亚低温减轻沙土鼠海马前脑缺血再灌注损伤和对Hsp70表达的影响

目的观察亚低温(维持沙土鼠鼓膜温度在33℃,持续4h)对前脑缺血再灌注后沙土鼠海马CA1区细胞损伤和热休克蛋白70(Hsp70)表达的影响,研究亚低温减轻脑损伤可能的机制。方法采用沙土鼠前脑缺血再灌注损伤模型:双侧颈总动脉阻断5min。随机分为假手术组(SH组),假手术低温组(HSH组),再灌注常温组(IR组),再灌注低温组(HIR组),根据再灌注的不同时间点(2h、4h、1d、3d、5d)每组又分为5个对应的亚组(每亚组n=6)。在预定时间点行行为学检查,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测海马CA1区的凋亡细胞,免疫组化检测Hsp70在海马CA1区的动态变化。结果亚低温处理4h可减轻缺血沙土鼠的行为学异常,减少海马CA1区的凋亡细胞,促进Hsp70蛋白1d后的表达。结论 4h亚低温增加沙土鼠5min前脑缺血再灌注后海马CA1区Hsp70的表达,可能是其减少凋亡细胞产生脑保护作用的机制之一。     

全脑缺血再灌注损伤后ERK在大鼠海马的表达及热休克预处理对其表达的影响

目的: 研究全脑缺血再灌注损伤后ERK在SD大鼠海马的表达及热休克预处理对其表达的影响,以阐明ERK在脑缺血再灌注损伤中作用机制. 方法: 健康雄性SD大鼠90只,随机分为假手术组(SO组,n=30),缺血再灌注组(IR组,n=30),热休克预处理组(HSP组,n=30),以四血管法建立全脑缺血再灌注模型,将大鼠置于42℃中15 min行热休克预处理,全脑缺血6 min后2, 6, 12, 24 h, 3, 5 d再灌注后处死,取海马组织行HE染色,ERK免疫组化染色,TUNEL法检测凋亡细胞. 结果: IR缺血再灌注后2 h ERK在CA1区开始表达,24 h达到高峰,5 d仍有表达,CA3区弱于CA1区,同时CA1区细胞损伤明显,HSP组ERK在CA1和CA3区相应时点均弱于IR组(P＜0.05),细胞损伤轻微,凋亡细胞减少(P＜0.05). 结论: 全脑缺血再灌注损伤后ERK过度表达参与了神经元损伤过程,热休克预处理通过下调ERK过度表达具有脑保护作用.     

脑缺血预处理后凋亡相关基因Bcl-2、Bax在海马CA1区的表达及意义

目的　探讨脑缺血预处理后凋亡相关基因Bcl-2、Bax在海马CA1区的表达及意义。方法　采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断缺血再灌注损伤模型。随机分为假手术组 (SH)、预处理对照组 (IC)、预处理缺血组 (IP)及脑缺血再灌注组 (IR) ;每组据再灌注时间点不同又分 1、3、5及 7d 4个亚组 ,每组 6只动物。在预定时间点行开阔法行为学检查、TUNEL法海马CA1区凋亡细胞检测 ,免疫组织化学ABC法测定Bcl -2、Bax蛋白在海马CA1区的动态变化。结果　IP可显著减少沙土鼠探索活动及海马CA1区凋亡锥体细胞数量 (与IR组相比 ,P <0 .0 1) ,诱导Bcl-2蛋白及抑制Bax蛋白表达 (与IR组相比 ,P <0 .0 1)。结论　脑缺血预处理有确切的脑保护作用 ,调控凋亡相关基因Bcl -2、Bax蛋白的表达可能是其作用机制之一     

