大鼠局灶性脑梗死皮层血流量和c-fos表达的实验研究

目的探讨大鼠局灶性脑梗死后皮层血流量和c-fos表达的变化。方法光化学法诱导大鼠局灶性脑梗死模型,应用激光多普勒微循环测量仪检测局灶性脑梗死后各时间点坏死区和半暗带皮层血流量,采用SABC免疫组化法检测局灶性脑梗死后各时间点c-fos阳性反应的表达情况。结果脑梗死后坏死区皮层血流量呈波浪样改变,3h降至最低,为正常血流量的(9.36±1.72)%,6h后回升,12h达高峰,为正常的(31.18±1.44)%,24～48h血流量再度下降,与3h相比无显著性差异(P>0.05)。半暗带皮层血流量6h降至最低,为正常皮层血流量的(30.88±7.11)%,9～48h呈上升趋势,至48h血流恢复至正常的(91.90±4.56)%,较其它组有显著性差异(P<0.05)。c-fos在脑梗死发生30min时半暗带区即有大量蛋白表达,并随时间的延长表达量相应增加,直至6h达表达高峰;在梗死后3h整个同侧皮层出现c-fos的弥漫性表达,6h发现梗死对侧大脑皮层亦有表达。观察9h后各个时间点的表达量逐渐减少,且只限于梗死的半暗带区。在坏死区均未见c-fos表达。结论局灶性脑梗死后皮层血流量和c-fos的表达具有明显的时间和空间的变化规律。     

大鼠局灶性脑梗死后细胞凋亡及热休克蛋白70表达的变化

目的 探讨大鼠局灶性脑梗死后热休克蛋白70(HSP70)及细胞凋亡的变化。方法采用光化学法诱导制作大鼠局灶性脑梗死模型，冰冻切片行HSP70免疫组化染色，并用TdT-介导duTP-生物缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞。结果免疫组化显示对照组和假手术组动物无HSP70免疫反应；局灶性脑梗死组12h即有：HSP70的表达，48h时HSP70表达至高峰，阳性反应局限于半暗带。TUNEL结果显示，对照组和假手术动物无凋亡细胞；局灶性脑梗死组6h时在半暗区凋亡细胞出现，3d达高峰。结论局灶性脑梗死可诱导HSP70的表达、神经细胞凋亡，两者的分布一致，但HSP70的表达高峰明显早于细胞凋亡。     

局灶性脑缺血后鼠脑组织tPA基因表达及其与细胞凋亡

目的 探讨局灶性脑缺血后组织型纤溶酶原激活物（tＰＡ）基因的表达及其与细胞凋亡的 关系。方法 用原位杂交和免疫组织化学方法检测tＰＡ基因在大鼠局灶性脑缺血（大脑中 动脉阻塞）后的表达,用ＴＵＮＥＬ法检测缺血不同时间的细胞凋亡状况。结果 脑缺血６h缺血中心部位的胶质细胞和梗死灶周边缺血半影区的神经元均观察到tＰＡ免疫反应性信号,在大脑皮层后肢体区、顶皮层区、海马区和齿状回可见凋亡细胞,但缺血１８h缺血侧神     

大鼠局灶性脑缺血后远隔区域脑损伤及药物干预的研究

目的　观察大鼠局灶性脑缺血后急性期两侧额叶、丘脑、小脑、下丘脑局部脑血流量 (rCBF)和细胞形态学的变化 ;评估川芎嗪对上述变化的干预作用。方法　采用线栓法建立大鼠一侧大脑中动脉闭塞 (middlecerebralarteryocclusion ,MCAO)模型 ;用氢清除法测定两侧额叶、丘脑、小脑、下丘脑在MCAO后 1、3、6和 2 4h的rCBF ;用HE染色和TUNEL法观察两侧额叶、丘脑、小脑MCAO后 6h、2 4h、1周细胞形态学变化。结果　正常对照组各相应部位rCBF无显著差异 (P >0 0 5 ) ;一侧MCAO后 ,两侧额叶皮层、丘脑、下丘脑、对侧小脑半球rCBF下降 ,MCAO后 1h达最低水平 (P <0 0 5或 P <0 0 1) ,随时间延长 ,rCBF逐渐增加 ,除对侧小脑、下丘脑外 ,其余部位rCBF至MCAO后 2 4h基本恢复正常 ;而川芎嗪可明显抑制上述rCBF的下降程度 (P <0 0 5 )。同侧额叶、丘脑在MCAO后 6h开始出现TUNEL阳性细胞 ,2 4h后明显增加 ,至 1周阳性细胞减少 (P <0 0 5 ) ,而川芎嗪可明显抑制上述部位凋亡细胞的产生。结论　局灶性脑缺血后可引起远隔区域有关脑组织rCBF下降 ,并进一步引发细胞凋亡。中药川芎嗪可明显抑制上述变化     

