原发免疫性血小板减少症动物模型研究进展

原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种以血小板减少、伴或不伴皮肤黏膜瘀紫、鼻衄、内脏出血等为特征的自身免疫性疾病,ITP动物模型是深入研究ITP发病机制与治疗方法的主要手段,在ITP的研究中一直发挥着重要作用。因此,如何制备与临床接近的动物模型是ITP研究领域的关键问题。目前原发免疫性血小板减少症动物模型的研究方法众多,主要有免疫造模、自发免疫模型、转基因造模以及其他造模方法。免疫造模是最常用的方法,实验用动物主要是小鼠,常用的注射途径是腹腔注射,常用的免疫原有抗血小板血清、单克隆/多克隆抗体、血小板等,自发模型与转基因模型比较少用。此外也有结合中医理论开展病证结合模型的研究,主要有ITP热盛证模型,ITP肾阴虚证模型,ITP气不摄血证模型等,为该病的证候研究提供了基础。本文对近些年来ITP疾病、病证结合动物模型的研究进展进行了比较系统的分析与总结,希望对该疾病的动物模型的进一步研究提供参考。     

特发性血小板减少性紫癜脾不统血证动物模型建立

目的 :建立特发性血小板减少性紫癜 (ITP)脾不统血证动物模型。方法 :采用现代医学免疫法腹腔注射抗血小板抗血清 ,结合中医苦寒泻下法灌胃番泻叶水浸剂 ,建立ITP脾不统血证动物模型。观察小鼠一般体征、外周血象、血清D -木糖含量、T淋巴细胞亚群及骨髓巨核细胞计数变化 ,并予中药复健方加减归脾汤治疗。结果 :ITP脾不统血证动物模型符合ITP疾病特点 ,未改变ITP疾病模型的关键指标 ,未影响血小板减少造模法的主要特点 ;同时模型小鼠出现明显脾不统血证主症及脾虚客观指标变化 ,经中药复健方治疗后 ,脾不统血证主症和脾虚指标明显改善。结论 :免疫法结合苦寒泻下法建立ITP脾不统血证病证结合动物模型方法可靠 ,重现性强 ,为中医药研究治疗ITP脾不统血证提供了较为合适的动物模型。     

骨质疏松肾阴虚型小鼠病证结合模型建立的实验研究

目的采用病、证模型复合方法建立骨质疏松肾阴虚型病证结合模型。方法雌性昆明小鼠45只,随机分为对照组(A组)、骨质疏松症模型组(B组)、骨质疏松肾阴虚型模型组(C组),每组15只。骨质疏松模型采用去势法复制,骨质疏松肾阴虚模型采用去势结合甲状腺素灌服法诱导。通过观察小鼠的症状体征、下丘脑-垂体-靶腺轴(肾上腺,甲状腺)相关指标及环磷酸腺苷(cAMP)与环磷酸鸟苷(cGMP)等验证肾阴虚证;通过测定骨密度、骨组织形态学及护骨素(OPG)和细胞核因子κB受体激活物配基(RANKL)基因表达等评估骨质疏松症。结果与A组小鼠相比,C组动物出现明显的毛发干枯,大便干结,体质量下降,肛温升高等类似肾阴虚表现,促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)含量升高,cAMP/cGMP升高,股骨及腰椎骨密度降低,骨组织HE染色及骨形态计量学示明显骨质疏松症征象,骨组织OPG表达下调,RANKL表达上调。与B组相比,C组在骨密度、骨组织形态学、OPG及RANKL基因表达,差异均无统计学意义。结论去势结合甲状腺素复制骨质疏松肾阴虚病证结合模型是可行的,该模型同时具有肾阴虚和骨质疏松症的特征改变,更接近临床实际情况,适合作为绝经后骨质疏松肾阴虚型病证结合模型进一步在中医药研究领域推广运用。     

