基因造血干细胞移植 (Allo HSCT)和自体移植的临床疗效。观察输注纯化CD34 细胞患者的预后情况。方法　采用磁分选临床型细胞富集仪将表面包被有CD34单抗的磁性微球体系与细胞共同培养 ,特异性结合CD34 细胞。在磁场作用下分别收集CD34 和CD34-组分。完成 2 0例患者CD34 细胞体外纯化富集。其中HLA半相合移植 5例 ,自体移植 15例。结果　纯化后CD34 细胞纯度达 97%以上 ,移植CD34 细胞中位数 5 .72 (0 .15～ 12 .0 )× 10 6,CD34 细胞中位数 3.73(2 .6～ 6 .8)× 10 4 ;CD34-细胞 (CD3、CD4、CD8、CD19)对数去除率 (Log,下同 )为 1.99～ 5 .0。 19例患者移植后随访 11个月 (中位数 ,1～ 2 0 ) ,总体生存13/ 19(例 )。本院 11例中 ,总体生存为 8/ 11(例 ) ,其中HLA半相合 1/ 3(例 ) ,自体移植 7/ 8(例 )。移植后造血重建迅速 ,随访 18个月以上无病生存者 3例中 1例为同种异基因HLA半相合亲属移植 ,2例为肿瘤自体移植。 1例父子间HLA半相合移植 ,白细胞恢复 >1× 10 9/L ,血小板 >2 0× 10 9/L(均为移植后第 13天 )。仅有短暂的I度移植物抗宿主疾病。 2例自体移植病例白细胞恢复 >1× 10 9/L(8～ 2 6d) ,血小板恢复 >2 0× 10 9/L(2 2～ 35d)。结论     

HIV感染和AIDS患者T淋巴细胞免疫病理改变的研究

目的　探讨我国HIV感染和AIDS患者T淋巴细胞的免疫病理改变情况及其临床意义。方法　收集 13例HIV感染患者 (HIV组 )、2 7例AIDS患者 (AIDS组 )和 5 1名健康献血员 (正常对照组 )的抗凝血 ,用人T淋巴细胞亚群的特异性荧光抗体标记 ,通过流式细胞仪检测外周血CD4 + T淋巴细胞 (T4细胞 )、CD8+ T淋巴细胞 (T8细胞 )及其亚群 ,并检测患者血浆HIV载量。结果　正常对照组、HIV组和AIDS组外周血T4细胞计数 (× 10 6个 /L)分别为 84 9± 2 88,4 37± 184 ,5 0± 5 1,组间比较P <0 0 1;T8细胞计数 (× 10 6个 /L)分别为 5 79± 175 ,10 31± 345 ,5 35± 338,HIV组明显高于正常对照组(P <0 0 5 ) ;T4纯真细胞 (CD4 + CD4 5RA+ CD6 2L+ )亚群比例分别为 4 3 0 %± 11 4 % ,4 4 2 %± 12 8% ,2 4 8%± 15 5 % ,AIDS组明显为低 (P <0 0 5 ) ;T4纯真细胞计数 (× 10 6个 /L)分别为 36 8± 16 2 ,185±134,18± 2 0 ,组间比较P <0 0 1;T4功能细胞 (CD4 + CD2 8+ )亚群比例分别为 93 1%± 8 1% ,6 2 6 %±2 8 2 % ,5 6 9%± 2 6 4 % ,组间比较P <0 0 1;T4和T8激活细胞 (CD4 + HLA DR+ ,CD8+ HLA DR+ ,CD8+CD38+ )亚群比例均表现为AIDS组 >HIV组 >正常对照组 (P <0 0 5 ) ;T4和T8凋亡细胞 (CD4 +CD95 + ,C     

自体外周血干细胞冷冻后回输出现过敏性休克1例

临床资料 患者赵某,男,50岁,2001年7月诊断为:多发性骨髓瘤(K轻链型)ⅢA期.MOD方案(Mito 6 mg d1-4;VCR 0.5 mgd1-4;Dex 40 mg d1-44 9-12 17-21)化疗1个疗程后达完全缓解[1].继以MOD方案巩固2疗程,骨髓象及外周血象持续缓解.2001年12月应用环磷酰胺行外周血干细胞动员(CTX 2g/m2/d×2 d),2002年1月应用美国MCS+Plans血细胞分离机采集.处理全血9 202 ml,收集PBSC 70 ml.采集单个核细胞数1.437×109/L,其中CD347.81%,CD3852.9%,CD34+/CD-38 0.96%,CD34+/CD38+51.9%.采集过程顺利,患者无不适.采集物的细胞应用20%二甲基亚砜(DMSO)和羟乙基淀粉(HES)混合液(中国科学院生理教研室提供)分装后,保存于-80℃冰箱.     