沙土鼠前脑缺血后海马P53蛋白的表达及氯化锂的干预作用

目的:观察沙土鼠前脑缺血时海马区P53蛋白的表达并探讨氯化锂对其干预作用。方法:夹闭沙土鼠双侧颈总动脉5min,制备前脑缺血损伤模型。沙土鼠54只,随机分为假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)、氯化锂预处理组(LI组)。依术后处死动物时间的不同,每组再分为3个亚组(SH1d、SH3d、SH7d;IR1d、IR3d、IR7d和LI1d、LI3d、LI7d),每个亚组6只动物。苏木精-伊红染色观察海马区病理变化,免疫组化(SP法)检测海马CA1区P53蛋白的表达。结果:①苏木精-伊红染色LI组中LI3d、LI7d亚组海马区神经元损伤程度明显较IR组中相对应的IR3d、IR7d亚组为轻,LI3d、LI7d亚组海马CA1区存活锥体细胞数明显多于相对应的IR3d、IR7d亚组(P<0.01);②P53免疫组化IR组于再灌注后1天P53蛋白表达增高,3天后显著增高,再灌注后7天有所下降,但仍高于SH组;LI组P53蛋白的表达显著低于相应的IR组(P<0.01)。结论:①氯化锂预处理能显著减少沙土鼠短暂前脑缺血后海马CA1区神经元死亡;②下调促凋亡基因P53蛋白的表达可能是氯化锂产生脑保护作用的机制之一。     

新生鼠脑缺血再灌注后海马CA1区HSP70的表达

目的观察新生Wistar鼠脑缺血再灌注后海马CA1区热休克蛋白70(HSP70)表达的意义.方法应用免疫组化的方法观察新生鼠脑缺血再灌注后不同时点脑组织HSP70的表达.结果缺血再灌注6h后HSP70表达开始增高,24h达高峰,持续升高至第3天,其COD值与对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论新生鼠脑缺血早期可诱导海马CA1区HSP70表达和合成增加,表明HSP70参与了脑缺血的病理生理过程,可能与脑缺血后神经细胞的内源性保护机制有关.     

姜黄素对缺血-再灌注H9c2心肌细胞的保护作用及对热休克蛋白27表达的影响

目的 探讨姜黄素对缺血-再灌注损伤的H9c2心肌细胞热休克蛋白27(Hsp27)表达的影响及意义.方法 利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟缺血-再灌注处理,同时随机分为缺血-再灌注、缺血-再灌注+姜黄素组和对照组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,JC-1法检测各组线粒体膜电位情况,噻唑蓝法检测各组细胞存活率,Western blot法检测各组Hsp27蛋白表达水平.结果 姜黄素组干预后的早期、晚期和总细胞凋亡率[分别为(4.9±0.6)%、(5.8±1.3)%和(10.7±1.5)%]均较缺血-再灌注组[分别为(8.6±2.1)%、(19.3±2.4)%和(27.9±3.2)%]明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).姜黄素组低电位细胞比例数[(38.2±2.4)%]较缺血-再灌注组[(59.3±7.5%)%]明显降低,而姜黄素组细胞的后续存活率和Hsp27蛋白表达水平[分别为(81.3±1.3)%和(109.1±9.3)%]均显著高于缺血-再灌注组[分别为(30.5±2.0)%]和(78.6±6.6)%],差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 诱导Hsp27蛋白高表达可能是姜黄素减轻心肌细胞缺血-再灌注损伤的重要机制之一.     

亚低温减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CAl区Bax表达变化的关系

目的研究亚低温（33℃,4h）减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CA1区Bax表达变化的关系,探讨亚低温脑保护的可能机制。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断5min前脑缺血／再灌注损伤模型,随机分为假手术组（SH）、常温再灌注组（IR）、低温假手术组（HSH）、低温再灌注组（HIR）,每组根据再灌注的不同时间点（2h、4h、1d、3d、5d）又分为5个对应的亚组（／Z=6）。在预定时间点行开阔法迷宫检查,TUNEL法检测海马CA1区的凋亡细胞,苏木精-伊红染色检测海马存活细胞,免疫组化检测Bax在海马CA1区的动态变化。结果4h亚低温可显著减少缺血沙土鼠1d、3d、5d的探索活动及CA1区的凋亡细胞,增加存活细胞,抑制脑缺血后海马CA1区Bax的早期表达（2h、4h、1d）。结论4h亚低温对沙土鼠5min前脑缺血有确切的保护作用,抑制海马CA1区缺血／再灌注早期Bax的表达可能是其减少海马细胞凋亡、产生脑保护作用的机制之一。     