免疫性血小板减少症病证结合动物模型研究

目的:探讨非附加条件建立免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenic purpura,ITP)病证结合动物模型的可行性。方法:对3批ITP模型小鼠相关数据进行了综合分析,并按照病证结合模型辨识标准,评估注射APS的被动性免疫造模法复制的小鼠模型是否能够模拟人类ITP发病过程与临床特征。结果:注射APS复制的ITP模型小鼠特征如下:1)模型小鼠外周血小板计数下降、凝血时间延长,与正常组比较,有统计学意义(P0.01)。2)骨髓产板巨核细胞减少,与正常组比较,有统计学意义(P0.05、0.01、0.001)。3)模型小鼠注射APS部位或其他部位有自发性出血。4)造模1周后模型小鼠即有活动减少,行动迟缓,不思饮食,进食(水)量明显减少,大便溏稀,皮肤瘀斑、瘀点,皮肤或注射部位自发性出血,并随造模时间延长,上述表征日趋加重。结论:在非附加任何条件下,注射APS的被动免疫造模法复制的ITP动物模型符合病证结合模型特征,从而为开展中药药理学实验提供了理想的研究工具。     

二号再生胶囊治疗特发性血小板减少性紫癜的实验研究

目的:探讨二号再生胶囊治疗特发性血小板减少性紫癜(ITP)的疗效.方法:用免疫法建立小鼠ITP模型,设正常对照组、豚鼠血清对照组、模型组、阳性药组、低剂量实验组和高剂量实验组共6组,实验组和阳性药组灌胃给予不同剂量的药物,其他各组给予等量生理盐水.实验过程中观察小鼠一般情况的改变.给药10d后处死小鼠,检测小鼠体重、脾脏和胸腺指数、血象、骨髓象、脾脏病理和T淋巴细胞亚群等各项指标的改变.结果:模型组小鼠出现紫癜和胃肠道出血症状,血小板显著降低,与其他各组相比有显著性差异(P<0.01),并有骨髓巨核细胞数增多,表现出骨髓细胞成熟障碍.实验组和阳性药组对ITP小鼠有明显的治疗作用,表现为血小板明显增多,与模型组相比差异显著(P<0.01), 骨髓细胞成熟障碍减轻,巨核细胞数恢复正常,尤其以产板巨核细胞显著增多(P<0.01),脾脏指数降低,外周血CD8降低,CD4/CD8比值升高.各实验组中以高剂量实验组效果最为明显.结论:二号再生胶囊治疗特发性血小板减少性紫癜模型小鼠疗效显著,尤其以升高血小板的作用最为明显.其作用机制与调节机体的免疫功能有关.     

紫茜胶囊对ITP模型小鼠外周血细胞因子IL-2及其受体的影响

目的:观察紫茜胶囊对特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠外周血细胞因子IL-2及其受体的变化,以及细胞因子IL-2与ITP发病的关系.方法:采用放免法测定IL-2及其受体.结果:ITP模型小鼠外周血细胞因子IL-2水平降低,IL-2受体水平升高,与模型组相比有明显差异(P<0.05).结论:紫茜胶囊对ITP模型小鼠外周血细胞因子具有明显的调节作用.     

免疫性血小板减少症气不摄血证小鼠模型的动态研究

目的:从证候与疾病两方面观察免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)气不摄血证小鼠模型的动态变化特征,初步阐释ITP气不摄血证的形成过程。方法:Balb/c雄性小鼠随机分为正常对照组和模型对照组,模型对照组采用第1 w睡眠剥夺,第2、3 w睡眠剥夺复合腹腔注射抗血小板血清(anti-platelet serum,APS)的方法复制ITP气不摄血证小鼠模型。实验第7 d、10 d、21 d时各取一批小鼠检测体质量、抓力、脉搏幅度等相关证候指标,以及出血、外周血小板(platelet,PLT)计数、脾脏指数、脾脏病理等相关疾病指标。结果:与正常对照组比较,7 d、10 d、21 d时模型对照组小鼠的证候指标(体质量、抓力、脉搏幅度)均显著降低(P<0.01);7 d时模型对照组小鼠无出血情况,脾脏指数无明显变化(P>0.05),10 d、21 d时模型对照组小鼠腹部、尾等不同部位均有不同程度的出血现象,脾脏指数显著增高(P<0.01);7 d、10 d、21 d时模型对照组小鼠PLT计数均显著降低(P<0.01)。结论:睡眠剥夺复合腹腔注射APS法复制的ITP气不摄血证小鼠模型呈现气虚-出血-气虚-气不摄血的动态变化特征。     

