儿茶素和漆黄素对柠檬酸铁诱导大鼠原代肝细胞损伤的保护作用

目的　分别从中药苞蔷薇根和叶中提取获得 (+ ) 儿茶素 (CAT )和漆黄素 (FIS)两种黄酮 ,研究其对柠檬酸铁致肝细胞铁超载的药理作用。方法　原代大鼠肝细胞加入 50μmol·L- 1柠檬酸铁诱导肝细胞铁超载。致损伤前加入CAT及FIS或损伤后 2 4h ,加入CAT及FIS ,继续培养 2 4h后 ,测定培养液中的超氧化物歧化酶 (SOD )、乳酸脱氢酶(LDH )、谷草转氨酶 (AST)、谷丙转氨酶 (ALT)活性和白蛋白 (ALB)含量。培养 48h后 ,用MTT法测肝细胞的存活率。结果　在致损伤前加入CAT或FIS ,仅见CAT 5× 10 - 5mol·L- 1和FIS 5× 10 - 5 mol·L- 1对大鼠原代肝细胞的恢复作用与模型对照组相比差异有显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1)。在致损伤后加入CAT或FIS ,可见CAT 5× 10 - 5 、5× 10 - 6 、5× 10 - 7mol·L- 1组 ,FIS 5× 10 - 5 、5× 10 - 6 、5×10 - 7mol·L- 1组均可不同程度的提高培养液中的SOD活性 ,降低LDH水平 ,抑制ALT、AST的释放 ,提高ALB的含量 ,提高培养液中肝细胞的存活率 ,与模型对照组比 ,差异有显著性 (P <0 0 1,P <0 0 5)。FIS 5× 10 - 5 mol·L- 1组与正常对照组相比 ,对于提高SOD活性、ALB含量 ,差异无显著性 (P >0 0 5)。结论　CAT、FIS对柠檬酸铁所致大鼠原代肝细胞的损伤具有保护作用     

内皮素-1对肺组织磷酸胆碱二胞苷酰转移酶的影响

目的　在离体肺组织培养模型上观察低浓度 (1×10 -13 ～ 1× 10 -9mol·L-1)内皮素 1(ET 1)对肺表面活性物质 (PS)脂质主要成分磷脂酰胆碱 (PC)合成的限速酶———CTP :磷酸胆碱二胞苷酰转移酶 (CCT)活性的影响。方法　采用无血清成年大鼠肺组织培养 ,以 [M 14 C]胆碱作为前体参入CDP 胆碱 ,液闪测定14 C放射性强度 ,反映CCT活性。结果　①CDP [M 14 C]胆碱的产量随微粒体和胞浆蛋白量增加、反应时间延长 (0～ 30min)而增多 ;②ET 1(1× 10 -12～ 1× 10 -9mol·L-1)以剂量依赖性提高微粒体CCT活性 ;③ET 1(1× 10 -10 mol·L-1)作用 8h ,微粒体CCT活性开始增强 ,随作用时间延长 (8～ 16h) ,酶活性逐渐增强 ;④ET 1(1× 10 -10 mol·L-1)可提高细胞微粒体CCT活性 ,而降低胞质CCT活性 ;⑤H 7和W 7均可分别抑制ET 1(1× 10 -10mol·L-1)促微粒体CCT活性增强的效应。结论　ET 1可促进肺组织细胞胞质CCT向微粒体转位 ,增加微粒体CCT活性 ,其细胞内信号转导途径与蛋白激酶C和钙调素有关     