局灶性脑缺血神经细胞DNA损伤与修复机制探讨

目的:观察脑缺血后半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE/Ref-1)的表达, 探讨脑缺血损伤与修复机制。方法: 采用大鼠大脑中动脉阻塞脑缺血模型, 应用免疫组化染色观察caspase-3和APE/Ref-1的表达, 应用TUNEL染色观察神经细胞DNA损伤, 采用免疫双标染色观察APE/Ref-1与DNA损伤的关系。结果:Caspase-3的活性单位P₂₀蛋白主要在半暗带表达, 表达高峰时间早于DNA损伤最高峰的时间。随着缺血时间延长, 缺血周边区APE/Ref-1免疫阳性细胞数量逐渐减少。结论:脑缺血后半胱氨酸蛋白酶级联反应启动, 促使DNA破坏, 同时, DNA损伤的修复分子表达水平下降, DNA修复失败, 进一步加速了细胞凋亡。     

大鼠短暂性局灶性脑缺血早期HMGB1在半暗带区的表达

目的:探讨调节炎症反应的细胞因子HMGB1在脑缺血/再灌注损伤中的时程变化特点。方法:采用大鼠MCAO模型,利用ELISA及免疫组织化学染色方法观察缺血/再灌注后不同时间点脑内HMGB1蛋白的表达变化。结果:ELISA检测提示再灌注后大鼠缺血侧大脑HMGB1表达显著增高,在10 h和70 h形成两次高峰(P<0.05);免疫组织化学染色提示再灌注1 h后部分大鼠(1/5)和再灌注后4,10,22和70 h后全部大鼠梗死区周边半暗带区的细胞外间隙有HMGB1阳性染色颗粒,后期并在部分细胞内出现HMGB1高表达。结论:结果提示,HMGB1不仅与脑缺血/再灌注的晚期损伤有关,亦可能参与了早期损伤过程。     

磷酸化细胞周期素依赖性激酶在局灶性脑缺血大鼠神经细胞中的表达

目的:观察磷酸化细胞周期素依赖激酶在大鼠局灶性脑缺血后神经元和星形胶质细胞的表达。方法:采用大脑中动脉阻塞（MCAO）方法制作大鼠局灶性脑缺血模型,应用免疫荧光技术检测缺血后1 d、3 d、7 d、14 d大鼠缺血侧病灶周围神经元和星形胶质细胞中磷酸化周期素依赖激酶2（CDK2）、磷酸化细胞分裂周期激酶2（CDC2）的表达。结果:在神经元中,与正常对照组相比,缺血后1 d、3 d组磷酸化CDK2的表达量明显增加（P<0.05）,磷酸化CDC2在正常组及缺血组均无明显表达;在星形胶质细胞中,缺血后1 d、3 d、7 d均出现明显的磷酸化CDK2、CDC2的表达,与对照组相比有显著差异（P<0.05）。结论:大鼠局灶性脑缺血后早期部分神经元再次进入细胞周期,细胞周期调控机制可能参与了大鼠局灶性脑缺血后神经元的凋亡及星形胶质细胞的分裂增殖。     

姜黄素降低局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质缺血半暗带神经元丢失

目的探讨姜黄素减轻局灶脑缺血/再灌注损伤的可能机制。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(tMCAO)和姜黄素组(Cur,100 mg/kg腹腔注射)(n=15)。于再灌注后24 h,用Longa评分评价大鼠神经功能;RT-qPCR检测大脑皮质缺血半暗带内Shh、Ptc和Smo mRNA含量;免疫荧光共聚焦检测大脑缺血半暗带内NeuN阳性细胞数量和Gli蛋白在细胞内分布。结果再灌注后24 h,Cur组大鼠Longa评分明显低于tMCAO组(P0.05);Cur组大脑皮质缺血半暗带内NueN阳性神经元较tMCAO组明显增多(P0.05);与sham相比,tMCAO组大脑皮质半暗带内Shh、Ptc和Smo mRNA表达明显升高(P0.05),Cur组上述mRNA进一步升高(P0.05);sham组缺血半暗带内Gli-1蛋白主要分布在细胞质,缺血后Gli-1蛋白部分转位至细胞核,Cur组Gli-1蛋白主要分布在细胞核。结论姜黄素治疗可促进局灶脑缺血/再灌注模型大鼠神经功能恢复,减少大脑皮质缺血半暗带内神经元丢失。     