紫茜胶囊对ITP模型小鼠外周血血小板相关抗体的影响

目的:观察紫茜胶囊对原发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠血小板相关抗体的变化,来阐述紫茜胶囊治疗ITP的药理作用。方法:采用注射豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)的免疫造模方法,建立BALB/C小鼠免疫性血小板减少性紫癜模型,选用紫茜胶囊对模型小鼠进行实验研究,并用泼尼松、升血小板胶囊作为阳性对照药,观察用药前后血小板相关抗体的变化。结果:模型小鼠血小板降低,而血小板相关抗体PAIgG、PAIgM、PAIgA均升高;紫茜胶囊、泼尼松和升血小板胶囊都能不同程度降低血小板相关抗体,与模型对照组相比有显著差异(P<0.05);而紫茜胶囊组与泼尼松组、升血小板胶囊组相比无显著差异(P>0.05)。结论:紫茜胶囊能降低外周血血小板相关抗体,减少血小板的破坏。     

免疫性血小板减少性紫癜病证结合动物模型建立与评价

目的:验证ITP病证结合动物模型的可行性.方法:应用免疫法造模,依造模时间不同分3组,检测各组的血小板计数、骨髓巨核细胞分类、病理及中医证候的变化.结果:模型1组,血小板在低水平维持72h恢复正常,模型2、3组,血小板在低水平维持48h即恢复正常,造模小鼠具有气虚血瘀证表现.结论:不加任何干预方法建立病证结合模型具有一定的可行性.     

紫癜颗粒对ITP模型小鼠骨髓细胞因子IL-3 TPO的影响

目的:通过观察ITP模型小鼠骨髓细胞白介素-3(IL-3)、血小板生成素(TPO)含量的变化,探讨IL-3、TPO含量变化与免疫性血小板减少性紫癜(ITP)发病之间的内在联系。方法:采用酶联免疫方法检测ITP模型小鼠骨髓细胞IL-3、TPO含量变化。结果:模型组小鼠骨髓细胞IL-3明显降低、TPO含量明显升高,均有统计学意义(P<0.05)。结论:调节巨核细胞的正性作用因IL-3与正性作用因子TPO参与了ITP的发病过程并发挥重要作用,紫癜颗粒通过调控骨髓细胞IL-3、TPO的含量变化而达到有效治疗ITP的目的。     

Syndrome differentiation in traditional Chinese medicine in chronic aplastic anemia; T-lymphocyte subpopulation in peripheral blood and erythrocyte C3b receptors]

In this paper, the Syndrome Differentiation in TCM and the determination on T-lymphocyte subpopulation and RBC C3b receptor were carried out by using indirect SPA assay and RBC C3b receptor ring test among 51 chronic aplastic anemia patients. Result: The OKT3, OKT4 and OKT4/OKT8 ratio in groups of Kidney-Yin Deficiency group were lower, while the OKT8 was higher than that of controls. In the group of both Kidney-Yin and Yang Deficiency, OKT4 and OKT4/OKT8 ratio were lower. and the value of OKT8 is higher than that of controls. The OKT8 in the Kidney-Yang Deficiency group was higher. and the ratio of OKT4/OKT8 was lower than that of controls. The OKT8 in the Kidney-Yin Deficiency group among three groups increased higher than that of other two groups. while the OKT4/OKT8 ratio reduced. The OKT4/OKT8 ratio in the group of both Kidney-Yin and Yang Deficiency was higher than that of Kidney-Yang Deficiency group. Among the three groups, the rosette rates of RBC C3b receptor were lower than controls. The above-mentioned data were statistically significant. These characteristic changes could be used as a reference of microcosmic Syndrome Differentiation and also a guide for how to apply the immunosuppressant and immunopotentiator.     

