人血清丙酮酸激酶测定方法的探讨和临床应用

丙酮酸激酶(Pyruvate Kinase,简称PK;EC2.7.1.40,ATP:丙酮酸转移酶)是糖酵解过程中的限速酶之一。1961年Valentine等发现,遗传性PK缺乏引起的溶血性贫血患者,红细胞中PK减少。1964年田中等发现大鼠肝脏存在L型(肝脏型)和M型(肌肉型)两种PK同功酶。近年来,国外有人测定血清PK     

丙酮酸激酶低底物利用率在溶贫诊断中的意义

丙酮酸激酶（PK）是糖酵解途径中的3个限速酶之一,红细胞PK缺乏时,ATP生成减少,膜通透性改变,细胞失K~+、失水,变形性降低,易被脾脏阻留破坏,出现血管外溶血症状。PK先天缺陷占遗传性非球性红细胞溶血性贫血的第2位（首位为G6PD缺陷）,酶活力测定是检出PK缺陷的最直接、可靠的方法,但实际上在PK病变所致溶贫中,相当部分病例酶活性不低,甚至表现大大高于正常值的催化活性。国内外均有文献提请注意这一点。本文报告3例PK缺陷症亦属这种情况,通过PK低废物利用率[PK（L）]测定和家系调查,得以确诊。     

蛋白激酶9在约氏疟原虫生长发育中的作用

目的探究蛋白激酶9 (PK9)在约氏疟原虫生长发育中的作用。方法基于疟原虫PlasmoDB数据库,查找约氏疟原虫致死株17XL (Py17XL)的PK9序列信息, BLAST比对Py PK9和恶性疟原虫PK9(Pf PK9)以及人蛋白激酶p78的同源性。提取Py17XL株野生型(WT)基因组DNA,设计引物, PCR扩增PK9基因。采用CRISPR-Cas9技术,将同源臂与sgRNA序列一起连接到PYC-MCS质粒中,构建PK9基因敲除(PK9KO)重组质粒。重组质粒电转至Py17XL虫株内,经乙胺嘧啶筛选、克隆,进行PCR鉴定和测序。10只雌性BALB/c小鼠随机分为WT感染组和PK9KO感染组,每组5只,重复3次实验。每鼠腹腔注射1×105个红内期疟原虫,每隔24 h取血检测小鼠原虫血症,观察小鼠存活情况。200只3～5日龄的斯氏按蚊随机分为WT感染小鼠吸血组和PK9KO感染小鼠吸血组,每组100只。于吸血8 d后解剖蚊胃,每组随机选取15只斯氏按蚊进行解剖,测定蚊胃中卵囊的数量。10只雌性BALB/c小鼠随机分为WT子孢子感染组和PK9KO子孢子感染组,每组5只,重复2次实验。每鼠尾静脉注射1×103个子孢子,每隔12 h取血,涂片观察其原虫血症出现时间。结果Py PK9与Pf PK9的序列一致性为82.5%, Py PK9和人类蛋白激酶p78的一致性为39.4%。PK9基因PCR扩增产物的长度约为597 bp。经PCR鉴定、测序确定PK9KO重组质粒构建成功, Py17XL虫株成功敲除PK9基因。WT感染组小鼠迅速出现原虫血症,感染后5～6 d全部死亡, PK9KO感染组小鼠全部存活,原虫血症在感染后17 d消失。WT感染小鼠吸血组和PK9KO感染小鼠吸血组的斯氏按蚊感染率分别为60.0%(9/15)和66.7%(10/15),差异无统计学意义(P 0.05)。WT子孢子感染组和PK9KO子孢子感染组小鼠均于72 h查见原虫血症。结论PK9在红内期Py17XL的毒力中发挥了重要作用。     

葡激酶纳米脂质体的制备及靶向溶栓的实验研究

目的 探讨葡激酶(PK)纳米脂质体的溶栓效果.方法 采用逆相蒸发法制备PK纳米脂质体,并用反相液相色谱(HPLC)法制备归巢装置,观察PK纳米脂质体包封率、分散性、形态、大小,制备血栓动物模型,应用不同剂量的PK纳米脂质体导向装置,观察溶栓效果.结果 PK纳米脂质体平均粒径为(78.6±5.7)nm,多分散性指数为0.298.PK纳米脂质体包封率71.5%,回收率93.2%.分析10、20、30、40 min各个时间段,PK大剂量组与精-甘-天冬-丝氨酸(RGDS)-PK纳米脂质体在血压变化方面与对照组均有显著差异(P＜0.05),各实验组的血栓湿重与对照组比较均有显著差别(P＜0.001).其中PK纳米脂质体、RGDS-PK纳米脂质体与小剂量PK组比较有统计学意义(P＜0.05).结论 制备PK纳米脂质体是可行的,RGDS有导向性,该归巢装置具有较好的溶栓效果.     

