PSMA基因疫苗抑瘤效应及免疫机制的实验研究

目的： 观察表达前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因疫苗在荷瘤小鼠模型中抑瘤效应并探讨其免疫机制,为前列腺癌的预防和免疫治疗提供实验基础。方法: 将PSMA基因疫苗肌注入BALB/c小鼠体内,检测其血清中PSMA抗体水平并观察脾T细胞的增殖效应和杀细胞毒效应,以sp2/0-PSMA细胞攻击免疫后小鼠,观察小鼠的成瘤率、肿瘤大小、平均瘤重及生存率,评价PSMA基因疫苗的抑瘤效应。结果: PSMA基因疫苗可诱导实验组小鼠产生PSMA抗体,脾T细胞的增殖效应和杀细胞毒效应,在一定时间内随着免疫次数的增加和时间的延长,抗体水平、脾细胞的增殖和杀细胞毒效应均呈上升趋势。与对照组相比较,实验组小鼠成瘤率低,无瘤生存期延长,肿瘤生长缓慢。结论: PSMA基因疫苗能诱导实验组小鼠产生特异性体液及细胞免疫应答,且有明显的抑瘤效应。     

单克隆抗体及其F(ab′)_2片段在小鼠体内的药物动力学及肿瘤显像研究

放射性同位素标记的抗肿瘤单克隆抗体(McAb)可用于体内肿瘤的定位显像及导向治疗。我们用~(125)I标记抗人小细胞肺癌单克隆抗体2F7和相应片段F(ab’)_2,比较它们在荷瘤裸鼠模型中的定位显像及经静脉(iv)或腹腔(ip)注射后在正常小鼠体内     

碘标记肝癌单克隆抗体对裸鼠肝癌移植瘤导向治疗的意义和观察

本文报告用~(131)I标记肝癌单克隆抗体HAb18、及其F(ab’)2片段对裸鼠移植瘤导向治疗的观察,具有明显的杀伤效应,其效果优于国外同类抗体。 同位素标记与显像 用~(131)I标记HAb8、18IgG及其F(ab’)2片段,全部采用氯胺T碘化法,标记率:51％比活性:9.58×10~4Bq/μg。抗体与肝癌细胞在体外的亲和率:IgG—70％,F(ab’)2—55％。尾静脉注入碘标记物后,荷瘤裸鼠肿瘤部位明确显像。其定位指数;IgG—3.09,F(ab’)2—6.99。 实验分组与治疗12只荷瘤肝癌裸鼠(SMMU—LTNM)分4组,实验前服用0.25％     

抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体导入治疗荷瘤鼠膀胱癌的研究

目的：探讨抗人膀胱癌，抗VEGF双功能基因抗体对膀胱癌生长的抑制作用。方法：应用双功能抗体作用荷瘤鼠模型，观察抑瘤作用；应用免疫组化技术检测体内生长肿瘤中微血管密度。结果：双功能抗体对体内生长的肿瘤有明显的抑制作用，经双功能抗体治疗的瘤体中微血管密度明显低于对照组。结论：双功能抗体可以抑制肿瘤血管生成，有望为膀胱癌的治疗提供新的方法。     

吡西达替尼抑制单核细胞向肿瘤微环境的聚集并减少M2型肿瘤相关巨噬细胞的数量

目的研究吡西达替尼(pexidartinib)对单核细胞向肿瘤微环境的聚集与M2型肿瘤巨噬细胞极化的影响。方法皮下接种结肠癌MC38细胞建立结肠癌细胞小鼠体内成瘤模型,观察吡西达替尼对小鼠体内的成瘤速度、荷瘤小鼠存活,免疫荧光组织化学染色检测肿瘤组织F4/80阳性肿瘤相关巨噬细胞(TAM)数量;分离增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠外周血单核细胞经尾静脉过继转移给荷瘤小鼠后,用吡西达替尼处理,流式细胞术检测肿瘤组织中单核细胞聚集及F4/80和CD206阳性细胞的比例。结果吡西达替尼减缓MC38结肠癌细胞在体内的成瘤速度并提高荷瘤小鼠的生存率,还可减少肿瘤微环境中TAM的数量和M2型TAM的形成,并抑制外周血的单核细胞向肿瘤微环境的聚集。结论吡西达替尼抑制单核细胞向肿瘤微环境的聚集并减少M2型TAM的数量。     