人类白细胞抗原不相合造血干细胞移植治疗白血病的临床研究

目的 :探讨应用人类白细胞抗原 (humanleukocyteantigen ,HLA)不相合供体造血干细胞移植治疗白血病。方法 :总结我所于 2 0 0 0年 7月至 2 0 0 1年 12月进行的 7例HLA不相合造血干细胞移植 ,其中包括 3例慢性髓性白血病、3例急性非淋巴细胞性白血病、1例急性淋巴细胞白血病。干细胞来源 :6例为外周血干细胞 ,1例为骨髓干细胞。预处理方案为改良马利兰 (busulfan ,BU) /环磷酰胺 (cyclophosphamide,CY)或BU/CY +抗胸腺细胞球蛋白 (antithymocyteglobulin ,ATG)。预防急性移植物抗宿主病 (graftversushostdisease,GVHD)采用环孢霉素A及短疗程氨甲喋呤 ,5例患者加用霉酚酸酯 (骁悉 )。结果 :1例为骨髓造血干细胞 ,采集骨髓单个核细胞数 3 .4 1× 10 8kg-1,6例为粒细胞集落刺激因子 (granlocytecolony stimulatingfactor,G CSF)动员后外周血干细胞 ,平均接受8.4 6× 10 8kg-1(4.3 0× 10 8～ 15 .3 5× 10 8kg-1)供者外周血单个核细胞 ,平均 + 13天 (+ 11～ + 16天 )中性粒细胞(absoluteneutrophilcount,ANC)大于 0 .5× 10 9L-1。平均 + 16天 (+ 11～ + 2 3天 )血小板大于 2 0 .0× 10 9L-1。发生急性Ⅰ～Ⅱ度GVHD 3例 (42 .9% ) ,无 1例严重的急性GVHD ,发生慢性广泛性GVHD 2例 (2 8.6% )。中位随访时间 1     

干细胞与肿瘤干细胞

目的了解干细胞、肿瘤干细胞和恶性肿瘤关系的研究进展。方法复习国内外相关文献,综述肿瘤干细胞与干细胞的关系、肿瘤干细胞与恶性肿瘤发生发展的关系、研究现状、前景及存在的问题。结果正常干细胞和肿瘤干细胞之间存在很强的相似性,其中淋巴造血系统恶性肿瘤和少数实体瘤干细胞分离鉴定的成功有力支持了肿瘤干细胞理论。结论肿瘤干细胞理论可解释很多恶性肿瘤的生物学行为,但目前仍迫切需要相关分离、纯化、鉴定实体瘤干细胞的思路和方法。     

ACAT-1在单核细胞向泡沫细胞分化过程中的表达变化

目的研究单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)表达及活性的变化。方法复苏、培养人单核细胞株THP-1细胞,与乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、PMA+氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育1～4 d,RT-PCR方法检测单核细胞分化过程中ACAT-1 mRNA表达,Westernblotting检测ACAT-1蛋白表达的变化。结果(1)单核细胞复苏后加入PMA诱导48 h后,分化为巨噬细胞。经PMA+ox-LDL诱导24 h后分化为泡沫细胞。(2)与无血清培养单核细胞对照组比较,在PMA诱导单核细胞株THP-1向巨噬细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平明显增高(P<0.05),呈时间依赖效应。(3)巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平增高,呈时间依赖效应。但和无血清培养巨噬细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单核细胞株THP-1经PMA,PMA/ox-LDL诱导后,可分化为巨噬细胞、泡沫细胞。ACAT-1的表达及活性增高在单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中起着重要作用。     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处。文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系。     

多发肾透明细胞癌11例磁共振影像分析

目的 描述多发肾透明细胞癌的MR影像表现.方法 回顾性分析2008年1月至2010年12月解放军总医院共11例经病理证实的多发肾透明细胞癌的MR影像资料及临床资料,重点分析病灶的分布、大小、外形、信号,增强特点.结果 11例多发肾细胞癌患者,其中6例女性,5例男性,年龄36 ～ 69岁,平均50.6岁,共发现24个病灶.9例患者为双肾多发病变,单侧肾多发病变为2例.T2加权图像高信号的有16个病灶(16/24),所有病变均可见假包膜,出血的有4例(4/24),含有脂质的为12例(12/24),囊变的有18例(18/24),动态增强扫描各期持续强化的有22例(22/24),快进快出的有2例(2/24).所有病变呈现中度至明显强化.5例患者的多发病变MR表现一致,6例患者的多发病变MR表现并不一致.结论 多发肾细胞癌通常为两肾多发.同一患者的多发病变即使病理类型一致,MR表现可能不同.     