甘草酸对血清和组织胺诱发的大鼠气道平滑肌细胞增生的影响

目的　观察甘草酸对血清和组织胺诱发的大鼠气道平滑肌细胞 (ASMC)增生的影响。方法　MTT法、细胞计数法和流式细胞术检测体外培养的ASMC的光密度、细胞数和细胞周期。结果　①在含 10 0g·L-1FCS的培养液中加入 6×10 -5mol·L-1的甘草酸可使A570 的增速增加 ,而加入 384×10 -5mol·L-1和 15 36× 10 -5mol·L-1却使A570 的增速减慢 ;在含 10 -2 mol·L-1组织胺的培养液中加入甘草酸使A5 70的增速减慢 ,浓度越大作用越明显。②在含 10 0g·L-1FCS的培养液中加入 6× 10 -5mol·L-1的甘草酸可促进细胞增生 ,而加入 384× 10 -5mol·L-1和 15 36× 10 -5mol·L-1则抑制细胞增生 ;在含 10 -2 mol·L-1组织胺的培养液中加入甘草酸 ,细胞增生受到抑制 ,浓度越大作用越明显。③在 10 0g·L-1FCS或 10 -2 mol·L-1的组织胺中培养 96h ,随着甘草酸浓度的增加 ,G1期细胞数增多 ,S期和G2 +M期细胞数减少。结论　①对FCS刺激引起的ASMC增生 ,低浓度甘草酸有促进作用 ,高浓度有抑制作用。②对组织胺刺激引起的ASMC增生 ,低浓度和高浓度甘草酸都有抑制作用     

比较鳗鱼降钙素与17β-雌二醇对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响

目的比较鳗鱼降钙素(CT)与17β-雌二醇对大鼠体外培养成骨细胞增殖和分化的影响。方法用酶消化法分离培养新生SD大鼠成骨细胞(OB),取第2继代,在培养液中分别加入不同浓度的CT和17β-雌二醇(E2);用MTT法观察OB的增殖能力(A值)及分化功能(ALP)。结果CT组较对照组从1×10-12mol·L-1起A值增加,且呈剂量依赖关系,当浓度≥1×10-9mol·L-1时,差异才有显著意义(P<0.05);E2组较对照组在1×10-9～1×10-7mol·L-1,A值均增加(P<0.001),以1×10-8mol·L-1作用最明显。CT组较对照组从1×10-12mol·L-1起ALP活性均增加,也呈剂量依赖关系,当浓度≥1×10-10mol·L-1差异有显著性意义(P<0.05);E2组较对照组在1×10-9～1×10-7mol·L-1,ALP活性均增加(P<0.05),以1×10-8mol·L-1作用最强。结论鳗鱼降钙素与17-β雌二醇均可促进大鼠体外培养OB增殖和分化。     

三七总皂苷对抗H_2O_2所致大鼠脑微血管内皮细胞损伤的物质基础研究

目的研究三七总皂苷对H2O2致大鼠脑微血管内皮细胞损伤产生保护作用的物质基础。方法分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC),以MTT和LDH的释放为指标,观察三七总皂苷(TPNS)、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rd、Re和Rb1对RBMEC损伤的保护作用。结果500μmol·L-1的H2O2对原代培养的RBMEC产生明显的损伤。20～200mg·L-1的TPNS,16·0μmol·L-1的R1,37·5～75·0μmol·L-1的Rg1,8·0～16·0μmol·L-1的Rd及5·4～54·0μmol·L-1的Rb1对H2O2致RBMEC的损伤具有明显的保护作用(P<0·05或P<0·01),Re则无此作用。结论TPNS对H2O2所致原代培养的RBMEC损伤具有明显的保护作用,产生这一作用的主要物质基础可能为Rb1、Rg1和Rd。     