经维甲酸处理的瘤细胞作为“瘤苗”的免疫治疗实验

为观察维甲酸对体外培养的肿瘤细胞免疫原性的影响,本实验将经维甲酸处理的小鼠前胃癌(MFC)细胞作为活瘤苗,进行了免疫接种及免疫治疗的实验观察。结果表明免疫接种小鼠可完全排斥再次接种未经药物处理瘤细胞的生长,同时伴有体内细胞免疫反应增强。将该瘤苗用于荷瘤小鼠的免疫治疗,可使肿瘤生长速度减慢,荷瘤生存期明显延长,提示维甲酸可通过改变肿瘤细胞的免疫原性介导机体抗瘤反应。     

99m Tc 标记单克隆抗体Au14-1对荷宫颈癌小鼠的放射免疫显像研究

目的和方法：应用99mTc直接法标记抗小鼠宫颈癌（U14）单克隆抗体Au14-1,对荷瘤Km小鼠进行放射性分布和放射免疫显像的实验观察,探讨用99mTc－An14-1作宫颈癌导向诊断和导向治疗的可能性。结果：（1）99mTc－Au14-1注射后12h肿瘤灶已有放射性聚集,24h肿瘤组织的％ID／g值达8．79,呈明显特异性浓聚;（2）除肾脏外,各脏器的T／NT值在2．02~6．71之间,SPECT图像12h已见肿瘤显影,24h肿瘤影像更为清晰。结论：99TcTc－An14-1的体内分布与显像结果相一致,表明An14-1在体内具有良好的宫颈癌导向定位作用。     

双特异抗体在肿瘤免疫治疗中的意义

双特异抗体在肿瘤免疫治疗中的应用以导向药物和导向细胞毒细胞最为重要。用于导向药物其效力比单抗高;用于导向细胞毒细胞时,可改变细胞毒细胞的靶特异性。NK 细胞、CTL 及LAK 细胞均可被双特异抗体导向而杀伤肿瘤细胞。经双特异抗体导向的细胞毒细胞用于治疗肿瘤已初步显示其重要作用。     

胃癌单克隆抗体1D1-2在荷瘤裸鼠体内的放射免疫显像

本文应用人胃癌组织及细胞株移植建立了裸大鼠和裸小鼠两种胄癌移植模型。用~(125)I和~(131)I标记抗人胃癌单克隆抗体1D1-2,体外试验表明碘化1D1-2具有特异性的结合活性。注入荷瘤裸鼠体内72h后,显示该抗体高度浓集于肿瘤组织,浓聚指数为4.5,而正常组织仅为1.3,T/NT比分别为2～12倍,与胃组织比为3.2倍、放射免疫显像显示出清晰的肿瘤图像。提示单克隆抗体1D1-2应用于肿瘤定位诊断及导向治疗的可能性。     