人参皂甙Rb1阻止大鼠局灶性脑缺血细胞凋亡和诱导NAIP表达

人参皂甙Rb1(GRb1)是人参中一个最重要的有效成分(人参属五加科中一属),能减少大鼠暂时性脑缺血梗塞面积和改善神经功能缺失症状,这种神经保护作用的机制不完全清楚。本实验研究GRb1的神经保护作用是否与防止神经元凋亡和调控神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)的表达有关。通过阻塞大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型,再灌注开始后立即给予腹腔注射GRb1(40mg/kg)。具有神经功能缺失的大鼠被随机分成2组:缺血组和GRb1组,每个组根据再灌注时间(3h,12h,1d,2d,3d,5d,10d,n=4/每时间点)分为亚组。正常大鼠和假手术组做为对照组。TUNEL标记分析凋亡细胞,用免疫组织化学的方法检测NAIP的表达。结果显示再灌注3h凋亡细胞数量开始升高,24h达高峰,后下降,但再灌注10d的凋亡细胞数量显著高于对照组(P<0.01)。与缺血组相比,GRb1各亚组的凋亡细胞数减少,但再灌注12h至3d,其差异具有统计学意义。在对照组,NAIP弱或阴性的免疫反应广泛出现在脑实质神经元。再灌注3h,NAIP阳性细胞增加,12h时达高峰,后下降。再灌注5d,NAIP阳性细胞数量比对照组少(P<0.05)。NAIP阳性神经元出现缺血性改变如扇形或三角形,纹状体星形胶质细胞强表达NAIP。在GRb1组,NAIP阳性细胞数量从再灌注12h到10d,显著高于缺血组。本实验结果提示大鼠局灶性脑缺血时,GRb1能减少细胞凋亡,其机制可能与增加NAIP的表达有关。     

局灶性脑梗死模型大鼠相对体质量、Bederson评分与梗死类型的鉴别

背景：采用MCAO法制作大鼠脑缺血模型时,通过分析Bederson评分结果并不能完全可靠的诊断皮质下梗死。 目的：对SD大鼠皮质梗死和皮质下基底核区梗死在不同时间点的体质量与Bederson评分结果进行比较。 方法：参照Zea Longa的线栓造模方法制作大脑中动脉闭塞模型SD大鼠,栓塞100 min后拔出线栓。术后将大鼠进行磁共振成像扫描,根据有无梗死灶及梗死部位的不同将大鼠分为：皮质下基底核区梗死组(n=13)、皮质梗死组(n=25)、未出现梗死组(n=10)。对3组大鼠大脑中动脉闭塞后7周内的体质量与Bederson评分结果进行监测。 结果与结论:皮质下梗死组与无梗死组在各时间点大鼠相对体质量相比无显著性意义(P > 0.05)。皮质梗死组大鼠的相对体质量在大脑中动脉闭塞后2周内明显小于皮质下梗死组,在大脑中动脉闭塞后3周内明显小于无梗死组(P< 0.05)。皮质下梗死组大鼠造模后第1天Bederson评分结果与皮质梗死组相比差异无显著性意义,但都明显高于无梗死组(P < 0.05)。提示可结合大鼠大脑中动脉闭塞后第1天的相对体质量与Bederson评分结果对大鼠的梗死类型进行鉴别。     