金属硫蛋白对同型半胱氨酸损伤血管内皮细胞的拮抗作用

目的　观察金属硫蛋白 (metallothionein ,MT)对同型半胱氨酸损伤血管内皮细胞的拮抗作用。方法　人血管内皮细胞培养 ;自动生化分析仪测乳酸脱氢酶 (LDH)漏出量 ;10 9Cd 血红素饱和法测细胞MT含量 ;台盼蓝排除法计算细胞存活率。结果　同型半胱氨酰 (Hcy) (0 1～ 1 0mmol·L-1)呈浓度依赖性地增加细胞LDH漏出和降低细胞存活率。外源给予MT 5× 10 -8μmol·L-1可呈剂量依赖性的抑制Hcy引起的血管内皮细胞损伤 ,5× 10 -8mol·L-1MT与1 0mmol·L-1Hcy共同孵育组较单纯Hcy孵育组血管内皮细胞LDH漏出降低 2 7 1% (P <0 0 5 ) ,细胞存活增加 6 %(P <0 0 5 )。凝血酶预孵育可诱导培养的血管内皮细胞MT生成 ,其含量较对照组增加 32 5 % (P <0 0 1)。凝血酶诱导内源性MT生成亦明显抑制Hcy引起的血管内皮细胞损伤 ,10 0 0U·L-1凝血酶与Hcy共同孵育组较单纯Hcy孵育组血管内皮细胞LDH漏出降低 46 % (P <0 0 1) ;细胞存活率升高 8% (P <0 0 5 )。结论　无论外源给予MT或内源性诱导MT生成均可降低Hcy引起的血管内皮细胞损伤作用     

甲硫氨酸脑啡肽对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞增殖反应的影响及阿片受体介导机制的研究

目的　研究甲硫氨酸脑啡肽 (Met Enk)对系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血淋巴细胞 (PBL)增殖反应的影响以及纳络酮 (Nal)对其影响的作用。方法　淋巴细胞增殖法。结果　Met Enk(1× 10 -8～ 1× 10 -6mol·L-1)能够促进正常人PBL增殖反应 ,Nal(1× 10 -6mol·L-1)对正常人PBL增殖反应无明显影响 ,但可拮抗Met Enk(1× 10 -6mol·L-1)对正常人PBL增殖反应的促进作用 ;Nal(1× 10 -6mol·L-1)不仅可拮抗Met Enk(1× 10 -6mol·L-1)对SLE患者PBL增殖反应的促进作用 ,而且可直接降低SLE患者PBL增殖反应。结论　内源性Met Enk通过阿片受体参与了SLE患者PBL功能的上调作用     

电化学发光法测定美洛昔康含量的研究

美洛昔康对Luminol电化学发光有强烈的抑制作用,建立了电化学发光法测定美洛昔康含量的新方法。美洛昔康浓度在2.5×10-7~3.0×10-5mol·L-1范围内与发光减少值呈良好的线性关系。检出限为1.0×10-7mol·L-1。对5.0×10-6mol·L-1美洛昔康平行测定10次,相对标准偏差为4.05%。该法具有简便、快速、灵敏的特点,应用于美洛昔康片的测定,结果满意。     

地黄活性成分梓醇对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

目的检测地黄活性成分梓醇对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法制备不同浓度地黄活性成分梓醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型;用MTT法测定不同浓度的梓醇溶液的促细胞增殖作用;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度的梓醇溶液的促细胞分化作用;以Vonkos-sa钙化染色法了解不同浓度的梓醇溶液的促细胞钙化作用。结果梓醇在1×10-7～1×10-9mol·L-1浓度范围内培养24及48h促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-148及72h提高成骨细胞株MC3T3-E1细胞内碱性磷酸酶的活性。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养8及12d时能明显促进成骨细胞MC3T3-E1骨钙素合成和分泌。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养19d时成骨细胞株MC3T3-E1细胞的矿化结节(mineralized bone nodular structure,MBNS)数目增多。结论梓醇可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖和分化能力,梓醇可能是地黄治疗骨质疏松作用的活性成分之一。     

牛磺酸对次氯酸诱导的大鼠肝细胞核核苷三磷酸酶损伤的保护作用

目的探讨牛磺酸对次氯酸(hypochlorous acid,HOCl)诱导的大鼠肝细胞核核苷三磷酸酶(NTPase)损伤的保护作用。方法体外分离大鼠肝细胞核,用HOCl单独或与牛磺酸共同孵育,分别以ATP和GTP作底物检测核NTPase的活性。结果ATP和GTP作底物时,HOCl(1×10^-9～5×10^-6 mol·L^-1)以浓度依赖的方式抑制NTPase活性。牛磺酸(1×10^-6～1×10^-4 mol·L^-1)可显著拮抗HOCl(1×10^-6 mol·L^-1)导致的NTPase活性降低。另外,牛磺酸(1×10^-6～1×10^-4 mol·L^-1)单独孵育肝细胞核,对NTPase有轻度刺激作用。结论牛磺酸可浓度依赖地拮抗HOCl诱导的肝细胞核NTPase活性下降,此作用可能是其保护机制之一。     