抗人大肠癌单链抗体的构建、表达及其体内外生物学活性的检测

目的 将抗人大肠癌单克隆抗体ND-1(mAb)的VR和VL基因进行重组，构建和表达ND－1scFv，并对其在体内外的生物学活性进行检测。采用RT－PCR技术，从能够分泌mAb ND-1的鼠杂交瘤细胞中扩增VH和RL基因，通过重叠延伸拼接PCR在VH和VL基因间引入连接短肽，体外构构建ND－1scFv基因，并在大肠杆菌中表达。采用间接免疫荧光（IFA）EY IF工IMPG-1scFv的免疫学活性。用^99Tc^m标记ND－1scFv后，将偶联物给予荷瘤裸鼠，观察其在动物体内的显像及生物学分布。结果 SDS－PAGEW显示，重组蛋白Mr为30000，同预期结果一致。IFA及ELISA检测表明，ND－1scFv保留了与亲本抗体相近的免疫学活性，对表达相应抗原的靶细胞具有行异结合活性。体内放射免疫实验显示，^99Tc^m-ND-1scFv在荷瘤小鼠体内的生物学分布，呈明显的肿瘤积聚趋向，注入体内1h血中T／NT即在2．61。结论 获得免疫学活性良好的ND－1scFv，对荷瘤动物体内肿瘤的定位快速，准确，可望成为有效的肿瘤诊断和治疗的导向载体。     

人鼻咽癌CNE－2Z细胞的不同转移潜能克隆株在严重联合免疫缺陷小鼠体内的检验和比较研究

将人类鼻咽癌不同克隆株的细胞悬液移植在严重联合免疫缺陷（ＳＣＩＤ）小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ（ｕｎ／ｕｎ）裸小鼠的颈背侧皮下，５６ｄ后处死全部动物进行观察。结果发现，在ＳＣＩＤ小鼠体内移植后ＣＮＥ２Ｌ２为高转移克隆株，其淋巴结转移率为１００％，肺转移率为７１％；而ＣＮＥ２Ｌ４为低转移克隆株，其肺转移率为１３％，淋巴结未见癌转移。这是从１个细胞母系中新筛选出的１个高转移和１个低转移的癌细胞克隆株。实验结果还显示，同ＢＡＬＢ／ｃ（ｕｎ／ｕｎ）裸小鼠相比，ＳＣＩＤ小鼠的恶性表型的表达能力高。另外，皮下移植时肿瘤细胞的数量可能与转移表型的表达有相关性，移植的瘤细胞数越多，转移率越高，反之亦然。     

Interactions between transplanted pituitary tumor and gonads in nude mice

More pronounced hyperprolactinemia occurred in the male nude mice bearing a transplantable rat pituitary tumor than in the female nude mice, although the hyperprolactinemia in rats bearing the identical tumors was more prominent in the females than in the males. PRL levels in castrated nude mice of both sexes bearing tumor were almost the same as those in the intact female nude mice. PRL levels in the tumor tissues in each group paralleled relative abundance of PRL-secreting cells in the tumors. Supplement with testosterone or estrogen to the castrated mice recovered the PRL concentrations to the same or higher levels than those in intact male mice. Reproductive organs in the tumor-bearing male nude mice showed no alterations, whereas those in the female nude mice were markedly atrophic. Tumors had receptors for estrogen but not for androgen. Insufficient estrogen secretion due to the ovarian atrophy caused by the PRL from the tumors seemed responsible for the failure in growth of PRL-secreting tumor cells and consequent low PRL production by the tumor.     

CIK细胞对胃癌OCUM-2MD3细胞体内外杀瘤活性的实验研究

目的：研究正常人细胞因子激活的杀伤细胞（Cytokine-induced killer,CIK)对人胃癌细胞株OCUM－2MD3的体外细胞毒活性以及对胃癌腹膜移植模型的体内抗肿瘤作用。方法：取正常人外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)，加入γ－IFN、IL－2、抗－CD3单抗和IL－1，体外诱导成CIK细胞，用流式细胞仪对细胞作动态表型分析，用MTT法测定CIK细胞体外对OCUM－2MD3的细胞毒活性，并与CD3AK作对比。在Balb/c裸小鼠腹腔内接种OCUM－2MD3细胞，观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。结果：CIK细胞在培养2周左右获得大量增殖，CD3^ CD56^ 双阳性细胞大量增殖达1000倍以上；体外实验证明，CIK细胞对OCUM－2MD3有明显的细胞毒活性，对比CD3AK其抑瘤率与85％与62．8％（P＜0．05）。体内实验表明，CIK细胞能够显著抑制癌性腹水的生长，其抑瘤率可达100％；肿瘤标志物CEA含量明显降低。结论：CIK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞，具有较强的体内外抗胃癌细胞活性，具有明显的抑制癌性腹水的生长的作用，有可能用于临床上晚期胃癌的过继性免疫治疗。     