SAPK/JNK信号通路在脑梗死后神经元凋亡中的作用

目的: 观察脑梗死后SAPK/JNK及Bcl-2/Bax信号途径中关键蛋白质的变化,以探寻各种病理因素引发神经元凋亡的分子机制。 方法: SD大鼠36只随机分为脑梗死组和假手术组。光化学法制作大脑皮层局灶缺血梗死模型, 称作光血栓皮层损伤(PCI)。7 d后取梗死灶同侧的大脑皮层行电镜检查,以Western blotting分析p-JNK1、p-JNK2、p-c-Jun、p-ATF-2、total JNK1、total JNK2、Bcl-2和Bax等关键蛋白的水平变化。结果: 光化学法可以成功复制大脑皮层局灶缺血梗死模型。在PCI后7 d,脑梗死组可见到神经元细胞凋亡和广泛的细胞器病变,p-JNK-1、p-JNK-2以及其下游的p-c-Jun、p-ATF-2的水平较假手术组显著升高,Bcl-2/Bax的比值显著降低 (P<0.05)。结论: 脑梗死发生后在较长的一段时间内都存在着以神经元凋亡为表现形式的迟发性神经细胞死亡,而这一过程可能与缺血缺氧性损伤激活了SAPK/JNK信号通路,及调节凋亡相关蛋白(如Bcl-2/Bax)等机制有关。     

脑梗死患者记忆减退与快速眼动睡眠的关系

目的：探讨脑梗死患者记忆减退与快速眼动（ＲＥＭ）睡眠的关系。方法：对４０例脑梗死患者进行记忆测定和多导睡眠图通宵描记,分析有关睡眠参数并与２２名正常人比较。结果：脑梗死患者睡眠潜伏期长,醒转次数增多,总睡眠时间减少,睡眠效率低,ＲＥＭ时间减少,ＲＥＭ活动度和密度均降低（Ｐ＜００１）,其记忆减退与ＲＥＭ减少具有相关性（ｒ＝０６８,Ｐ＜００１）。结论：脑梗死患者不但有睡眠量的减少而且有睡眠质的改变,尤其ＲＥＭ睡眠减少与记忆减退有密切关系。     

黄芪对脑缺血再灌注损伤c-fos表达和细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的保护作用。方法采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCA)血流2h,再灌注24h制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型。将24只Wistar雄性大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注组、黄芪组。造模前1h时黄芪组给与黄芪200mg/kg腹腔注射。假手术组、缺血再灌注组给予等剂量生理盐水。再灌注24h后断头取脑、切片,进行HE染色、c-fos免疫组化染色和细胞凋亡检测。结果缺血2h再灌注24h后,黄芪组和缺血再灌注组大鼠缺血侧皮层可检测到细胞凋亡细胞,黄芪组凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组,假手术组未见凋亡细胞;黄芪组和缺血再灌注组大鼠缺血侧皮层c-fos阳性细胞数均高于假手术组,与缺血再灌注组相比,黄芪组大鼠缺血侧皮层c-fos表达降低。结论黄芪可抑制缺血再灌注损伤后缺血侧皮质的细胞凋亡。     

急性脑梗死患者BAEP与脑血流量相关性研究

目的：探讨脑干听觉诱发电位与脑血流量在急性脑梗死病人中的相关性,方法：对１２０例急性脑梗死患者和８０例上常人进行脑干听觉诱发电位（ＢＡＥＰ）及脑血流量（ＣＢＦ）检测。结果：脑梗死患者ＲＡＥＰ和ＣＢＦ异常率分别为７７％和６８％,病情愈重异常愈明显．脑梗死患者ＢＡＥＰ异常表现为主波潜伏期和波间期均比正常对照组延长（Ｐ＜０．０５～０．０１）,且病情愈重延长明显,ＢＡＥＰ延长患者ＣＢＦ明显低于正常患者（Ｐ＜０．０５～０．０１）。结论：ＢＡＥＰ是初步评价脑梗死患者脑功能和ＣＢＦ的有效手段。     

慢性乙醇中毒大鼠神经细胞凋亡和学习记忆能力下降的关系

目的：观察乙醇对大鼠脑神经细胞及学习记忆能力的影响。方法:采用Morris水迷宫试验测试大鼠学习记忆能力，TUNEL方法对凋亡神经细胞染色，图像分析计数，并计算凋亡率。结果:① 慢性乙醇中毒大鼠逃避潜伏期和路径均比对照组延长，找到平台的路径和时间也比对照组长，P<0.05。② 凋亡神经细胞主要分布在大脑皮质、海马、脑干和小脑与对照组有显著差异，大脑皮质和海马神经细胞凋亡率高于其它部位，P<0.05。结论:慢性乙醇中毒大鼠脑神经细胞凋亡广泛存在，大脑皮质和海马神经细胞凋亡是学习记忆能力下降的病理形态学基础。     