虎杖苷对CCl_4损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的研究虎杖苷（ＰＤ）对ＣＣｌ４损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用。方法原位灌流法分离大鼠肝细胞，培养２４ｈ后加入ＰＤ，同时造成ＣＣｌ４损伤，分别于损伤后６，１２，２４和４８ｈ测培养液中谷丙转氨酶（ＡＬＴ）、丙二醛（ＭＤＡ）和还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）活性，４８ｈ后用ＭＴＴ比色法测肝细胞存活率。结果ＰＤ１×１０－７～１×１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１能不同程度地抑制ＡＬＴ和ＭＤＡ的上升，提高ＧＳＨ水平，显著提高细胞存活率，以１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１效果最好。结论ＰＤ１×１０－７～１×１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１能有效保护ＣＣｌ４造成的原代培养大鼠肝细胞损伤     

大黄素对大鼠体外颅骨成骨细胞的影响

目的观察大黄素对体外大鼠颅骨成骨细胞细胞周期、骨钙素含量、骨结节数目和面积、Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。方法在成骨细胞体系中加入不同浓度的大黄素,应用流式细胞术、放射免疫测定法、茜素红染色法及RTPCR的方法观察大黄素对大鼠颅骨成骨细胞的增殖、骨钙素含量、骨结节数目和面积、Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。结果大黄素可刺激成骨细胞分泌骨钙素。低浓度的大黄素可上调Ⅰ型胶原基因的表达,高浓度时则降低Ⅰ型胶原的基因表达。结论大黄素可以刺激成骨细胞分泌骨钙素和增加Ⅰ型胶原mRNA的表达。     

大鼠胃壁细胞胃泌素受体的放射配基结合法

目的　建立大鼠胃壁细胞胃泌素受体放射配基结合实验方法。方法　以12 5I [Leu15] gastrin17 I为标记配基 ,以大鼠胃壁细胞悬液为受体制备 ,反应体系总体积为 2 0 0 μl,37℃恒温水浴振荡孵育 30min ,以 49型玻璃纤维滤膜分离结合和游离配基。结果　胃泌素受体结合符合简单单位点结合模型 ,Scatchard作图求出胃泌素受体结合参数Bmax=4 46 0 4× 10 -12 mol·L-1,Kd=1 2 49× 10 -10 mol·L-1。单点法求出特异结合位点数 70 3 2sites·cell-1。细胞浓度在0 2 5× 10 9～ 2× 10 9cells·L-1范围内 ,与标记配基特异性结合容量成正比。同一样品特异结合测定方法变异系数为7 0 4%。竞争抑制实验证明12 5I Gastin与大鼠胃壁细胞结合特异性良好。结论　大鼠胃壁细胞胃泌素受体的放射配基结合实验方法符合受体结合实验方法学要求     

