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本研究探索高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞体外扩增技术。应用免疫磁珠分选法(MACS)分离出高纯度的CD3-CD56+CD16+NK细胞,置于含10%人AB血清的造血干细胞培养基(SCGM)中,加入细胞因子IL-2、IL-15、SCF组成不同培养体系进行体外扩增。采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析和CCK-8试剂盒检测对K562细胞的杀伤率等方法比较不同培养体系对NK细胞增殖前后的数量、纯度及杀伤活性的影响;并采取相同方法对IL-2的浓度与NK细胞增殖效率及杀伤活性之间的关系进行探讨。结果发现,经免疫磁珠分选法所得的高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞扩增18天后,IL-2/IL-15/SCF组扩增倍数显著高于其他组(p0.05);含细胞因子组的NK细胞对K562细胞的杀伤活性显著提高,尤其是IL-2/IL-15组和IL-2/IL-15/SCF组在效靶比10∶1时杀伤活性均高达90%以上。低、中、高浓度IL-2组扩增倍数之间比较差异无显著性(p0.05),而在对K562细胞杀伤率的比较上,高浓度组明显高于低、中浓度组(p0.05)。结论:在10%人AB血清的SCGM中加入IL-2/SCF/IL-15细胞因子组合,可使经MACS纯化的NK细胞在体外高效地活化及增殖;本培养体系中IL-2浓度较低(1 000U/ml)时,NK细胞的扩增效率及对K562细胞的杀伤率与IL-2的浓度高低无相关性;而高浓度的IL-2(≥1 000U/ml)可进一步激活纯化后NK细胞的体外杀伤活性。 相似文献
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目的:研究重症肌无力(MG)患者外周血CD16+CD56+ NK细胞的水平,及其在MG发病机制中的作用.方法:应用流式细胞仪检测16例MG患者与20名正常对照外周血CD16+CD56+NK细胞的百分率.结果:MG组外周血CD16+CD56+NK细胞百分率(13.81±5.59)%明显高于对照组的(7.23±1.95)%,P <0.05.结论:NK细胞在MG发病中起重要作用,既可通过分泌IFN2γ等细胞因子途径促进MG的发病,也可通过细胞毒作用发挥免疫效应. 相似文献
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目的探讨外周血淋巴细胞CD16+CD56表达率对不同血小板减少性疾病鉴别诊断的价值。方法应用流式细胞术检N28例正常对照者、47例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者、16例再生障碍性贫血(AA)患者、18例骨髓增生异常综合征(MDS)患者、13例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者、37例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者、11例慢性粒细胞白血病(CML)患者、6例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者和12例自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者外周血淋巴细胞CD16+CD56表达率。结果ITP组外周血淋巴细胞CD16+CD56表达率低于正常对照组(P〈0.05);AA组低于正常对照组(P〈0.05),高于MDS(P〈0.05);白血病组较正常对照组明显降低(P〈0.05),ALL组、ANLL组、CML组、CLL组之间无明显差异,白血病患者外周血淋巴细胞CD16+CD56表达率随病情发展、复发而降低,病情控制缓解而上升;AIHA组与正常对照组相比无明显差异。结论外周血淋巴细胞CD16+CD56表达率的检测对鉴别血小板减少性疾病有重要意义,对患者的疗效及预后判断有一定的参考价值。 相似文献
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李玛琳 A ACardoso P Batard A Hatzfeld J-PLevesque B Panterne P Sansilvestri J Hatzfeld EL Brown H Sookdo SC Clark 《中国实验血液学杂志》1996,(2)
通过在生长因子依赖的长期培养体系中加入转化生长因子β1(TGF-β1)的反义核酸或抗TGF-β1抗体以阻断TGF-β1的抑制作用,比较了脐血和骨髓的CD34~ CD38~-及CD34~ CD38~ 亚群在长期培养中的增殖反应以及产生早期造血前体细胞的能力。结果显示:脐血中CD34~ CD38~-细胞占CD34~ 的比例为4%,比骨髓多4倍;和成人骨髓移植平均所需的骨髓标本相比,一份常规脐血标本含有的CD34~ CD38~-细胞所产生的CFU-GEMM和骨髓相当,CFU-GM为骨髓的2倍,BFU-E为骨髓的3倍;由脐血产生的集落明显大于由骨髓产生的集落。提示脐血更富含造血干细胞并具有较高的增殖潜能。脐血中晚期祖细胞量低于骨髓。以上研究结果提示脐血可用于成人进行造血细胞移植。 相似文献
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本文综述了近年来对脐血CD34^+细胞(即造血干/祖细胞)的研究进展,表明虽脐血CD34^+细胞水平低于正常成人骨髓,但其干细胞比例较高且造血功能较强,有利于移植后长期造血的重建。 相似文献