51例急性心肌梗塞患者血浆前激肽释放酶活性变化的分析

为了解急性心肌梗塞(AMI)血浆激肽系统的变化,我们动态观察51例AMI后血浆前激肽释放酶(PK)的活性变化,与40例正常人血浆PK进行比较。结果表明,AMI一周内血浆PK最低,以后逐步恢复正常;有并发症组低于无并发症组,死亡组明显低于存活组。这提示,AMI时测定血浆PK浓度可反映病情的严重程度,对了解预后亦有一定价值。     

恶性疟原虫FCC1／HN株丙酮酸激酶基因的扩增、克隆和序列分析

目的 扩增恶性疟原虫海南株FCCl／HN的丙酮酸激酶(PK)的编码基因，构建其原核和真核表达重组质粒，测定其序列，并了解它及它推导的蛋白质与恶性疟原虫3D7和人PK基因之间的差异。方法 根据3D7的PK基因设计合成一对引物，用PCR从FCCl／HN株基因组中扩增PK基因；将它分别定向克隆到原核表达质粒PGEX-4T-1和真核表达质粒pcDNA3，分别转化大肠杆菌JM109感受态细菌；经酶切、PCR扩增鉴定筛选到阳性重组克隆，用双脱氧链末端终止法测定其序列，用生物信息学软件分析PK序列及进行同源性比较。结果 PCR扩增得到特异的FCCl／HN株PK基因，大小为2235bp，编码744个氨基酸。其氨基酸序列与3D7的同源性高达99．9％，与约氏疟原虫的同源性为70．2％，但与弓形虫和人的PK的同源性分别只有20．9％和21．6％～25．4％。结论 从FCCl／HN株基因组中获取了PK基因，成功构建了其原核和真核表达质粒，并测定了其序列；它与3D7的PK高度同源，但与人的PK基因同源性很低，可能是一个药物靶标。     

恶性疟原虫FCC1/HN株丙酮酸激酶基因的扩增、克隆和序列分析

目的　扩增恶性疟原虫海南株FCC1/HN的丙酮酸激酶 (PK)的编码基因 ,构建其原核和真核表达重组质粒 ,测定其序列 ,并了解它及它推导的蛋白质与恶性疟原虫 3D7和人PK基因之间的差异。　方法　根据 3D7的PK基因设计合成一对引物 ,用PCR从FCC1/HN株基因组中扩增PK基因 ;将它分别定向克隆到原核表达质粒PGEX 4T 1和真核表达质粒 pcDNA3 ,分别转化大肠杆菌JM 10 9感受态细菌 ;经酶切、PCR扩增鉴定筛选到阳性重组克隆 ,用双脱氧链末端终止法测定其序列 ,用生物信息学软件分析PK序列及进行同源性比较。　结果　PCR扩增得到特异的FCC1/HN株PK基因 ,大小为 2 2 3 5bp ,编码 744个氨基酸。其氨基酸序列与 3D7的同源性高达 99.9% ,与约氏疟原虫的同源性为 70 .2 % ,但与弓形虫和人的PK的同源性分别只有 2 0 .9%和 2 1.6%～ 2 5 .4%。　结论　从FCC1/HN株基因组中获取了PK基因 ,成功构建了其原核和真核表达质粒 ,并测定了其序列 ;它与 3D7的PK高度同源 ,但与人的PK基因同源性很低 ,可能是一个药物靶标。     

Prokineticin 2/Bv8 is expressed in Kupffer cells in liver and is down regulated in human hepatocellular carcinoma

