急淋白血病中基因重排,缺失与突变及其用PCR检测时的引物设计

白血病复发根源是微小残留病，近年来ＰＣＲ技术已用地白血病微小残留病的检测这是目前最为敏感的检测方法，本文综述了急性淋巴细胞白血清中可作为肿瘤特异性基因标志的染色体异常和基因突变，以及微小残留病ＰＣＲ检测时扩增引物的设计方法。     

急淋白血病抗原受体基因重排的克隆演化问题

急性淋巴细胞白血病中抗原受体基因重排的克隆演化可导致２种以上重排亚克隆同时存在，或病程中白血病克隆重排的改变，本文综述有关抗原受体基因重排克隆演化发生机理，表现形式及临床意义等方面的研究现状。     

急淋白血病抗原受体基因重排的克隆演化问题

急性淋巴细胞白血病中抗原受体基因重排的克隆演化可导致2种以上重排亚克隆同时存在,或病程中白血病克隆重排的改变。本文综述有关抗原受体基因重排克隆演化发生机理、表现形式及临床意义等方面的研究现状。     

PCR测定B-细胞系急、慢性淋巴细胞白血病患者的免疫球蛋白基因重排

作者用多聚酶链反应(PCR)技术测定了19例急性淋巴细胞白血病(ALL)和15例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者在确诊时的外周血和骨髓的DNA 标本,还检测了5例正常人外周血的DNA 标本。白血病患者标本中均含有10%以上的白血病细胞。用V670/OL-4,VH26/OL-4两对引物来扩增免疫球蛋白重链基因的CDR■(Complementarity determining re-gion 3)区。依FAB 分型19例ALL 中L_1型3例,L_2型15例,L_3型1例。其免疫学表型为普通型-ALL(C-ALL)15例,T-ALL2例,B-ALL 和无标记ALL(N-ALL)各1例,15例CLL 均为B-免疫表型。C-ALL、B-ALL、N-ALL 共     

聚合酶链反应(PCR)检测急性淋巴系统白血病基因标志的引物设计

应用大剂量的化疗,可使大多数儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)和很大比例的成人ALL 得到临床缓解,但缓解的病人中许多最终复发。大量资料表明,疾病的复发主要是来源于首次治疗后未杀死的残留白血病细胞,或称为微小残留病(MRD)。随着有效化疗方案的改进和放疗技术的提高,敏感、特异地进行MRD 的检测成为当今白血病研究领域的关键。最近发展的PCR 技术为更敏感的检测MRD 提供了可能,可以检测出占细胞总数1/100000的残留细胞。残留病的检测关键是寻找肿瘤性标志。淋巴系统肿瘤最可靠的基因标志是细胞表面的免疫球蛋白(Ig)和T 细胞受体(TCR)基因发生重排,它们都是起源于生命早期的免疫球蛋白功能基因,在进化过程中转换到不同的染色体,在结构上是线性排列的DNA 上有一些结构恒定的C 区,高度可变的V区和结合区J 区编码,有些还有多变的D 区。V 区数     

应用PCR检测儿童恶性淋巴瘤时的引物设计

近年来PCR技术已开始用于恶性淋巴瘤的基因分型诊断及微小残留病的检测中,这是目前为止最为敏感的检测方法。本文综述了儿童恶性淋巴瘤中可作为肿瘤特异性基因标志的染色体异常变化,以及应用PCR进行检测时扩增引物的设计方案。     

应用PCR检测儿童恶性淋巴瘤时的引物设计

近年来ＰＣＲ技术已开始用于恶性淋巴瘤的基因分型诊断及微小残留病的检测中，这是目前为止最为敏感的检测方法。本文综述了儿童恶性淋巴瘤中可作为肿瘤特异性基因标志的染色体异常变化，以及应用ＰＣＲ进行检测时扩增引物的设计方案。     

以IgH/TCR重排为靶分子的PCR急淋白血病微小残留病检测的现状和进展

以IgH/TCR重排为靶分子的PCR微小残留病(MRD)检测,对儿童急性淋巴细胞白血病的预后判断、预防复发具有重要意义。本文主要对这种方法的进展及其应注意的问题进行综述。     