缺血预处理减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤与海马CA1区p-p38MAPK表达的关系

目的:研究脑缺血预处理减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤与海马CA1区磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)含量之间的关系?方法:采用双侧颈总动脉夹闭造成前脑缺血的动物模型?动物随机分为假手术组(SH组)?预缺血组(IA组,前脑缺血3 min)?缺血再灌注组(IR组)?预处理组(IP组)?后3组末次缺血后再分为再灌注15 min?2 h?6 h?1 天和5 天时间点,每时间点8只动物?前4亚组用免疫组化法测定海马CA1区p-p38MAPK含量?再灌注1 天?5 天2亚组观察行为学变化和海马CA1区形态学存活细胞数目?结果:IA组?IR组?IP组沙土鼠海马CA1区再灌注15 min?2 h?6 h和1 天 p-p38MAPK表达均多于SH组,差异有统计学意义(P < 0.01 );IR组沙土鼠海马CA1区再灌注15 min?2 h?6 h和1 天 p-p38MAPK表达均多于IA组,差异有统计学意义(P < 0.01 );IP组沙土鼠海马CA1区再灌注15 min和2 h p-p38MAPK表达多于IA组,差异有统计学意义(P < 0.05),再灌注2 h?6 h和1天 p-p38MAPK表达较IR组下降,差异有统计学意义(P﹤0.05)?IA组与SH组沙土鼠行为学改变无统计学意义(P > 0.05);IR组沙土鼠再灌注1天和5天探索活动均较IA组增多,差异有统计学意义(P < 0.01);IP组沙土鼠再灌注1天?5天探索活动均少于IR组,差异有统计学意义(P < 0.01 )?IR组沙土鼠海马CA1区再灌注1天和5天存活神经元少于IA组,差异有统计学意义(P < 0.01);IP组沙土鼠海马CA1区再灌注5天存活神经元多于IR组,差异有统计学意义(P < 0.01 )?结论:3 min预缺血可引起海马CA1/3区p-p38MAPK水平轻度升高,但能降低24 h后5 min缺血再灌注引起的海马CA1区p-p38MAPK水平的上升程度?同时缺血预处理减少海马CA1区神经元死亡,并改善沙土鼠行为学变化?     

脑缺血预处理对沙鼠前脑缺血再灌注后HSP70表达水平及学习记忆能力的影响

目的研究脑缺血预处理对沙鼠前脑缺血再灌注后热休克蛋白70(HSP70)表达水平及动物学习记忆能力的影响。方法100只蒙古沙鼠随机分成假手术(Sham)组、前脑缺血再灌注(I/R)组、脑缺血预处理(IP)组,放线菌酮+脑缺血预处理(Cycloheximide+IP)组,每组25只。后3组参照Kirino法制备前脑缺血动物模型,Kitagawa法制备脑缺血预处理动物模型。再灌注后1、2、3d取各组动物脑组织行H-E染色,观察海马CA1区神经元形态变化;用TUNEL法检测神经细胞凋亡情况;用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测HSP70的表达水平。再灌注后3、4、5、6、7d用4-PTT旱路迷宫法对沙鼠的学习记忆能力进行评定,各取均值。结果与Sham组比较,I/R组沙鼠海马CA1区存活神经元密度降低(P<0.05),神经细胞凋亡数量增多(P<0.05),HSP70表达量增加(P<0.05),学习记忆能力下降(P<0.05);与I/R组比较,IP组中沙鼠海马CA1区存活神经元密度增加(P<0.05),凋亡神经细胞数量回降(P<0.05),HSP70表达水平进一步增加(P<0.05),学习记忆能力得到改善(P<0.05);而...     