一氧化氮供体预处理对乳鼠心肌细胞的延迟保护作用及其机制

目的　探讨一氧化氮模拟预处理延迟保护作用的机制。方法　体外培养新生大鼠心肌细胞 ,实验分为 :①阴性对照组 (Normal组 ) ;②SNAP组 :一氧化氮 (nitricoxide ,NO)供体S 亚硝基 N 乙酰青霉胺 (S nitroso N acetyl 1 ,1 penicil lamine ,SNAP ,5 0 0 μmol·L-1 )与心肌细胞共育 2 4h ;③Che +SNAP组 :蛋白激酶C拮抗剂白屈菜季铵碱 (chelerythrinechlo ride ,Che ,1 0 μmol·L-1 )处理心肌细胞 30min后 ,加入SNAP与心肌细胞共育 2 4h ;④PDTC +SNAP组 :核因子κB(NF κB)特异性阻断剂PDTC(1 0 0 μmol·L-1 )处理心肌细胞 30min后 ,加入SNAP与心肌细胞共育 2 4h ;⑤缺氧复氧损伤组 (H/R组 ) :心肌细胞缺氧 6h ,复氧 3h。②～④组部分取细胞爬片以免疫组织化学法观察SNAP对热休克蛋白 70 (HSP70 )表达的影响 ;其余细胞经历H/R损伤后 ,检测心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果　在正常心肌细胞免疫组织化学法未检测到HSP70的表达 ,心肌细胞经过H/R损伤后 ,可检测到少量HSP70阳性细胞 ,其阳性染色A值为 94 6± 9 1 ,心肌细胞培养上清LDH活性为 (2 1 90 5± 1 5 1 7)U·L-1 ,细胞存活率为 5 1 7%± 4 6 % ,细胞损伤较正常组加重 (P <0 0 1 ) ;SNAP处理细胞后 2 4h ,HSP70阳性细胞数增多 ,     

重组人白细胞介素-1受体拮抗药对豚鼠离体呼吸道平滑肌的影响

目的　观察人重组白细胞介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)对正常和卵白蛋白致敏豚鼠离体肺条、气管平滑肌的影响。方法　应用离体器官装置、张力换能器、MedLab记录系统测定肺条和气管平滑肌的张力。结果　①IL 1ra对正常豚鼠离体肺条和气管平滑肌有直接松弛作用 ,EC50 分别为1 2 9ⅹ 10 -7mol·L-1和 8 0 6× 10 -8mol·L-1;并对卵白蛋白致敏的豚鼠肺条和气管平滑肌也有直接的松弛作用 ,EC50 分别为 2 6 1× 10 -7mol·L-1和 5 88× 10 -7mol·L-1,但致敏豚鼠呼吸道平滑肌对IL 1ra的敏感性要比正常豚鼠低。②IL 1ra(10 -9～ 10 -5mol·L-1)可剂量依赖性地抑制致痉剂组胺对正常豚鼠肺条和气管平滑肌的收缩作用 (P <0 0 1)。③IL 1ra能抑制卵白蛋白攻击引起的肺条和气管平滑肌的收缩 ,IC50 分别为 7 83ⅹ 10 -7mol·L-1和 4 4 8ⅹ 10 -7mol·L-1。结论　IL 1ra对正常、痉挛及致敏状态的呼吸道平滑肌均有松弛作用     

阿魏酸钠对组胺引起的血管内皮细胞单层通透性增高的作用

目的　本实验观察阿魏酸钠对炎症介质组胺引起的血管内皮通透性增加的作用。方法　从新生牛主动脉分离获得单个内皮细胞 ,培养于微孔滤膜上直至形成致密单层。通过灌流Hanks液或含 5g·L-1白蛋白的Hanks液后 ,测定经 1× 10 -4 mol·L-1组胺溶液加 1× 10 -5mol·L-1阿魏酸钠处理的液体滤过系数 (Kf)、液体滤过流量 (Jv)和蛋白质渗透压反射系数 (σ)。结果　内皮单层经组胺处理后 ,Kf和Jv降低 ,σ升高 ;而阿魏酸钠能够抑制因组胺造成的Kf和Jv降低 ,以及σ升高。结论　组胺能够引起血管内皮单层通透性的增加 ,而阿魏酸钠能够减轻组胺造成的内皮单层通透性的增加 ;其作用机制需要进一步地研究。     