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本研究观察急性白血病患儿外周血T细胞在不同病程阶段的变化,了解白血病患儿的免疫状况。应用流式细胞术检测42例急性白血病患儿,另选取50例正常儿童(对照组)外周血CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+比值、CD3^+以及NK细胞在不同病程阶段的动态变化。结果表明:急性淋巴细胞白血病(ALL)与急性髓系白血病(AML)初诊患儿的CD3^+,CD4^+、CD8^+细胞比例和CD4^+/CD8^+比值均值显著低于对照组(P〈0.05),初诊时急性白血病患儿的NK细胞值显著低于对照组(P〈0.05);ALL与AML患儿完全缓解期(CR)3、6和12个月时的NK细胞水平虽然缓慢上升,但与对照组比较仍具有统计学差异(P〈0.05)。结论:急性白血病患儿在病情发生以及治疗过程中细胞免疫功能存在紊乱,经治疗获CR后患儿病情好转,细胞免疫渐渐恢复,但恢复速率慢,该结果为患儿后续使用免疫调节剂治疗提供依据。 相似文献
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哮喘患儿外周血CD56,CD25检测的临床意义 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:探讨哮喘息儿外周血分化群(CD)56、CD25水平检测的临床意义。方法:应用流式细胞仪(FCM)检测哮喘患儿外周血单个核细胞中CD56 、CD25 细胞数。结果:缓解期组CD56十细胞数百分比[(12.0±3.1)%]及CD25 细胞数百分比[(4.1±2.2)%]与正常对照组比较均无显著性差异(P>0.05);哮喘发作组CD56 细胞数百分比[(9、4±2.2)%]低于正常对照组[(11.9±3.2)%]及缓解期组(P<0.01);哮喘发作组CD25 细胞数百分比[(7.2±2.1)%]高于正常对照组[(4.1±1.8)%]及缓解期组(P<0.01)。结论:CD56 、CD25 细胞数与小儿哮喘的发病过程有一定关系。 相似文献
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目的 探索CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(CD3AK细胞)更为合适的培养方法,为临床治疗提供有效的免疫效应细胞.方法 以脐血为细胞培养来源,经包被技术和传统培养两种方法分别获得CD3AK细胞(A组及B组),经细胞因子体外诱导获得CIK细胞(C组),对3组细胞的增殖数量、对K562/A02细胞株杀伤活性进行比较分析.结果 培养第4天3组细胞均开始增殖,A组CD3AK细胞增殖速度较其他两组快,在增殖数量方面A组在第7、10、13天分别是C组的4.01、5.85、2.88倍,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);是B组数量的1.73、1.85、1.45倍,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).在对K562/A02细胞株杀伤活性方面,3组之间比较均无统计学意义(P>0.05).结论 抗CD3单抗包被技术获得的CD3AK细胞增殖速度快,更容易获得临床需要的治疗量. 相似文献
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目的 检测新生儿脐带血淋巴细胞亚群和调节性T细胞比率,了解脐带血免疫学的特征.方法 使用Sysmex XE2100血细胞分析仪分别计数脐带血、新生儿母亲及对照组外周血淋巴细胞;采用流式细胞术分别检测其CD3+T细胞、CD19+B细胞、CD3- CD16+56+ NK细胞、CD3+ CD4+细胞、CD3+ CD8+细胞占淋巴细胞百分比,以及CD4+ CD25+CD127low调节性T细胞占CD4+细胞的百分比.结果 脐带血、新生儿母亲及对照组淋巴细胞计数分别为(3.68±1.07)×109/L,(1.42±0.44)×109/L和(2.06±0.88)×109/L;B淋巴细胞为:15.71%±3.89%,11.13%±3.79%和9.69%±2.22%;CD4+T细胞为:50.27%±9.08%,37.25%±7.13%和34.65%±7.17%;调节性T细胞为:6.94%±1.09%,5.09%±0.95%和4.8%1±0.99%.上述检测结果脐带血均显著高于母亲及对照组,P<0.01,母亲与对照组差异无统计学显著性意义P>0.05.三组间CD3+T细胞(69.64%±9.97%,74.83%±5.91%和69.41%±5.42%)和NK(11.36%±7.93%,10.48%±6.78%和16.31%±4.69%)细胞无显著性差异,P>0.05.脐带血中CD8+T细胞低于母亲及对照组(19.38%±6.62%,32.39%±2.08%和31.16%±1.87%),P<0.01.结论 脐血中高水平的CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞和低水平的CD8+T细胞有助于保持脐带血的低免疫状态. 相似文献
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采用两步法分离出脐血CD34~ 细胞,比较研究了混合脐血血浆联合IL-3,IL-6,GM-CSF,Epo 4种中、晚期造血因子和单纯的4种造血因子情况下脐血CD34~ 细胞的体外扩增。结果表明,混合脐血血浆联合造血因子对粒-巨噬细胞集落形成单位(granulocyte-macrophage colony-forming unit,CFU-GM),红系爆式集落形成单位(burst-forming unit of erythriod,BFU-E),混合集落形成单位(minxed colony-forming unit,CFU-mix)3种集落的扩增效果明显优于单纯的4种造血因子联合组,差异具有统计学意义(P<0.01),但单纯混合脐血血浆扩增效果较差。脐血造血细胞扩增对子成人脐血移植有重要意义。上述结果提示,混合脐血血浆的扩增成功,可代替或弥补早期造血生长因子的作用,用于脐血造血细胞的体外扩增。 相似文献
