TF/Ⅶa活化PAR2后经钙信号促进SW620细胞的增殖和迁移

目的探讨钙信号参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶活化受体2(PAR2),从而促进结肠癌SW620细胞增殖、迁移的可能机制。方法Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2激动剂(PAR2-AP,100μmol/L)作用负载fluo-4/AM的SW620细胞,激光共聚焦显微镜测定细胞内钙离子荧光强度的变化;钙抑制剂EGTA(1 mmol/L)和毒胡萝卜内酯(thapsigargin,TG,1μmol/L)预处理细胞后,Ⅶa(10 nmol/L)、PAR2-AP(100μmol/L)再分别处理细胞,western blot检测p-ERK1/2、t-ERK1/2蛋白的表达;MTT法及流式细胞术检测SW620细胞的增殖情况、transwell法检测细胞迁移的变化。结果Ⅶa(10 nmol/L)和PAR2-AP(100μmol/L)处理SW620细胞后,胞内钙离子荧光强度瞬时升高后降低,分别在60、30 s达到峰值;EGTA和TG预处理细胞,能明显降低Ⅶa、PAR2-AP对p-ERK1/2蛋白的活化作用(P<0.05),抑制其对细胞增殖和迁移的促进作用。结论 TF/Ⅶa激活PAR2后,经钙信号通路活化下游ERK1/2信号,促进SW620细胞的增殖和迁移。     

PKCα参与凝血因子Ⅶa/TF激活PAR2促进SW620细胞迁移

目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶激活受体2(PAR2),从而促进SW620细胞迁移以及可能的作用机制。方法用蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa、PKC激动剂佛波醇酯(PMA)等刺激物处理SW620细胞,并用抑制抗体(抗TF、抗PAR2)、同型对照抗体(mopc-21)进行抑制试验。用western blot检测其PKCα与p-PKCα的表达,免疫荧光试验观察PKCα的分布情况;分别用PMA(100 nmol/L)、Ⅶa(10 nmol/L)及PKCα抑制剂(safingol,10μmol/L)处理SW620细胞,Transwell试验观察细胞迁移情况,定量PCR法检测其MMP-9 mRNA表达水平。结果PMA(100 nmol/L),因子Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2-AP(100μmol/L)能明显促进PKCα的磷酸化(F=289.9,P<0.05),而对PKCα的表达没有显著性影响(F=2.02,P>0.05);免疫荧光实验结果表明,PKCα自胞浆向核膜与核内发生转位;加入抗TF及抗PAR2抗体能够显著抑制因子Ⅶa对PKCα的激活,而同型对照抗体(mopc-21)没有此作用;Transwell试验与定量PCR结果表明,PKCα抑制剂明显阻断因子Ⅶa对细胞迁移及MMP-9表达的促进作用。结论因子Ⅶa依赖TF活化PAR2,经信号分子PKCα介导,上调SW620细胞MMP-9表达,促进细胞的迁移。     

慢病毒介导的RNA干扰抑制PAR2表达影响结肠癌细胞SW620增殖与迁移

目的构建人蛋白酶激活受体2(protease-activated receptor 2,PAR2)RNA干扰(RNAi)的重组慢病毒表达载体,探讨PAR2在结肠癌细胞SW620增殖与迁移中的作用。方法根据PAR2基因信息,设计4条PAR2 RNAi片段及1条阴性对照片段,western blotting筛选有效干扰片段,于293T细胞进行病毒包装,采用real-time PCR及western blotting检测干扰效率。PAR2激动剂(PAR2-AP)刺激感染后的SW620细胞,通过流式细胞仪、Transwell试验分别检测细胞周期及细胞迁移能力。结果构建的PAR2-RNAi慢病毒颗粒感染SW620细胞后,PAR2 mRNA及蛋白表达均被明显抑制。与对照相比,PAR2-AP不能促进感染后的SW620细胞增殖,细胞各周期比率未见明显差异,迁移试验结果显示穿膜细胞数也未见明显增多。结论成功构建的PAR2-RNAi慢病毒颗粒能显著抑制结肠癌细胞SW620的PAR2表达,进而阻断PAR2-AP对细胞增殖与迁移的促进效应,证明PAR2在SW620细胞增殖与迁移过程中发挥重要作用。     