AIM： TO study the implication of prokineticin 1 （PKI/EGVEGF） and prokineticin 2 （PK2/13v8） in hepatocellular carcinoma angiogenesis.
METHODS： The gene induction of PK1/EG-VEGF and PK2/Bv8 was investigated in 10 normal, 28 fibrotic and 28 tumoral livers by using real time PCR. Their expression was compared to the expression of VEGF （an angiogenesis marker）, vWF （an endothelial cell marker） and to CD68 （a monocyte/macrophage marker）. Furthermore, the rnRNA levels of PK1/EG-VEGF, PK2/Bv8, prokineticin receptor 1 and 2 were evaluated by real time PCR in isolated liver cell populations. Finally, PK2/Bv8 protein was detected in normal liver paraffin sections and in isolated liver cells by immunohistochernistry and immunocytochemistry.
RESULTS： PK2/Bv8 mRNA but not PK1/EG-VEGF was expressed in all types of normal liver samples examined. In the context of liver tumor development, we reported that PK2/13v8 correlates only with CD68 and showed a significant decrease in expression as the pathology evolves towards cancer. Whereas, VEGF and vWF mRNA were significantly upregulated in both fibrosis and HCC,as expected. In addition, out of all isolated liver cells examined, only Kupffer cells （liver resident macrophages） express significant levels of PK2/Bv8 and its receptors, prokineticin receptor 1 and 2.
CONCLUSION： In normal liver PK2/Bv8 and its receptors were specifically expressed by Kupffer cells. PK2/Bv8 expression decreased as the liver evolves towards cancer and did not correlate with HCC angiogenesis.     

血清丙酮酸激酶（PK）测定对急性心肌梗塞早期诊断的实验研究

动态观察了17只AMI犬模型的血清丙酮酸激酶(PK)的活性变化,结果显示AMI后血清PK峰值平均为353.7±241.28IU/L,为对照值的6.79倍,PK在AMI发生后起始上升快,上升幅度高,是早期诊断AMI的敏感性指标。     

P_1PK血型抗原研究进展

正2011年国际输血协会(ISBT)确认了P1PK血型系统的抗原,命名为P1PK,编号003。确认该系统有3个抗原,分别是:P1,PK,NOR。本文就目前对P1PK系统抗原的研究进展,做一扼要概述。并针对"P抗原"在多年的研究过程中,经历的定义不清、命名混乱,以及目前还存在的一些模糊认识、错误观点加以澄清[1-4]。     

发色底物法测定血浆激肽释放酶原及其临床应用

本文报导了用国产发色底物131455对30例正常人及226例病人血浆激肽释放酶原(Prekallikren,PK)的测定结果,发现肝硬化失代偿期、恶性肿瘤、尿毒症、慢性肾炎、血友病、冠心病、急性白血病患者血浆PK较正常人为低(P<0.05～0.001);而脑血栓形成、孕高症患者之血浆PK则明显高于正常人(P<0.05～0.001).并对发色底物法测定血浆PK的原理、方法学问题进行了一些探讨.     

缬沙坦与胰激肽原酶合用逆转自发性高血压大鼠左室重构的机制

目的探讨缬沙坦（Val）和胰激肽原酶（PK）联合应用对自发性高血压大鼠（SHR）左心室重构的作用及对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平、血清一氧化氮（NO）含量的影响。方法选用雄性15周龄的SHR24只、WKY大鼠8只，分为4组：SHR组、PK组、Val＋PK组、WKY组，实验期4w。放免法测定AngⅡ、化学法检测血浆NO水平、常规测量各组血收缩压（SBP）、左心室重量指数（LVMI）、心肌胶原体积比例（CVF）和心肌血管周围胶原与管腔面积的比例（PVCA）。结果SHR组的SBP、LVMI、CVF、PVCA、AngⅡ水平明显增高而血清NO含量明显下降，较WKY组有显著差异（P〈0．01）；治疗组（PK组、Val＋PK组）SBP、LVMI、CVF及PVCA均显著下降（P〈0．01），血清NO水平明显升高（P〈0．01），Val＋PK组血浆AngⅡ水平显著上升（P〈0．01），而心肌AngⅡ水平明显下降P〈0．01），PK组心肌局部和血浆AngⅡ变化不明显。结论PK能有效的改善高血压左室重构，与Val合用效果更佳。     

胰激肽原酶对糖尿病神经原性膀胱的疗效观察

目的探讨胰激肽原酶（PK）对糖尿病神经原性膀胱的疗效。方法40例糖尿病神经原性膀胱女性患者随机分为PK治疗组（PK组）、对照组（Con组）各20例。PK组日1次肌注PK40U；Con组日1次肌注维生素B12 500μg。治疗前及治疗后的1个月、2个月检测尿流率、残余尿、最大尿流率、平均尿流率及排尿期逼尿肌压。结果治疗后PK组残余尿量显著降低，最大尿流率、平均尿流率及排尿期逼尿肌压均显著增加（P〈0.05）。Con组治疗后1个月各项结果较治疗前无统计学差异（P〉0.05）。治疗后2个月残余尿量轻度降低，最大尿流率及排尿期逼尿肌压升高，较治疗前差异有统计学意义（P〈0．05）。PK组与Con组比较，残余尿量更低，最大尿流率、平均尿流率及排尿期逼尿肌压更高，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论胰激肽原酶可以作为治疗糖尿病神经原性膀胱的用药之一。     

