表没食子儿茶素没食子酸酯通过下调存活素表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡的实验研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对鼻咽癌细胞株CNE-2的凋亡诱导作用以及这个过程中存活素(survivin)的表达变化特点.方法 应用噻唑蓝(MTT)法计算不同浓度EGCG作用于CNE-2鼻咽癌细胞后不同时间点的生长抑制率,并通过细胞荧光显微镜观察其凋亡情况,同时应用RT-PCR法检测这个过程中survivin mRNA的表达变化.结果 EGCG诱导CNE-2细胞凋亡,对其生长具有明显的抑制作用,并且存在时间和剂量依赖关系,同时伴有survivin mRNA的表达下调. 结论EGCG能诱导CNE-2细胞凋亡,明显抑制其生长,这种诱导凋亡的能力通过下调survivin mRNA的表达实现.     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过下调诱导型一氧化氮合酶促进鼻咽癌细胞的凋亡

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抗鼻咽癌的分子机制.方法 体外培养鼻咽癌CNE-2细胞并以不同质量浓度EGCG处理,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,Hochest染色观察凋亡细胞并计算细胞凋亡率,RT-PCR检测细胞中一氧化氮合酶(iNOS)表达变化.结果 EGCG处理后,CNE-2细胞增殖明显受到抑制,且呈时间和剂量依赖性; CNE-2细胞凋亡率显著升高;iNOS表达明显下调,且随EGCG质量浓度的增加有降低趋势.结论 EGCG能抑制CNE-2细胞增殖、促进其凋亡,可能机制为下调iNOS表达.     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制人鼻咽癌细胞的生长机制

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epi-gallocatechin-3 gallate,EGCG]抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞系生长增殖的机制,寻找鼻咽癌治疗的新靶点.方法:用EGCG处理人鼻咽癌CNE-2Z细胞,应用MTT试验观察不同浓度的EGCG对癌细胞生长增殖的影响;流式细胞仪检测用药前后细胞周期的变化;用逆转录聚合酶链反应分析ras相关区域家族1A(RASSF1A)mRNA表达情况.结果:从CNE-2Z细胞生长曲线判定EGCG对细胞生长均有抑制作用;流式细胞分析结果显示,G0/G1期细胞增加,S期细胞减少;经EGCG处理后,细胞中均有RASSF1AmRNA表达,且表达随药物浓度增高而增强.结论:EGCG对体外培养的鼻咽癌细胞生长增殖的抑制作用,可能是由于其能使因甲基化而失活的RASSF1A基因再转录,诱导该基因重新表达的结果.     

黄芪注射液诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡及对细胞周期阻滞的研究

目的:研究黄芪注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响.方法:采用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法(ATP-TCA法)测定不同浓度黄芪注射液在不同作用时间内对体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞的增殖状态; 应用细胞形态学实验方法和流式细胞术分析细胞生长周期及凋亡情况.结果:黄芪注射液对体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞株有明显的抑制作用,与浓度和作用时间呈正比;流式细胞仪分析显示,250 mg/L黄芪注射液作用CNE-2细胞48 h有明显的G0/G1期阻滞作用,AnnexinV,PI染色显示CNE-2细胞凋亡率从对照组的1.8%升高到62.4%.HE染色观察到250 mg/L黄芪注射液作用48 h后CNE-2细胞质空泡、核固缩、核染色质聚集等形态学改变.结论:黄芪注射液可抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖,其抗鼻咽癌的活性是通过诱导细胞凋亡而实现的.     

紫杉醇对鼻咽癌CNE-1细胞株作用的研究

目的探讨紫杉醇对鼻咽癌细胞株CNE-1生长抑制及诱导凋亡作用。方法应用肿瘤细胞培养技术,随机分组和空白对照设计,观察紫杉醇对CNE-1生长抑制的剂量和时间效应;培养不同时间后,用MTT法、集落形成能力测定、流式细胞仪检测分析观察细胞周期分布和凋亡发生率。结果紫杉醇为1.0×10-9低浓度时细胞生长受到明显影响,1.0×10-8浓度组的细胞生长受到明显抑制(P<0.05)。并且存在时间关系和一定范围内的剂量依赖关系。细胞周期分析结果显示;在中等或低浓度紫杉醇作用下,CNE-1细胞被阻止于G0/G1期,并能诱导细胞发生凋亡。在紫杉醇的短时间作用去除后再培养比持续作用培养更易促使细胞凋亡。结论鼻咽癌细胞株CNE-1对紫杉醇是高度的敏感,能使细胞生长阻止于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,为紫杉醇治疗鼻咽癌提供实验依据。     