NF-κB decoy对人脐静脉内皮细胞组织因子表达及凝血因子Ⅶ激活抑制作用研究

目的用decoy策略调控核因子κB( NF-κB)调节组织因子(TF)表达及相应的因子Ⅶ(FⅦ)活化,探讨冠心病新的防治方法.方法用流式细胞术检测NF-κB decoy对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的转染效率 ,用凝胶迁移率改变竞争实验证实NF-κB decoy的作用机制,用RT-PCR检测组织因子(TF)mRNA,流式细胞术检测HUVEC表面TF抗原,重组组织因子一期凝血法检测与HUVEC共孵育的血浆中活化因子Ⅶ(FⅦa)活性.结果 decoy能成功地转染入HUVEC内,能与TF启动子的κB位点顺式作用元件竞争性结合转录因子NF-κB,明显抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激的HUVEC TF mRNA TF抗原表达及相应的FⅦa活性.结论 NF-κB decoy能通过抑制TF表达而抑制FⅦ的激活,为冠心病的防治提供新的思路.     

NF—κB decoy对人脐静脉内皮细胞组织因子表达及凝血因子Ⅶ激活抑制作用的研究

目的 用decoy策略调控核因子κB（NF-κB）调节组织因子（TF）表达及相应的因子Ⅶ（FⅦ）活化，探讨冠心病新的防治方法。方法 用流式细胞术检测NF－κB decoy对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的转染效率，用凝胶迁移率改变竞争实验证实NF－κB decoy的作用机制，用RT－PCR检测组织因子（TF）mRNA，流式细胞术检测HUVEC表面TF抗原，重组组织因子一期凝历法检测与HUVEC共孵育的血浆中活化因子Ⅶ（FⅦa)活性。结果 decoy能成功地转梁入HUVEC内，能与TF启动子的κB位点顺式作用元件竞争性结合转录因子，NF－κB，明显抑制肿瘤坏死因子α（TNFα）刺激的HUVEC TF mRNATF抗原表达及相应的FⅦa活性。结论 NF－κB decoy能通过抑制TF表达而抑制FⅦ的激活，为冠心病的防治提供新的思路。     

mTOR活化对抗β2 GPI抗体/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子表达的影响

目的探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在抗β_2糖蛋白I(β_2GPI)/β_2GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子(TF)表达中的作用。方法用抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS处理THP-1细胞,mTOR抑制剂雷帕霉素(100 nmol/L)进行干预实验;收集细胞总RNA和蛋白质,实时定量PCR(RT-q PCR)和TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞中TF mRNA表达水平及其活性,western blot检测THP-1细胞中mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况。结果抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS复合物均能明显增加THP-1细胞TF mRNA和TF活性以及mTOR磷酸化水平(P均0.05);雷帕霉素能明显降低抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS诱导THP-1细胞TF的表达水平以及mTOR磷酸化的效应(P均0.05),也能明显地削弱p38、ERK1/2和NF-κB p65的磷酸化水平(P均0.05),而对JNK的磷酸化水平无抑制效应(P0.05)。结论抗β_2GPI抗体/β_2GPI复合物能够刺激THP-1细胞mTOR的活化,并能影响TF的表达。     

三氧化二砷诱导白血病细胞凋亡与核因子-κB活化的关系

为了研究三氧化二砷（As2O3）诱导白血病细胞凋亡与核因子-κB（NF-κB）活化以及血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP9）表达的关系,应用流式细胞仪Annexin V FITC法检测白血病细胞系K562-n凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析K562-n细胞NF-κB、VEGF、MMP9表达的动态变化.结果显示：As2O3在诱导K562-n细胞凋亡的过程中可活化NF-κB,而VEGF、MMP9的表达也随之增强.地塞米松（DXM）1μmol/L能显著增加As2O3诱导K562-n细胞凋亡的作用和抑制K562-n细胞NF-κB活化,细胞凋亡增加率为43.04%,（P＜0.05）,NF-κB活化抑制率为31.15%（P＜0.05）,VEGF、MMP9变化与NF-κB一致.结论：As2O3诱导K562-n细胞凋亡的过程中可使NF-κB活化,VEGF、MMP9表达亦随之增强;DXM可通过抑制NF-κB活化增强其诱导K562-n细胞凋亡的作用,VEGF、MMP9的表达也随之下降.     