以IgH／TCP重排为靶分子的PCR急淋白血病微小残留病检测的现状和进展

以IgH/TCR重排为靶分子的PCR微小残留病（MRD）检测，对儿童急性淋巴细胞白血病的预后判断、预防复发具有重要意义。本文主要对这种方法的进展有其应注意的问题进行综述。     

混合系白血病基因重排的检测方法及其临床意义

为了研究混合系白血病（MLL）基因重排在急性白血病（AL）中的发生率、融合基因类型及其临床意义，用荧光原位杂交技术检测60例急性白血病（AL）患者MLL基因重排，对于MLL基因重排阳性的患者，用巢式RT—PCR方法检测MLL基因重排形成的6种常见融合基因类型。结果表明：7例AL患者有MLL基因重排，发生率为11．67％，其中2例为急性髓细胞白血病M5（AML—M5），融合基因均为MLL／AF9；男5例为B细胞系急性淋巴细胞白血病（B—ALL），其中2例融合基因为MLL／ENL，1例MLL／AF4，2例未扩增出融合基因产物。结论：荧光原位杂交技术是检测ALMLL基因易位重排的快速、特异、灵敏的方法，巢式RT-PCR是检测MLL基因重排产生的融合基因类型的简便可行的方法；MLL基因重排的检测对急性白血病预后判断和治疗方案的选择具有重要意义。     

应用PCR方法检测淋巴细胞白血病IgH和TCRγ基因重排

本文应用PCR方法扩增IgH基因重排产生的CDR-Ⅲ区序列和TCRγ基因重排产生的V_9区序列,共检测了20例淋巴细胞白血病病人,其中15例B淋巴细胞白血病均发生IgH基因重排,并有2例出现两种基因扩增产物,它的大小为70-140bp;另5例T淋巴细胞白血病中有2例发生TCRγ基因重排,扩增产物的大小为170-230bp,而在正常人和非淋巴细胞白血病中均未发现有IgH和TCRγ基因重排。     

已知位点突变检测中测序引物的规范化设计

目的作为突变检测的经典方法,第1代测序法(Sanger测序法)可以清晰地读取基因中碱基置换、颠换、缺失和插入等改变,临床已知位点突变引物的设计涉及数据库查询、转录本及位点的核查等环节,过程繁琐。本研究尝试提出一套实用、易操作的已知位点突变引物设计流程。方法随机抽取2018年7月在该院病理科分子病理实验室进行BRAF(V600E)基因检测和FOXL2(C134W)基因检测的甲状腺乳头状癌患者和颗粒细胞瘤患者检测结果各1例。对于LRG网站中已录入基因组、氨基酸、蛋白质3种序列的基因,进入LRG网站下载3种序列,使用Lasergene(DNASTAR,USA)软件通过3种序列的人工比对,确定基因版本号无误,根据突变位点前后400个序列,设计引物;针对LRG网页还未收入3种序列的基因,先人工通过NCBI各个基因库搜索相应的基因组、氨基酸、蛋白质3种序列,并核实3种序列的版本匹配,再根据上述流程设计引物。结果引物设计完成后,经上海生物工程公司订购,使用已知突变结果的FFPE样本作检测,用ABI3500Dx(Thermo Fisher,Scientific,America)测序,观察测序结果,确认所验证基因突变点包含在该序列内。结论目前临床治疗及报告习惯使用氨基酸位置提示突变,而引物设计需要通过核酸位点,因此确认3种序列基因版本号很重要;对于部分已收入LRG网站的基因,一些版本号也会与临床报告中的突变位点有出入,所以即使是有LRG号的基因也要核查基因组、氨基酸、蛋白质3种序列。     