氯喹对鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的:探讨氯喹(CQ)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)CQ对鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖抑制效应;集落克隆实验法检测不同浓度CQ对集落克隆形成的影响;溴化丙啶单染检测CQ诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡;Western blot检测CQ(10μmol/L)处理鼻咽癌细胞CNE-2Z不同时间(0、6、16、24 h)内质网应激反应标志物葡萄糖调节蛋白(GRP-78)的表达。结果:不同浓度CQ均对鼻咽癌细胞CNE-2Z具有明显的增殖抑制作用,16μmol/L CQ作用于鼻咽癌细胞CNE-2Z 24、48、72 h细胞存活率分别为85.94%、75.34%和56.45%。同时,CQ具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的集落克隆形成的作用。并且,CQ呈剂量依赖性诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z的凋亡。另外,CQ诱导鼻咽癌细胞上调GRP-78的表达。结论:CQ能抑制鼻咽癌细胞增殖,并通过引起过度的内质网应激反应机制诱导其凋亡。     

氯喹对鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的:探讨氯喹(CQ)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度(0、2、4、8、16、32mol/L)CQ对鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖抑制效应;集落克隆实验法检测不同浓度CQ对集落克隆形成的影响;溴化丙啶单染检测CQ诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡;Western blot检测CQ(10mol/L)处理鼻咽癌细胞CNE-2Z不同时间(0、6、16、24 h)内质网应激反应标志物葡萄糖调节蛋白(GRP-78)的表达。结果:不同浓度CQ均对鼻咽癌细胞CNE-2Z具有明显的增殖抑制作用,16mol/L CQ作用于鼻咽癌细胞CNE-2Z 24、48、72 h细胞存活率分别为85.94%、75.34%和56.45%。同时,CQ具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的集落克隆形成的作用。并且,CQ呈剂量依赖性诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z的凋亡。另外,CQ诱导鼻咽癌细胞上调GRP-78的表达。结论:CQ能抑制鼻咽癌细胞增殖,并通过引起过度的内质网应激反应机制诱导其凋亡。     

THP、ADM和VP-16诱导CNE-2鼻咽癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)抑制剂吡喃阿霉素(THP)、阿霉素(ADM)、鬼臼乙叉甙(VP-16)对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2抑制增殖及诱导细胞凋亡的作用;进一步检测了TopoⅡ抑制剂作用以后鼻咽癌细胞Survivin表达水平的变化.[方法]采用MTT法检测THP、ADM和VP-16对CNE-2细胞的生长抑制,Annenxin V FITC染色检测凋亡早期细胞,流式细胞仪检测Survivin的表达情况.[结果]ADM、THP和VP-16对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2均具有较强的体外抗肿瘤作用,随着药物浓度增高细胞增殖抑制率增高.ADM、THP和VP-16的IC50分别为(0.0238±0.0089)μg/mL、(0.0019±0.0030)μg/mL、(0.6416±0.0691)μg/mL.THP的IC50明显低于ADM.随着药物作用时间的增加,CNE-2细胞凋亡率逐渐增高.但ADM和VP-16作用CNE-2 48 h后细胞凋亡率的升高不如THP作用48h后明显.ADM、THP和VP-16诱导CNE-2细胞凋亡过程中出现Survivin的表达上调,但THP作用后表达上调的程度较ADM、VP-16低.[结论]TopoⅡ抑制剂THP、ADM和VP-16对CNE-2鼻咽癌细胞均具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.含TopoⅡ抑制剂的化疗方案可能在鼻咽癌的治疗中具有一定价值.THP在诱导细胞凋亡时Survivin的上调不如ADM、VP-16明显,是否意味着临床使用中THP有较少的耐药性有待进一步研究.     

