紫杉醇联合三氧化二砷作用人结肠腺癌LS-174T细胞增殖及凋亡的实验研究

目的以人结肠腺癌LS-174T细胞系作为体外模型,研究紫杉醇与三氧化二砷联合作用抑制肿瘤细胞增殖及凋亡双重作用的机理。方法采用不同浓度的紫杉醇与三氧化二砷联合作用于体外培养的人结肠腺癌LS-174T细胞,以MTT比色法和形态学观察检测其对人结肠腺癌LS-174T细胞的抑制作用。以TUNEL法和Annexin V-Fife、PI染色、共聚焦显微镜检测其对人结肠腺癌LS-174T细胞系的凋亡诱导作用。结果不同浓度的紫杉醇与三氧化二砷联合组对人结肠腺癌LS-174T细胞增殖的抑制作用均强于紫杉醇或三氧化二砷单用药组。联合用药组从形态学观察及应用TUNEL法和Annexin V-FITC、PI染色结果显示联合用药组可检测到大量凋亡结肠腺癌细胞,明显多于单用药组。结论紫杉醇与三氧化二砷联合应用于人结肠腺癌LS-174T细胞可协同抑制其增殖,并可明显诱导肿瘤细胞凋亡发生。     

MTA2在结肠癌中的表达及意义的研究

目的研究转移相关蛋白2(MTA2)在结肠癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学Max Vision法检测86例结肠癌组织(观察组)和60例癌旁正常结肠黏膜组织(对照组)中MTA2的表达,并研究MTA2的表达与结肠癌临床病理指标间的关系。结果 1MTA2在结肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常黏膜组织;2结肠癌中MTA2的表达与分化程度、有无淋巴结转移、Dukes分期、肿瘤直径、浸润深度、有无脉管浸润、是否伴有黏液有密切关系。结论 MTA2可能在结肠癌的浸润及转移中起重要作用,推测其可能作为结肠癌的临床标志物及治疗靶点。     

MTA1基因沉默对宫颈癌细胞增殖及转移能力的影响

【】 目的 探讨MTA1基因沉默对宫颈癌细胞转移增殖的影响。方法 用慢病毒转染法稳定转染Siha细胞,转染同时进行实验分组。用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定宫颈癌Siha、Hela细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达。Transwell体外侵袭实验检测转染后Siha细胞的迁移能力,MTT检测法和克隆形成实验法检测转染后Siha细胞的细胞增殖能力,FACS细胞凋亡法检测转染后Siha细胞的细胞凋亡率,PI-FACS细胞周期法检测转染后Siha细胞的各个生长周期的细胞数。结果 (1)Transwell体外侵袭实验：相比NC组,KD组Transwell转移率经T-Test分析P=2.61E-08<0.05。(2)MTT检测结果表明：相比NC组,KD组细胞增殖减缓。(3)克隆形成实验结果显示：相比NC组,KD组克隆数经T-Test分析P值=0.0006<0.05。(4)FACS细胞凋亡：相比两个对照组,KD组凋亡率经T-Test分析P<0.05。结论 MTA1基因促进宫颈癌细胞的转移和增殖,沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞增殖及迁移能力下降,加速宫颈癌细胞的凋亡,为抑制肿瘤转移奠定实验基础,最后为宫颈癌的新型药物性靶向治疗提供有力的实验依据。     

三氧化二砷对淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响及其与Mcl-1基因表达关系的研究

本研究探讨不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对人淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡诱导的作用特点及其机制,并探讨其与mcl—1基因表达的关系。应用琼脂糖凝胶电泳检测不同浓度As2O3作用于Raji细胞后的典型DNA—Ladder凋亡条带,激光共聚胶显微镜检测Raji细胞线粒体膜电位的变化,实时荧光定量PCR技术检测As2O3对mcl-1基因表达的影响。结果表明：1μmol／L As2O3作用于Raji细胞时其凋亡不明显,2—8μMol／L As2O3可以诱导Raji细胞凋亡。随着药物浓度的增加,Raji细胞线粒体的呼吸功能和跨膜电位明显减低,同时mcl-1基因表达量明显下调。结论：As2O3降低Raji细胞线粒体的呼吸功能和跨膜电位、下调mcl-1基因表达,而这些可能是导致细胞凋亡的机制。     