~（131）I－抗AFPMcAb－MMC“双弹头”导向药物对荷瘤裸鼠的放射免疫显像和治疗

应用双弹头免疫导向治疗药物１３１Ｉ－抗ＡＦＰＭｃＡｂＭＭＣ进行荷人原发性肝癌棵鼠的体内放射免疫显像（ＲＩＩ）及放射免疫治疗（ＲＩＴ）研究。药物经腹腔给予后，第３ｄ即能选择性的定位于肿瘤；第１３ｄ抑瘤率高达８１．５％，远高于单纯１３１Ｉ－抗ＡＦＰＭｃＡｂ组和ＭＭＣ组（分别为２９．６％和１１．１％），提示该药物对人原发性肝癌细胞的亲和力好、杀伤力强，为其进入临床治疗提供了依据。     

不良心理应激对人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤生长及表皮生长因子受体、磷酸化蛋白激酶B、血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的 通过观察不良心理应激人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤的体积、重量和瘤体组织中表皮生长因子受体（EGFR）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达情况的差异,探讨其对卵巢癌生长的影响及可能的分子机制。 方法 购置4～6周龄的雌性BALB/c裸鼠,称重,随机分两组,每组12只。A组：荷瘤组皮下移植人卵巢癌组织瘤块,不给予应激;B组：荷瘤+应激组皮下移植人卵巢癌组织瘤块,给予应激。定期测量皮下移植瘤的体积,结束应激实验后的第2天,处死全部组别（A组、B组）裸鼠,剥离肿瘤予以称重,利用免疫组织化学及Western blotting方法对A、B两组皮下移植瘤组织中的EGFR、p-Akt、VEGF蛋白表达情况进行检测。 结果 荷瘤+应激组皮下移植瘤体积及其重量显著高于荷瘤组（P＜0.01）;免疫组织化学实验提示,荷瘤+应激组中皮下移植瘤组织中的EGFR、p-Akt、VEGF蛋白表达水平高于荷瘤组（P<0.05）;Wester blotting提示,荷瘤+应激组皮下移植瘤组织中EGFR、p-Akt、VEGF蛋白表达水平显著高于荷瘤组（P<0.01）。 结论 不良心理应激可能通过EGFR及其介导的下游PI3K/Akt信号通路来促进卵巢癌的发生、发展。     

人直肠粘液腺癌裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性

A model of transplantable human mucoid adenocarcinoma of rectum in BALB/C nu/nu nude mice (TNB 92), was established and 18 sub-transplantations were performed. The success rate of transplantation was 98% and the average tumor bearing life time of mice was 112 days. Histology and ultrastructures showed that the transplantable tumor retained the original structures of the human tumor. Chromosomal analysis of the tumor cells exhibited the same features of the human carcinoma and it also retained the function of secreting CEA. Frozen tissue of the tumor in liquid nitrogen after rehabilitation could be successfully retransplanted into nude mice again. It seems to be a useful model for further study of human rectal adenocarcinoma.     