肌病和带病状态者的血清丙酮酸激酶

近十余年来肌酸磷酸激酶(CPK)的升高曾被应用于帮助诊断一些肌病。最近Horano等报告假肥大型和肢体胛带型肌营养不良症病人有血清丙酮酸激酶(PK)的升高;PK可比正常对照者增高28倍,他们的材料提示PK试验可能比CPK更为敏感。本文对29例假肥大型肌营养不良症,12例肌强直性营养不良症和10例面肩肱型肌营养不良症,26例假肥大型带病者以及35例无神经肌肉疾病的对照者所测定的血清PK和CPK结果作了比较。     

急性心肌梗塞患者血清丙酮酸激酶同工酶M诊断价值

近年来的研究结果表明，血清丙酮酸激酶（PK）总活力测定对急性心肌梗塞（AMI）早期诊断具有重要的价值。但有关血清丙酮酸激酶同工酶M（PKM）对AMI诊断价值报道甚少，为此，我们测定40例AMI血清PK－M活性，探讨PK－M对AMI的诊断价值，现报道如下。1对象和方法1．1对象AMI组：4     

抗结核药物药代动力学/药效学的研究及进展

结核病治疗需要联合使用多种药物且治疗时间较长,迫切需要研发抗结核新药。抗结核新药的研发成果十分有限,对现有药物体内外的药代动力学/药效学(pharmacokinetic/pharmacodynamic,PK/PD)进行研究,优化抗结核药物的使用,对提高疗效,减少耐药结核病的发生至关重要。作者主要对PK/PD研究方法及抗结核药物PK/PD特点进行综述,为临床优化抗结核药物治疗方案提供参考。     

观点PK

蜂蜜滋润肠道能吃!PK蜂蜜是甜的不能吃!;红薯口感较甜又富含淀粉,糖尿病患者不能吃!PK红薯可抑制胆固醇的存积,是理想的瑚巴食品!     

血浆前激肽释放酶在血管疾病中的研究进展

生物体内,血浆激肽释放酶(kallikrein,Kal)以其无活性的前体-血浆前激肽释放酶(prekallikrein,PK)的形式存在,属于胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶家族.PK参与调控多种生理途径,如凝血途径,纤维蛋白溶解、炎症反应和补体途径等.因此,PK被认为是多种疾病的潜在靶标,包括遗传性血管水肿、糖尿病的微血管并发...     

31例早期急性心肌梗塞血清丙酮酸激酶动态测定分析

为探讨更适合基层医院的血清丙酮酸激酶(PK)测定方法,我们在2,4—二硝基苯肼法的基础上,改进了基质液的配制,对31例早期急性心肌梗塞(AMI)和5例变异型心绞痛患者进行了血清PK活性的动态测定。     

PK7300全自动血型仪在血站应用的探讨

目的:探讨分析PK7300全自动血型仪在献血者血型筛查中应用的可行性。方法:(1)用PK7300血型仪反复检测3次100个已经确定血型的标本,看结果是否一致;(2)用PK7300全自动血型分析仪与目前正在使用的Galileo全自动血型分析仪平行实验,进行ABO血型及RhD血型检测,正反不符、O细胞凝集及RhD阴性标本送往武汉血液中心输血研究室进行结果鉴定。结果:(1)重复测定3次结果一致;(2)对24 353名无偿献血者标本进行平行检测,PK7300全自动血型分析仪与Galileo全自动血型仪对ABO血型一次判读正确率分别为99.55%和99.59%;RhD血型一次判读正确率分别为99.93%和99.91%;差异无统计学意义(P0.05)。结论:PK7300全自动血型仪稳定性好,与Galileo全自动血型分析仪判读结果无统计学差异,结果具有可比性。PK7300全自动血型仪与Galileo全自动血型分析仪比较具有操作更简便,速度更快,试剂用量更少,仪器拍照结果更加清晰直观,人工核对更方便,结果可靠,适合样本量大的血站进行批量化血型检测。