反复自然流产患者外周血中性粒细胞蛋白酶激活受体2和组织因子的表达

摘要:目的：检测蛋白酶激活受体2（proteaseactivated receptor 2, PAR2）和组织因子（tissue factor,TF）在反复自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）患者外周血中性粒细胞的表达。 方法：用real-time PCR、western blot及TF活性分析方法,在mRNA、蛋白质及活性水平检测35例RSA患者和35例健康非孕或健康孕妇外周血中性粒细胞PAR2和TF的表达。 结果：与健康非孕或健康孕妇比较,RSA患者外周血中性粒细胞PAR2和TF在mRNA、蛋白质及活性水平均显著升高,且PAR2和TF mRNA水平呈明显正相关（r=0.864,P＜0.05）,PAR2蛋白质水平与TF活性水平间有正相关关系（r=0.942,P＜0.05）。 结论：RSA患者外周血中性粒细胞高表达PAR2和TF,为进一步研究PAR2和TF在RSA中的作用提供了依据。     

粉防己碱对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及ERK/NF-kB通路的影响

目的：观察粉防己碱（tetrandrine,Tet）对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及ERIC／NF—κB号通路的影响。方法：培养增生性瘢痕成纤维细胞。四甲基偶氮唑蓝（MTY）比色法、[^3H]-TdR掺入率测定不同浓度Tet对细胞增殖的抑制作用；免疫沉淀法纯化蛋白并ERK1/2试剂盒测定ERK活性；Western-blot测定p-ERK1／2、NF-κBp65）及NF—κB制物（I-κBα）的表达。结果：Tet作用下，细胞胞体收缩、变圆，间隙增宽，药物浓度高时，细胞碎裂、浮起。MTT实验、[^3H]-TdR掺入率均显示Tet明显抑制细胞增殖，Western-blot显示Tet明显抑制p-ERK1／2及NF-κB（p65）表达及增强I-κB表达。结论：Tet可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖，其途径与下调ERK／NF-κB号通路有关。[著者文摘]     

粉防己碱对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及ERK/NF-κB通路的影响

目的：观察粉防己碱（tetrandrine,Tet）对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及ERIC／NF—κB号通路的影响。方法：培养增生性瘢痕成纤维细胞。四甲基偶氮唑蓝（MTY）比色法、[^3H]-TdR掺入率测定不同浓度Tet对细胞增殖的抑制作用；免疫沉淀法纯化蛋白并ERK1/2试剂盒测定ERK活性；Western-blot测定p-ERK1／2、NF-κBp65）及NF—κB制物（I-κBα）的表达。结果：Tet作用下，细胞胞体收缩、变圆，间隙增宽，药物浓度高时，细胞碎裂、浮起。MTT实验、[^3H]-TdR掺入率均显示Tet明显抑制细胞增殖，Western-blot显示Tet明显抑制p-ERK1／2及NF-κB（p65）表达及增强I-κB表达。结论：Tet可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖，其途径与下调ERK／NF-κB号通路有关。     

组织因子/活化因子Ⅶ复合物影响人卵巢癌细胞侵袭及转移能力的研究

目的　研究组织因子 /活化因子Ⅶ (TF/FⅦa)复合物对人卵巢癌细胞体外侵袭能力及体内转移能力的影响。方法　①采用分子克隆及基因转染技术构建高效表达TF的人卵巢癌细胞系A2 780 /TF ;②采用Boyden小室法计数FⅦa刺激后A2 780、A2 780 /TF穿透Matrigel迁移到PVPF膜背面的细胞数 ;③建立人卵巢癌细胞转移的实验动物模型 ,研究TF对人卵巢癌细胞在裸鼠体内形成转移灶的能力。结果　①经分子克隆技术构建得到pcDNA3 TFcDNA重组体 ;②稳定转染的A2 780 /TF细胞内TFmRNA水平显著增高 :转染细胞为 3.99± 0 .15 ,未转染细胞为 0 .97± 0 .2 3(P <0 .0 1) ;转染细胞表面TF表达也显著增高 :转染细胞中约 (48.5 6± 9.5 3) %细胞表面有TF抗原 ,而未转染细胞中仅 (2 .73± 1.15 ) % (P <0 .0 1) ;③A2 780 /TF细胞穿膜细胞数为 15 7.3± 19.2 ,经FⅦa刺激后穿膜细胞数显著增多 ,为 4 4 7.7± 39.4 (P <0 .0 1) ;与FⅦa和抗TF单抗共孵育的A2 780 /TF ,穿膜细胞数接近刺激前的基础水平 ;④种植A2 780细胞的裸鼠中 2 2 .2 %可见肺部转移灶 ,种植A2 780 /TF细胞的裸鼠中 88.9%发生肺转移 (P <0 .0 1)。结论　①将所构建的TF真核表达载体转入人卵巢癌细胞系 ,获得稳定、高效表达TF的人卵巢癌细胞系A2 780 /TF ,为研究TF     