透明细胞乳头状肾细胞癌的研究进展

2016年WHO正式将透明细胞乳头状肾细胞癌作为一种肾细胞癌新类型。该肿瘤可以为散发性也可以发生于终末期肾病或Von Hippel?Lindau综合征（VHL综合征）,具有相对特征性的病理组织学形态、免疫表型和分子遗传学特点,诊断时应与透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌以及Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌相鉴别。鉴于透明细胞乳头状肾细胞癌生物学行为相对惰性或低度恶性,因此准确诊断对指导临床治疗和判断预后具有十分重要的意义。     

miR-622抑制肺癌细胞的生长

目的探讨miR-622对H460肺癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法利用脂质体瞬时转染方法将miR-622模拟物及其对照核苷酸转染至肺癌细胞内。miRNA定量试剂盒检测miR-622的表达。CCK-8试剂盒检测细胞增殖。生物信息学分析miR-622的靶点。蛋白印迹方法检测K-Ras蛋白的表达。构建含K-Ras mRNA的3'非翻译区的报告基因载体,检测萤火虫/Renilla荧光素酶活性。结果转染miR-622模拟物可提高miR-622的表达,并使H460和16HBE-T的细胞增殖率分别降至(58.60±4.27)%和(65.17±4.67)%,P均<0.01。生物信息学分析K-Ras为miR-622的一潜在靶点。转染miR-622模拟物可明显抑制K-Ras蛋白的表达。共转染miR-622模拟物和K-Ras-3'UTR报告基因,可使萤火虫/Renilla荧光素酶的活性降低至(60.22±2.50)%。结论 miR-622可通过负性调控靶点K-Ras抑制肺癌细胞的增殖。     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处.文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系.     

Lingual squamous cell carcinoma surrounded by granular cell tumor

The granular cell tumor (GCT) is an uncommon, benign lesion with a preference for subcutaneous sites. In the head and neck, the tongue is the most common site, followed by the larynx. We experienced a case of a 27-year-old woman with lingual squamous cell carcinoma (SCC) surrounded by GCT. The pathological findings established that the lesion was SCC covered by GCT in the midline of the tongue. The size of the mass was very small, however, so we excised it in a diamond shape. There is an interesting association between GCTs and other malignant neoplasms. However, no causal relationship between GCT and these other carcinomas has been established. Here we report on an SCC coexisting with GCT at the same site as a median tongue lesion and review the literature.     

Huge clear cell squamous cell carcinoma of the head

To the editor:An 85-year-old woman,presented with a macula in the front region of parietal bone one year ago,which was slightly protruding from the epidermis without pain and pruritus.After scratching,ulceration and the scope was increasing gradually.A month ago,the tumor was about walnut size,and now about egg size,accompanied with bleeding when knocked,without special feeling.Apart from this,the patient has been suffering from hypertension,diabetes for many years.The size of the tumor was 6 cm × 7 cm × 8 cm,dark red,hard shell,endoplasmic soft.The surface was contaminated,oozy,scabing,poor activity,the boundary was not clear,and pressing with no feeling.The pathological examination showed squamous cell carcinoma (SCC),as shown in Figure 1.Immunohistostaining revealed positive staining for PAS and ABPAS in the tumor tissue.We also performed immunohistostaining analysis,such as keratins AE1/AE3,EMA,cytokeratin 7,cytokeratin 18,cytokeratin 20,vimentin,S-100,HMB45,CD68,CKH and CD34.Of which,keratins AE 1/AE3,cytokeratin 18,CKH,CD34 and EMA were positive,others were negative.The tumor was diagnosed as huge clear cell SCC.After expansion excision,skin grafting,abdominal skin surgery,postoperative recovery was uneventful,and flakiness has survived well.