DMBT1过表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的 观察DMBT1过表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响.方法 利用脂质体LipofectamineTM 2000转染鼻咽癌5-8F细胞,Real time-PCR、Western-blot验证转染效率.MTT、流式细胞术检测DMBT1过表达对5-8F细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.Western-blot检测DMBT1过表达对多药耐药基因(P-gp)、肿瘤抑制基因p53蛋白表达的影响.MTT法检测DMBT1过表达对化疗药物敏感性的影响.结果 转染pcDNA3.1/DMBT1的5-8F细胞中DMBT1表达显著上调(P<0.05),提示成功构建稳定表达DMBT1基因的鼻咽癌5-8F细胞.DMBT1过表达的鼻咽癌5-8F细胞增殖能力减慢、凋亡率、G0/G1期细胞比例及p53蛋白表达增高,S期、G2/M期细胞比例及P-gp蛋白表达降低,同时细胞对顺铂敏感性增加(P<0.05).结论 DMBT1过表达能够显著抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖,诱导其凋亡,并提高癌细胞对化疗药物敏感性.     

靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA,采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞,细胞分3组:对照组、空白转染组、转染组.Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化.CCK-8法检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位.划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力.Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况.结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达.与对照组和空白转染组比较,转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低,G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时细胞增殖相关基因PCNA、凋亡抑制基因Bcl-2、转移相关基因MMP-9蛋白表达显著下调,凋亡诱导基因Bax蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 靶向沉默SSBP1基因能够通过线粒体途径抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移,并诱导其凋亡.     

芬太尼抑制鼻咽癌细胞侵袭转移的机制研究

目的：通过选择10 nmol/L芬太尼作用于鼻咽癌细胞系CNE2和HONE1，研究芬太尼对鼻咽癌细胞迁移能力的影响。 方法：取对数生长期的鼻咽癌细胞系CNE2和HONE1，选择10 nmol/L芬太尼分别作用于鼻咽癌细胞系30分钟和1小时，Western blot检测p-Src和Src表达，Transwell检测细胞迁移能力；构建Src过表达质粒，转染鼻咽癌细胞系，观察鼻咽癌细胞形态，检测细胞的迁移能力。 结果：10 nmol/L芬太尼处理鼻咽癌细胞CNE2和HONE1 48小时后，细胞呈现出类间质向上皮转化的形态特征，同时，与对照组相比，加入芬太尼处理组的鼻咽癌细胞其迁移能力显著降低；应用芬太尼分别处理鼻咽癌细胞30分钟和1小时后，p-Src水平显著下调；此外，与转染空载体质粒的对照组相比，过表达Src的细胞迁移能力明显增强，而在过表达Src的细胞中同时联合芬太尼处理后，细胞的迁移能力没有被抑制。 结论：芬太尼可能通过抑制Src通路活化抑制鼻咽癌细胞侵袭转移。     

MTA1沉默抑制鼻咽癌侵袭能力的体外研究

【摘要】目的探究MTA1基因敲除后对鼻咽癌细胞株5-8F细胞转移能力的影响。方法设计并构建针对 MTA1基因的RNAi片段,脂质体（Lipofectamine TM 2000）介导Si-MTA1-01（Si-MTA1-01组）和Si-MTA1-02（Si-MTA1-02组）感染5-8F细胞,同时设无义序列转染组（Si-ctr组）为对照。应用荧光定量PCR和蛋白印迹法检测转染后各组细胞的MTAl mRNA和蛋白表达;细胞划痕实验、基底膜侵袭实验和细胞黏附实验检测转染后5-8F细胞迁移和侵袭能力的变化,并进行比较分析。结果与Si-ctr组相比,Si-MTA1-01和Si-MTA1-02组MTA1mRNA及蛋白表达水平下降,穿膜细胞数减少,细胞黏附率增加（均P<0.05）,划痕实验显示细胞阻滞效果明显。结论沉默MTA1能明显减弱鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力,MTA1有望成为治疗鼻咽癌的有效靶点。     