PCR检测血小板细菌的引物设计与筛选

目的设计PCR检测血小板细菌的通用引物,评价其在血小板检测中的应用效果。方法在美国国家生物技术信息中心(NCBI)中找到不同细菌中同一片段基因16Sr DNA序列,对其做多序列比对,确定合适的保守区域;使用Primer 5.0设计3对引物探针,采用荧光定量PCR对不同浓度[(101—107)CFU/m L]的标准菌株扩增,通过分析扩增曲线来判断扩增效果。分别将配制后经血小板稀释为101、102、103、104、105、106、107CFU/m L的菌悬液在22℃震荡培养24 h,以荧光定量PCR检测细菌;筛选出灵敏度和特异性最好的引物作为最终引物。结果血小板常见菌做荧光定量PCR检测[对(101—107)CFU/m L的细菌重复检测3次]后,通过对检测灵敏度和特异性的比较,发现第3号组引物(16S-F3:CAACGCG■AACCTTAC,16S-R3:AACC■CATTTCACAACA)不但能避免背景和非特异物的产生,而且能识别低含量的目标DNA,检测的细菌浓度范围含量为(102—108)CFU/m L。结论细菌通用引物的设计与筛选为血小板细菌的核酸检测方法的建立起到了关键的作用。     

用PCR扩增和SSCP分析检测克隆性免疫球蛋白基因重排

Southern印迹杂交分析免疫球蛋白(Ig)基因重排对于检测B细胞性恶性肿瘤是一种敏感而特异的方法,但存有一些缺陷:(1)克隆性细胞只有超过总细胞数的1％才能检测到;(2)所用组织必须为新鲜或冷冻标本,因为石蜡包埋组织提取的DNA降解太明显,一般不能进行Southern印迹分析;(3)需要相对大量的DNA,因而常常使得那些形态学诊断困难而急需克隆构型分析的小标本不能做此检测。本研究应用聚合酶链反应(PCR)扩增结合单链构型多态性(SSCP)分析Ig基因重排,可以克服上述不     

慢性粒细胞白血病急非淋变与急淋变的临床对比分析

目的　探讨慢性粒细胞白血病 (CML)急非淋变与急淋变治疗前的特点及其对治疗反应的差异。方法　对我院 6 1例CML急非淋变与急淋变患者治疗前临床及实验室检查特点及其对治疗的反应进行回顾性对比分析。结果　CML急变时 ,急非淋变与急淋变相比 ,急非淋变发生率高 ,发病年龄偏大 ,肝大、巨脾的发生率高 ,贫血较重 ,外周血白细胞总数较多 ,幼稚细胞比例高 ,骨髓幼稚细胞比例低 ,血清乳酸脱氢酶水平高 ,CD34 和CD34 /HLA -DR 表达率高 ,附加染色体的发生率高 ,治疗反应差。结论　急非淋变与急淋变相比 ,具有不同的临床特征、实验室特点及不同的治疗反应 ,这对临床分型具有重要的意义。     

急性淋巴细胞白血病基因重排及其用于微量残留白血病检测的研究

应用多种分子生物学技术，对急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患儿６５例进行抗原受体（ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＩｇＨ）基因重排和肿瘤融合基因（ＳＩＬ－ＴＡＬ－１、ｂｃｒ／ａｂｌ、ＨＲＸ）转录本的研究，发现９６％的患者存在至少一种上述基因标记，对其中２３例具有连续３次以上送检骨髓标本的患者进行微量残留病（ＭＲＤ）检测。杂交试验显示，ＭＲＤ可检出的敏感度在以肿瘤融合基因为标记的患者为１０－４～１０－６，在以抗原受体Ｖ－（Ｄ）－Ｊ结合部顺序为探针的患者为１０－２～１０－５。文中就选用多种基因标记，对ＡＬＬ患儿进行有步骤、多方位筛查特异标记基因，并对同一患儿采用不同基因标记作ＭＲＤ跟踪检测的方法学评价和临床意义予以讨论。     

多重PCR检测急性淋巴细胞白血病IgH及TCRγ链重排基因

多重ＰＣＲ检测急性淋巴细胞白血病ＩｇＨ及ＴＣＲγ链重排基因徐兵周淑芸孙竞免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）基因重排，可作为淋巴细胞白血病特异性基因标志。应用多聚酶链（ＰＣＲ）技术检测重排基因以其灵敏、快速等特点而优于其它传统方法。但目前Ｐ...     

急性淋巴细胞白血病基因重排及其用于微量残留白血病检测的…

应用多种分子生物学技术，对急性淋巴细胞白血病患儿６５例进行抗原受体基因重和肿瘤融合基因转录本的研究，发现９６％的患者存在至少一种上述基因标记，对其中２３例具有连续３次以上送检骨髓标本的患者进行微量残留病检测。