2-甲氧基雌二醇及三氧化二砷对骨髓瘤细胞凋亡相关基因表达谱影响的研究

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)及三氧化二砷(As2O3)对多发性骨髓瘤(MM)细胞系CZ-1细胞凋亡相关基因表达的影响。方法 应用TRlzol一步法抽提经凋亡剂量的2ME2及As2O3处理后CZ-1细胞总RNA，经逆转录合成Bio-16-clLTP标记的cDNA探针，与微矩阵排列的含有96种凋亡相关基因的表达谱芯片杂交，利用GEArray Analyzer软件分析2ME2及As2O3处理对CZ-1细胞凋产相关基因表达的影响及差异，并进一步用RT-PCR法证实。结果 As2O3诱导了52条(占芯片凋亡相关基因总数的54．2％)凋亡相关基因表达发生改变，其中42条(占表达改变的凋亡相关基因总数的80．8％)基因表达上调及10条(19．2％)基因表达下调；上倜的基因主要涉及caspases家族、P53及ATM通路、死亡结构域家族、TNF受体家族及CIDE家族等2ME2诱导了42条(占芯片凋亡相关基因总数的43．8％)凋亡相关基因表达改变，其中32条(占表达改变的凋亡相关基因总数的76．2％)基因表达下调及10条(23．8％)基因表达上调；下调基因主要涉及bcl-2家族、1AP家族、TRAF家族、TNF配体家族及CARD家族等。结论 2ME2及As2O3分别通过不同的凋亡通路诱导CZ-1细胞凋亡，As2O3主要诱导一些促凋亡基因表达上调；而2ME2则主要下调了一些抗凋亡基因表达。     

三氧化二砷及2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系CZ-1细胞凋亡通路的影响

多发性骨髓瘤（MM）是一种多发生于老年人的恶性血液系统疾病，随着社会人口的老龄化及诊断水平的不断提高，其发病率呈逐渐增高的趋势，提高治疗安全性的方案将会改善多发于老年人的MM的预后。我们以骨髓瘤细胞系CZ-1细胞为研究对象，观察了三氧化二砷（As2O3）和2-甲氧基雌二醇（2ME2）对CZ-1细胞凋亡通路的不同影响，试图为MM的治疗找寻新的治疗靶点。     

结肠癌转移相关基因1在胃癌组织中的高表达及与肿瘤细胞侵袭、转移的关系

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)在胃癌组织中的表达情况及与肿瘤细胞侵袭、转移的关系。方法收集2017年7月-2020年2月在我院行胃癌切除术治疗的90例患者的临床资料以及胃癌组织标本,随机选取癌旁组织标本61例,采用免疫组织化学法检测MACC1表达情况,并分析与患者临床病理参数的关系。结果MACC1在胃癌组织中的阳性表达率68.89%显著高于癌旁组织阳性表达率16.39%,差异有统计学意义(P<0.05),且MACC1的高表达与患者浸润深度、组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。结论在胃癌组织中,MACC1呈现异常高表达,与肿瘤细胞的侵袭、转移显著相关,可以作为患者病情以及预后的检测指标。     

lncRNA结肠癌相关转录本2在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录本2(CCAT2)在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响。方法标本取自2016年1月至2018年12月南通市中医院收治的55例结肠癌门诊患者。通过体外实验研究,采集结肠癌细胞系HT29、LOVO、SW620、HCT116和正常结肠上皮细胞系NCM460,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定lncRNA-CCAT2的表达情况。取lncRNA-CCAT2在结肠癌中相对表达量最高的细胞系,将其分为空白对照组(磷酸盐吐温缓冲液)、阴性对照组(经Lipofectamine~(TM)2000转染NC-siRNA序列)、CCAT2-siRNA组(经Lipofectamine~(TM)2000转染CCAT2-siRNA序列)。采用MTT实验检测三组细胞增殖能力,用流式细胞术检测CCAT2-siRNA组与阴性对照组细胞凋亡能力。通过蛋白印迹法检测CCAT2-siRNA组与阴性对照组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、裂解型聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)及p53蛋白的表达水平。结果相比正常结肠上皮细胞系NCM460,结肠癌细胞系HT29、LOVO、SW620、HCT116中lncRNA-CCAT2相对表达量均明显上调(P 0. 05),其中SW620的表达量最高。经MTT实验显示,转染后0、1、2 d,CCAT2-siRNA组与阴性对照组、空白对照组于490 nm波长处的吸光度值(OD_(490nm))比较,均无显著差异(P 0. 05);转染后3、4 d,CCAT2-siRNA组OD_(490nm)较阴性对照组、空白对照组明显下降(P 0. 01);阴性对照组与空白对照组不同时间点OD_(490nm)值的比较,均无显著差异(P 0. 05)。流式细胞术检测显示,相比阴性对照组,CCAT2-siRNA组细胞凋亡率明显升高(P 0. 01)。CCAT2-siRNA组Bcl-2蛋白的表达水平明显低于阴性对照组,裂解型PARP和p53蛋白的表达水平明显高于阴性对照组(P 0. 01)。结论 lncRNA-CCAT2高表达于结肠癌细胞系,而通过敲低lncRNA-CCAT2的表达可起到阻滞结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,并且其作用机制与Bcl-2蛋白表达降低、裂解型PARP和p53蛋白表达升高可能存在密切关系。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞系HepG2的凋亡诱导作用及其发生机制。方法体外培养HepG2细胞,用不同浓度的As2O3对HepG2细胞进行干预;采用MTT、Annexin V/PI双染及TUNEL法,观察其对HepG2细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;采用流式细胞术定量检测凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达的变化。结果 As2O3在体外能明显抑制HepG2细胞生长,具有时间剂量依赖关系。Annexin V/PI双染及TUNEL法结果显示:5～20μmol/L的As2O3作用24h均可诱导HepG2细胞凋亡,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=-2.96、-4.15、-7.33,P均<0.05);As2O3作用HepG2细胞24h时Bcl-2表达下降,Bax表达上升,Bcl-2/Bax比值降低,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=3.59、5.65、6.94、7.62、7.92,P均<0.05)。结论一定浓度的As2O3能抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。     