再生障碍性贫血的辨证分型与外周血T淋巴细胞亚群、红细胞C3b受体的关系

运用间接葡萄球菌A蛋白(SPA)花环法和红细胞C_3b受体花环试验,对51例再生障碍性贫血(下称再障)患者进行了辨证分型及T淋巴细胞正群、红细胞C_3b受体花环率检测。结果T淋巴细胞亚群的改变以肾阴虚型最重,肾阴阳两虚型最轻,肾阳虚型介于二者之间;三型红细胞C_3b受体花环率均低于健康对照组(P<0.01)。表明再障各型T淋巴细胞亚群紊乱的程度不同,红细胞免疫功能低下。这种特征性的改变可作为微观辨证的参考指标,亦可为临床应用免疫制剂提供指导。     

丽参注射液对老年女性冠心病肾虚患者性激素双向调节的初步研究

本研究观察了丽参注射液治疗前后老年女性冠心病肾虚患者雌二醇（Ｅ２）、睾酮（Ｔ）及Ｅ２／Ｔ比值的变化。结果：治疗前与对照组比较，Ｅ２、Ｅ２／Ｔ肾阳虚组明显降低，肾阴虚组明显升高（Ｐ均＜０．０１）；肾虚两组比较亦差异显著（Ｐ＜０．００１）。３组Ｔ比较差异均不显著（Ｐ＞０．０５）。治疗后随着肾虚症状改善，Ｅ２、Ｅ２／Ｔ肾阳虚组明显回升（Ｐ＜０．０５），肾阴虚组明显下降（Ｐ＜０．０１），均接近对照组，Ｔ两组均无显著变化。提示：绝经期后冠心病肾虚患者阴阳失调与性激素紊乱有关，主要表现在生物活性作用强的Ｅ２水平的升高或降低；人参既可调整阴阳改善肾虚症状又可逆转性激素变化，对Ｅ２有很好的双向调节作用，有助于人体内环境雌雄性激素的平衡。     

丽参注射液对老年女性冠心病肾虚患者性激素双向调节的初步研究

本研究观察了丽参注射液治疗前后老年女性冠心病肾虚患者雌二醇（Ｅ２）、睾酮（Ｔ）及Ｅ２／Ｔ比值的变化。结果：治疗前与对照组比较，Ｅ２、Ｅ２／Ｔ肾阳虚组明显降低，肾阴虚组明显升高（Ｐ均＜０．０１）；肾虚两组比较亦差异显著（Ｐ＜０．００１）。３组Ｔ比较差异均不显著（Ｐ＞０．０５）。治疗后随着肾虚症状改善，Ｅ２、Ｅ２／Ｔ肾阳虚组明显回升（Ｐ＜０．０５），肾阴虚组明显下降（Ｐ＜０．０１），均接近对照组，Ｔ两组均无显著变化。提示：绝经期后冠心病肾虚患者阴阳失调与性激素紊乱有关，主要表现在生物活性作用强的Ｅ２水平的升高或降低；人参既可调整阴阳改善肾虚症状又可逆转性激素变化，对Ｅ２有很好的双向调节作用，有助于人体内环境雌雄性激素的平衡。     

不同证型血小板减少性紫癜患者糖皮质激素受体亚型的表达及生血灵干预研究

目的:探讨不同证型特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者糖皮质激素受体(GR)α和β亚型的表达水平及生血灵的调节作用。方法:应用免疫细胞化学方法分别检测脾肾阳虚型ITP和脾肾阴虚型ITP患者在生血灵治疗前后GRα和GRβ的免疫阳性的外周血单个核细胞(PBMC)数目的变化,并和正常对照组比较。结果脾肾阳虚型和脾肾阴虚型ITP患者GRα免疫阳性PBMC数与正常对照组比较明显下降(P0.05),但两型之间比较差异无统计学意义;脾肾阴虚型ITP患者GRβ免疫阳性PBMC数明显高于脾肾阳虚型(P0.05);经生血灵治疗后患者GRα数上升,GRβ数下降。结论:脾肾阴虚型ITP患者GRβ数较脾肾阳虚型明显升高,GRβ可作为脾肾阴虚型ITP辨证分型的参考指标;生血灵治疗ITP能调节GRα和GRβ的比例失衡。     

左归丸对左旋谷氨酸单钠大鼠下丘脑单胺类递质含量及体重增长的影响

目的：探讨中医肾阴虚与下丘脑弓状核毁坏后中枢单胺类递质代谢的关系。方法：用谷氨酸单钠（ＭＳＧ，出生后２，４，６，８，１０天，４ｍｇ／ｇ皮下注射）造成大鼠弓状核毁坏后继发性下丘脑－垂体－肾上腺（ＨＰＡ）轴功能亢进模型，观察其下丘脑单胺类递质含量和体重增长的变化。结果：新生期大鼠给予ＭＳＧ成年后下丘及单胺递质中多巴胺，去甲肾上腺素等含量显著降低；同时还表现体重减轻，肥胖，鼻－肛长度缩短等生长受抑现象。     