核转录因子-κB、细胞外信号调节激酶1/2、转移相关蛋白-3在乳腺肿瘤组织中的表达研究

目的分析核转录因子-κB(NF-κB)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、转移相关蛋白-3(MTA-3)在乳腺肿瘤中的表达。方法选取我院2017年8月至2019年3月收治的60例乳腺肿瘤患者作为观察组,另取30例同期乳腺增生患者作为对照组。比较两组患者组织样本NF-κB、ERK1/2和MTA-3水平。结果观察组NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于对照组; MTA-3阳性检出率低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);临床分期越高者、肿瘤直径越大者,NF-κB、ERK1/2阳性检出率越高,MTA-3阳性检出率低越低,差异有统计学意义(P0.05)。Luminal A型、Luminal B型及HER2阳性分子分型患者NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于三阴型,MTA-3阳性检出率低于三阴型,差异有统计学意义(P0.05)。淋巴结转移患者NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于对照组,MTA-3阳性检出率低于无转移患者,差异有统计学意义(P0.05)。结论在乳腺肿瘤组织中存在NF-κB和ERK1/2的高阳性表达和MTA-3和低表达,并且与乳腺增生患者病理组织表达有明显差异,结合三者指标分析对鉴别诊断乳腺肿瘤、改善乳腺肿瘤干预时机有重要意义。     

热打击诱导氧化应激介导神经元凋亡过程中核因子κB的活化

背景：大量研究显示高热可诱导机体细胞发生广泛凋亡,但对于高热如何介导神经元细胞凋亡并没有深入研究报道。目的：检测热打击细胞模型中核因子κB信号通路对活性氧诱导细胞凋亡的影响。方法：使用细胞培养箱建立细胞热打击模型,热打击组分别将细胞置于39,41,43℃培养箱中进行热打击2 h,对照组（37℃组）将细胞置于标准37℃、体积分数5%CO 2细胞培养箱。使用Annexin V-FITC/PI双染色方法检测不同温度热打击下神经元细胞凋亡率,Westen blot 检测caspase-3及抗-核因子КB65蛋白表达,DCFH法检测细胞内活性氧含量,同时检测活性氧抑制剂MnTMPyP及核因子κB抑制剂PDTC对热打击细胞凋亡的影响。结果与结论：39℃热打击对细胞凋亡无影响,41℃热打击诱导细胞少量凋亡（10.19%）,43℃热打击诱导诱导细胞大量凋亡（43.02%）。caspase-3和抗-核因子κB65蛋白的表达于热打击温度依赖的方式增加。MnTMPyP及PDTC均可有效阻断热打击引起的caspase-3、抗-核因子κB65蛋白的表达和细胞凋亡。结果证实热打击后细胞内活性氧增加诱导神经元细胞凋亡,提示核因子κB可能作为中间信号通路参与了热打击引起的细胞凋亡。     

血浆凝血因子Ⅶ测定在缺血性心脑血管病中的临床意义

前瞻性研究表明,凝血因子Ⅶ活性（FⅦ：C）增高为缺血性心脑血管病的危险因子,甚或与心肌梗死及猝死相关[1,2]。FⅦ：C受许多因素的影响,而且其增高可能是FⅦa增高或凝血因子Ⅶ抗原（FⅦ：Ag）增高或两者同时增高所致。动脉粥样硬化因血管内皮广泛损伤而致组织因子（TF）过度表达,但TF与FⅦ两者各自单独存在时并无促凝活性,只有当两者结合为TF-FⅦ复合物时才有促凝作用,而TF-FⅦa的促凝活性比TF-FⅦ大25～100倍。因此有人认为,通过测定血浆FⅦa水平预估高凝状态,并作为缺血性心脑血管病的危险因子更为恰当。我们测定了缺血…     