Functional analysis of lung tumor suppressor activity at 3p21.3

The early and frequent occurrence of deletions at 3p21.3 in lung cancer has led to the consideration of this chromosomal region as a lung cancer (LUCA) critical region with tumor suppressor activity. We covered this 19 genes-containing region with overlapping P1 artificial chromosomes (PACs), in which genes are likely accompanied by their own promoters or other regulatory sequences. With these PACs we transfected cells from a small cell lung cancer (SCLC) cell line which readily caused tumors in nude mice. Per PAC we selected two cell clones with a low number of PAC copies integrated at a single genomic site. The selected clones were s.c. injected into nude mice to investigate whether the integrated genes suppressed the tumor-inducing capacity of the original SCLC cell line. We could demonstrate PAC-specific gene expression in the transfected cells. All of the PAC integration sites were different. It appeared that introduction of a PAC or even an empty PAC vector causes some chromosomal instability, which in principle may either promote or inhibit cell growth. However, both cell clones with integration of the same PAC from the centromeric part of the LUCA region in different genomic sites were the sole pair of clones that caused smaller tumors than did the original SCLC cell line. This suggests that rather than the induced chromosomal instability, the DNA sequence of that PAC, which in addition to two protein-encoding genes contains at least one potential miRNA gene, is responsible for the tumor suppressor activity.     

奥沙利铂对人结肠癌细胞SW620荷瘤裸鼠抗肿瘤增殖作用

目的：探讨奥沙利铂对人结肠癌细胞（SW620）荷瘤裸鼠的抗肿瘤增殖作用.方法：制备裸鼠SW620移植瘤体内模型,设立荷瘤对照组（n=8）及奥沙利铂（20、40 mg·kg-1;n=8）治疗组,并增加正常裸鼠对照组（n=8）.14 d后,观察奥沙利铂对移植瘤体抑瘤率的影响,ELISA法检测移植瘤组织中肿瘤坏死因子α（TN-α）及γ型干扰素（IFN-γ）的含量,此外,Western blotting法检测移植瘤组织中Bcl-2表达.结果：与荷瘤模型对照组比较,奥沙利铂明显抑制肿瘤体生长（P＜0.01）,并增加植瘤组织中TNF-α、IFN-γ的含量（P＜0.01）.此外,有效下调移植瘤中Bcb2蛋白表达（P＜0.01）.结论：奥沙利铂有效发挥抗结肠癌作用,其机制与减少内源性Bcb2表达有关,从而抑制肿瘤细胞增殖.     

用人盲肠未分化腺癌细胞系建立的裸鼠移植瘤模型及其生物学特性

作者用人盲肠未分化腺癌体外培养细胞系移植于裸小鼠皮下获得裸鼠可移植瘤模型,定名为NB-93。现已传至第26代。移植成功率为96.2%。裸鼠带瘤生存时间最长者为246天,中位数为108天。裸鼠移植瘤病理组织学的结构与原始人体肿瘤的形态相似。移植瘤具有分泌CEA的能力。染色体分析显示了人类恶性肿瘤染色体特征。移植瘤组织经液氮冻存再复苏后,可移植性不变。该移植瘤裸小鼠模型的建立,为进一步研究人盲肠未分化腺癌提供了有用的手段。     

胃肠道间质瘤细胞组织在不同周龄裸小鼠不同部位的成瘤情况

背景：建立合适的人胃肠道间质瘤裸鼠动物模型,可为以后在活体状态下研究胃肠道间质瘤细胞提供一个必不可少的工具。 目的：观察胃肠道间质瘤细胞组织块接种于不同周龄裸小鼠腋下和臀部的成瘤情况。 方法：将胃肠道间质瘤细胞组织块分别接种于4,8周龄BALB/c(nu/nu)裸鼠的腋下和臀部,观察在一定时间内,不同周龄裸鼠不同部位的瘤体成瘤率,生长速度,破溃率和转移率。 结果与结论：4周龄裸鼠的成瘤率及生长速度明显高于8周龄裸鼠(P < 0.05),且接种于腋下的成瘤率较臀部高;4周龄与8周龄裸鼠的肿瘤破溃率差异无显著性意义(P > 0.05),但接种于臀部的肿瘤破溃率大于腋下(P < 0.05);在肿瘤软化消失率方面,8周龄裸鼠明显高于4周龄裸鼠(P < 0.05),同龄裸鼠中,臀部高于腋下。说明不论接种部位如何,周龄越小的裸鼠,移植瘤成瘤率越高、生长速度越快;但对于相同周龄的裸鼠,不论接种部位如何,肿瘤生长速度无明显差异。