147例脑梗死患者24小时动态脑电图监测

目的：探讨不同类型脑梗死患者动态脑电图（AEEG）变化的特点及对临床诊断的指导价值。方法：147例均应用24小时便携式磁带记录脑电图仪进行监测,并对比分析脑腔隙性梗死组与脑梗死组的AEEG异常程度。结果：AEEG总异常率为88.4％,腔隙性梗死组轻度异常60％,中、重度异常20％;脑梗死组轻度异常23％,中、重度异常77％,两组间存在显著差异（P＜0．01）。腔隙性脑梗死组痫样波检出率3％,脑梗死组痫样波检出率25％,两组间也有显著性差异（P＜0．01）。结论：脑腔隙性梗死以正常和轻度异常AEEG改变多见、痫样波出现率低;脑梗死以中、重度异常AEEG改变明显,痫样波出现率高。AEEG监测对脑梗死的诊断及病情变化均有重要价值。     

Neuroprotective effects of zonisamide on cerebral ischemia injury via inhibition of neuronal apoptosis

It is known that neuronal apoptosis contributes to pathology of cerebral ischemia injury. Zonisamide (ZNS) has shown anti-apoptosis effects in recent studies. The present study investigated whether the anti-apoptotic effect can account for the neuroprotective action of ZNS on cerebral ischemia. Neuronal cells were maintained under oxygen-glucose deprivation conditions to simulate cerebral ischemia and treated with ZNS simultaneously. The apoptosis of the cells and expression of apoptosis-related proteins were investigated by flow cytometry and western blot analysis, respectively. A cerebral ischemia mouse model was created via middle cerebral artery occlusion, and the mice were treated with ZNS. Neurological deficit scores and infarct volumes of the cerebral ischemia mice were measured. The apoptosis status of the neuronal cells was evaluated by TUNEL staining. In vitro, the ZNS treatment inhibited both the apoptosis of the neuronal cells and apoptosis-related protein expression (caspase-3, caspase-8, and calpain-1) induced by the oxygen-glucose deprivation. The anti-apoptosis effect of ZNS could occur through the blocking of reactive oxygen species. Moreover, ZNS treatment significantly ameliorated neurological deficits and reduced infarct volumes in the cerebral ischemia mice model. In this study, ZNS exerted neuroprotective effects by inhibition of apoptosis in neuronal cells in cerebral ischemia. Therefore, ZNS might be a promising therapy for cerebral ischemia.     

川芎嗪联合骨髓间充质干细胞移植抑制脑缺血大鼠神经细胞凋亡

目的:研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对脑缺血大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。方法:采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,传代至第3代用于尾静脉移植。采用线栓法诱导大鼠右侧大脑中动脉阻塞模型,除假手术组外,大鼠随机分为模型组、BMSCs(1×10~9/L)组、川芎嗪(40 mg/kg)组和联合(川芎嗪+BMSCs)组,每组12只。缺血后第1、7和14天采用改良的神经损伤严重程度评分(modified neurological severity scoring,m NSS)进行神经功能评价。缺血后第14天,甲苯胺蓝染色检测脑梗死体积,HE染色观察脑组织病理学变化,采用原位末端标记(TUNEL)法观察神经细胞凋亡数,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测Bax和Bcl-2的mRNA及蛋白表达。结果:与BMSCs组和川芎嗪组比较,联合组m NSS评分显著减少(P0.01),梗死体积显著减少(P0.01),缺血引起的脑缺血周边区病理性损伤明显减轻,TUNEL阳性细胞数显著减少(P0.01),Bcl-2的mRNA及蛋白表达显著增加,Bax的mRNA及蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:川芎嗪联合BMSCs移植能显著促进脑缺血后大鼠的功能恢复,减少梗死体积,减轻脑组织缺血性损伤,抑制神经细胞凋亡,机制可能与调控Bcl-2和Bax的表达有关。     

164例急性脑梗死的脑电图分析

目的 :探讨EEG对脑缺血的早期诊断价值。方法 :回顾性分析 16 4例急性脑梗死患者的EEG资料 ,并与头颅CT作对比研究。结果 :急性脑梗死的早期 (≤ 72h)CT异常率 6 1 6 % ,EEG异常率 88 1% ,两者差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。EEG异常以局限性及广泛伴局限性改变为主( 82 3% ) ;BEAM的α和δ频带功率值局限性改变有助于定侧定位。结论 :EEG在评价急性脑缺血方面有一定的优越性 ,特别是对发病早期CT阴性的病例