苦参碱对前列腺癌PC-3M细胞生长抑制和凋亡的影响

目的:探讨苦参碱治疗前列腺癌的可行性及机制。方法:用不同药物浓度苦参碱诱导PC-3M细胞不同时间后,在相差倒置显微镜观察细胞形态;用MTT法测细胞的增殖抑制情况;用流式细胞仪(FCM)进行细胞凋亡率检测;RT-PCR法检测PC-3M细胞内bcl-2、bax基因表达水平。结果:用苦参碱干预后随着药物浓度增加PC-3M细胞株生长明显受抑制;在FCM上可见凋亡率逐渐增加;PC-3M细胞中bcl-2 mRNA表达水平逐渐下调,bax mRNA表达水平逐渐上调,且呈时间-浓度依赖性。结论:苦参碱体外能有效抑制前列腺癌细胞株生长,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调bcl-2表达及上调bax水平有关。     

熊果酸诱导鼻咽癌细胞株CNE-2Z凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡的作用机制.方法:用不同浓度的熊果酸处理CNE-2Z细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色检测熊果酸对CNE-2Z细胞的增殖抑制效应;流式细胞术分析细胞周期和凋亡率;应用免疫组织化学SP法检测凋亡相关基因bcl-2,bax和cox-2表达的变化;Western blot检测CNE-2Z细胞内caspase 3的表达.结果:熊果酸对CNE-2Z细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈浓度依赖性;流式细胞术分析表明S期细胞数减少,细胞主要阻滞在G0/G1期;免疫组织化学检测显示在凋亡过程中bax表达上调,bcl-2、cox-2表达下调;Western blot检测CNE-2Z细胞中caspase 3表达增强.结论:熊果酸在体外对CNE-2Z细胞有诱导凋亡的作用,其作用机制可能是通过促进caspase 3的活化和bax的表达上调、bcl-2、cox-2的表达下调来实现.     

山奈酚抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的 探讨山奈酚(Kaempferol)体外对人鼻咽癌细胞株CNE-2增殖和凋亡的影响.方法 以不同浓度的山奈酚作用于体外培养的CNE-2细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测IC50,用流式细胞仪、Hoechest33258染色及DNA片段化检测细胞凋亡.结果 山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞株的生长抑制作用随着其作用时间的延长和浓度的增加而明显增强,不同浓度山奈酚分别处理细胞24、48和72h后,其IC50值分别为(184.1±10.1)、(53.9±3.1)及(27.5±1.8)μmol/L,各IC50值间比较差异有显著性(P＜0.01);荧光显微镜下可见到典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞术显示,经不同浓度山奈酚作用72h后细胞凋亡率均增加,以80μmol/L显著(P＜0.01);60、80和100μmol/L山奈酚处理组可见明显的DNA梯带.结论 山奈酚可通过抑制CNE-2细胞株的增殖而诱导其凋亡.     

塞来昔布对鼻咽癌细胞株CNE-2Z作用的研究

目的:探讨塞来昔布对鼻咽癌细胞株CNE-2Z的生长抑制作用及可能机制.方法:以人鼻咽癌细胞株CNE-2Z为研究对象,体外药物敏感试验(MTT)观察不同浓度和作用时间的塞来昔布对细胞的生长抑制作用;免疫细胞化学染色检测细胞增殖核抗原(PCNA)和环氧化酶-2(COX-2)的表达;流式细胞术(FCM)检测药物作用后细胞周期分布.结果:MTT试验显示塞来昔布对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间及浓度依赖的特点;流式细胞术表明塞来昔布可引起CNE-2Z细胞GO/G1期阻滞;免疫组织化学检测显示塞来昔布下调PCNA、COX-2蛋白表达.结论:CNE-2Z细胞中存在COX-2表达,塞来昔布可抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖,可能成为鼻咽癌化疗的有效药物.     

IL-24诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株凋亡的研究

目的 探讨IL-24对鼻咽癌CNE-2Z细胞株凋亡的影响,为临床应用提供理论依据.方法 取鼻咽癌CNE-2Z细胞株,进行细胞培养;采用碘化丙锭染色、流式细胞仪分析和细胞核形态检测两种方法 同时检测体外培养的CNE-2Z细胞株增殖、分化过程中的凋亡状况;观察IL-24对它们的影响,并进行了定量分析.结果 IL-24可诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株的凋亡.结论 在培养的48小时,IL-24 50ng/m1实验组细胞凋亡程度较没加IL-24的对照组明显增加.结论:IL-24可呈时间和剂量依赖性的诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株 论著中外健康文摘 2011年4月第8卷第14期 World Health Digest Medical Periodieal 的凋亡.     