Notch3在鼻咽癌中的基础研究及临床意义

目的：探讨Notch3是否可以作为判断鼻咽癌复发、转移和化疗预后的分子生物学指标。方法 West-ern blot检测鼻咽癌细胞系CNE2沉默Notch3的效果,球形成实验分析沉默Notch3对癌症干细胞的影响;通过Western blot检测上皮细胞标志E-cadherin和间质细胞标志Vimentin的表达分析沉默Notch3对鼻咽癌细胞EMT的影响;检测鼻咽癌细胞上清中乳酸的浓度分析在鼻咽癌中沉默Notch3对糖酵解的影响;Western blot检测顺铂作用后Notch3的表达,判断Notch3是否可以作为鼻咽癌对化疗药物敏感的指标。结果Western blot结果显示寡核苷酸干扰序列可以明显抑制沉默鼻咽癌细胞系CNE2中Notch3的表达。通过球形成实验发现在鼻咽癌细胞系CNE2中沉默Notch3后球形结构明显增加,说明沉默Notch3后干细胞增加。通过Western blot发现鼻咽癌细胞系CNE2沉默Notch3后上皮细胞标志分子E-cadherin表达减少,间质细胞标志分子Vimentin表达升高,说明沉默促进鼻咽癌细胞EMT转化。通过检测上清液中乳酸的浓度发现鼻咽癌细胞CNE2发现沉默Notch3后乳酸浓度升高,表明糖酵解增加。 Western blot发现化疗药物顺铂作用鼻咽癌细胞系CNE2后Notch3表达减少,表明Notch3可以作为判断化疗药物有效的指标。结论在鼻咽癌细胞系CNE2中沉默Notch3后癌症干细胞增加,促进EMT转换,糖酵解增加。化疗药物顺铂作用CNE2细胞后Notch3表达减少。因此,Notch3可以作为判断鼻咽癌复发、转移和化疗预后的分子生物学指标。     

减毒沙门菌SGN1对鼻咽癌的抑制作用及机制研究北大核心CSCD

目的探讨高表达甲硫氨酸酶减毒沙门菌SGN1对鼻咽癌的抑制作用及其机制研究。方法通过甲硫氨酸限制培养,检测对人鼻咽癌细胞HNE-2、5-8F和CNE-2细胞增殖、迁移能力、克隆形成率以及细胞周期凋亡的影响;将SGN1与鼻咽癌细胞HNE-2、5-8F和CNE-2共培养,观察其增殖情况;构建5-8F人鼻咽癌细胞系皮下移植瘤模型,观察SGN1对体内鼻咽癌移植瘤的抑制作用;结果甲硫氨酸限制显著抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移能力、单克隆形成以及阻滞细胞周期G 2/M期并诱导细胞发生凋亡。SGN1能抑制鼻咽癌细胞的增殖并诱导凋亡,体内实验结果表明SGN1治疗后,小鼠皮下移植瘤生长受到抑制(P<0.05)。结论SGN1可促进鼻咽癌细胞发生凋亡且抑制肿瘤细胞迁移,为临床治疗提供一个新的治疗策略。     

SOX1对鼻咽癌细胞化疗敏感性的影响

目的 观察SOXl基因过表达对鼻咽癌细胞化疗敏感性的影响.方法 采用脂质体Lipofectamin2000介导的方法,将SOXl基因转入鼻咽癌细胞CNE2和HONE1中,RT-PCR和Western blot法检测转染空载体对照组及转染SOX1过表达组鼻咽癌细胞中SOX1基因的表达,并用MTT法检测两组鼻咽癌细胞对化疗药物的敏感性.结果 RT-PCR和Western blot法表明,转染过表达组鼻咽癌细胞的SOX1基因的mRNA及蛋白表达水平均较对照组明显增强,MTT法结果表明过表达SOX1的鼻咽癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性显著提高（P＜0.05）.结论 转染外源性SOX1并使之在鼻咽癌细胞中过表达,能提高CNE2和HONE1细胞对化疗药物的敏感性.     