TAB3过表达促进结肠癌的上皮间质转化和侵袭迁移的研究

目的观察过表达TAB3对结肠癌细胞SW620的上皮间质转化(EMT)和侵袭迁移能力的影响,探究TAB3对NF-κB的影响以及NF-κB在TAB3调控结肠癌EMT和侵袭迁移中的作用,为阐明TAB3在结肠癌发生发展过程中的作用及其分子机制提供理论依据。方法通过qRT-PCR和Western blot检测结肠癌与癌旁组织中TAB3的表达情况。利用结肠癌细胞株SW620构建稳定过表达TAB3的细胞,应用Western blot检测EMT相关分子标记物Vimentin、E-cadherin的表达变化;利用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变。结果与癌旁组织相比,TAB3在结肠癌组织中呈高表达;过表达TAB3后,结肠癌细胞SW620中Vimentin表达升高,E-cadherin表达下降;划痕实验和Transwell侵袭实验显示过表达TAB3能够上调SW620细胞的侵袭和迁移能力;此外,过表达TAB3使p65表达增加,核内分布增多;NF-κB抑制剂能够减弱过表达TAB3对结肠癌EMT和侵袭迁移的促进作用。结论 TAB3在结肠癌中高表达,其通过NF-κB信号通路调控结肠癌的EMT和侵袭迁移。     

组织因子途径在急性心肌梗死患者发作期间的比值变化及其意义

本研究旨在观察急性心肌梗死（AMI）患者发作期间组织因子途径（TFP）的变化及其意义。采用手工法检测血浆复钙时间,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中的组织因子（TF）、组织因子途径抑制物（TFPI）、凝血因子Ⅶ抗原（FVU：Ag）、激活的FⅦ（FⅦa）及D-二聚体（D—dimer）,采用发色底物法检测TF活性（TFact）;采用一期凝固法测定凝血因子Ⅶ促凝活性（FⅦ：C）。观察对象包括59名AMI患者和84名健康中老年人。结果表明,①AMI患者血浆复钙时间比正常对照者明显缩短（p〈0．01）;②与对照组相比,AMI患者血浆中TF活性无显著增高（p〉0．05）;TF与TFPI的抗原均显著增加（p〈0．01）,但TF增高程度较TFPI更为显著,故TF／TFPI比值升高;总TFPI（t-TFPI）和全长TFPI（fl-TFPI）含量明显增加（p〈0．01）,截短TFPI（tr-TFPI）含量明显降低（p〈0．01）,TF／t—TFPI比值高于正常组,TF／fl—TFPI比值低于正常组（p〈0．05）,但在AMI组TF／tr-TFPJ与fl—TFPL／t—TFPI比值明显高于对照组（p〈0．01）,而tr—TFPUt—TFPI与tr—TFPL／fl-TFPI比值降低（p〈0．01）;③与对照组比较,血浆FⅦ：C、FⅦa在AMI组是增高的（p〈0．05）,FⅦ：Ag无显著性变化,FⅦa／FⅦ：Ag比值明显升高（p〈0．01）,但FⅦa／FⅦ：C及FⅦ：C／FⅦ：Ag比值并无显著性差异（p〉0．05）;④与正常对照组相比,AMI组D—dimer明显增高（P〈0．01）。结论：AMI发作期间体内TFP被启动,提示AMI患者血液呈现高凝状态,为评估AMI及其危险事件的发生,以多因子同时测定为好,而且用相对比值表示高凝状态与危险因子比单测更为可靠。     

