去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡的实验研究

目的：研究去氢骆驼蓬碱对白血病细胞的作用及其机制。方法：采用MTT法测定去氢骆驼蓬碱对各白血病细胞的生长抑制作用;以U937、HL-60为作用细胞,用琼脂糖凝胶电泳检测去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡的作用;应用蛋白印迹法检测去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡过程中Bcl-2表达的变化情况。结果：去氢骆驼蓬碱对白血病细胞有明显的生长抑制作用,其对各白血病细胞抑制率无明显差异,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2在白血病细胞中有表达,并随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：去氢骆驼蓬碱可诱导白血病细胞凋亡,其作用与降低Bcl-2表达有关。     

青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株凋亡诱导作用的实验研究

目的：探讨青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat细胞的凋亡诱导作用及其可能的作用机制。方法：采用Mrrll比色法检测青蒿琥酯对Jurkat细胞体外生长的抑制作用;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA的PI染色等观察和检测Jurkat细胞的凋亡;Western-blot法检测Jurkat细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase-8和ICAD蛋白表达水平的变化。结果：青蒿琥酯对Jurkat细胞的生长有明显的抑制作用,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P〈0．01）,呈浓度依赖性;其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase-8蛋白出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导Jurkat细胞凋亡作用,既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导Jurkat细胞凋亡。     

去氢骆驼蓬碱通过诱导凋亡发挥抗肿瘤药理作用研究进展

目的去氢骆驼蓬碱是药用植物骆驼蓬中的有效单体化合物,具有中枢兴奋、抗菌、抗寄生虫、抗肿瘤等多方面药理作用。本文对近年来有关去氢骆驼蓬碱通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤药效方面的研究情况进行综述,主要包括去氢骆驼蓬碱体内外抗瘤药效,去氢骆驼蓬碱诱导肿瘤细胞凋亡的检测方法及分子机制,为去氢骆驼蓬碱抗肿瘤应用方面的深入研究提供参考。     

青蒿琥酯对U937细胞凋亡的诱导作用及其对Bcl-2、Bax、ICAD和Caspase-8表达的影响

目的：探讨青蒿琥酯对急性髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。方法：采用MTT比色法检测青蒿琥酯对U937细胞体外生长的抑制作用;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA的PI染色等观察和检测U937细胞的凋亡;Western-blot法检测U937细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase-8和ICAD蛋白表达水平的变化。结果：青蒿琥酯对U937细胞的生长有明显抑制作用,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P〈0.01）,呈浓度依赖性,48小时IC50值为24.48μg/ml;其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase-8蛋白出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导U937细胞凋亡作用,既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导U937细胞凋亡。     

去氢骆驼蓬碱脂质体对人宫颈癌Hela细胞增殖作用研究

目的:探讨去氢骆驼蓬碱脂质体对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用。方法:将去氢骆驼蓬碱单体制备成脂质体形式并对其进行结构表征;采用细胞毒性试验CCK-8法检测去氢骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱脂质体对Hela细胞增殖的体外抑制作用。结果:去氢骆驼蓬碱脂质体的粒径分布集中,去氢骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱脂质体对Hela细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为3.83μg·m L-1和2.84μg·m L-1。结论:去氢骆驼蓬碱脂质体形式可以增加其抗宫颈癌肿瘤活性。     

牡荆苷对人食管癌EC-109细胞生长及凋亡的影响

目的观察金莲花中提取的牡荆苷体外对人食管癌EC-109细胞生长及诱导EC-109细胞凋亡的作用,探讨p53及bcl-2蛋白表达在牡荆苷抗肿瘤细胞机制中的作用。方法用不同浓度牡荆苷作用于对数生长期的EC-109细胞,通过CCK-8法检测其对EC-109细胞体外生长、增殖的抑制作用;Hoechst33258荧光染色观察细胞形态的变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带;AnnexinV-FITC/PI双标法流式细胞术观察牡荆苷对EC-109细胞凋亡的诱导作用;流式细胞术检测EC-109细胞中抑癌基因p53和促癌基因bcl-2蛋白的表达。结果牡荆苷对EC-109细胞生长、增殖具有明显的抑制作用,能够诱导EC-109细胞凋亡,且作用与牡荆苷浓度、作用时间呈正相关,可上调p53蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达。结论牡荆苷可能通过上调p53蛋白和下调bcl-2蛋白的表达,促进EC-109细胞凋亡,抑制EC-109细胞生长。     