微小RNA-455-3p 下调TRIM27 对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人鼻咽癌细胞5-8F、CNE-1和鼻咽上皮细胞NP69中miR-455-3p的表达;将miR-NC、miR-455-3p mimics、pcDNA3.1、pcDNA3.1- TRIM27、si-NC、si- TRIM27 组、miR-455-3p mimics 和pcDNA3.1、miR-455-3p mimics 和pcDNA3.1-TRIM27通过脂质体试剂转染到5-8F;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞术、蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞的增殖、凋亡和TRIM27蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-455-3p与TRIM27的靶向关系。结果与鼻咽上皮细胞NP69(1.37±0.06)相比,人鼻咽癌细胞5-8F(0.42±0.02)、CNE-1(0.96±0.05)中miR-455-3p的表达显著降低(F =314.35,P =0.001)。过表达miR-455-3p 可明显抑制5-8F、CNE-1 细胞的增殖,促进其凋亡;miR-455-3p 可抑制野生型TRIM27细胞的荧光活性,且与TRIM27的表达呈负相关;抑制TRIM27可抑制抑制5-8F细胞的增殖,促进凋亡,过表达TRIM27能够逆转miR-455-3p对鼻咽癌细胞5-8F增殖凋亡的作用。结论miR-455-3p能够调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡的作用机制与其靶向TRIM27相关,将可为鼻咽癌的治疗提供新靶点。     

PIAsxα对鼻咽癌细胞系CNE1凋亡的影响及其机制探讨

目的　探讨PIAsxα 对鼻咽癌细胞凋亡和成瘤能力的影响及可能机制。方法　采用实时定量PCR,流式细胞术以及裸鼠成瘤实验分析PIAsxα 在鼻咽癌组织中的表达情况,PIAsxα 对鼻咽癌细胞系CNE1 凋亡和cyclin D、CDK 表达及其成瘤能力的影响。结果　鼻咽癌组织中PIAsxα mRNA 的表达水平显著低于邻近正常鼻咽组织。过表达PIAsxα 的CNE1 细胞凋亡率及G2/M 期细胞比例均明显增高,cyclin D1、cyclin D3、CDK4、CDK6 和CDK8 的mRNA 表达均显著降低且在裸鼠体内的成瘤能力亦受到抑制。结论　PIAsxα 的表达下调可能通过增加cyclin D 和CDK 的表达,抑制鼻咽癌细胞的凋亡,促进鼻咽癌的发生和发展。     

肿瘤干细胞标志物在鼻咽癌细胞株中的表达

目的探索肿瘤干细胞(CSC)标志物ABCG2、CD44、CD34在鼻咽癌细胞株CNE2、5-8F和6-10B中的表达情况,为选择CSC标志物进行鼻咽癌CSC样研究奠定基础。方法常规培养CNE2、5-8F和6-10B这3种鼻咽癌细胞株,用流式细胞仪检测3种鼻咽癌细胞株中ABCG2、CD44、CD34细胞比例及其交互情况。结果 ABCG2在CNE2、5-8F和6-10B这3种鼻咽癌细胞株中表达率分别为0.1%、18.6%、19.9%;CD44在CNE2、5-8F和6-10B中表达率分别为99.5%、93.2%、99.1%;CD34在CNE2、5-8F和6-10B中表达率分别为0、3.0%、0.1%。在5-8F中,ABCG2+CD44+细胞交互比例为11.6%,ABCG2+CD34+细胞交互比例为0。结论 5-8F和6-10B中CD34+细胞比例与CSC理论中CSC的比例相符。CD34可以作为鼻咽癌CSC的候选标志物。     