三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡和环氧合酶-2基因表达研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)诱导NB4细胞凋亡过程中线粒体膜电位的改变及环氧合酶-2的表达变化。利用免疫荧光显微镜、DNA电泳等观察As2O3诱导NB4细胞凋亡过程中NB4细胞的形态学改变,流式细胞术检测NB4细胞凋亡率及线粒体膜电位改变,Western blot分析环氧合酶-2的蛋白质表达水平变化。结果表明,经2μmol/L As2O3处理NB4细胞48小时后,荧光显微镜显示NB4细胞出现核致密浓染、染色质固缩及片断化断裂,甚至呈碎片状;提取DNA进行琼脂糖电泳显示典型DNA Ladder现象。流式细胞术分析发现,NB4细胞经3μmol/L As2O3处理48小时后细胞凋亡率为33.34%,As2O3浓度越高,NB4细胞凋亡率越高;以0.5、1、2、4及8μmol/L As2O3分别处理NB4细胞48小时后,线粒体膜电位分别下降12.8%、21.6%、66.9%、83.7%和83.8%;Western blot检测显示,环氧合酶-2在实验组的表达明显低于对照组,且随着As2O3浓度的升高,环氧合酶-2的表达逐渐降低,二者呈显著的负相关关系。结论 :As2O3能够有效诱导NB4细胞凋亡,且在一定浓度范围内具有量效关系;线粒体膜电位下降与As2O3诱导的NB4细胞凋亡有关;环氧合酶-2可能参与了As2O3诱导的NB4细胞凋亡过程。     

硼替佐米单用或联合三氧化二砷对Jurkat细胞凋亡和Livin mRNA表达的影响

本研究旨在探讨硼替佐米单用或联合三氧化二砷对Jurkat细胞凋亡的影响。用不同浓度硼替佐米、三氧化二砷处理细胞24小时,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Livin mRNA的表达。结果表明,5-25 nmol/L硼替佐米对Jurkat细胞增殖均有一定抑制作用,随着浓度增加抑制作用逐渐增强。硼替佐米和三氧化二砷联合处理组对细胞的抑制作用比同剂量两药中任一种单独使用时都显著增强(p<0.05)。硼替佐米能促使Jurkat细胞凋亡,且随浓度增加而凋亡增多,联合处理组对细胞的凋亡作用比同剂量单药作用时显著增强(p<0.01)。硼替佐米能下调Jurkat细胞Livin mRNA的表达,且随着药物浓度增加,表达逐渐降低,联合处理组比同剂量单药组更显著下调LivinmRNA的表达(p<0.05)。结论:硼替佐米或联合三氧化二砷可以下调Jurkat细胞中Livin mRNA的表达,并可能通过此机制诱导K562细胞凋亡,两药具有协同作用。     