姜黄素与5氟尿嘧啶联合应用抗鼻咽癌的实验研究

目的：探讨姜黄素与5氟尿嘧啶（5-FU）联合应用对鼻咽癌CNE-2Z细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用,并研究其机制。方法姜黄素、5-FU单独应用及两者联合应用作用于鼻咽癌CNE-2Z细胞72 h,MTT法检测细胞生长状况,流式细胞仪检测鼻咽癌细胞的凋亡率, Western blot 检测Bcl-2、Bax、caspase-3以及 NF-κB 蛋白表达水平变化。 Real-time PCR 检测 caspase 家族中 caspase-3、caspase-7、caspase-9 mRNA表达水平的变化。结果凋亡率检测结果显示：两药联合应用后,肿瘤细胞的凋亡率明显高于单用药组（ P＜0.01）。姜黄素组、5-FU组和药物合用组CNE-2Z细胞的Bcl-2蛋白、细胞核内及细胞浆内NF-κB蛋白的表达水平下降,Bax蛋白、Cleaved caspase-3蛋白的表达水平增高。联合用药组caspase-3、caspase-7和caspase-9 mRNA表达水平高于单用药组。结论姜黄素和5-FU 抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的作用是通过诱导细胞凋亡来实现的。药物联合应用抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的作用可能是通过抑制Bcl-2基因的表达,增强Bax基因的表达,并通过抑制NF-κB活性来诱导凋亡而实现的。     

PCDH8基因表达对鼻咽癌细胞生物学效应的影响

目的 探讨PCDH8基因表达对鼻咽癌细胞株CNE-1生物学行为的影响.方法 采用脂质体介导质粒pcDNA3.1-PCDH8(实验组)与质粒pcDNA3.1(对照组)转染至鼻咽癌细胞株CNE-1,RT-PCR、Western blot检测转染后CNE-1细胞的PCDH8 mRNA及蛋白表达;通过CCK-8细胞生长曲线、流式细胞技术、Transwell侵袭实验及CCK-8细胞药物敏感实验,进一步对转染PCDH8基因质粒的细胞株CNE-1的增殖能力、生长周期、细胞侵袭能力及对化疗药物的敏感性进行了分析,并与转染对照质粒的细胞株进行比较.结果 RT-PCR、Western blot检测结果表明转染质粒pcDNA3.1-PCDH8的实验组细胞株中PCDH8 mRNA及蛋白成功表达并明显高于转染质粒pcDNA3.1的对照组细胞株.CCK-8细胞生长曲线结果表明实验组细胞株的生长速度明显低于对照组.流式细胞仪检测结果表明实验组细胞株G0/G1期较对照组增加,S期细胞较对照组减少;Transwell侵袭实验结果表明实验组细胞株侵袭能力明显低于对照组;CCK-8细胞药物敏感性实验结果表明PCDH8基因的高表达能显著提高鼻咽癌细胞株CNE-1对顺铂化疗药物的敏感性.结论 PCDH8基因的表达能降低鼻咽癌细胞的增殖、侵袭能力,延缓细胞分裂周期,提高对顺铂化疗药物的敏感性.     

热疗和热放疗对CNE-2细胞凋亡的影响

目的:研究热疗和热放疗对诱导鼻咽癌(CNE-2)细胞凋亡的作用.方法:将CNE-2细胞分为正常对照组、单纯放疗组、单纯热疗组和热放疗组,应用热疗联合放疗在不同照射剂量下诱导CNE-2细胞凋亡,以末端标记法(TUNEL法)检测其凋亡率.结果:单纯放疗、单纯热疗、热放疗均能诱导CNE-2细胞的凋亡,随放疗剂量的增加凋亡率明显升高(P<0.05)热放疗组的细胞凋亡率明显大于单纯放疗组和单纯热疗组(P<0.05).结论:单纯放疗、单纯热疗及热放疗均能诱导CNF-2细胞凋亡,热疗对CNE-2 细胞系有明显的放射增敏作用.     

广西何首乌GXHSWAQⅠ在鼻咽癌细胞放射增敏过程中对基因HIF-1α的影响

目的:探讨广西何首乌中蒽醌类化合物GXHSWAQⅠ,在鼻咽癌CNE-1细胞的放射增敏过程中对乏氧诱导因子表达的影响.方法:MTT比色法确定GXHSWAQⅠ对鼻咽癌CNE-1细胞株体外增敏剂量和放射增敏比,HE染色观察GXHSWAQⅠ放射增敏后细胞形态学的改变,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GXHSWAQⅠ作用前后,乏氧诱导因子HIF-1α的表达情况.结果:无细胞生长抑制作用浓度的GXHSWAQⅠ低浓度(3.90 mg/L)和高浓度(7.80 mg/L)组的放射增敏比分别为1.23和1.58,放射和联合用药的细胞发生明显的细胞形态学改变,同时下调基因HIF-1α的表达.结论:GXHSWAQⅠ对鼻咽癌CNE-1细胞具有放射增敏作用,其机制与下调乏氧诱导因子HIF-1α表达有关.     

EGCG抑制人胃癌SGC-7901细胞生长

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)抑制人胃癌(SGC-7901)细胞生长及诱导凋亡的生物学效应.方法:应用细胞计数法研究不同浓度EGCG对SGC-7901细胞生长曲线的影响;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染法观察各组细胞凋亡形态,计算凋亡率.结果:EGCG显著抑制人胃癌(SGC-7901)细胞的生长,呈浓度依赖性;SGC-7901细胞经EGCG作用后,其细胞群体倍增时间明显延长,由(34.50±0.14) h延长到(97.74±0.33) h,细胞增殖周期延长,从而细胞增殖速度减慢;EGCG可以诱导SGC-7901细胞凋亡,且随着药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐增加.结论:EGCG具有显著抑制人胃癌(SGC-7901)细胞的生长,诱导人胃癌(SGC-7901)细胞凋亡的作用.     

EGCG对低氧诱导下胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 将人胃癌细胞株SGC7901进行传代培养,并采用氯化钴（CoCl2）建立低氧模型,实验设空白对照组（常氧组）、低氧对照组及低氧加不同浓度的EGCG组.分别采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting检测细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的表达.结果 低氧条件下,低浓度EGCG短时间内（24 h）对SGC7901细胞生长无明显抑制作用（P〉0.05）;但随着浓度的升高和作用时间的延长,EGCG可抑制低氧SGC7901细胞的增殖（P〈0.01）,100 μg/mL EGCG作用72 h后,其抑制率可达（76.3±2.9）%.流式细胞仪检测显示,EGCG在低氧环境下可呈时间-剂量依赖性地诱导胃癌细胞凋亡（P〈0.05或P〈0.01）.EGCG可明显抑制低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）,并下调VEGF-A mRNA表达（P〈0.05或P〈0.01）,但对HIF-1α mRNA的转录无明显影响（P〉0.05）.结论 低氧条件下,EGCG可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A的表达有关.     

NF-κB抑制剂PDTC对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及Livin和Caspase-3表达的影响

目的:观察核因子-кB(NF-кB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对人胃癌SGC-7901细胞生长及凋亡的影响,研究其对凋亡抑制蛋白Livin和Caspase-3表达水平的调控,探讨PDTC对人胃癌SGC-7901细胞凋亡影响的机制.方法:不同浓度的PDTC作用于SGC-7901细胞不同时间后,MTr法测定其对SGC-7901细胞增殖的抑制率;流式细胞仪观察SGC-7901细胞的凋亡情况;real time PCR法和Western blot法检测SGC-7901细胞Livin和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达情况.结果:PDTC作用不同时间后对SGC-7901细胞生长有抑制作用,并诱导SGC-7901细胞凋亡,呈剂量-时间依赖性;PDTC可降低Livin mRNA及蛋白的表达.增加Caspase-3 mRNA及蛋白的表达,且Livin的表达量与PDTC的作用呈剂量,时间负相关.结论:PDTC可诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡,其机制可能与PDTC抑制NF-кB信号转导通路,下调Livin表达继而上调Caspase-3表达有关.