阿司匹林对鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞增殖、迁移与侵袭作用机制研究

目的 探讨阿司匹林对人鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞增殖、迁移与侵袭的影响和机制。方法 将人鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞株分为对照组和阿司匹林（0.00、1.25、2.50、5.00、10.00mmol/L）处理组。噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度阿司匹林作用24、48、72h后对CNE-1、5-8F细胞的增殖能力,以半数抑制浓度（IC₅₀）作为后续实验药物处理浓度。集落形成实验检测CNE-1和5-8F细胞增殖能力,Transwell实验检测CNE-1和5-8F细胞迁移及侵袭能力的变化,Western blotting法检测CNE-1和5-8F细胞中蛋白激酶B（Akt）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、波形蛋白（Vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、Snail蛋白相对表达水平。结果 人鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞分别经1.25、2.50、5.00、10.00mmol/L阿司匹林处理后,细胞增殖均受到不同程度抑制,且呈时间及浓度相关性,IC₅₀分别为3.3、2.7mmol/L。与对照组相比,经阿司匹林处理后,鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞的细胞增殖和集落形成能力明显下降（P＜0.01）。与对照组相比,经阿司匹林处理后,划痕愈合率显著降低（P＜0.05）。Trasnwell迁移实验结果表明,与对照组相比,阿司匹林处理组鼻咽癌细胞CNE-1和5-8F 48h穿过小室的数目显著减少（P＜0.05、0.001）。与对照组相比,阿司匹林处理组CNE-1、5-8F细胞的E-cadherin蛋白表达显著增加（P＜0.05）,PI3K、Akt、Vimentin、Snail蛋白表达显著下降（P＜0.05、0.01）。结论 阿司匹林可通过上调E-cadherin蛋白的表达、抑制上皮间质转化进程从而抑制人鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞迁移侵袭,同时下调PI3K、Akt、Vimentin、Snail蛋白的表达进而抑制CNE-1、5-8F细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-132通过靶向KLF7抑制鼻咽癌细胞增殖和迁移

目的 探讨miR-132靶向负调节Kruppel样因子7（KLF7）表达对鼻咽癌（NPC）细胞增殖和迁移的影响。 方法 将NPC细胞CNE-2Z分组：空白组、NC组、miR-132 mimics组、KLF7-OE组和miR-132 mimics+KLF7-OE组。 荧光定量PCR（qPCR）检测NPC组织和细胞及正常鼻咽组织和细胞中miR-132表达,Western blot检测KLF7蛋白表 达。TargetScan 网站预测及双荧光素酶检测验证KLF7与miR-132的靶向关系。CCK-8实验和Transwell 实验检测 CNE-2Z细胞增殖、迁移和侵袭能力,裸鼠成瘤实验、免疫组化法检测CNE-2Z细胞体内生长、瘤内血管情况。结果 鼻咽癌组织较正常鼻咽组织miR-132表达水平降低,KLF7蛋白表达增加;鼻咽癌CNE-2Z细胞较正常鼻咽上皮细胞 NP69 miR-132表达水平降低,KLF7蛋白表达增加（P＜0.05）。TargetScan预测及双荧光素酶检测显示,KLF7是miR- 132的靶基因。相比空白组、NC组,miR-132 mimics组CNE-2Z细胞中KLF7蛋白表达水平,36、48、60 h细胞增殖活 力,迁移和侵袭数量,肿瘤体积及微血管密度（MVD）显著降低（P＜0.05）,KLF7-OE组结果均相反（P＜0.05）。相比 miR-132 mimics组,miR-132 mimics+KLF7-OE组KLF7蛋白表达水平,36、48、60 h细胞增殖活力,迁移和侵袭数量、 肿瘤体积及MVD显著升高（P＜0.05）。结论 miR-132可通过负调控KLF7表达,影响NPC细胞的增殖、迁移及侵袭。     

鼻咽癌中环氧化酶-2的实验研究

目的 研究环氧化酶-2在鼻咽癌中的表达,探讨其与鼻咽癌的增生、浸润及转移的关系。方法 在26例鼻咽癌及相应癌旁组织和10例正常鼻咽部黏膜组织中,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测环氧化酶-2 mRNA的表达。结果 在鼻咽癌组织中环氧化酶-2 mRNA高表达,在正常鼻咽部黏膜环氧化酶-2 mRNA中低表达,差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论 环氧化酶-2与鼻咽癌的生长、浸润及转移有密切关系。     

TPM1在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的观察TPM1基因的表达与鼻咽癌（NPC）的关系。方法采用实时定量rt-PCR技术检测TPM1基因在NPC细胞株（CNE1、CNE2、58F）和鼻咽上皮细胞株（NP69）中的表达;采用组织芯片技术通过免疫组化检测TPM1在124例恶性鼻咽癌肿瘤、31例对应的癌旁正常组织和12例正常鼻咽黏膜组织的表达。结果 TPM1 mRNA在NP69中表达水平较高,而在NPC细胞株中表达水平显著下降。正常鼻咽黏膜及癌旁组织中TPM1蛋白染色阳性表达率约为65.1%（28/43）;而在鼻咽癌组织中阳性表达率约为34.7%（43/124）;TPM1蛋白表达水平与肿瘤的侵犯范围（T）呈负相关（P〈0.05）,与颈淋巴结转移（N）无关（P〉0.05）。结论 TPM1基因表达的抑制可能参与鼻咽癌的发生。     