托吡酯对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的　观察托吡酯对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后脑神经细胞的病理改变及细胞凋亡的影响。方法　沙土鼠 30只 ,随机分为⑴假手术组 ,⑵缺血再灌注组 ,⑶预防性托吡酯组。采用双侧颈总动脉夹闭法复制沙土鼠脑缺血再灌注模型 ,术后 3d处死动物取材 ,石蜡切片 ,光、电镜观察海马CA1 区神经细胞形态的改变 ;TUNEL法显示凋亡细胞。结果　缺血再灌注组CA1 区神经细胞呈缺血性改变 ,预防性应用托吡酯能明显减轻海马CA1 区神经细胞缺血性损伤 ,细胞凋亡的表达明显减少 ,与缺血再灌注组比较有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　托吡酯能减轻沙土鼠脑缺血再灌注所致的神经细胞损伤及凋亡 ,对缺血再灌注损伤有明显的保护作用。     

Bcl-2和Bax在缺血预处理保护海马神经元缺血再灌损伤中的作用

目的:探讨凋亡相关基因bcl-2和bax在缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)保护大鼠海马神经元缺血再灌损伤中的作用。方法:随机将动物分为IPC加缺血再灌组(IPC组)、单纯缺血再灌组(IR组)和对照组。观察海马CA1区神经元的组织形态学变化;TUNEL染色检测海马CA1区神经元凋亡;免疫组化测定海马CA1区神经元Bcl-2和Bax的表达。结果:IPC组海马CA1区神经元存活数显著多于IR组,凋亡细胞数显著低于IR组,Bcl-2呈强表达,Bax表达不明显。结论:IPC诱导Bcl-2表达上调和Bax蛋白表达下调,可抑制凋亡的发生,对海马CA1区神经元缺血再灌损伤起保护作用。     

利用冰冻切片技术检测大鼠全脑缺血后海马CA1区线粒体细胞色素C变化

目的利用冰冻切片技术检测大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元线粒体CytC的变化.方法采用4-VO法制作全脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术对照组、全脑缺血组.观察缺血后24 h海马CA1区细胞色素C(Cytochrome C,CytC)变化.结果缺血后24 h,假手术组海马CA1区CytC呈阳性表达,并且呈现出特异性的点状分布,符合CytC线粒体分布的特征,全脑缺血组海马CA1区CytC表达明显降低.结论利用冰冻切片技术能方便、直观的检测脑缺血再灌注后神经元线粒体CytC的变化,再灌注24小时海马CA1区神经元线粒体CytC明显下降.     

海马不同地区域缺血时损伤和hsp70mRNA表达差异

目的：探讨缺血再灌注后鼠脑海马CA1区选择性易损伤和迟发神经元死亡现象,以及hsp70mRNA差异表达的可能机制。方法：观察鼠前脑缺血再灌注时,海马CA1区、CA3区及齿状回锥体细胞在组织学变化;以及原位杂交技术检测各区hsp70mRNA的诱导表达。结果：缺血再灌注7d后海马CA1区锥体细胞缺失明显,而CA3区及齿状回未见明显形态学变化。CA1区hsp70mRNA的诱导较其余两区迟,而持续时间较长。结论：在缺血早期加强或在缺血后期抑制hsp70mRNA的诱导,有可能保护CA1区锥体细胞。     