甘草次酸对血管平滑肌细胞c-fos mRNA表达及细胞增殖的影响

目的　研究甘草次酸 (GA)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)原癌基因c fosmRNA表达及细胞增殖的影响 ,探讨GA与血管紧张素Ⅱ (AⅡ )受体结合的可能机制。方法　原代培养大鼠血管平滑肌细胞 ,[3H]TdR参入DNA、MTT分析法、Northernblot。结果　①低浓度GA( 1× 10 -9mol·L-1)及高浓度GA( 1× 10 -5mol·L-1)均能导致c fosmRNA迅速表达 ;1× 10 -5mol·L-1Sar AⅡ能够阻断AⅡ、GA诱导的VSMCc fos表达 ;低浓度和高浓度GA都能促进AⅡ ( 1× 10 -5mol·L-1)诱导的VSMCc fos表达 ;②低浓度GA对细胞的增殖有促进作用 ;随着浓度的升高 ,促增殖作用减弱 ;高浓度GA抑制细胞的增殖。Sar AⅡ单独作用于VSMC ,不影响细胞增殖 ;Sar AⅡ能够阻断AⅡ对细胞增殖的促进作用 ;Sar AⅡ既抑制低浓度GA促细胞增殖作用 ,也消除高浓度GA抑制细胞增殖作用 ;低浓度GA与AⅡ联合作用 ,对细胞增殖的促进作用更加显著 ;高浓度GA与AⅡ联合作用于VSMC ,则可减轻高浓度GA对细胞增殖的抑制作用。结论　GA能激活c fos转录因子 ,从而产生对VSMC的增殖作用 ,因此 ,GA具有AT1受体的激动剂2 0 0 2 0 4 0 3收稿 ,2 0 0 2 0 7 2 3修回作者简介 :张凤云 ,女 ,33岁 ,硕士 ;贺师鹏 ,男 ,67岁 ,教授。研究方向 :酶和受体的拮抗剂样作用     

低浓度毒毛旋花子苷原对离体豚鼠衰竭心脏的影响

目的　研究低浓度毒毛旋花子苷原 (strophanthidin ,Str)对离体衰竭心脏心功能及心肌细胞膜Na+,K+ ATP酶活性的影响。方法　Langendorff离体心脏灌流装置制备戊巴比妥钠心衰模型 ,八道生理记录仪测定不同浓度Str对心功能的影响 ,无机磷法测定各组心肌细胞膜Na+,K+ ATP酶活性。结果　Str 1× 10 -9～ 1× 10 -7mol·L-1均能不同程度地持续增加衰竭心脏的心率、左室收缩压及左室收缩的最大速率 ,但 1× 10 -7mol·L-1对Na+,K+ ATP酶活性无明显抑制 ,1× 10 -10 ～ 1× 10 -8mol·L-1则可升高Na+,K+ ATP酶的活性 (P <0 0 5或P <0 0 1)。 1× 10 -6 ～ 1× 10 -4 mol·L-1可使心功能指标先升高、后降低 ,且伴有心脏收缩不规则和心律失常 ,也可剂量依赖性地抑制Na+,K+ ATP酶活性 (P <0 0 1)。结论　高浓度Str的正性肌力及伴有的心脏毒性作用是通过抑制Na+,K+ ATP酶实现的 ;而低浓度的正性肌力作用则和Na+,K+ ATP酶抑制无关     

糖基化白蛋白液中糖含量的不同定量方法比较

目的探讨测定糖基化白蛋白反应液中葡萄糖含量的适宜方法。方法对3熏5-二硝基水杨酸法、邻甲苯胺法和苯酚-硫酸法三种不同测定糖含量方法进行研究比较。结果3熏5-二硝基水杨酸法、邻甲苯胺法、苯酚-硫酸法测定糖的线性范围分别为:2.5×10-5～3.0×10-4mol/L,3.0×10-5～3.0×10-4mol/L,2.5×10-5～2.5×10-4mol/L;直线回归方程为:y=0.01780x-0.05400穴r=0.9991雪,y=0.006029x+0.004286穴r=0.9988雪,y=0.01554x-0.001905穴r=0.9994雪;摩尔吸光系数为:6.5×103L/mol·cm,2.4×102L/mol·cm,2.4×104L/mol·cm;回收率分别为:101.9%～108.0%,92.3%～109.1%,94.3%～104.5%。结论苯酚-硫酸法具有操作简便、准确、灵敏、快速、显色后颜色稳定等优点,适用于测定糖基化白蛋白样品中的糖含量。