5种生物碱胃癌多药耐药逆转剂的筛选及机制研究

目的研究骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱对肿瘤细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及机制。方法以胃癌亲本细胞系SGC-7901和MDR细胞系SGC-7901/VCR为细胞模型,采用MTT法检测上述5种生物碱的细胞毒活性及对MDR的逆转效果;用流式细胞仪检测MDR逆转效果最好的贝母素乙对肿瘤细胞内阿霉素(ADR)蓄积的影响;Western blotting法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达;Hoechst荧光染色和细胞免疫荧光法检测贝母素乙诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡情况。结果骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱均能不同程度地抑制SGC-7901和SGC-7901/VCR细胞的增殖,在非毒剂量下贝母素乙能够显著提高SGC-7901/VCR细胞对ADR的敏感性及细胞内ADR的浓度,降低P-gp表达。贝母素乙联合5-氟尿嘧啶(5-FU)给药可诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡,凋亡细胞cleaved caspase-3呈高表达。结论贝母素乙具有作为胃癌MDR逆转剂的潜力,其逆转耐药的机制可能与下调P-gp表达和诱导细胞凋亡有关。     

蝎毒对白血病HL—60细胞生长的抑制和诱导凋亡作用研究

目的：研究蝎毒对HL－60细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法：应用MTT法观察蝎毒对细胞的抑制作用,光镜、荧光显微镜和透射电镜观察细胞结构的改变,原位末端标记检测DNA断裂,流式细胞术分析凋亡细胞和bcl-2蛋白表达。结果：蝎毒可明显地抑制HL－60细胞生长和诱导细胞凋亡,作用在一定范围内呈对浓度和时间的依赖性,蝎毒并能下调HL－60细胞bcl-2蛋白表达。结论：蝎毒能抑制HL－60细胞生长和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与bcl－2蛋白表达的下降有关。     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及机制研究

目的:研究氯化两面针碱在体外诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用与机制。方法:通过MTT法测定氯化两面针碱细胞毒作用,通过酶解可见光底物DEVD-pNp法测Caspase-3的活性;免疫组化技术研究氯化两面针碱对SMMC-7721细胞中p53、bax和bcl-2三种细胞凋亡相关蛋白表达的影响,透射电镜观察细胞的超微结构。结果:氯化两面针碱作用SMMC-7721细胞48h后的IC50值为3.8μg/ml;药物处理后的细胞中p53、Bax蛋白水平表达显著增强,Bcl-2蛋白水平表达减弱,与对照组比较,差异有统计学意义,典型的凋亡形态学特征表现出细胞核裂解、染色质聚集、细胞膜皱缩、有空泡形成,出现凋亡小体。结论:氯化两面针碱对SMMC-7721细胞有明显抑制作用,其机理可能与恢复p53的功能,激活Caspase-3的活性,Bcl-2/Bax的表达进行性下调,诱导细胞凋亡有关。     

茜草蒽醌诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其分子机制的研究

目的:探讨茜草提取物蒽醌单体对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制作用,诱导凋亡作用及对凋亡相关基因bcl-2表达的影响,为肝癌的基因治疗提供有效靶点。方法:采用MTT法检测生长的抑制作用;以形态学,DNA凝胶电泳,流式细胞仪单染、双染检测细胞凋亡;以RT-PCR来分析蒽醌对bcl-2 mRNA的影响。结果:蒽醌能抑制肝癌细胞的生长;蒽醌处理肝癌细胞后,倒置显微镜和光镜下可见典型的凋亡细胞;DNA琼脂糖凝胶电泳显示出典型的细胞凋亡梯形带,PI单染表明细胞周期的G1期前有异常二倍体细胞的凋亡峰,并将细胞周期阻滞在G1期,Annexin V-FITC/PI定量检测进一步证实了蒽醌诱导肝癌细胞凋亡的作用;RT-PCR检测表明蒽醌可使bcl-2 mRNA表达水平下降。结论:蒽醌能显著抑制肝癌细胞的生长,并诱导肝癌细胞凋亡,其分子机制可能与下调bcl-2基因的表达有关。     

丹参酮ⅡA诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的研究

目的:研究丹参酮ⅡA对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡诱导作用。方法:四亚基噻唑蓝(MTT)法测定丹参酮ⅡA对细胞生长的抑制作用,流式细胞仪技术(FCM)观察细胞周期及凋亡。结果:不同浓度的丹参酮ⅡA均能抑制人喉癌细胞Hep-2生长,并有明显的时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测不同浓度丹参酮ⅡA作用48h后的细胞凋亡率增高,与对照组比较差异均有统计学意义。结论:丹参酮ⅡA在体外能明显抑制人喉癌细胞Hep-2生长,抑制其生长的机制可能是诱导细胞凋亡。     