缺血预处理经抑制线粒体释放细胞色素C减轻大鼠海马神经元缺血再灌注损伤

目的：探讨线粒体细胞色素C的释放在缺血预处理（IPC）保护大鼠海马神经元缺血再灌注损伤中的作用。方法：动物随机分为单纯缺血再灌组（IR组）、IPC加缺血再灌组（IPC+IR组）和对照组。HE染色观察海马CA1区神经元的组织形态学变化;TUNEL染色检测该区神经元凋亡;免疫组化测定该区神经元细胞色素C的表达。结果：IPC+IR组海马CA1区神经元存活数显著多于IR组,凋亡细胞数显著低于IR组,细胞色素C 的释放明显少于IR组(P均＜0.001)。结论：IPC可经阻止线粒体释放细胞色素C抑制凋亡的发生,对海马CA1区神经元缺血再灌损伤起保护作用。     

姜黄素对全脑缺血再灌注大鼠海马高迁移率族蛋白1表达及凋亡的影响

目的 观察姜黄素对全脑缺血再灌注后大鼠海马高迁移率族蛋白1(HMGBl)表达及神经元凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠192只,随机分成假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)、姜黄素组(Cur组,200 mg/kg缺血前1 h腹腔注射)及溶剂对照组(SC组).建立四动脉阻塞全脑缺血冉灌注模型,在再灌注后1、3、5、7 d处死大鼠;HE染色观察海马神经细胞形态,TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,免疫蛋白印迹法对海马HMGBI表达行半定量分析.结果 IR组及SC组海马CA1区各点凋亡细胞数明显多于sH组,Cur组再灌注1、3、5、7 d凋亡细胞数分别为IR组的41%、57%、65%、70%(P＜0.05).IR组(0.685±0.050)及Sc组(0.695±0.053)再灌注1 d HMGB1表达水平明显低于SH组(0.977±0.063,P＜0.05),再灌注3 d(1.360±0.045,1.353±0.045)、5 d(1.342±0.046,1.338±0.047)、7 d(1.319±0.052,1.322±0.035)表达水平明显高于SH组(0.992±0.031,0.978±0.090,0.992±0.075,P＜0.05).Cur组再灌注1 d HMGB1表达水平(0.842±0.063)明显高于IR组、SC组但低于SH组(P＜0.05),再灌注3 d(1.125±0.023)、5 d(1.098±0.073)、7 d(1.087±0.089)表达水平明显低于IR组及sC组(P＜0.05).SC组与IR组相比差异无统计学意义.结论 SD大鼠全脑IR后1 d海马HMGB1表达明显减少,后升高并持续高表达至再灌注7 d.姜黄素减轻海马神经元凋亡及损伤的机制可能与抑制HMGB1的合成与释放有关.

Abstract：

Objective To explore the effects of curcumin on the expression of high mobility group box 1(HMGB1)and apoptotic neurons in hippocampus after global cerebral ischemia/reperfu8ion in SD rats.Methods A total of 192 male SD rats were randomly divided into 4 groups:sham group(SH),ischemia-reperfusion group(IR),cureumin group(Cur)and solvent control group(SC).Bilateral vertebrate arteries were electroeauterized and bilateral comlnon carotid arteries libemted in 3 ischemic groups.Isasteric curcumin solutions(200 mg=/kg)or menstruum were injected intraperitoneally at 1 hour preischemia in Cur and SC groups.The rats in each group were ligated for 15 minutes and then decapitated at slides.Apoptotic neurons were detected in CA1 region by TUNEL(terminal deoxynueleotidyl transferasemediated dUTP-biotin nick end labeling).Western blot was used to make a semi-deternination of HMGB1 expression.Results At each time point,tlle number of apoptotic neurons was much more in IR and SC groups than that in SH group(P＜0.05).And the number of apoptotie neurons at 1,3,5,7 d postreperfusion was only 41%,57%,65%and 70%in Cur group respectively(P＜0.05).The exPressional level of HMGB1 in IR and SC groups was significantly lower at 1d post-reperfusion(0.685±0.050:0.695±0.053 vs 0.977±0.063,P＜0.05).And it was significantly higher at 3,5,7 d post-reperfusion in IR and SC groups than that in SH groups(1.360±0.045/1.353±0.045;1.342±0.046/1.338±0.047;1.319±0.052/1.322 ±0.035 vs 0.992±0.031;0.978±0.090;0.992±0.075,P<0.05).The level at 1 d post-reperfusion(0. 842±0. 063)in Cur group was significantly higher than that in IR and SC groups but lower than that in SH group. And it was lower at 3, 5, 7 d post-reperfusion (1. 125 ± 0. 023, 1. 098 ±0. 073, 1. 087 ± 0. 089) than those in IR and SC groups (P＜0. 05). There was no significant difference of HMGB1 expression level between IR and SC groups. Conclusion The expression level of HMGB1 in hippocampus is significantly reduced at 1 d post-reperfusion. Then it significantly increases and a high level is maintained until 7 d after global cerebral ischemia/reperfusion. Cureumin can reduce hippocampal neuronal apoptosis and injury. Such an effect may be due to an inhibition of the synthesis and release of HMGB1.     