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脐血CD3AK细胞治疗恶性肿瘤的观察与护理 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究用脐血单个核细胞制备CD3AK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标及临床应用中的护理规范.方法分离脐血单个核细胞,用IL-2+CD3Ab诱导CD3AK细胞;测定肿瘤患者用CD3AK细胞治疗前后外周血单核细胞(PBMC)的自然杀伤(NK)活性,静脉滴注过程中严密观察患者体温和脉搏等反应.结果肿瘤患者输注CD3AK细胞一个疗程后,其PBMC的NK杀伤活性由63%升高到81%,平均升高28%,发热反应不到3%,大多在38 ℃以下,未经处理自行消退.结论 (1)CD3AK细胞输注能明显提高肿瘤患者PBMC的NK活性;(2)CD3AK细胞输注安全有效,无明显副作用;(3)肿瘤患者PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗近期疗效的一个参数. 相似文献
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目的进一步认识Vα24 NKT细胞和CIK细胞在生物学特性的差异。方法从人外周血单个核细胞扩增NKT细胞和CIK细胞;经免疫磁珠纯化获得高纯度的TCRVα24 NKT细胞和CD3 CD56 CIK细胞。运用流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的表型、细胞因子和细胞坏死相关因子的表达情况,并用DIOC18染色及流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的细胞杀伤活性。结果经纯化TCRVα24 Vβ11 NKT细胞和CD3 CD56 CIK细胞的纯度均达到>90%;纯化后的Vα24 NKT细胞多数为CD4 和DN NKT细胞,高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56;而纯化后的CIK细胞则以CD8 T细胞为主,高表达CD3、CD56,低表达CD161,几乎不表达TCRVα24和Vβ11。在抗原刺激下,CD3 CD56 CIK细胞的IFN-γ、TNF-α、Perforin、FasL、TRAIL表达水平均高于NKT细胞,但CD3 CD56 CIK细胞几乎不分泌IL-4,而NKT细胞则分泌高水平的IL-4;CD3 CD56 CIK细胞对肿瘤细胞株K562、U937、Jurkat的杀伤率均远远高于NKT细胞。结论TCRVα24 NKT细胞和CD3 CD56 CIK细胞是两类完全不同的细胞群,在抗肿瘤免疫和免疫调节中可能起着不同的作用。 相似文献
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目的 探讨CD34+ 富集细胞和单个核细胞 (MNC)的体外扩增特性。方法 利用Min iMACS系统富集CD34+ 细胞 ,在相同条件下与同批MNC进行对照培养 ;观察了再次富选和MNC培养上清 (MNC SN)对CD34+ 富集细胞扩增的影响 ;并尝试了MNCCD34- 细胞的培养。结果 虽然CD34+ 富集细胞具有很高的扩增潜力 ,但在培养过程中 ,其集落密度和CD34 + 细胞含量却始终呈下降趋势 ,而MNC在培养中却出现了一个上升的趋势 ,集落密度和CD34+ 细胞含量分别由第 0天的 (4 12± 16 7) 10 5细胞和 (1.12± 0 .4 2 ) %增至第 7天的 (116 2± 5 6 6 ) 10 5细胞和 (4 .17± 1.4 4 ) % ;再次富选可以使培养过的CD34+ 富集细胞的总细胞和CD34+ 细胞扩增能力大大提高 ;MNCCD34- 细胞具有集落形成和转化为CD34+ 细胞的能力 ;MNC SN对CD34+ 富集细胞的集落形成有促进作用 ,而同时又对CD34+ 细胞有促分化作用。结论 CD34+ 富集细胞在体外大量扩增的同时存在大量分化 ,其在培养过程中产生的CD34-细胞对CD34+ 细胞的扩增有抑制作用 ;脐血MNC中大量的CD34- 细胞含有造血干 祖细胞 ,其分泌的细胞因子有促进CD34+ 细胞向较为成熟的集落形成祖细胞分化的作用。 相似文献
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脐血CD34+细胞的分离与纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
脐血造血干细胞的分离是进行干细胞移植、体外扩增培养的关键.研究采用明胶自然沉降法、Fi-coll分层法分离脐血MNC后,用MACS分离纯化CD34+细胞,计数并用流式细胞仪进行纯度分析.结果显示每份脐血的采集量平均为95±52 ml,3 g/dl明胶自然沉降法所获MNC密度平均为(5.76±0.67)×107/ml;CD34+细胞密度平均为(5.53±1.16)×105/ml,较Ficoll分层法高(P<0.01).因此,3 g/dl明胶自然沉降法是一种较理想的分离MNC的方法,用明胶沉降法和MACS相结合是分离脐血CD34+细胞的理想方法. 相似文献