整合素连接激酶通过核因子κB途径介导基质金属蛋白酶9上调促进肺癌细胞迁移和侵袭

目的 探讨整合素连接激酶（ILK）促进肺癌细胞侵袭的相关分子机制.方法 通过细胞转染、siRNA干扰、细胞划痕实验、实时定量PCR、Western Blot方法探讨ILK和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在肺癌A549细胞中的表达及相互关系.结果 在肺癌A549细胞系中,过度表达的ILK诱导MMP-9的表达（P＜0.01）;加入MMP-9抑制剂多西环素显著影响了转染组细胞划痕愈合能力（P＜0.01）,加入抗-MMP-9中和抗体则严重阻碍了细胞迁移能力（P＜0.01）,体外基底膜侵袭实验亦得到了相同的结果（P＜0.01）.ILK的过度表达促进磷酸化和核因子-κB（NF-κB）亚单位p65的核易位（P＜0.01）,并且NF-κB抑制剂BAY11-7028和NF-κBp65siRNA能抑制ILK高表达细胞系中MMP-9的上调（P＜0.01）.结论 本研究结果表明,ILK的过度表达可促进肺癌细胞迁移和侵袭,并且是通过NF-κB途径介导MMP-9上调来实现这一过程.     

血必净注射液对脂多糖诱导大鼠肾脏微血管内皮细胞组织因子表达的影响及机制探讨

目的 观察血必净注射液对脂多糖(LPS)诱导大鼠肾脏微血管内皮细胞(RMECs)组织因子(TF)表达的影响,并探讨其可能机制.方法 采用胰酶消化法原代培养大鼠RMECs,用Ⅷ因子相关抗原免疫荧光法鉴定.取生长良好的3、4代细胞,分为对照组、LPS刺激组和血必净治疗组;采用透射电镜观察各组细胞形态,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内TF mRNA和内皮素(ET)mRNA表达,用免疫荧光法检测核转录因子-κB(NF-κB)活化程度.结果 与对照组比较,10 mg/L LPS刺激组电镜下可见细胞粗面内质网和高尔基体空泡变性明显)LPS(1～100 mg/L)刺激组TF mRNA和ET mRNA表达均随浓度增加显著上调(P<0.05或P<0.01),NF-κB核移位明显;血必净(12.5、25.0、50.0 g/L)治疗组较LPS刺激组细胞形态明显改善,TF mRNA和ET mRNA表达均明显减少,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),未观察到NF-κB核移位.结论 LPS可呈剂量依赖性诱导TF mRNA和ET mRNA表达;血必净注射液可通过降低TF mRNA表达来抑制LPS诱导的微血管内皮细胞凝血系统的启动,其保护作用的机制可能与降低ET mRNA表达并抑制NF-κB活化有关.     

组织因子的非凝血功能

组织因子 (tissuefactor,TF)的凝血功能众所周知 ,它与活化凝血因子Ⅶ (activatedfactorⅦ ,FⅦa)结合后 ,形成TF FⅦa复合物 ,启动外源性凝血途径 ;亦可激活凝血因子Ⅺ ,启动内源性凝血系统是机体内活性最强的促凝物质之一 ,在生理性止、凝血过程及多种血栓栓塞性疾病中发挥重要作用。然而 ,TF作为凝血系统中惟一在细胞表面表达的跨膜糖蛋白 ,是否具有受体特性并具备非凝血功能 ,逐渐成为众多学者关注的焦点。近期研究提示 ,TF具有信号传导受体的功能 ,可通过介导多种信号传导 ,影响肿瘤侵袭与转移、胚胎发育、血管新生、炎症、动脉粥…     

凝血酶促进结肠癌SW480细胞生长的研究

目的探讨凝血酶对结肠癌SW480细胞增殖及细胞周期的影响。方法将20 nmol/L、100 nmol/L、500nmol/L的凝血酶作用于SW480细胞48 h,以未处理组（0 nmol/L）作为对照。CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR检测蛋白酶活化受体-4（protease-activated receptor-4,PAR-4）的mRNA表达;Western blotting检测NF-κB p50蛋白表达。结果在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可剂量依赖性的促进SW480细胞的增殖;细胞周期显示G0/G1期细胞百分数减少,S期及G2/M期细胞百分数增加,表明凝血酶可诱导细胞从G0/G1期向G2/M期发展,从而促进细胞增殖;随着凝血酶浓度的增加,PAR-4 mRNA及NF-κB p50蛋白含量也有不同程度的增加。结论在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可促进结肠癌SW480细胞的增殖,加速细胞周期进程;其作用可经PAR-4介导,并与NF-κB信号通路活化有关。