低压缺氧对大鼠全脑缺血／再灌注后海马CA1区GLT-1表达的影响

目的探讨低压缺氧预处理对大鼠全脑缺州再灌注后的神经保护作用。方法将Wistar大鼠随机分为假手术组、低压缺氧对照组、全脑缺血／再灌注组、低压缺氧预处理＋全脑缺血／再灌注组。间断暴露于低压缺氧（大气压为70．66～70．93kp）环境的大鼠[（1次／d）×4d]作为低压缺氧对照组。采用Pulsinelli四血管闭塞法复制大鼠全脑缺At／再灌注模型,夹闭颈总动脉造成全脑缺血8min后再灌注。硫堇染色观察大鼠海马组织学改变;免疫组织化学方法观察神经胶质细胞谷氨酸转运体亚型-1阳性细胞表达变化,并将四组结果进行比较。结杲Wistar大鼠低压缺氧预处理全脑缺血／再灌注组海马CAl区存活细胞数较全脑缺血／再灌注组明显增加,其神经胶质细胞谷氨酸转运体亚型-1阳性细胞表达量较全脑缺血／再灌注组显著升高。结论低压缺氧可通过上调神经胶质细胞谷氨酸转运体亚型-1的表达,减少神经细胞的死亡,发挥神经保护作用。     

新生鼠脑缺血再灌注后海马CA1区突触素的表达及意义

目的 :观察新生Wistar大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区突触素的表达 .探讨中枢神经系统的可塑性 .方法 :应用免疫组化方法观察新生鼠脑缺血再灌注后不同时点脑组织突触素的表达 .结果 :缺血再灌注 3d突触素表达开始增高 ,7d达高峰 ,1 4d时免疫活性仍高 ,其矫正吸光度值与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 1 ) .结论 :新生Wistar大鼠脑神经细胞损伤后具有修复的可塑性 ,其时间持续至缺血再灌注后 1 4d .突触素检测能较好地反映神经元和轴突的代偿再生情况     

全脑缺血再灌注后HSP70的表达及其与缺血耐受关系的实验研究

目的：研究不同时间大鼠全脑缺血预处理诱导热休克蛋白70(HSP70)的表达及其与缺血耐受间的关系。方法：用改良的四动脉阻断法制备全脑缺血模型，分别预缺血1、2、5、10min。2天后用免疫组化SP法检测海马CAl区HSP70的表达，相同的预缺血分组间隔2天再次给予20min的全脑缺血，5天后观察海马CAl区的病理学改变。结果：预缺血1min组未见HSP70表达，2min组少量表达，5min组大量表达，10min组表达减少。预缺血1min组和10min组再缺血后CAl区锥体细胞大量坏死，2min组和5min组坏死细胞较少。结论：HSP70是脑缺血敏感的应激标志，与脑缺血耐受的机制有关，在一定的缺血时间窗内存在量效关系。