PAI-1在鼻咽癌组织中的表达及其意义

目的探讨纤溶酶原激活剂抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1）在鼻咽癌组织中的表达及其与鼻咽癌侵袭和转移的关系。方法应用RT-PCR方法检测55例鼻咽癌术后组织标本中PAI-1mRNA的表达,分析PAI-1表达与鼻咽癌临床病理特征的关系。结果PAI-1基因在鼻咽癌组织的原发灶和浸润中均有表达,二者间无显著性差异（P〉0.05）,在淋巴结转移组无表达。结论PAI-1基因表达与鼻咽癌侵袭和转移无关,可能起抑制作用。     

鼻咽癌组织中钙黏蛋白和MMP-2的表达

目的探讨上皮型钙黏蛋白(E-Cad)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)在鼻咽癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化检测E-Cad与MMP-2蛋白在鼻咽癌组织标本52例(A组)和正常鼻咽部黏膜标本20例(B组)的表达;A组再分为有淋巴结转移组(A1组,41例)和无淋巴结转移组(A2组,11例)。结果 A组E-Cad表达率明显低于B组(55.8%vs.85.0%)(P<0.01);A1组E-Cad表达率明显低于A2组(53.7%vs 63.6%)(P<0.05)。A组MMP-2表达率为73.08%,而B组仅少数上皮细胞表达MMP-2(P<0.01);A1组MMP-2表达率明显高于A2组(85.4%vs 27.3%)(P<0.01)。MMP-2与E-Cad表达呈负相关(r=-0.412,P<0.01)。结论鼻咽癌组织低表达E-Cad,高表达MMP-2;其表达差异也明显存在于有、无淋巴结转移的鼻咽癌组织中。     

Survivin和PCNA蛋白在鼻咽癌组织中的表达及与预后的关系

目的检测Survivin和PCNA蛋白在鼻咽癌组织中的表达，了解其临床价值。方法应用免疫组织化学法检测68例鼻咽癌组织中Survivin和PCNA蛋白的表达水平。结果鼻咽癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率为72．1％（49／68）：其表达与淋巴结转移和T分期有关（P〈0．05）。肿瘤残留、复发及转移者Survivin表达有增高趋势，但未达统计学意义。生存时间〈5年者Survivin表达明显增高。PCNA的阳性表达率为73．5％（50／68），Survivin与PCNA的表达正相关。结论Survivin对预测鼻咽癌预后有一定的价值。     

奈达铂与鼻咽癌相关蛋白P53、Bcl-2、caspase的表达水平与相关性分析

目的 观察奈达铂对鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响,探讨奈达铂与鼻咽癌相关蛋白P53、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、caspase的表达水平与相关性分析.方法 分析不同浓度的奈达铂(0 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml)和作用不同时间(12 h、24 h、36 h、48 h)对鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响;分析不同浓度的奈达铂对CNE-2细胞P53、Bcl-2、caspase蛋白表达水平的影响.结果 使用MTT法检测不同浓度的奈达铂对CNE-2细胞增殖的影响,随奈达铂浓度的升高OD值逐渐降低(P<0.05),且随着奈达铂作用时间的延长OD值逐渐降低(P<0.05).形态学可见:奈达铂浓度0 μg/ml时CNE-2细胞增值迅速、细胞饱满,形态规则;奈达铂作用下细胞增值减慢,细胞变圆、边缘模糊;使用流式细胞仪检测不同浓度的奈达铂对CNE-2细胞凋亡率可见随着奈达铂浓度的升高细胞凋亡率逐渐升高(P<0.05);使用免疫组化光密度定量检测不同浓度的奈达铂对CNE-2细胞P53、Bcl-2、caspase蛋白表达水平的影响,可见随着奈达铂浓度的升高P53、Bcl-2蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05),caspase蛋白表达水平逐渐升高(P<0.05).结论 奈达铂能够明显抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖和促进凋亡,其可能与抑制P53、Bcl-2蛋白表达和促进caspase蛋白表达有关.