滋阴补肾法对卵巢切除所致骨质疏松大鼠骨髓基质细胞IL-1和成骨细胞IL-6表达的影响

目的:通过观察滋阴补肾法对卵巢切除所致骨质疏松大鼠骨髓基质细胞IL-1和成骨细胞IL-6表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的机理.方法:将大鼠随机分为5组,即空白对照组、假手术组、模型组、雌激素组和补肾组.摘除大鼠双侧卵巢3个月后,灌胃给予左归丸,共给药3个月.采用骨组织形态计量学的方法对大鼠胫骨不脱钙骨切片进行形态计量;采用免疫组化和原位杂交的方法分别检测骨髓基质细胞IL-1和成骨细胞IL-6蛋白和mRNA的表达.结果:与模型组比较,补肾组大鼠胫骨TBV%显著增高,TRS%以及TFS%、MAR、OSW和mAR均明显降低;同时,其骨髓基质细胞IL-1和成骨细胞IL-6蛋白和mRNA的表达皆显著降低.结论:滋阴补肾法能使骨髓基质细胞IL-1和成骨细胞IL-6表达降低,是其能够治疗骨质疏松症的机理之一.     

益髓颗粒对免疫性血小板减少性紫癜模型小鼠细胞相关因子表达影响

目的:建立免疫性血小板减少性紫癜(ITP)小鼠动物模型,观察益髓颗粒对模型小鼠外周血细胞因子影响,探讨益髓颗粒的免疫调节机制。方法:40只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、泼尼松治疗组和益髓颗粒治疗组,除正常组外,其余各组隔日1次腹腔注射豚鼠抗小鼠血小板血清(GP-APS)建立ITP小鼠模型,于造模第8d开始,各组均按0.2mL/(10g·d)体积灌胃。其中正常组、模型组灌服生理盐水;泼尼松按0.0113mg/(10g·d)灌胃;益髓颗粒按0.3g/(10g·d)灌胃。连续7d后眼球取血分离血清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)。结果:与正常组相比,模型组小鼠IFN-γ水平明显升高,IL-4水平明显降低,IFN-γ/IL-4比值明显异常;与模型组相比,泼尼松治疗、益髓颗粒治疗组的IFN-γ、IL-4均有所恢复,IFN-γ/IL-4比值接近正常。结论:益髓颗粒可通过影响Th1/Th2细胞及其因子水平而对ITP免疫功能起调节作用。     

Analysis of the correlations between immunological changes and syndrome groups in patients with immunological thrombocytopenic purpura (ITP)]

To study the relationship between the immunological changes and syndrome (Zheng,) groups by TCM of ITP, the T-lymphocyte subsets, B-lymphocyte, NK cell, platelet-associated IgG (PAIgG, PAIgA, PAIgM) and antiplatelet-autoantibodies (GPIIb, GPIIIa, GP I b) of 66 patients with ITP were assisted using APAAP and ELISA method separately. It was found that the T-lymphocyte subsets, PAIg and syndrome groups of ITP were closely related. From the group of blood-heat (Xuerewangxing) to the group of deficiency of both Qi and blood, the group of asthenia of both Spleen and Kidney, the group of deficiency of Liver-yin and Kidney-yin, and the group of deficiency Yin and Yang Ts lymphocyte successfully increased (from 29. 0 +/- 8.0% to 47.2 +/- 10.0%), Th/Ts ratio declined (from 1.35 +/- 0.60% to 0.69 +/- 10%), PAIg increased gradually except for PAIgM,PAIgG of the group of deficiency Yin and Yang. Only the Th of the group of asthenia of both Spleen and Kidney among 5 syndrome groups was decreased significantly and contrary to the group of deficiency of Liver-Yin and Kidney-Yin. These results indicated that every syndrome group has specific characteristics, and immunological changes of ITP could have prognostic value.