三氧化二砷对大鼠C6胶质瘤细胞的诱导分化作用

目的：观察三氧化二砷对胶质瘤细胞诱导分化作用，为可能的临床应用提供实验依据。方法：采用SP免疫组化法，检测经三氧化二砷不同浓度、作用不同时间的大鼠胶质瘤细胞系C6细胞的GFAP及C-myc蛋白的表达变化。结果：在较低浓度时（0．5～2．0μmol／L）As20a均可引起大鼠C6细胞的GFAP及C—myc的表达的变化。表现为与空白对照组相比GFAP表达量显著增加（P〈0．05），C—myc蛋白表达量明显减少（P〈0．05）。结论：三氧化二砷可以有效诱导大鼠C6细胞分化，使胶质瘤细胞的恶性程度降低，促使其向高分化方向转变。     

三氧化二砷对人胃癌细胞株nm23、P53基因表达的影响

目的 观察三氧化二砷（As2O3）对人胃癌细胞株nm23、P53基因表达的影响。方法 以As2O3作用于体外培养的人胃癌细胞株，通过免疫组化技术对nm23和P53基因编码蛋白的表达进行检测。结果 经As2O3作用的人胃癌细胞株nm23、P53基因编码蛋白表达减少（P〈0．05）。结论 As2O3具有下调nm23、P53基因编码蛋白表达作用。     

MTA1基因沉默对宫颈癌细胞增殖及转移能力的影响

目的:探讨MTA1基因沉默对宫颈癌细胞转移增殖的影响。方法:用慢病毒转染法稳定转染Siha细胞,转染同时进行实验分组。用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定宫颈癌Siha、Hela细胞中MTA1 m RNA和蛋白的表达。Transwell体外侵袭实验检测转染后Siha细胞的迁移能力,MTT检测法和克隆形成实验法检测转染后Siha细胞的细胞增殖能力,FACS细胞凋亡法检测转染后Siha细胞的细胞凋亡率,PI-FACS细胞周期法检测转染后Siha细胞的各个生长周期的细胞数。结果:(1)Transwell体外侵袭实验:相比NC组,KD组Transwell转移率经T-Test分析P=2.61E-080.05。(2)MTT检测结果表明:相比NC组,KD组细胞增殖减缓。(3)克隆形成实验结果显示:相比NC组,KD组克隆数经T-Test分析P值=0.000 60.05。(4)FACS细胞凋亡:相比两个对照组,KD组凋亡率经T-Test分析P0.05。结论:MTA1基因促进宫颈癌细胞的转移和增殖,沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞增殖及迁移能力下降,加速宫颈癌细胞的凋亡,为抑制肿瘤转移奠定实验基础,最后为宫颈癌的新型药物性靶向治疗提供有力的实验依据。     

三氧化二砷对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji凋亡的诱导作用及C-myc表达的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对Burkitt淋巴瘤细胞袜Raji凋亡的诱导作用及C-myc表这的影响.方法 通过噻唑蓝比色法检测观察As2 O3对Raji细胞增殖的影响,流式细胞仪观察As2O3对Raji细胞凋亡的诱导作用,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测As2O3对C-myc mRNA表达的影响.结果 As2O3对Raji细胞生长有抑制作用,呈剂量和时间依赖关系(P＜0.01);As2O3对Raji细胞有诱导凋亡作用,呈剂量和时间依赖关系(P＜0.01);随着As2O3浓度升高,C-myc的表达水平明显下降(P＜0.01).结论 As2O3对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能与C-myc表达水平明显下降有关.     

茶多酚对人结肠癌细胞株Caco-2凋亡及RhoA蛋白活性的影响

目的探讨茶多酚对人结肠癌细胞株Caco-2凋亡及RhoA蛋白活性的影响。方法将传代后的人结肠癌细胞株Caco-2细胞分为实验组和对照组,实验组加入不同浓度的茶多酚（25、50、100和200μmol／L）,对照组加入等量RPMI-1640培养液,采用四甲基偶氮唑盐（MTr）法测定茶多酚对Caco-2增殖抑制的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡指数,Pull．down法检测人结肠癌细胞株Caco-2细胞内的RhoA蛋白活性。结果不同浓度的茶多酚对人结肠癌细胞株Caco-2有明显的抑制作用,且呈剂量及时间依赖性;Pull-down法检测结果显示,茶多酚可以降低人结肠癌细胞株Caco-2细胞内的RhoA蛋白活性,且随浓度增加其蛋白活性降低。结论茶多酚可促进人结肠癌细胞株Caco-2的凋亡,其可能通过降低RhoA蛋白活件来实现。