油茶皂苷通过内质网应激途径诱导Jurkat细胞凋亡的研究

目的探讨油茶皂苷在体外诱导人白血病细胞Jurkat凋亡的作用及作用机制。方法将1～4μg/mL的油茶皂苷作用于人白血病Jurkat细胞,应用细胞计数考察油茶皂苷对细胞增殖的影响;用Western blot方法分析油茶皂苷对caspase-3、PARP、Bipc、hop、Perk、ATF6和IRE1蛋白表达的影响。结果油茶皂苷(1～4μg/mL)对Jurkat细胞的增殖产生明显的剂量依赖性抑制作用。免疫印迹结果显示,油茶皂苷可以使caspase-3激活,增加Cleaved PARP的表达量,而诱导Jurkat细胞发生凋亡;其作用机制是通过下调Bip和chop的表达,触发Perk、ATF6和IRE1 3个内质网应激跨膜蛋白而产生细胞凋亡的。结论 1～4μg/mL油茶皂苷具有抑制人白血病细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其作用机制参与了细胞凋亡的内质网应激途径。     

麝香乌龙丸对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的 观察麝香乌龙丸对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2及其抑制基因bax的影响,探讨麝香乌龙丸对关节软骨的保护作用是否与抑制细胞凋亡与调节bcl-2及bax的表达有关.方法 选用健康日本大耳白兔30只,随机分成正常对照组、造模组、麝香乌龙丸组.用1.6%木瓜蛋白酶膝关节腔内注射,建立兔膝骨关节炎模型, 4周后处死全部动物,取右膝关节胫骨内侧髁软骨,软骨组织切片用TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化法检测关节软骨中bcl-2、bax的水平.结果 麝香乌龙丸组细胞凋亡率明显低于造模组(P＜0.05),bcl-2在麝香乌龙丸组中的表达高于造模组(P＜0.05),bax的表达低于造模组(P＜0.05).结论 麝香乌龙丸通过上调bcl-2的表达,下调bax的表达,达到抑制兔实验性膝骨关节炎软骨中软骨细胞的过度凋亡,这可能是该药治疗骨性关节炎机制之一.     

软脂酸对人脐静脉血内皮祖细胞增殖、凋亡及Bcl-2表达的影响

目的探讨软脂酸（PA）对人脐静脉血内皮祖细胞（EPC）增殖、凋亡及Bcl-2表达的影响。方法密度梯度离心法获取人脐静脉血单个核细胞,培养7d后,收集贴壁细胞并加入不同浓度软脂酸（分别为200mmol/L、400mmol/L、600mmol/L）干预48h。MTT法检测PA对EPC增殖能力的影响;流式细胞仪检测PA对细胞凋亡率的影响;提取细胞RNA,采用逆转录一聚台酶链式反应（RT-PCR）技术检测Bcl-2mRNA表达;采用免疫组织化学法检测Bcl-2蛋白表达水平。结果PA呈浓度依赖性抑制EPC增殖,诱导EPC凋亡（P〈0.05或P〈0.01）;基础状态下EPC表达Bcl-2mRNA及蛋白,PA处理能抑制其表达,并存在量效关系（P〈0.05或P〈0.01）。结论PA通过下调Bcl-2表达诱导EPC凋亡、抑制EPC增殖,这可能影响血管内皮的修复及新生血管的形成。     

熊果酸诱导HL-60细胞凋亡机制的探讨

目的：本实验拟用熊果酸干预处理人急性早幼粒白血病HL-60细胞,体外培养实验,证实其对HL-60细胞的增殖抑制和促进诱导凋亡作用,并通过免疫细胞化学方法检测bcl-2,survivin在熊果酸与该细胞株作用后表达,探讨熊果酸诱导HL-60细胞调亡可能的分子机制。方法：荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期相分布及细胞凋亡率：琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA;免疫细胞化学方法检测Bcl-2、Survivin蛋白。结果：荧光显微镜下观察,80gmol／LUA作用24h的HL一60细胞可看到典型的细胞凋亡形态学变化;40umol／L、80umol／LuA可使G0／G1期细胞增多,出现G0／G1期阻滞,S期和G2／M期细胞数减少,凋亡细胞峰（sub-G1）及凋亡率逐渐增高,Bcl-2、Survivin蛋白表达降低,当UA浓度为40gmol／L时,P〈0．01,有显著性差异。结论：UA呈浓度和时间依赖性抑制HL．60细胞增殖,诱导其凋亡机制可能与下调Bcl-2、Survivin蛋白表达有关。     

鲜壁虎冻干粉诱导C6胶质瘤细胞凋亡的血清药理学研究

目的探讨鲜壁虎冻干粉对C6胶质瘤细胞凋亡的影响。方法将30只小鼠随机分为3组,分别给予顺铂腹腔注射,口服鲜壁虎冻干粉及口服等量蒸馏水。20天后,取小鼠血清体外处理C6胶质瘤细胞。通过形态学分析、流式细胞仪及TUNEL法,观察细胞凋亡情况;S—P免疫组化法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果形态学变化、流式细胞仪分析和TUNEL法结果均证实含鲜壁虎血清在体外可诱导C6胶质瘤细胞凋亡;鲜壁虎组与空白对照组比较,细胞内的bcl-2基因表达无明显变化,bax基因表达升高。结论含鲜壁虎血清能够诱导细胞凋亡,其机制可能与上调bax基因有关。     

龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对硝普钠诱导的大鼠软骨细胞bax、bcl-2表达的影响

目的：比较龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对硝普钠（SNP）诱导后软骨细胞bax、bcl-2表达的影响,探讨龟鹿二仙胶的配伍机理。方法：取第三代4周龄SD大鼠关节软骨细胞,经SNP诱导凋亡后,采用免疫组化染色法及Realtime-PCR观察龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对软骨细胞bax、bcl-2表达的影响。结果：龟鹿二仙胶及其拆方各组均可引起bcl-2表达升高及bax下降,与生理盐水组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,龟鹿二仙胶与龟板、鹿角比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：龟板、鹿角、人参、枸杞均具有抑制软骨细胞凋亡的作用,而4味药同用,人参、枸杞并无显著加强龟板、鹿角的抑制凋亡作用。     

夏枯草提取物诱导B、T淋巴瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究夏枯草提取物对人B淋巴瘤Raji细胞及T淋巴瘤Jurkat细胞增殖的影响及其差异,探讨夏枯草提取物体外抗淋巴瘤的作用机制。方法:不同浓度的夏枯草提取物分别作用于Raji细胞及Jurkat细胞;48 h后分别收集各组细胞,应用MTT法、琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞技术分别检测每组细胞的增殖抑制率、细胞凋亡率及细胞凋亡情况;Western blot检测BCL-2及BAX蛋白表达变化。结果:不同浓度的夏枯草提取物对Raji及Jurkat细胞均有明显的增殖抑制作用(P0.01),且对Raji细胞的抑制作用大于Jurkat,其对Raji细胞IC50(18.01±0.92)μg/mL显著低于Jurkat细胞(25.47±0.96)μg/mL(P0.05);凝胶电泳检测结果表明夏枯草提取物处理Raji及Jurkat细胞后均出现凋亡相关DNA Ladder;随夏枯草提取物浓度的增加,Raji及Jurkat细胞的早期凋亡率均显著增加,与空白对照组比较差异显著(P0.01),浓度为15、20、25μg/mL的夏枯草提取物作用于Raji及Jurkat细胞后的早期凋亡率分别为(9.4±0.25)%、(21.68±0.46)%、(35.03±0.35)%和(4.06±0.14)%、(13.59±0.23)%、(22.92±0.20)%,同浓度条件下,Raji细胞的早期凋亡率显著高于Jurkat细胞(P0.01);随夏枯草提取物浓度增加,实验组细胞中BCL-2蛋白的表达逐渐减弱,BAX蛋白的表达逐渐增强,与空白对照组比较均有显著性差异(P0.05),同浓度条件下,Raji细胞内BCL-2蛋白表达的下降程度、BAX蛋白表达的增加程度显著高于Jur-kat细胞(P0.05)。结论:夏枯草提取物具有抑制淋巴瘤细胞增殖的作用,其机制可能与调节BCL-2和Bax蛋白的表达以诱导细胞凋亡有关,且夏枯草提取物对Raji细胞的抑制作用大于Jurkat细胞。     

沙蟾毒精诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制的研究

目的观察沙蟾毒精诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用。方法用M,rr法观察沙蟾毒精对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响：通过荧光染色、流式细胞分析等方法观察沙蟾毒精对细胞凋亡的影响：RT—PCR和Westernblot分析沙蟾毒精对Bcl-2、Bax、p53和p21等基因和蛋白表达的影响。结果沙蟾毒精对人肝癌SMMC-7721细胞的生长有明显的抑制作用,24h半数抑制剂量（IC50）为0．415μg／mL。细胞周期结果显示,人肝癌SMMC-7721细胞经不同浓度的沙蟾毒精处理后,G／M期细胞数量增加,而Go／G,期细胞数明显减少。RT—PCR和Westernblot结果显示,人肝癌SMMC-7721细胞经沙蟾毒精处理后,Bax的表达升高,而bcl-2的表达降低（P〈0．05）。结论沙蟾毒精可能通过线粒体凋亡途径诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡。